UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
Universidad del Perú, DECANA DE AMERICA
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
Escuela Académico Profesional de Farmacia y Bioquímica
Departamento Académico de Bioquímica
HEMATIMETRIA
DOCENTE:
Dr. Juan Manuel Parreño Tipián
INTEGRANTES:
Cubas Luca, Sheila Nimia
Jurado Castro, Bettina Aracely
Mesias Sanchez, Pedro Alejandro
Pérez Mayta, Gabriela Estefany
Ramos Pillaca, Gaisel Jaquilin
Suárez Su , Luis Alfredo
GRUPO: Lunes de 10 - 2 p.m.
SEMESTRE: 2018- 1
2018
I. INTRODUCCIÓN
Los glóbulos rojos (glóbulos rojos) son las células más comunes en la sangre;
contienen hemoglobina (Hb) y desempeñan un papel importante como
transportadores de oxígeno a los tejidos corporales1. Las enfermedades
relacionadas con el tamaño anormal y la cantidad de células sanguíneas
(incluidos los glóbulos rojos) se denominan anemia1. La anemia puede ser
causada por sangrado masivo, exposición a la radiación, deficiencia de hierro,
deficiencias vitamínicas, cáncer, administración de medicamentos contra el
cáncer, diabetes y anomalías de la médula ósea 1,2,3. La anemia no solo causa
serios problemas de salud por sí misma, sino que también causa enfermedades
complicadas. La mayoría de las enfermedades relacionadas con la anemia son
difíciles de detectar temprano. Por lo tanto, la anemia a menudo se detecta solo
después de que la enfermedad progresa más allá de su etapa tratable. La
detección temprana y el tratamiento oportuno pueden disminuir sustancialmente
el riesgo de enfermedades futuras. Los análisis de sangre pueden ayudar en la
prevención de enfermedades al proporcionar información valiosa para el
diagnóstico clínico y controlar la progresión de la enfermedad y los cambios en
la salud del paciente durante el tratamiento. Hoy, en los hospitales, el análisis de
sangre se realiza utilizando un dispositivo llamado analizador de hematología 4.
Esta prueba proporciona el conteo sanguíneo completo (CBC), que revela
información importante sobre la sangre1. Por ejemplo, el CBC puede revelar el
recuento de glóbulos rojos, el nivel de hematocrito (Hct), el nivel de Hb, el
volumen corpuscular medio (MCV), el nivel medio de hemoglobina corpuscular
(MCH) y la concentración media de hemoglobina corpuscular (MCHC). Entre
ellos, el recuento de glóbulos rojos, Hct y Hb se pueden obtener directamente a
través de la medición, mientras que MCV, MCH y MCHC se pueden calcular a
partir del recuento de glóbulos rojos, Hct y Hb1. Esta información puede usarse
como un indicador principal para la anemia específica y otras enfermedades
relacionadas con los RBC. Actualmente, el equipo utilizado para la determinación
de CBC en los hospitales es voluminoso y costoso, y solo los expertos calificados
pueden manejarlo. Además, se requiere una gran cantidad de sangre (~ 10 ml)
para el análisis. La obtención de esta cantidad de sangre a través de inyecciones
intravenosas podría ser una molestia para el paciente. Por lo tanto, es necesario
desarrollar técnicas y dispositivos de análisis de sangre para el uso en el punto
de atención (POC) que sean económicos, rápidos y fáciles de usar5.
Los sensores de análisis de sangre para POC desarrollados hasta la fecha se
pueden clasificar en sensores ópticos y electroquímicos6. Los sensores que usan
tecnología óptica son fáciles de usar, rápidos y no invasivos, pero solo pueden
controlar la concentración de Hb7. Son ideales para predecir un tipo de anemia
debido a la deficiencia de hierro, pero no para otros tipos de anemia. Los
sensores anémicos electroquímicos actuales usan dos métodos (medición de
hierro o impedancia) para medir la Hb. Sin embargo, incluso estos no son
capaces de detectar otros tipos de anemia, especialmente los relacionados con
el tamaño anormal y la cantidad de glóbulos rojos (por ejemplo, macrocitosis,
microcitosis, anisocitosis y poiquilocitosis)1.
II. OBJETIVOS
- Conocer el manejo de la cámara hemocitométrica “Neubauer” y la
pipeta de Thoma.
- Realizar el recuento de glóbulos rojos utilizando la cámara de
Neubauer y la pipeta de Thoma.
III. MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales
Tubo de ensayo
Frasco de vidrio
Algodón
Aguja
Camara de Neubauer
Pipeta de Thoma para glóbulos rojos
Reactivos
Liquido de dilución
Muestra Problema
Sangre venosa 5ml
Equipos
Microscopio eléctrico
IV. PROCEDIMIENTO;
Aspirar sangre hasta
0.5 con una dilución
de 1 en 100.
Completar con el
líquido de dilución
hasta la marca de 101.
Mientras se aspira el líquido de dilución, se hace girar la pipeta
entre el pulgar y el índice de la mano derecha.
Retirando la boquilla se imprimen movimientos durante 1 ó 2
minutos
Tocar con una gota pequeña el borde de la superficie
donde están en contacto la cuadricular de la cámara y
el cubreobjeto.
Esta gota se insinúa por debajo del
cubreobjeto por capilaridad.
La suspensión no debe escurrirse en
los surcos laterales ni debe formarse
burbujas de aire.
Dejar transcurrir 3 minutos para
que se depositen los glóbulos.
1. Llevar la cámara a la platina del
microscopio.
2. Iluminar bien.
3. Comprobar si hay uniforme distribución.
4. Efectuar el recuento de hematíes.
V. RESULTADOS:
Recuento de glóbulos rojos:
Cuadrante superior derecho (CSD): 75
Cuadrante superior izquierdo (CSI): 86
Cuadrante central (CC): 75
Cuadrante inferior izquierdo (CII): 76
Cuadrante inferior derecho (CID): 82
Cálculos:
𝐍𝐱 𝟏𝟎 𝐱 𝟐𝟎𝟎 𝐱 𝟒𝟎𝟎
Número de hematíes/ mm3 sangre =
𝟖𝟎
394 x 10 x 200 x 400
Numero de hematíes/ mm3 sangre = 80
Numero de hematíes/ mm3 sangre = 3 940 000/mm3
VI. Comentario:
En el análisis hecho, el número de eritrocitos fue de 3 940 000/mm3,
lo que indica un índice disminuido de glóbulos rojos (oligocitemia).
VII. Discusión:
Los valores normales del número de hematíes en sangre es de 3.8
a 5.9 mill/mm3 .10 en mujeres por lo cual podemos decir que la
paciente está dentro de los valores normales.
VIII. Conclusiones:
- Se aprendió a utilizar la cámara de Neubauer y la pipeta de Thoma,
para el conteo de glóbulos rojos y para la dilución de sangre
respectivamente.
- El recuento de glóbulos rojos, a partir de una muestra de sangre
total obtuvo un valor de 3 940 000 hematíes/ mm3 de sangre por lo
que se concluye que el paciente se encuentra saludable.
CUESTIONARIO
1) ¿Cuál es el fundamento del proceso de la hematimetria?
2) ¿Cuál es la composición química de los líquidos de dilución utilizados
en hematimetría?
Las principales soluciones diluyentes son las de Gower, Hayem, Marcano,
Toisson, Fazie, Dacie, SSF.
Solución de Gower
Na2SO4 12,5 g
CH3COOH glacial 33,3 mL
H2O c.s.p. 200 mL
Solución de Hayem
HgCl2 0,25 g
NaCl 0,50 g
Na2SO4 2,5 g
H2O c.s.p. 100 mL
Solución de Marcano
Na2SO4 50 g
HCHO (formol) 10 mL
H2O c.s.p. 1000 mL
Solución de Toisson
Violeta de genciana
NaCl
Na2SO4
Glicerina
H2O
Solución de Dacie
HCHO (formol al
10 mL
40%)
Na3C6H5O7 3% p/v 990 mL
3) Explique mediante un esquema el retículo de Thoma
16 cuadrados para recuento de
Glóbulos blancos
1 2
5 cuadrados representativos para contaje
5 de glóbulos rojos. Divididos en 16
cuadrados.
3 4 1. Cuadrado superior izquierdo
2. Cuadrado superior derecho
3. Cuadrado inferior izquierdo
4. Cuadrado inferior derecho
5. Cuadrado central
4) Explique la fórmula utilizada en el recuento de los glóbulos rojos.
Para la dilución de 1/200, se llenó la pipeta de Thoma con sangre hasta la
marca de 0,5 y luego se completó la pipeta con diluyente de dilución hasta la
marca de 101.
Se realiza el conteo de cada uno de los glóbulos rojos que se encuentre dentro
de los 4 cuadrados angulares y el cuadrado central de la Cámara de Neubauer
donde se realizara el conteo celular.
Figura 1: Representación gráfica de las divisiones de la Cámara de Neubauer
La Cámara de Neubauer mide 3mm que se divide en 25 cuadrantes, de los
cuales el cuadrante central que mide 1mm se divide en 25 cuadrantes
pequeños de 0.2mm, de los cuales se selecciona a los 4 cuadrantes angulares
y el cuadrante central para el conteo de glóbulos rojos, estos cuadrantes a su
vez se divide en 16 subcuadrantes que miden 0.05mm; es decir, el área total
del recuento de glóbulos rojos consta de 400 cuadrantes.8
Ahora bien, el conteo se realiza a 5 cuadrantes que se subdividen en 16
cuadrantes pequeños; es decir, que para el cálculo en la fórmula de recuento
de glóbulos rojos se tendrá que dividir entre estos cuadrantes para calcular el
número de hematíes.
Tenemos:
Nx 10 x 200 x 400
Número de hematíes/ mm3 sangre =
80
N = número de hematíes contabilizados
10 = altura de la Cámara de Neubauer
200 = Representa la dilución utilizada
400 = número total de cuadrantes por mm
80 = número de cuadrantes contabilizados
5) ¿Cuál es el fundamento de los métodos automatizados para el recuento
de hematíes? Señale los inconvenientes de estos equipos.
Los primeros contadores fueron descriptos por Coulter y Crosland-Taylor,
quienes adoptaron diferentes enfoques para limitar el volumen en la zona
sensora y realizar el recuento.
En el instrumento descripto por Coulter, las células son conducidas a través
de un estrecho orificio, detectándose los cambios de impedancia. La
impedancia es efectivamente medida en la zona sensora situada entre los
electrodos colocados a ambos lados del orificio. Así, las células funcionan
como aislantes frente a los diluyentes salinos, de modo que la impedancia
aumenta transitoriamente a medida que las células pasan a través de la zona
sensora. Los cambios de impedancia transitorios producen impulsos
eléctricos que pueden ser contados. Estos instrumentos han sido llamados
contadores de apertura-impedancia.
Figura 2: Contadores de apertura-impedancia. La impedancia se mide entre un electrodo negativo
dentro del tubo con orificio y el electrodo positivo en la dilución de las células de la sangre. El área
delimitada por línea de puntos muestra la zona sensora por donde pasan las células. ρ: resistividad del
electrolito, ρm: resistividad del electrolito modificada por la partícula.
El instrumento descripto por Crosland-Taylor8 se basaba en hacer que las
células pasen a través de un delgado haz de luz. La zona sensora estaba
restringida parcialmente por la estrechez del haz de luz y por el pasaje de
células en una corriente de líquido muy delgada. A medida que las células
pasan a través de la zona sensora, interceptan el haz de luz que se dispersa,
pudiendo ser colecta da por un sistema óptico adecuado y medida por un
fotómetro.
Figura 3: Contadores por dispersión de luz. La luz de la fuente láser se dirige hacia un foco y luego se
dispersa. Una barrera impide la llegada de luz al fotodetector. Cuando una célula entra en el foco,
dispersa la luz, que así pasa por fuera de la barrera, e impacta en el detector.
Los aumentos transitorios en la luz dispersada crean impulsos desde el
fotómetro, que luego pueden ser contados electrónicamente, por ello estos
sistemas son llamados contadores de dispersión de luz. Los impulsos
contados en los primeros instrumentos de apertura-impedancia y de
dispersión de luz también se utilizaron para determinar el tamaño celular, dado
que el tamaño del impulso es aproximadamente proporcional al tamaño de la
célula. Por lo tanto, el tamaño del impulso puede usarse para discriminar entre
la célula de interés y otras células, restos o ruido electrónico.9
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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Hemoglobin Concentration. Sensors 12, 1816–1826.
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8. Muñoz M, Morón C. Manual De Procedimientos De Laboratorio En
Técnicas Básicas De Hematología. Serie de Normas Técnicas; 40.
Ministerio de Salud, Instituto Nacional de Salud, Lima. 2005
9. Fink N. Automatización en hematología. Revista de Hematología.
Volumen 9. Nº 1, La Plata. 2005
10. Demedicina.com. Hemograma. [Citado el: 22 de abril del 2018].
Disponible en: https://demedicina.com/hemograma/
