UNIDAD ESPECIALIZADA EN ENERGÍAS RENOVABLES

Ingeniería en Energías Renovables

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

Nombre del estudiante: Abraham Hernández.

Fecha:19/04/2018

Práctica No. 6

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO PARA LEVADURAS

En el trabajo cotidiano de laboratorio se emplean organismos para el estudio de los

procesos biológicos, los cuales comprenden los de tipo metabólico, procesos
reproductivos y de desarrollo o los procesos infecciosos. Para estudiar los componentes
de la vida es indispensable contar con organismos modelo que se puedan manipular
fácilmente en el laboratorio.

Los hongos unicelulares o levaduras son un modelo de organismos eucariotas bastante

sencillo, que se utiliza comúnmente en el laboratorio. La especie Saccharomyces
cerevisiae es una de las levaduras más estudiadas y es la especie que fermenta la
cerveza y el pan.

Otros hongos unicelulares o levaduras son perjudiciales para otros organismos, por ello
también se estudian como patógenos. Las levaduras pueden cultivarse en grandes
cantidades y utilizar la biomasa (proteína unicelular) como parte de la dieta animal y
humana, por lo que tienen importancia económica a nivel mundial. Por todos estos
motivos el cultivo de levaduras en el laboratorio de microbiología es importante.

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Los medios generales para crecer hongos contienen peptona, una fuente de energía,
como carbohidratos (generalmente glucosa) y agar. Las levaduras pueden crecer a
temperatura ambiente, sin embargo la temperatura óptima para cultivarlas es entre 28 y
30 °C, una presión de oxígeno de 1 atmósfera y a un pH ligeramente ácido, lo cual
puede ayudar a que no crezcan bacterias en este medio tan rico y contaminen los
cultivos. Para evitar el crecimiento de bacterias muchas veces se añaden antibióticos a
los medios de levaduras (como gentamicina o kanamicina), con ellos se inhibe el
crecimiento de la mayoría de bacterias Gram positivas y Gram negativas. En ocasiones
se utilizan 2 o más antibióticos para asegurarse la inhibición del crecimiento de
bacterias, en ellos se puede usar también cloranfenicol. Las bacterias tienen una tasa
de crecimiento mayor que las levaduras, por lo que pueden contaminar el medio e
impedir el crecimiento de la levadura.

Algunos medios comunes y generalistas para crecer levaduras tienen un pH ácido

como los medios Agar Sabouraud o Agar papa dextrosa. Los medios comunes con
antibióticos son OGA (Oxitetraciclina glucosa Agar) o CGA (Cloranfenicol glucosa agar)
usados para el recuento de colonias. Para el crecimiento de mohos en general se usa
comúnmente el medio agar rosa bengala con cloranfenicol.

El medio más completo con el que se puede crecer levaduras y el que se suele usar
para crecer S. cerevisiae, en el laboratorio es YEPD o YPD. En él se incluye extracto de
levadura, normalmente un 1% en proporción masa/volumen con el agua, 2% de
peptona, 2% de glucosa o dextrosa como fuente de energía y agua destilada hasta el
volumen que se requiera. Si se desea hacer un medio sólido, se añade agar, en la
concentración deseada (generalmente entre 1 y 2 %). La mezcla se esteriliza en
autoclave antes de poner a crecer las levaduras para evitar que crezcan otros
organismos.

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OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:

1. Preparar medio de cultivo sólido y líquido como soporte y fuente de nutrientes

para el desarrollo de levaduras in vitro.
2. Conocer y manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que
imprescindibles, en la elaboración de medios de cultivo.
3. Conocer y comprender el proceso de esterilización por calor húmedo.

MATERIAL Y EQUIPO:

 Balanza analítica
 Autoclave (olla de presión)
 Peptona
 Extracto de levadura
 Sacarosa
 Agar bacteriológico
 Agua destilada
 Algodón
 Guantes de carnaza
 Placas de Petri estériles
 3 pipetas serológicas de 10 mL
 3 matraces Erlenmeyer de 500 mL
 3 mecheros Fisher
 3 tripiés (base para la olla)
 25 tubos de ensayo de 13x100 mm
 3 gradillas para tubos de 13x100 mm
 3 probetas de 250 mL
 3 probetas de 100 mL

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DESARROLLO Y OBSERVACIONES DE LA PRÁCTICA:

(Describe las actividades que desarrollaste en la práctica, te recomiendo agregar
imágenes de las evidencias)
Se prepararon 150 ml de medio de cultivo líquido
150 ml de agua destilada
Extracto de levadura 1% = 1.5gr
Peptona 2% = 3gr
Sacarosa 2% = 3gr
Agar bacteriológico 1.5 =2.25gr

Primero pesar los ingredientes en una báscula analítica de precisión.

Una vez pesados los ingredientes, se procede a preparar el medio de cultivo liquido
agregando los componentes a un matraz Erlenmeyer (agua destilada, peptona,
sacarosa, extracto de levadura) agitando hasta disolver los grumos y conseguir una
mezcla homogénea. Una vez preparado el medio de cultivo líquido se agregaron 2ml a
los tubos de ensayo con la ayuda de una pipeta y tapamos con un tapón de algodón los
tubos de ensayo.

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Para la preparación del medio de cultivo solido se agrega el agar bacteriológico al

medio liquido sobrante, se aplica calor con mechero Fisher y con la ayuda de un guante
de carnaza agitando el matraz disolviendo los grumos hasta conseguir un aspecto
cristalino y se tapa la boca del matraz con algodón , gasa , papel y cinta reveladora .

Una vez preparados los medios de cultivo usamos dos mecheros fisher y tres tripiés
(base para autoclave) y colocamos los cultivos dentro del autoclave hasta conseguir
121C° o 15psi por 15miutos.
Después de haber terminado el proceso en el autoclave(esterilización) se limpia la
mesa de trabajo con etanol y el cultivo solido se vacía en placas Petri cercas de un
mechero y se deja que complete su proceso de solidificación.

CONCLUSIÓN DE LA PRÁCTICA:
(¿Qué conclusiones personales puedes obtener de lo realizado en la práctica?, ¿Cuál
es el principal conocimiento que te aporta?)

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El principal conocimiento adquirido es la preparación correcta del medio de cultivo

liquido y solido , sus respectivos cuidados para un resultado favorable al momento de
hacer la siembra de levaduras .

CUESTIONARIO:
(Investiga y resuelve las siguientes preguntas, recuerda agregar la referencia de donde
obtuviste la información)
1. ¿Qué es el extracto de levadura?
Se obtiene por hidrólisis ácida o enzimática de levaduras
El agar extracto de levadura se utiliza para la enumeración de microorganismos.
El agar extracto de levadura no está destinado a ser utilizado en el diagnóstico
de enfermedades u otras condiciones en humanos. Soluble en agua formado por
el autolisado de células de levaduras. Es un producto rico en vitaminas
especialmente del complejo B, aminoácidos y otros factores de crecimiento.
http://foodsafety.neogen.com/sp/yeast-extract-agar
http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-i/pb-i-2-concepto.htm

2. ¿Qué es la peptona?
Es una descripción química para un producto soluble en agua obtenido de la
hidrolisis de las proteínas , contiene aminoácidos libres y polímeros de
aminoácidos (péptidos).
https://es.slideshare.net/YAZMINDIAZOYOLA/peptona

3. ¿Cómo se prepara el agar papa dextrosa?

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Medio de cultivo Agar de Dextrosa y Papa es conocido como PDA por sus siglas
en ingles, tiene la infusión de papa como fuente de almidones y la dextrosa son
la base para el crecimiento de hongos y levaduras
Material Necesario
Olla, cazuela
1500 ml de Agua destilada
200-250g de Patata
13-18 g de Agar
13 - 20g de Dextrosa
Preparación del Agar PDA
Tomar 500 ml de agua destilada y cocer en ella una patata de 200 g pelada y
cortada en trozos.
En otro recipiente disolver el agar en 500 ml de agua destilada al fuego.
Colar la infusión de patata a través de un colador de algodón o un colador chino.
Mezclar ambos líquidos.
Agregar la dextrosa
Homogeneizar.
Recomendación
En este medio los hongos crecen y se reproducen muy fácilmente.
Puede añadirse ácido tartárico al 10% o ácido láctico para bajar el pH hasta 3.5 e
inhibir el crecimiento bacteriano.

http://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-de-cultivo-reactivos/agar-
de-dextrosa-y-papa/
http://www.blog.naturaleza.eldietista.es/2012/01/medio-de-cultivo-para-
hongos.html

4. Del medio de cultivo que preparaste, ¿Cuál es la fuente de carbono?

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Peptona: Los medios generales para crecer levaduras contienen peptona, una
fuente de energía, como hidratos de carbono y agar.
5. ¿Cómo se reproducen las levaduras y cuál es su velocidad de crecimiento?
Las levaduras se reproducen por gemación o y fisión binaria
Gemación

Es decir, generan una yema o conjuntos de yemas en las zonas externas de la

membrana plasmática. Se forma un abultamiento.
El núcleo de la célula madre se divide, los núcleos hijos pasan a la membrana
plasmática y forma estos abultamientos.
Las yemas pueden producir otras yemas en su superficie antes de separarse de
su célula madre.
Fisión binaria

Es una manera de reproducción asexual en la cual el ADN se duplica, se divide

el citoplasma y se da lugar a dos células hijas.
Reproducción sexual
Se trata de una reproducción que se lleva a cabo a través de ascosporas o
basidioesporas. Este tipo de reproducción se produce cuando escasean los
nutrientes que consumen las levaduras.
Las levaduras suelen producir ciertas cantidades de feromonas, si estas no son
suficientes para atraer al sexo contario la levadura se reproducirá asexualmente.

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Esto se debe a que las levaduras habitan en entornos ricos en otras sustancias
químicos que tienden a opacar el aroma de las feromonas.

https://www.comosereproducen.com/levaduras/
http://naukas.com/2010/11/19/la-apasionante-vida-sexual-de-las-levaduras/

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