UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL

PERU

E.A.P. DE INGENIERIA QUIMICA

SEMESTRE: VI SECCION: A

INTEGRANTES:

 LAVADO HUARCAYA Ruth

 ÑAUPARI GONZALES Yordi
 ROJAS MOYA, Estephany Yackelin

ANALISIS POR INSTRUMENTACION

24. CUESTIONES Y PROBLEMAS
24.1. DEFINIR

a) Elución
Es un proceso en el cual las especies son lavadas a través de una columna
cromatográfica por el flujo o la adición del solvente fresco.
b) Fase móvil
La fase móvil en cromatografía es el que los movimientos encima o a través de
una fase inmóvil que se fija en su lugar en una columna o en la superficie de una
placa plana.
c) Fase estacionaria
La fase estacionaria en una columna cromatográfica es un sólido o líquido se fija
en su lugar. La fase móvil entonces pasa encima o a través de la fase
estacionaria.
d) Constante de distribución
La constante distribución K en cromatografía es la relación de la concentración
del analito en la fase estacionaria a su concentración (actividad) en la fase móvil
cuando existe equilibrio entre las dos fases.
e) Tiempo de retención
 El tiempo de retención para un analito es el intervalo de tiempo entre su inyección
en una columna y la aparición de su pico en el otro extremo de la columna.
f) Factor de retención
El factor k de retención se define por la ecuación:
𝑘 = 𝐾𝐴 𝑉𝑆 /𝑉𝑀
Donde 𝐾𝐴 es la constante de distribución de la especie 𝐴, 𝑉𝑆 y 𝑉𝑀 son los
volúmenes de las fases estacionarias y móviles, respectivamente.
g) Factor de selectividad
El factor de selectividad α de una columna hacia las especies A y B es dada por
𝛼 = 𝐾𝐵 /𝐾𝐴 , donde 𝐾𝐵 es la constante de distribución de las especies más
fuertemente sostenidas y 𝐾𝐴 es la constante de distribución de las especies
menos fuertemente sostenidas.
h) Altura de pico
La altura 𝐻 de la placa de una columna cromatográfica se define por la relación
𝐻 = 𝜎 2 /𝐿 donde 𝜎 2 es la varianza obtenida de la Gaussiana en forma de pico
cromatográfico y L es la longitud de la columna en centímetros.
i) Difusión longitudinal
Es una fuente de banda ampliar en una columna en el cual un soluto difunde
desde el centro de concentración de la banda a las regiones más diluidas en
ambos lados.
j) Difusión aparente
Es un fenómeno en el cual las moléculas de un analito llegan al final de una
columna en diferentes momentos como consecuencia de viajar a través de la
columna por las vías que difieren en longitud.
k) Resolución de la columna
La resolución 𝑅𝑠 de una columna hacia dos especies 𝐴 y 𝐵 está dada por la
ecuación 𝑅𝑠 = 2𝛥𝑍 /(𝑊𝐴 + 𝑊𝐵 ) donde 𝛥𝑍 es la distancia (en unidades de
tiempo) entre los picos de las dos especies, y 𝑊𝐴 y 𝑊𝐵 son las anchuras (también
en unidades de tiempo) de las cumbres en sus bases.
l) Eluyente
El eluyente en cromatografía es la nueva fase móvil que lleva el analito a través
de la columna.
24.2. DESCRIBA EL PROBLEMA GENERAL DE LA ELUCIÓN

El problema general de elución surge cuando cromatogramas se obtuvieron en

muestras que contienen especies ampliamente con diferentes constantes de
distribución. Cuando las condiciones son tales que las buenas separaciones de las
especies más fuertemente retenidas se realizan, se observa la falta de resolución
entre las especies que se encuentran débilmente. Por el contrario, cuando las
condiciones son favorables que dan separaciones satisfactorias de los
compuestos débilmente retenidas, banda severa ampliación y se encuentran
largos tiempos de retención para las especies fuertemente unidos. El problema
general de elución se resuelve a menudo en la cromatografía de líquido por
gradiente de elución en cromatografía de gases y por la programación de la
temperatura.

24.3. ENUMERE LAS VARIABLES QUE ORIGINAN EL ENSANCHAMIENTO DE

BANDA EN CROMATOGRAFÍA.
Las variables que conducen a la zona de ensanchamiento incluyen (1) diámetro
de partícula grande para fases estacionarias; (2) columna de grandes diámetros;
(3) altas temperaturas (importantes solamente en GC); (4) para líquidos fases
estacionarias, gruesas capas del líquido inmovilizado; y (5) caudales muy altos o
muy bajos.

24.4. ¿CUÁLES SON LAS PRINCIPALES DIFERENCIAS ENTRE LA

CROMATOGRAFÍA GAS – LÍQUIDO Y LÍQUIDO – LÍQUIDO?
En cromatografía de gas-líquido, las fases móviles son los gases, mientras que,
en cromatografía de líquidos, son los líquidos.

24.5. ¿CUÁLES SON LAS PRINCIPALES DIFERENCIAS ENTRE LA

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDO – LÍQUIDO Y LÍQUIDO – SÓLIDO?
En la cromatografía líquido-líquido, la fase estacionaria es un líquido que está
inmovilizado por adsorción o unión química a una superficie sólida. Los equilibrios
que causa la separación son equilibrios de distribución entre dos fases líquidas
inmiscibles. En la cromatografía líquido-sólido, la fase estacionaria es una
superficie sólida y los equilibrios implicados son equilibrios de adsorción.

24.6. ¿QUÉ VARIABLES TIENEN MÁS PROBABILIDAD DE AFECTAR AL FACTOR

DE SELECTIVIDAD 𝛂 CORRESPONDIENTE A UN PAR DE ANALITOS?
 Las variables que afectan el factor α selectividad incluyen la composición de la
fase móvil, la temperatura de la columna, la composición de la fase estacionaria,
y químicas interacciones entre la fase estacionaria y uno de los solutos están
separados.
24.7. EXPLIQUE LA MANERA EN QUE SE PUEDE MANIPULAR EL FACTOR DE
RETENCIÓN DE UN SOLUTO.
En GC, el factor de retención se varía mediante el cambio de la temperatura de la
columna como se hace en la programación de la temperatura. En LC, las
variaciones se logran mediante la alteración de la composición del disolvente como
en el gradiente de elución.

24.8. DESCRIBA UN MÉTODO PARA DETERMINAR EL NÚMERO DE PLATOS DE

UNA COLUMNA.
El número de placas en una columna se puede determinar midiendo el tiempo de
retención t R y la anchura de un pico en su base W. El número de placas de N es
entonces N = 16 (t R / W)2 .

24.9. MENCIONE DOS MÉTODOS GENERALES PARA MEJORAR LA

RESOLUCIÓN DE DOS SUSTANCIAS EN LA COLUMNA
CROMATOGRÁFICA.
La disminución de las anchuras de los picos aumentará resolución será el
aumento de la separación de los picos. El aumento de la separación se puede
hacer por el alargamiento de la columna para aumentar el número de placas o el
aumento de la selectividad.
24.10. ¿POR QUÉ EL MÍNIMO EN LA GRÁFICA DE LA ALTURA DE PLATO FRENTE
A TASA DE FLUJO SE ENCUENTRA A TASAS DE FLUJO MENORES EN
CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS QUE EN CROMATOGRAFÍA DE GASES?
Difusión longitudinal es mucho más importante en GC que en LC. Difusión
longitudinal es una gran contribución a H a velocidades de flujo bajas. Los
descensos iniciales de H en tramos de altura de la placa frente a la velocidad de
flujo son, pues, en gran parte el resultado de la difusión longitudinal. Debido a
que los coeficientes de difusión gaseosa son órdenes de magnitud más grande
que los valores de líquidos, el fenómeno se hace evidente a velocidades de flujo
más altas en GC que en LC. El mínimo a veces no se observa en todos en LC.

24.11. ¿QUÉ ES LA ELUCIÓN CON GRADIENTE?

 La elución en gradiente es un método de llevar a cabo cromatografía de líquido
en el que la composición de la fase móvil se cambia continuamente o en pasos
con el fin de optimizar las separaciones.
24.12. LOS
SIGUIENTES DATOS CORRESPONDEN A UNA COLUMNA
CROMATOGRÁFICA DE LÍQUIDOS:

Longitud del
24.7 cm
relleno
Tasa de flujo 0.313 mL/min
𝐕𝐌 1.37 mL
𝐕𝐒 0.164 mL

Un cromatograma de una mezcla de las especies A, B, C y D proporciona los

siguientes datos:

Tiempo de retención, Anchura del pico en la

min base (𝐖), min
No retenida 3.1 0.41
A 5.4 1.07
B 13.3 1.16
C 14.1 1.72
D 21.6 1.72

Cálculos:
a) El número de platos para cada pico
Se emplea la siguiente ecuación: N = 16(tR/W)2
Para A, N = 16 × (5.4/0.41)2 = 2775.49 ≈ 2775
Para B, N = 16 × (13.3/1.07)2 = 2472.04 ≈ 2472
Para C, N = 16 × (14.1/1.16)2 = 2363.97 ≈ 2364
Para D, N = 16 × (21.6/1.72)2 = 2523.31 ≈ 2523

b) La media y desviación estándar de N

N = (2775.49 + 2472.04 + 2363.97 + 2523.31)/4 = 2533.70 ≈ 2500
s = 200

c) La altura de plato de la columna

 Usando la ecuación: H = L/N
24.7cm
H= = 0.0097 cm
2534 platos

24.13. CON LOS DATOS DEL PROBLEMA 24-12, CALCULE PARA A, B, C Y D.

a) el factor de retención
Para ello usamos la siguiente ecuación: k = (t R − t M )/t M
Para A: k A = (5.4 – 3.1)/3.1 = 0.74
(13.3– 3.1)
Para B: k B = = 3.3
3.1

Para C: k C = (14.1– 3.1)/3.1 = 3.5

Para D: k D = (21.6– 3.1)/3.1 = 6.0
b) La constante de distribución
Para ello usamos la siguiente ecuación: K = k(VM /VS )

K = [(t R − t M )/t M ] × 1.37⁄0.164 = [(t R − t M )/t M ] × 8.35

Para A: (5.4 – 3.1)/3.1 × 8.35 = 6.2

Para B: (13.3 – 3.1)/3.1 × 8.35 = 27
Para C: (14.1 – 3.1)/3.1 × 8.35 = 30
Para D: (21.6 – 3.1)/3.1 × 8.35 = 50

24.14. CON LOS DATOS DEL PROBLEMA 24-12, CALCULE PARA LAS ESPECIES
BYC

a) La resolución
2[(tR )C −(tR )B ]
Se emplea la siguiente ecuación: R s = WB +WC

2(14.1 − 3.1)
Rs = = 0.72
(1.07 + 1.16)
b) El factor de selectividad α
(t R )C − t M
αC,B = = 1.08
(t R )B − t M
 c) La longitud de columna necesaria para separar las dos especies con una
resolución de 1.5.

(R s )1 √N1 0.717 √2534

= = =
(R s )2 √N2 1.5 √N2
(1.5)2
N2 = 2534 × = 11090 platos
(0.717)2
L=H×N
Pero H = 0.0097 cm/plato
Entonces: L = 0.0097 × 11090 = 108 cm
d) El tiempo necesario para separar las dos especies con una resolución de 1.5.

(t R )1 (R s )1 2 14.1 (0.717)2
= = =
(t R )2 (R s )2 2 (t R )2 (1.5)2

(1.5)2
→ (t R )2 = 14.1 × = 61.7 ≈ 62min
(0.717)2

24.15. CON LOS DATOS DEL PROBLEMA 24-12, CALCULE PARA LAS ESPECIES
CYD

a) La resolución
2[(tR )D −(tR )C ]
Rs = → R s = 2(14.1 − 13.3)/(1.07 + 1.16) = 0.72
WC +WD

b) La longitud de columna necesaria para separar las dos especies con una
resolución de 1.5

(R s )1 2 (1.5)2
N1 = N2 = 2534 × = 210 platos
(R s )2 2 (5.21)2
cm
L = H × N = 0.0097 × 210platos = 2.0 cm
plato

24.16. CON UN CROMATOGRAFO GAS-LIQUIDOY CON UNA COLUMNA DE

RELLENO DE 40CM SE OBTUVIERON LOS SIGUIENTES DATOS:
 Compuesto 𝐭 𝐑 , 𝐦𝐢𝐧 𝐖, 𝐦𝐢𝐧
Aire 1.9 −
Metilciclohexano 10.0 0.76
Metilciclohexeno 10.9 0.82
Tolueno 13.4 1.06

Calcule:
a) El número de platos promedio a partir de los datos
N = 2.7 × 103
b) La desviación estándar para el promedio en a)
s = 100
c) La altura de plato promedio para la columna
H = 0.015
24.17. EN RELACIÓN CON EL PROBLEMA 24-16, CALCULE LA RESOLUCIÓN
PARA
 a) Metilciclohexano y metilciclohexeno:
R s = 1.1
b) Metilciclohexeno y tolueno:
R s = 2.7
c) Metilciclohexano y tolueno:
R s = 3.7

24.18. SI 𝐕𝐒 𝐲 𝐕𝐌 PARA LA COLUMNA DEL PROBLEMA 26.18 SON 19.6 Y 62.6 ML

RESPECTIVAMENTE Y EL PICO DE AIRE NO RETENIDO APARECE
DESPUÉS DE 1.9 MIN, CALCULE:

a) El factor de retención para cada compuesto:

k1 = 4.3, k 2 = 4.7 y k 3 = 6.1

b) La constante de distribución para cada compuesto:

K1 = 14, K 2 = 15 y K 3 = 19

c) El factor de selectividad para el metilciclohexano y el metilciclohexeno:

α2,1 = 1.11, α3,2 = 1.28
24.19. ENUMERAR LAS VARIABLES QUE CONDUCEN A UN (A)
ENSANCHAMIENTO DE BANDA Y (B) UNA SEPARACIÓN DE BANDAS
a)

 Influencia del caudal de la fase móvil

 Relación entre la altura del plato y las variables de la columna
 Término del camino múltiple
 Difusión longitudinal
b)

 Velocidad lineal de la fase móvil

 Coeficiente de difusión en la fase móvil
 Coeficiente de difusión en la fase estacionaria
 Factor de capacidad
 Diámetro de la partícula de relleno
 Grosor del recubrimiento líquido en la fase estacionaria

24.20. CUAL SERÍA EL EFECTO SOBRE UN PICO CROMATOGRÁFICO DE LA

INTRODUCCIÓN DE LA MUESTRA A UNA VELOCIDAD DEMASIADO
LENTA?
No se generaría pico o sería muy pequeño ya que el analito no alcanzaría el
detector

24.21. A PARTIR DE ESTUDIOS DE DISTRIBUCIÓN DE LAS ESPECIES M Y N SE

SABE QUE SUS COEFICIENTES DE DISTRIBUCIÓN EN EL SISTEMA
AGUA/HEXANO SON 6,01 Y 6,20 (K= (M)AGUA/(H)HEX.). LAS DOS
ESPECIES SE SEPARAN POR ELUCIÓN CON AGUA ADSORBIDA. LA
RELACIÓN VS/VMPARA EL RELLENO RESULTA SER DE 0,422.
a) Calcular el factor de capacidad para cada uno de los solutos.
K’A= 6,01*0,422 K’B= 6,20*0,422
K’A= 2,536 K’B= 2,616

b) Calcular el factor de selectividad.

 𝐾𝐵 6,20
𝛼= 𝛼= = 1,031
𝐾𝐴 6,01

c) ¿Cuántos platos se necesitarán para tener una resolución de 1,5?

∝ 2 1 + 𝐾′𝐵 2
𝑁 = 16𝑅𝑠2( ) ( )
∝ −1 𝐾′𝐵
𝑁 = 36 ∗ 1106,098 ∗ 1,910 = 76055,30

d) ¿Qué longitud de columna se necesita si la altura de plato del relleno es

2,2x10-3 cm?
L=N*H L=76055,30*2,2X10-3 L=167321,660cm

e) ¿Si se utiliza una velocidad lineal de flujo de 7,10 cm/min, qué tiempo se
necesitará para eluir las dos especies?
16𝑅𝑠2𝐻 ∝ 2 (1 + 𝐾 ′ 𝐴)3
𝑡𝑅𝐴 = ( )
𝑢 ∝ −1 𝐾′𝐴2
𝑡𝑅𝐴 = 0,11 ∗ 1106,09 ∗ 6,874 𝑡𝑅𝐴 = 83,63 𝑚𝑖𝑛
𝑡𝑅𝐵 = 0,11 ∗ 1106,09 ∗ 6,90 𝑡𝑅𝐴 = 84,03 𝑚𝑖𝑛
𝑡𝑅 = 167,69 𝑚𝑖𝑛

24.22. REPETIR LOS CÁLCULOS EN EL PROBLEMA 24-21 ASUMIENDO QUE KM

= 5,81 Y KN= 6,20.
a) Calcular el factor de capacidad para cada uno de los solutos.
K’A= 5,81*0,422 K’B= 6,20*0,422
K’A= 2, 451 K’B= 2,616

b) Calcular el factor de selectividad.

𝐾𝐵 6,20
𝛼= 𝛼= = 1,067
𝐾𝐴 5,81

c) ¿Cuántos platos se necesitarán para tener una resolución de 1,5?

∝ 2 1 + 𝐾′𝐵 2
𝑁 = 16𝑅𝑠2( ) ( )
∝ −1 𝐾′𝐵
 𝑁 = 36 ∗ 253,6 ∗ 1,910 = 17437,53

d) ¿Qué longitud de columna se necesita si la altura de plato del relleno es

2,2x10-3 cm?
L=N*H L=17437,53*2,2X10-3 L=38,36cm

e) ¿Si se utiliza una velocidad lineal de flujo de 7,10 cm/min, qué tiempo se
necesitará para eluir las dos especies?
16𝑅𝑠2𝐻 ∝ 2 (1 + 𝐾 ′ 𝐴)3
𝑡𝑅𝐴 = ( )
𝑢 ∝ −1 𝐾′𝐴2
𝑡𝑅𝐴 = 0,11 ∗ 253,6 ∗ 6841 𝑡𝑅𝐴 = 190,84 𝑚𝑖𝑛
𝑡𝑅𝐵 = 0,11 ∗ 1106,09 ∗ 6,90 𝑡𝑅𝐴 = 84,03 𝑚𝑖𝑛
𝑡𝑅 = 274,87 𝑚𝑖𝑛

24.23. Las áreas del pico obtenidas por cromatografía de gases para una mezcla
de acetato de metilo, propionato de metilo, y n-butirato de metilo fueron
17.6, 44.7, y 31.1, respectivamente. Calcular el porcentaje de cada
compuesto si las respectivas respuestas de detección relativas fueron 0.65,
0.83 y 0,92.
Factor de
Área de pico, cm2 Área x F
respuesta relativa
Acetato de metilo 17,6 0,65 11,44

Propionato de metilo 44,7 0,83 37,10

n-butirato de metilo 31,1 0,92 28,61

77,15

% acetato de metilo = (11,44/77,15) x 100 = 14,8

% propionato de metilo = (37,10/77,15) x 100 = 48,1

% n-butirato de metilo = (31,1/77,15) x 100 = 37,1

24.24. A CONTINUACION SE DAN LAS ÁREAS RELATIVAS PARA LOS CINCO
PICOS DE LA FIGURA 24-13, OBTENIDAS POR CORMATOGRAFIA DE
GASES. TAMBIÉN SE INDICAN LAS RESPUESTAS RELATIVAS DEL
DETECTOR PARA LOS CINCO COMPUESTOS. CALCULE EL PORCENTAJE
DE CADA COMPUESTO EN LA MEZCLA.
Área relativa, Respuesta relativa,
Compuesto
de pico del detector
1 27.6 0.70
2 32.4 0.72
3 47.1 0.75
4 40.6 0.73
5 27.3 0.78

(1) 𝐴𝑟𝑒𝑎 × 𝐹 = 27.6 × 0.70 = 19.32

(2) 𝐴𝑟𝑒𝑎 × 𝐹 = 32.4 × 0.72 = 23.33
(3) 𝐴𝑟𝑒𝑎 × 𝐹 = 47.1 × 0.75 = 35.33
(4) 𝐴𝑟𝑒𝑎 × 𝐹 = 40.6 × 0.73 = 29.64
(5) 𝐴𝑟𝑒𝑎 × 𝐹 = 27.3 × 0.78 = 21.2
𝑇𝑂𝑇𝐴𝐿 = 128.91
Hallando el porcentaje de cada compuesto de la mezcla
(1) 𝐴𝑟𝑒𝑎 × 𝐹
% 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 1 = ( ) × 100 = 14.99
𝑇𝑂𝑇𝐴𝐿
(2) 𝐴𝑟𝑒𝑎 × 𝐹
% 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 2 = ( ) × 100 = 18.10
𝑇𝑂𝑇𝐴𝐿
(3) 𝐴𝑟𝑒𝑎 × 𝐹
% 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 3 = ( ) × 100 = 27.40
𝑇𝑂𝑇𝐴𝐿
(4) 𝐴𝑟𝑒𝑎 × 𝐹
% 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 4 = ( ) × 100 = 22.99
𝑇𝑂𝑇𝐴𝐿
(5) 𝐴𝑟𝑒𝑎 × 𝐹
% 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 5 = ( ) × 100 = 16.52
𝑇𝑂𝑇𝐴𝐿

TOTAL= 100.00
 26. CUESTIONES Y PROBLEMAS

26.1. Enumere los tipos de sustancias en los cuales son más aplicables los
siguientes métodos de cromatografía:

a) Gas – líquido
Especies que son un poco volátiles y térmicamente estables.
b) Absorción de líquidos
No polares compuestos orgánicos de bajo peso molecular y especies
orgánicas particularmente isómeros.
c) Reparto líquido – líquido
Especies moleculares que son permanentes o térmicamente inestables.
d) Reparto en fase inversa
Especies orgánicas de bajo o moderado peso molecular, no volátiles o
térmicamente inestables.
e) Intercambio iónico
Sustancias que no son iónicas.
f) Penetración en gel
Compuestos de altos pesos moleculares que son solubles en disolventes no
polares.
g) Gas – sólido
Gases de bajo peso molecular no polares.
h) Filtración sobre gel
Compuestos hidrofílicos de alto peso molecular.
i) Pares iónicos
Iones orgánicos e inorgánicos pequeños.

26.2. Describa tres métodos generales para mejorar la resolución en la

cromatografía de reparto.
 Tres métodos para mejorar la resolución incluyen:
(1) Ajuste de k A y k B mediante el empleo de una fase móvil de múltiples
componentes y la variación de la revuelta de los disolventes de encontrar una
mezcla óptima.
(2) Variación en la composición química del sistema solvente de manera tal que α
más grande.
(3) Empleando un relleno diferente en que α es mayor.

26.3. Explique una forma de modificar el factor de retención de un soluto en la

cromatografía de reparto.
En cromatografía de reparto, k es variada convenientemente usando un sistema
componente solvente de dos (o más) y variando la proporción de los solventes.

26.4. ¿Cómo se puede modificar el factor de selectividad en a) la cromatografía

de gases y b) la cromatografía de líquidos?

(a) en cromatografía de gases, α es generalmente variada variando la columna

del relleno.
(b) (b) en LC, columna del relleno y composición química de la fase móvil pueden
variar para producir mejores valores α.

26.5. Al preparar un gradiente con hexano – acetona para una columna de HPLC
rellena de alúmina, ¿es deseable aumentar o disminuir la proporción de
hexano a medida que progresa la elución en la columna?
En cromatografía de adsorción con un relleno de alúmina, es generalmente mejor
aumentar la polaridad de la fase móvil a medida que avanza la elución. Así la
proporción de acetona con el hexano debe aumentarse a medida que avanza la
elución.
26.6. Definir los siguientes términos:
a) Difusor: Un difusor es un dispositivo, generalmente una superficie (por
ejemplo, un revestimiento), que distribuye el sonido que incide sobre el mismo,
en el espacio y en el tiempo

b) Elución isocrática: En una elución isocrática, la composición solvente se

mantiene constante a lo largo de la elución.

c) Elución con gradiente: En una gradiente elución, se utilizan dos o más

solventes y la composición de la fase móvil va cambiando continuamente o en
pasos a medida que avanza la separación.
 d) Inyección con parada de flujo: En una inyección de flujo detenido, se detiene
el flujo de disolvente, se elimina un accesorio a la cabeza de la columna, y la
muestra se inyecta directamente en la cabeza de la columna. El accesorio se
sustituye a continuación, y el bombeo se reanuda

e) Relleno pelicular: El relleno pelicular consiste de bolillas esféricas, no

porosas, de vidrio o polímero, con diámetros típicos de 30 a 40 um. Para
algunas aplicaciones, se aplica un recubrimiento adicional, que consiste de
una fase estacionaria líquida que se mantiene adsorbida.

f) Ensanchamiento extracolumna: El ensanchamiento extracolumna se

presenta cuando el soluto se transporta a través de tubos abiertos como los
que se utilizan en los sistemas de inyección, en la región de los detectores y
en los tubos que conectan los distintos componentes del sistema.

g) Relleno de fase inversa: Un relleno de fase inversa es un relleno no polar que

se emplea en cromatografía de partición con una fase móvil relativamente
polar.

h) Relleno de fase normal: En un relleno de fase normal, la fase estacionaria es

polar y la fase móvil es relativamente no polar

i) Detector de propiedades de la disolución: Un detector de propiedad de la

solución responde a alguna propiedad de la fase móvil (tales como la
conductividad térmica o eléctrica) que se ve alterada por la presencia de
analitos.

j) Detector de propiedades del soluto: Un detector de propiedad del soluto

responde a alguna propiedad de analitos, tales como la absorción o
fluorescencia

26.7. ¿Qué se entiende por intervalo de respuesta lineal de un detector?

El rango de respuesta lineal de un detector es el rango de concentración de

analito o masa sobre el cual el detector responde linealmente. Es el mismo que
el rango dinámico.
26.8. ¿Qué es la precolumna en la cromatografía de reparto?
Para aumentar la vida de la columna analítica, se coloca unapre columnaque
elimina no solo la materia en suspensión y los contaminantes de los solventes,
sino también los componentes de la muestra que se unen de manera irreversible
a la fase estacionaria.
26.9. ¿En qué se parecen la cromatografía de reparto en fase normal y la
cromatografía de adsorción?
 La cromatografía de reparto en fase normal y la cromatografía de adsorción son
similares en el sentido que las fases estacionarias en ambos son polares,
mientras que las fases móviles son relativamente no polares.
26.10. Enumerar las características deseables para un detector de HPLC.
1. Debe tener un volumen interno mínimo con el fin de reduciré el
ensanchamiento de banda y ser compatible con el flujo de líquidos.

2. Absorbancia.

3. Fluorescencia

4. Electroquímica

5. Índice de refracción

6. Conductividad

7. Espectrometría de masas

8. IR de transformada de Fourier

9. Dispersión de la luz

10. Actividad óptica

11. Selectivo a elementos

12. Fotoionización.

26.11. Describir algunas técnicas que se utilizan para acoplar un cromatógrafo de

líquidos con un espectrómetro de masas.

Recipientes para la fase móvil y sistemas para el tratamiento de los

disolventes

Un aparato moderno de HPLC se equipa con uno o más recipientes de vidrio o

de acero inoxidable, cada uno de los cuales contiene unos 500 mL de un
disolvente. Los recipientes a menudo se equipan con un sistema para eliminar
los gases disueltos -en general oxígeno y nitrógeno- que interfieren formando
burbujas en los sistemas de detección.

Sistemas de bombeo
 Los requisitos para un sistema de bombeo en HPLC son rigurosos e incluyen: (1)
La generación de presiones por encima de 400 kg/cm2, (2) un flujo libre de
pulsaciones, (3) un intervalo de caudales de 0.1 a 10 mL/min, (4) el control y
reproducibilidad del caudal mejor del 0,5% relativo y (5) componentes resistentes
a la corrosión (juntas de acero inoxidable o teflón). Debe subrayarse que las altas
presiones que generan las bombas de HPLC no constituyen un riesgo de
explosión, debido a que los líquidos no son muy compresibles.

Amortiguadores de pulsos 4. Cromatografía de líquidos de alta resolución

Muchos de los detectores utilizados en HPLC son sensibles a variaciones de flujo.

Un método sencillo de amortiguación contiene un fuelle flexible o un gas
compresible en la porción superior cerrada de un tubo en T para absorber parte
de la energía de pulsación. Cuando la bomba se rellena esta energía se libera
para ayudar a suavizar la pulsación de presión.

26.12. Enumerar las distintas propiedades y funciones de la fase móvil en la

cromatografía de gases y la de líquidos. ¿Cómo influyen esas diferencias
en las características de los dos métodos?

Fase móvil en cromatografía de gases:

 Es habitual

 Utiliza una fase estacionaria polar y una móvil no polar.

 Utiliza disolventes polares

Fase móvil en cromatografía de líquidos:

 Es un solvente líquido, el cual puede ser puro o una mezcla de solventes.

 El tiempo de retención aumenta con la adición de disolvente polar a la fase

móvil y disminuye con la introducción de disolventes más hidrofóbicos.

 El líquido, se obliga a pasar a través de él, por efecto de la gravedad.

En la cromatografía de gases la elución se produce por el flujo de una fase móvil

de gas inerte. A diferencia de la cromatografía de líquidos, la fase móvil no
interactúa con las moléculas del analito; su única función es la de transportar el
analito a través de la columna.
26.13. En una columna de reparto en fase normal, se encuentra que un soluto tiene
un tiempo de retención de 29,1 min, mientras que una muestra no retenida
tiene un tiempo de retención de 1,05 min cuando la fase móvil es un 50% en
volumen de cloroformo y un 50% en n-hexano. Calcular (a) K’ para el soluto
y (b) una composición de disolventes que condujera a un valor de k’ por
debajo de 10.
′ ′
𝑘2 10(𝑃1 −𝑃2 )
= … . (1)
𝑘1 2
Donde P1’ Y P2’ son los índices de polaridad de cloroformo y n-hexano,
respectivamente.
𝑡𝑅−𝑡𝑀
a) Usando la Ecuación: 𝐾𝐴 = … (2)
𝑇𝑀

29,1 − 2,05
𝑘1 = = 26,7
1,05

b) Usando la Ecuación: 𝑃′𝐴𝐵 = ∅𝑎 𝑃′𝐴 + ∅𝐵 𝑃′𝐵 … (3)

𝑃′𝐴𝐵 = 0,50 × 4,1 + 0,50 × 0,1 = 2,10

10 ′
Sustituyendo en la Ec. (1): 26,7 = 10(2,1−𝑃 2 ) /2

𝑃′2 = 2 × 0,427 + 2,1 = 2,95

Sustituyendo P’2 por P’AB en la ecuación (3) da:

2,95 = ∅𝐴 + ∅𝐵 × 0,1

Donde ∅A+∅𝐵 = 1,00

(2,95 − 0,1)
∅𝐴 = = 0,712
4,0

Así la mezcla deber ser CHCl3 el 71% y 29% n- haxano.

26.14. La mezcla de disolventes del problema 26-13 no proporciona una

separación satisfactoria de los dos solutos. Sugerir cómo se podría
modificar la fase móvil para mejorar la resolución.
La fase móvil se podría mejorar aumentando el volumen del n- hexano, ya que
de esta manera se podrá obtener una resolución mucho más equilibrada.
26.15. Sugerir que tipo de cromatografía líquida que fuera adecuado para la
separación de:

a) Cromatografía en fase inversa y de adsorción.

b) Cromatografía de fase reversa
c) Cromatografía en plano bidimensional
d) Cromatografía de pares iónicos
e) Cromatografía de exclusión molecular

26.16. ¿Qué es una columna supresora y que emplea?

Es una columna que reduce la elevada conductividad del eluyente colocada
después de la columna analítica de intercambio iónico.
Emplea una segunda resine de intercambio iónico, que convierte eficazmente los
iones del disolvente en especies moleculares poco ionizadas.
26.17. En una una columna de gel de sílice, se encuentra que un compuesto tiene
retención de 28 min cuando la fase móvil es tolueno. ¿Qué disolvente de
tetracloruro de carbono o cloroformo, sería más probable que acortase el
tiempo de retención? Justifique su respuesta
El cloroformo, porque se trata de una fase normal puesto que el gel de sílice es
polar y el tolueno es una fase móvil no polar, la adición de un compuesto
levemente más polar a la fase móvil, esto hará que se aumente la movilidad.

26.18. En una separación en fase normal, predecir el orden de elución de:

(a) n-hexano, n-hexanol, benceno

(b) Acetato de etilo, dietiléter, nitrobutano

 (a) Hexano - Benceno – n-Hexanol.

(b) Dietiléter – Acetato de etilo – Nitrobutano.

26.19. Para una separación de fase inversa, predecir el orden de elusión de los
solutos del problema 18.
(a) N-Hexanol – Benceno – Hexano.

(b) Nitrobutano – Acetato de etilo – Dietiléter.

26.20. Estimar la constante de distribución de los compuestos B y C en la figura

28-27, si el volumen de retención para el compuesto A es 5.1 ml y para el
compuesto D es de 14.2 ml.

𝑉𝑅𝐴 5.1 𝑚𝑙
𝐾= 𝐾=
𝑉𝑅𝐷 14.2 𝑚𝑙

K= 0.359
26.21. ¿Qué es un cromatograma de masas y como se obtiene?
Gráfica de picos obtenida por la medición de iones derivados de moléculas.