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MICROSCOPIO ÓPTICO

Es un microscopio basado en lentes ópticos. También se le conoce como

microscopio de luz, (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de campo claro.

El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van

Leeuwenhoek. Aumenta el tamaño de los objetos que son realmente muy

pequeños y que no se pueden ver a simple vista, a su vez puede ser

monocular, binocular entre otros.

HISTORIA

 1608 Zacharias Janssen construye un microscopio con dos lentes

convergentes.

 1611 Kepler sugiere la manera de fabricar un microscopio compuesto.

 1665 Robert Hooke utiliza un microscopio compuesto para estudiar cortes

de corcho y describe los pequeños poros en forma de caja a los que él

llamó "células". Publica su libro "Micrographia".

 1674 Leeuwenhoek informa su descubrimiento de protozoarios. Observará

bacterias por primera vez 9 años después.

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 1828 W. Nicol desarrolla la microscopía con luz polarizada.

 1838 Schleiden y Schwann proponen la teoría de la célula y declaran que la

célula nucleada es la unidad estructural y funcional en plantas y animales.

 1849 J. Quekett publica un tratado práctico sobre el uso del microscopio.

 1876 Abbé analiza los efectos de la difracción en la formación de la imagen

en el microscopio y muestra cómo perfeccionar el diseño del microscopio.

 1881 Retzius describe gran número de tejidos animales con un detalle que

no ha sido superado por ningún otro microscopista de luz. En las siguientes

dos décadas él, Cajal y otros histólogos desarrollan nuevos métodos de

tinción y ponen los fundamentos de la anatomía microscópica.

 1886 Zeiss fabrica una serie de lentes, diseño de Abbé que permiten al

microscopista resolver estructuras en los límites teóricos de la luz visible.

 1908 Köhler y Siedentopf desarrollan el microscopio de fluorescencia.

 1930 Lebedeff diseña y construye el primer microscopio de interferencia.

 1932 Zernike inventa el microscopio de contraste de fases.

 1937 Ernst Ruska y Max Knoll, físicos alemanes, construyen el primer

microscopio electrónico.

 1952 Nomarski inventa y patenta el sistema de contraste de interferencia

diferencial para el microscopio de luz.

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PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO

Sistema óptico

 Ocular: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del

objetivo.

 Objetivo: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.

 Condensador: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la

preparación.

 Diafragma: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

 Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

SISTEMA MECÁNICO

 Soporte: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el

brazo.

 Platina: Lugar donde se deposita la preparación.

 Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular,

binocular, entre otros.

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 Revólver: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar,

cambiar los objetivos.

 Tornillos de enfoque: Macrométrico que aproxima el enfoque y

micrométrico que consigue el enfoque correcto.

FUNCIONAMIENTO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

El principio de funcionamiento de un microscopio óptico se basa en la

propiedad de algunos materiales que permiten cambiar la dirección de los

rayos de luz. Esto permite fabricar lentes capaces de hacer converger o divergir

los rayos de luz. Mediante la combinación de estas lentes se puede generar

una imagen aumentada de cualquier objeto. El ejemplo más sencillo sería

utilizar una sola lente, como en el caso de una lupa, para producir una imagen

aumentada de una muestra.

En el caso de un microscopio óptico se genera la imagen aumentada a partir de

distintas lentes. Algunas de ellas montadas en el objetivo del microscopio y

otras en el ocular. En primer lugar las lentes del objetivo generan una imagen

real aumentada de la muestra. Esta imagen real es a continuación ampliada

mediante las lentes del ocular dando lugar a una imagen virtual de tamaño

superior a la muestra original.

Funcionamiento del microscopio

Representación del funcionamiento del microscopio óptico

El otro elemento esencial para el funcionamiento del microscopio óptico es la

luz. Es por este motivo que los microscopios ópticos vienen equipados con un

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foco de luz y un condensador para focalizar un haz de luz hacia la muestra.

Una vez la luz ha atravesado la muestra, las lentes son las encargadas de

desviar esta luz de forma correcta para generar la imagen aumentada.

TIPOS DE MICROSCOPIO

Existen distintas variaciones del concepto básico de microscopio óptico que

resultan en diferentes tipos de microscopio:

 Microscopio compuesto: El microscopio compuesto es el tipo

elemental de microscopio óptico. El término compuesto indica que se

utilizan dos o más lentes para obtener la imagen aumentada. Esta

denominación se utiliza en contraposición a la de microscopio simple,

que se refiere a los microscopios que funcionan con una sola lente y que

se conocen comúnmente como lupas.

 Microscopio monocular: El microscopio monocular es aquel que sólo

tiene un ocular y por lo tanto permite observar la muestra solo con un

ojo. Debido a la sencillez de este tipo de microscopio es habitualmente

utilizado por estudiantes o aficionados a la microscopía. Este tipo de

microscopio no resulta cómodo cuando se tienen que analizar muestras

durante horas y es por eso que en ámbitos profesionales se utilizan

normalmente microscopios binoculares.

 Microscopio binocular: El microscopio binocular incluye dos oculares

de modo que es posible utilizar los dos ojos para examinar una muestra.

En los microscopios binoculares la imagen proveniente del objetivo se

divide en dos mediante un prisma óptico.

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 Microscopio trinocular: Este tipo de microscopio tiene los dos oculares

necesarios para observar la muestra con los dos ojos e incluye también

un ocular adicional donde se puede conectar una cámara para capturar

imágenes de las observaciones.

 Microscopio digital: El microscopio digital incluye una cámara en lugar

del ocular, esto permite capturar digitalmente la imagen de la muestra.

La imagen digital se puede visualizar en tiempo real en una pantalla o

transmitirla a un ordenador mediante conexión USB.

 Microcopio USB: El microscopio USB es un tipo de microscopio digital

muy sencillo que se ha popularizado en los últimos años debido a su

bajo coste. Los aumentos alcanzables con este tipo de microscopio son

bajos en comparación con el resto de microscopios pero aún así son una

herramienta muy útil para observar objetos cotidianos.

 Microscopio invertido: En el microscopio invertido la posición de la

fuente de luz y el objetivo es la opuesta al microscopio convencional. De

este modo la muestra es iluminada desde arriba y el objetivo se

encuentra debajo la platina. La principal ventaja del microscopio

invertido es que permite observar los elementos del fondo de un

recipiente. Se utiliza para observar células vivas y tejidos que se

mantienen constantemente hidratados dentro del recipiente.

 Microscopio estereoscópico: Un microscopio estereoscópico es un

tipo de microscopio binocular porque está equipado con dos oculares.

Sin embargo, a diferencia del microscopio binocular convencional donde

se ve exactamente la misma imagen en los dos oculares, en el

microscopio estereoscópico la imagen en cada ocular es distinta. La

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combinación de las dos imágenes provenientes de los dos oculares

produce el efecto de estar viendo una imagen en tres dimensiones. Para

conseguir este efecto el microscopio estereoscópico utiliza en general

dos objetivos, uno para cada ocular.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento

en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la

platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su

funda.

2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo

cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si

no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro

de un armario para protegerlo del polvo.

3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas

muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.

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4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el

microscopio.

5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite

que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con

papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasará el

papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha

llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una

mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo

de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se

pueden dañar las lentes y su sujeción.

6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico,

micrométrico, platina, revólver y condensador).

7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la

mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra.

No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni

hacerlo mientras se está observando a través del ocular.

8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre

ella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite,

limpiarla con un paño humedecido en xilol.

9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la

sesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y

revisión general de los mismos.

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APLICACIONES

Este instrumento ha sido de gran utilidad, sobre todo en los campos de la

ciencia donde la estructura y la organización microscópica es importante,

incorporándose con éxito a investigaciones dentro del área de la Química (en el

estudio de cristales), la Física (en la investigación de las propiedades físicas de

los materiales), la Geología (en el análisis de la composición mineralógica de

algunas rocas) y en el campo de la Biología (en el estudio de estructuras

microscópicas de la materia viva.

Se utiliza en laboratorios de histología y anatomía patológica, donde la

microscopía permite determinadas aplicaciones diagnósticas como el

diagnóstico de certeza del cáncer, numerosas estructuras cristalinas,

pigmentos, lípidos, proteínas, depósitos óseos, depósitos de amiloide entre

otras.

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