Rev. Per. Quim. Ing. Quim, Vol. 4, N*2, Pigs. 22-27 (2001) DETERMINACION EXPERIMENTAL DEL COEFICIENTE DE TRANSFERENCIA DE OX{GENO (K,a) EN UN BIORREACTOR BATCH Raymundo Erazo E., Jorge L. Cardenas R. Departamento Académico de Procesos, Facultad de Quimica @ Ingenieria Quimica, UNMSM, Av. Venezuela s/n., Ciudad Universitaria, Lima - Perd. Abstract: The volumetric oxygen transfer cosficlent, ka, has beon determined experimentally ina batch operating bloreactor at 30°C. It was found that it Is directly proportional to the degree of aereation and the agiation, while it Is Inversely proportional tothe viscosity, This behavior isn aocord wih other correlations found inthe erature [3, 7]. The ‘989 elimination method may be applied to systems with or without presence of microorganiemes, As a result the only ‘equied data are the concentrations of dissolved oxygen as a function of time. Key words: Determination of ka, gas elimination. Resumen: Se ha doterminado experimentalments el costiciente volumético de transferencia de oxigeno, Ka, en un biorreactor de operacién batch a 20°C, Se encontié que esté en una relacién drectamente proporclonal al grado de la ereacién y la agitacién, mientras que es Inversamente proporcional @ la visoosldad, Este comportamiento esté de acuerdo con otras correlaciones encontradas en la Ierature (3, 7) El método de ensayo de eliminecién del gas puede fplicarse en sletemas con o sn prsencia de microrgenismos. Por resultado general los Gncos dtos requerdos son la concentracién de oxigano disuelto como una funcion del tempo. Palabras claves: Determinacién de k.a, técnica de eliminacién del gas. INTRODUCCION La medicién de la capacidad de transferencia de masa, oxigeno, en un bioreactor aerobio es de suma importancia, por cuanto dicho va- lordeterminaré la productividad del sistema, La caracteristica general de los problemas de transferencia de masa en un sistema fermentative es que el oxigeno pasa desde Una fase a otra en la cual se encuentra el mi- croorganismo. Las distintas etapas presentes eneste fenémeno son: * Transporte del oxigeno desde la fase ga- seosa hacia la interfase gas-liquido, * Difusi6n del ox(geno a través de la interfase gas-iquido. ‘Transporte del oxigeno a través de la fase lfquida hasta las vecindades del microorga- nismo. * Difusi6n del oxigeno en la interfase Ifquido- ‘sdlido (eélula). * Difusi6n intraparticula (intracelular). * Reaccién bioquimica intracelular. Una de las particularidades de la ocurrencia de ‘este fenémeno es que todas estas etapas se dan en serie. Se ha determinado, por ejemplo, 22 ue en microorganismos unicelulares la etapa limitante la constituye la difusi6n del oxigeno en la Interfase gas-liquido, de modo que la veloc dad neta de transferencia de masa se expresa en términos de un cosficiente de transferencia referido a la fase iquida, el érea dela Interfase y Un gradients de concentraciones de oxigeno entre a interfase y la fase liquida. Sin embargo, en fermentaciones donde se forman agregados calulares o ‘pellets’, la difusién del oxigeno a través de los agregados se constituye como el aso limitante. Es decir, el producto del coeti- ciente de transferencia de oxigeno y el érea de la interfase gas-liquido representan un indice de la capacidad de aereacién de un biorreactor. El valorde este pardmetro depende del disefio del biorreactor, del grado de agitacién (o consumo de potencia por unidad de volumen de biorraactor), del iyjo de aire (medidos como VVM), de la vis- cosidad del medio, de la presencia de antiespumantes, entre otros. En consecuencia, el disefio y las condiciones de operacién del bioreactor deben ser tal que satistacen los re- uerimientos de oxigano por el microorganismo, Eneste sentido, estudiaremos un sistema, como parte primera, sin presencia de microorganismos para determinar experimentalmente el coeficien- te volumétrico de transferencia de oxigeno, K,a, ‘en un biorreactor batch isotérmico y observar elefecto del nivel de aereacién, ol grado de agita- i6n y la viscosidad en diversos medios. ASPECTOS TEORICOS Consideremos una burbuja de aire moviéndose ‘en un liquido en fermentacién. Eloxigeno debe! pasar desde ol interior de fa burbuja hacia el liquido y posteriormente ser consumido porlos microorganismos. Hemos sefialado una serie de pasos 0 etapas en este fendmeno tan com- plejo; sin embargo vamos a restringir nuestro estudio a sélo tres etapas como son: + Eltransporte de oxigeno desde el seno de la burbuja de aire hacia la interfase. * La difusién del oxigeno a través de la interfase gas-iquido. * Eltransporte a través del Iiquido. Porlo tanto, evaluar la transferencia de oxige- no en un sistema de fermentacién implica el Célculo de las resistencias diversas al paso del ‘oxigeno desde la burbuja de aire hasta su difu- si6n en la célula. Para el estudio de un problema de transteren- cla de masa, son importantes las condiciones. dela interfase. Con excepcién de los casos de transferencia extremadamente intensos 0 de acumulacién de particulas sélidas en la interfase, la experiencia muestra que existe ‘equilbrio entre las fases a través de lainterfase. Es decir, si una burbuja de aire se mueve en un liquido en una fermentacion, et oxigeno debe pasar desde el interior de la burbuja hacia el IIquido, para finalmente ser consumida porlas células. En otras palabras, la concentracion de ‘oxigeno en el gas, junto ala interlase, esté en ‘equilibrio con la concentracién de oxigeno en 1 liquido, también junto a la interfase. Ya que existe equilibrio entre las fases en la Interfase, se puede aplicar las leyes que rigen en el equllibric. La manera mas simple es por la ley de Henry: p, =H, (4) Coeficientes de transferencia de masa ‘Si existe una diferencia de concentraciones de oxigeno disuelto en el liquide (C,) y en la interfase (C), ocurre una transterencla de masa, la. cuales representada empiricamente por: N= kC-C,) (2) La diferencia de concentracién (C,- C,) debe ‘mantenerse para la transferencia de ox/geno a través de la Interfase (difusién) y por analogta al caso de la fase liquida, el flujo de oxigeno por difusién a través del gas es: N = kg(p—P,) @) Las ecuaciones (2) y (8) son de diffcil aplica- cién, pues raramente se conocen C, y p, en la interfase, por lo que se recurre al uso de los coeficientes globales de transferencia de masa tanto para la fase Iiquida K, , como para la fase gaseosa, K,, como siguen: 1 # = Tee GTkgH) “ y K,=——_-__ kg) +(HTk,) ®) resultando las expresiones: 2K, (C)-C,) © y N=K,(p-p*) ” En las ecuaciones (6) y (7), ©," es la concen- tracién de oxigeno en una solucién en equil- brio con una fase gaseosa donde la presién parcial del gas es p; p* es la presién parcial de oxigeno en una mezola gaseosa en equilibrio con una fase liquida en la cual la condentra- clén de oxigeno es C,. Los valores de ©,* y p* se pueden obtener a partir de datos de equilibrio reportados en la It teratura. Por lo general, ©,” varla entre 7 y 10 ppm. La determinacién de K, 0 K, es mucho més sencilla que la dek, ok,, En ciettos casos puede oourrirK, =k, oK, = ky, SiH! @s muy pequefto, por fa ecuacién (7) se observa que Ka = ky, 08 decir, k, >> Kyla resistencia a la transterencia de oxigeno es mayoren el gas que en el liquido, y serdla fase gaseosa la controlante de la transferencla de ‘oxigeno. La igualdad entra K, yk ocurre enicaso ccontrario, la absoreién de ox/géno por el agua en los mostos en fermentacién, #s 6! caso™mas ‘comiin, pues debido a la agitacién, el oxigeno desde la burbuja de aire llega alla interfase con faclidad, En estas condiclones, el flujo detrans- ferenoia de masa sord expresado por: N=k,(C}-C,) (8) 23En sintesis, los coeficientes de transferencia de masa dependen de: a) Las propiedades de las dos fasas. b) La geometrfa det sistema (burbujas, gotas, lechos continuos).. ¢) Eltipo de régimen que existe entre las dos fases (laminar o turbulento). Elndmero de variables que intervienen en los. clculos de estos coeticientes es, pues, tan grande y su influencia tan compleja que, a no ser en algunos casos triviales, no existen teo- ras que lleven a expresiones mateméticas de ‘estos coeficiantes. Esto es tan evidente en el ‘caso de régimen turbulento, que es lo que ocu- [Link] la mayoria de los casos de transferencia. ‘de masa industrial. Ladeterminacién experimental del coeficiente de transferencia de oxigeno se puede realizar siguiendo los métodos siguientes [1]: 1. Oxidacién de sultito, 2, Técnica de eliminacién de gas. 3. Balance de oxigeno en el sistema. 4, Técnica dindmica, Para efecto de observaciones genéricas, en ‘este primer trabajo prescindiramos de una fer- ‘mentacién real, por lo que se aplicaré la técni- ca de eliminacién de gas [2]. ‘Técnica de ellminacién de gas (Gassing-out) Para un cuttivo batch, un balance molar para el ‘oxigeno en un biorreactor batch tipo tanque, con agitacién y transferencia de masa a tra- vvés de una interfase gas-liquido, conduce a la ecuacién siguiente: 1 -n,atc} ~C,)~ IX (9) Debido a la restriccién planteada para el desa- rrollo de la medicién, la ecuacién (9) se reduce a dC, “ a =k,a(C,-C,) (10) Los términos k, y a resultan diffciles de medir ‘en forma directa en una fermentacién; lo nor- mal es evaluarlo como ka, denomindndosele ‘coeticiente de transferencia volumétrica. Enten- digndose que la ecuacién (10) s6lo muestra la 24 variacién de C, con el tiempo, una integracin entre los limites a t= Oy C, = 0 da el resultado siguiente: In (\-C,/C})=-k,as (11) El valor de C*, a condiciones ambientales del laboratorio es 10 mg.L; por lo tanto, la Ec.(11) es una recta de Ln(t —C,/C*,) vst con pendiente igual a-ka, Las mediciones experimentales necesarias para evaluark,a deben consistir de variaciones de C, (t). Esto se puede lograr en un biorreactor batch en el-cual, previo a cualquier ensayo, se elimi- na el oxfgeno disuelto en el medio burbujeando un gas inerte, nitrégeno, has- ta conseguir que C, = 0. Este método es bastante bueno para deter- minar k,a cuando se requieran hacer ‘compatacio-nes entre diferentes biorreactores. que operan en condiciones ambientales si- milares, escalamiento. Sin embargo, los mé- todos de balance de oxigeno en el sistema o la técnica dindmica, se presentan como mé- todos mas representativos de estos sistemas batch o continuos. tras correlaciones para evaluar el coeficiente de transferencia de masa que tienen sus resul- tados en el analisis dimensional, pueden en- contrarsg gna literatura [3, 4, 5, 6). PARTE EXPERIMENTAL Materiales Se utizaron los equipos siguientes: BIOFLO Il, Batch/Continuous Fermentor. NEW BRUNSWICK SCIENTIFIC EDISON Nw. U.S.A. Capacidad 1,3. Compresor de aire, marca BELNA de 1,5 HP, Balén de nitrégeno comprimido. Materiales de vidrio y accesorios comple- mentarios, Métodos Para todos los ensayos se utilz6 el biorreactor BIOFLO Ill. Antes de cada medicién se pro- codié a eliminar el oxigeno disuelto en las so- luciones mediante burbujeo de nitrégeno has- ta verificar que la concentracién de oxfgeno es caro y la temperatura del medio se lleva hasta 30°C.Figura 1. Variacién de la concentracién de oxigeno dievetto con el iempo a 90°C, 300 rpm yU= 11P, para diversos valores de WWM Figura 2. Variacién de la concentracién de oxigeno disuelto con el tiempo 30 °C, 1 VVM y p= 1 cP, para diversos valores de pm. oas 030 | 0.25 0.20 = 048 _ +800 bm o0 mane om 00s | 0.00 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 ts ’ Figura 3. Variacién dé la concentraclon de oxigeno dieuelto con el tiempo a 80°C, 1 VVM y 300 rpm, para diversos valores dey 0.98 0.80 0.28 0.20 Agua, 1 oP Gots = ONO, 15 oP auto os | | —w— CMC, 200 oP 0.00 LA Bo G0 90 120 160 100 210 240 270900 990 900 990 «20 a0 AIO ID GAD” 670 600 630 600 90 720 te a) Varlacién de k,a con la aereacin Para esta determinacién, se utiliz6 un litro de agua destilada y se fijé un grado de agi- tacién de 300 rpm. Se eligieron tres niveles de aereacién: 0,4 VVM, 1,2 VVM y 2,0 VVM, midiéndose para cada caso la veloci- dad de saturacién del medio liquido cada 20 segundos. Los resultados se muestran en la figura 1. b) Varlacién de k,a con ei grado de agitaclén En estos ensayos se usé un litro de agua des- tilada para un nivel de aereacién fjo de 1 WWM. Se experiment6-para tres grados de agitacion: 300 rpm, 500 rpm y 800 rpm, y serraglstré para cada uno de estos valores la cinética de satu- racion cada 20 segundos. Los resultados se muestran en la figura 2. 25¢) Varlacién de k,a con la viscosidad Se eligié un régimen de aereacién constante de 1 VVM y un grado de agitacién también constante de 300 rpm. Las mediciones se lle- varon a cabo en tres madios distintos: 11 de agua destilada (1 cP), 11 de una solucién de ‘CMC al 0,5% (15 cP) y un ltro de una solucién de CMC al 1,0% (200 oP). Los datos de solubilidad se registraron cada 30 segundos para cada uno de los medios sefialados. Los resultados se presentan en la figura 3, RESULTADOS Y DISCUSION Enlas figuras 1,2 y 3 se muestran las variacio- nes de k,a con el fiujo de aire, grado de agita- cién y visoosidad del medio, respectivamente, Utiizando esta base y con la ecuacién (11), se determinaron los distintos valores de k,a, los cuales son presentados en las tablas 1,2 y 3. ‘Tabla 1. Variacion de k,a con la viscosidad. Como se observa a través de los resultados obtenidos para k,a, existen marcadas influen- clas del caudal de aire, et nivel de agitacién y la viscosidad de la solucién en el coeficiente de transferencia volumétrica. Hay una depen dencia directa con el caudal y la agitacion, y tuna relacién inversa con a viscosidad del me- dio. Efectivamente, estas dependencias fue- ron estudiadas por diversos investigadores, 26 quienes establecieron relaciones empiricas cuya validez estd limitada al rango de experi- mentaci6n correspondiente. Una de las corre- laciones més importantes es, precisamente, la de Richards [7], que guarda acuerdo mutuo con los resultados obtenidos aqul. Por otto lado, es importante resaltar que el uso de las correlaciones de la literatura no son del todo recomendables, en especial cuando {a solucién tiene marcada influencia por la vis cosidad (fluidos no newtonianos), para cuyo caso es necesario realizar mediciones in situ para estimar un valor adecuado de ka para el escalamiento apropiado. Debs notarse que en un biorreactor batch con aireacién y agitacién mecénica, k,a puede tam- bién expresarsa en términos de la potencia ‘consumida por unidad de volumen (P/V); sin ‘embargo, aun cuando k,a esté funcionalmente relacionado con las anteriores variables de ope- raci6n y disefo, resulta que no es posible re- comendar algin método general para evaluar ka, porlo que resulta imprescindible realizar ediciones experimentales an el equipo y para as condiciones de operacién proyectada del bioreactor, esto incluye la necesaria consi- deracién del ultivo de microorganismo selec- cionado, Por lo tanto, el bioreactor a escala. de laboratorio y banco equipado con un elec- trodo [Link] de respuesta répida propor- ‘cionaré la informacién suficiente para evaluar ken estas escalas y emplearlo para hacer comparaciones entre diferentes reactores que operan en condiciones semejantes y en as- calas mayores. CONCLUSIONES La determinaci6n de k,a para diferentes condi- ciones de aereacién, agitacién y viscosidad conduee a las conclusiones siguientes: ~ _Existe una relacién funcional directa con la areacion y agitacién y una dependencia inver- sa con la viscosidad del medio. = Elmétodo de eliminacién de gas (gassing- out) es una buena alternativa siempre que él sistema de medicién esté equipado con un electrode de tiempo de respuesta répida. + _Elmétodo anterior puede extenderse para determinaciones que envueiva la presencia de microorganismos en al medio, en cuyo caso, 80 resuelve la ecuacién (9) considerando que 1 sistema es homogéneo y que el electrode est midiendo una concentracién media de‘oxigeno disuelto y tomando, paraletamente, un valor medio para C*,, es decir, 1 a(t dt £+0o,X jer (12) que representa una recta de C, vs (dC,/at + y como se observa, para determinar ka, ss6lo serd necesario conocer C, y (dC,/dt). LISTA DE SIMBOLOS a: dreainterfacial, m’/m*. *, : Concentracién del oxigeno disuelto en ‘equilbrio con el oxigeno de la fase gaseo- sa, MMOL. + Concentracién en la interfase. : Concentracién del oxigeno disuelto en el ‘seno del liquido, mMO,/L, CMG : Carboximetiicelulosa, cP. :Centipoise. H’ : Constante de la ley de Henry, k, : Coeficiente de transferencia de masa re- lativo a la fase gaseosa, mis, k, Coeficiente de transferencia de masa re- lativo a la fase liquida, m/s. K, : Coeficiente global de transferencia de masa relativo a la fase gaseosa, m/s. K, } Coeficiente global de transferencia de masa relativo a la fase Iiquida, m/s. ka : Coeficiente volumétrico de transferencia de masa, tr’. + Velocidad de transferencia de masa. pt: Presién parcial de oxigeno en la fase ga- ‘seosa que estarfa en equilibrio con una fase Iiquida donde la concentraciénfuese C,, atm. C, pi : Presién parcial de oxigeno junto a la interfase, atm. P : Presién parcial media de oxigeno en la fase gaseosa, atm, P : Potencia, HP. ‘e :Demanda espeetfica de oxigeno, mMOJ g.células-h. 1pm : Revoluciones por minuto, min’. t :Tiompo, s. bi: Viscosidad, oP, V_:Volumen, L. ‘WM: Volumen de gas, por volumen de Ifqui- do, por minuto. X _:Concentracién calular, g/L. AGRADECIMIENTO Los autores expresan su agradecimiento al Consejo Superior de Investigacion de la Univer- sidad Nacional Mayor de San Marcos por el financlamiento de este trabajo de investigacién. BIBLIOGRAFIA Quinteros, R., ingenierla Bioquimica, Edi- torlal Alhambra Mexicana $.A., México, (1981). Van't Riet, K., Mass Transfer in Fermentation, Trends in Biotechnology, 1(4), 113, (1983). Calderbank, PH. y Moo-Young, M.B.,The Continuous Phase Heat an Mass Transfer Properties of Dispersions, Trans. Inst. Chem, Eng., 39, 337(1961). Akita, K. y Yoshida, F., Bubble Size, Interfacial Area and Liquid-Phase Mass Transfer Cosficient in Bubble Columns, I&EC Process Des. 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