CURSO:

QUÍMICA
ORGÁNICA
CROMATOGRAFÍA EN
COLUMNA

E LA PRACTICA N°6 DE LABORATORIO DE

QUÍMICA ORGÁNICA

TAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMÁTICA

PROFESOR: R. MARTINEZ

R.
INTRODUCCIÓN
Las técnicas cromatográficas se emplean para separar los componentes individuales de
una mezcla y en ciertos casos para identificar un compuesto comparando su
comportamiento cromatográfico con el de sustancias conocidas empleadas como patrón.

Existen varios tipos de cromatografías según los criterios que se usan para hacer los
análisis, pero todas consisten de una fase estacionaria y una móvil.

En la cromatografía de columna, las moléculas de una mezcla son separadas en base a la

afinidad de las moléculas por la fase estacionaria o por la fase móvil. Si una molécula A
tiene más afinidad por la fase estacionaria que la B, B bajará más rápido que A.

Existen muchos tipos de cromatografía de columna: adsorción, partición o reparto,

exclusión, intercambio iónico, afinidad.
OBJETIVOS
 Conocer la técnica de cromatografía en columna, sus características y los
factores que en ella intervienen.
 Utilizar la cromatografía en columna para la separación de mezclas de
compuestos orgánicos.

MARCO TEORICO
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

Es una técnica de purificación, puesto que permite aislar los compuestos deseados de una
mezcla.

La cromatografía en columna utiliza una columna de vidrio vertical que se llena con un
soporte sólido adsorbente (fase estacionaria: los más utilizados son gel de sílice (𝑆𝑖𝑂2) y
alúmina ( 𝐴𝑙2 𝑂3 ). La muestra que se quiere separar se deposita en la parte superior de
este soporte. El resto de la columna se llena con el eluyente (disolvente que constituye la
fase móvil) que, por efecto de la gravedad, hace mover la muestra a través de la columna.
Se establece un equilibrio entre el soluto adsorbido en la fase estacionaria y el disolvente
eluyente que fluye por la columna. Debido a que cada uno de los componentes de una
mezcla establecerá interacciones diferentes con la fase estacionaria y la móvil, serán
transportados a diferentes velocidades y se conseguirá su separación. Así, de manera
similar a otros tipos de cromatografía, las diferencias en las velocidades de
desplazamiento a través del medio sólido se corresponden con diferencias en los tiempos
de elución por la parte inferior de la columna para cada uno de los componentes de la
muestra original, que se recogerán en fracciones diferentes.

La polaridad del eluyente afecta las velocidades relativas con las que los diferentes
componentes de la mezcla se mueven en la columna. Los disolventes polares compiten
más eficientemente con las moléculas polares de una mezcla por los lugares polares del
adsorbente. Por lo tanto, un disolvente polar desplazará las moléculas, incluyendo las más
polares, rápidamente a través de la columna. Si el disolvente es muy polar la elución será
muy rápida y generalmente habrá poca separación de los componentes de la mezcla. Si
por el contrario el disolvente es muy apolar, no eludirán los compuestos de la columna.
Por lo tanto, la elección del eluyente es crucial para el éxito de la cromatografía en
columna. A menudo se utiliza un gradiente creciente de polaridad para la elución. La CCF
se utiliza para determinar y elegir el sistema solvente adecuado para cada separación.
En 1978 se introdujo una versión modificada denominada cromatografía en columna
rápida. La diferencia con la cromatografía en columna tradicional es que en la técnica
rápida el disolvente se hace atravesar la fase estacionaria aplicando una presión positiva.
Esto hace que las separaciones mejoren en resolución y se pueda disminuir el tiempo de
elución, por lo cual constituye un método de elección.

Análisis de los Eluatos de la columna:

Si los compuestos separados en una cromatografía en columna son coloreados, el

progreso de la separación se puede monitorizar visualmente. No obstante, a menudo los
compuestos que deben ser aislados suelen ser incoloros. En este caso, se recogen
secuencialmente pequeñas fracciones de eluatos en tubos rotulados y la composición de
cada fracción se analiza por cromatografía en capa fina. Una vez identificadas las
diferentes fracciones que contienen el mismo producto, se reúnen, se elimina el
disolvente y se analiza la identidad de los componentes por métodos espectroscópicos.

El orden aproximado de elución de compuestos y de polaridad es aproximadamente el

que se indica.
MATERIALES

LABORATORIO REACTIVOS
 Columna cromatografica  Silica Gel
 Matrices Erlenmeyer (4 x 50 ml;2  Etanol
x 100)  Naranja de metilo
 Vaso de precipitado (100 ml)  Azul de dibromo fenol
 Varilla de vidrio
 Soporte metálico
 Pinza
 Nuez
 Pipetas Pasteur/ pipeta graduada
de 1 ml
 Aspirador de pipeta
 Naranja de metilo

Gel de sílice

Etanol
Azul
dibromofenol
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Pesar 17.7 mL. de sílice gel.

Tapando arriba de la llave con un
pedazo de algondon (una bolita).

PREPARACION DE LA SILICA GEL

(FASE ESTACIONARIA9

2. Agregar etanol a la sílice gel Sin

dejar que se seque la sílice.
3. Cuando el etanol gotee se agrega la
muestra

Naranja de Metilo + Azul de dibromo

(C14H14N3NaO3S + C19H10Br2O5S) fenol.
Agrega una 2 micros
gotas a la columna
cromatográfica. De lo
contrario demoraría o
PREPARACION DE LAS MUESTRAS
saturaría la prueba.
RESULTADOS
 Cuando comienza a dar las primeras
gotas clasificarlas (agrupar por
separado) según el orden que salgan
en diferentes vasos.

A realizar las pruebas con la pipeta

de Pasteur obtuvimos los mismos
resultados

En el conteo que dio muestras fueron 3 colores: azul y verde que fue recaudada en un
vaso precipitados, pero quedo un color amarillo que no se puedo recaudar puesto a que
su polaridad con el etanol no es compatible, y si lo queremos llevar a un vaso tenemos
que encontrar un eluyente que sugiera su polaridad exacta o aproximada.

DISCUSIONES

1. ¿A qué se debe la separación de franjas de colores de la mezcla problema en la

columna cromatografía?

Debido a que cada uno de los componentes de una mezcla establecerá interacciones
diferentes con la fase estacionaria y la móvil, serán transportados a diferentes
velocidades y se conseguirá su separación.

2. ¿Qué componente de la mezcla problema se desplazará más rápidamente por la

columna cromatográfico?

La polaridad del eluyente afecta las velocidades relativas con las que los diferentes
componentes de la mezcla se mueven en la columna; es decir, los disolventes polares
 compiten más eficientemente con las moléculas polares de una mezcla por los lugares
polares del adsorbente. Por lo tanto, un disolvente polar desplazará las moléculas,
incluyendo las más polares, rápidamente a través de la columna. Si el disolvente es
muy polar la elución será muy rápida y generalmente habrá poca separación de los
componentes de la mezcla. Si por el contrario el disolvente es muy apolar, no eludirán
los compuestos de la columna

3. Mayormente la cromatografía en columna es una técnica de separación

relativamente lenta ¿cómo podríamos acelerar el proceso?

En 1978 se introdujo una versión modificada denominada cromatografía en columna

rápida. La diferencia con la cromatografía en columna tradicional es que en la técnica
rápida el disolvente se hace atravesar la fase estacionaria aplicando una presión
positiva. Esto hace que las separaciones mejoren en resolución y se pueda disminuir
el tiempo de elución

4. ¿Qué sucede si los compuestos separados en una cromatografía en columna son

coloreados?
Si los compuestos que deben ser aislados son incoloros, entonces, se recogen
secuencialmente pequeñas fracciones de eluatos en tubos rotulados y la composición
de cada fracción se analiza por cromatografía en capa fina. Una vez identificadas las
diferentes fracciones que contienen el mismo producto, se reúnen, se elimina el
disolvente y se analiza la identidad de los componentes por métodos espectroscópicos.

5. ¿Qué métodos espectroscópicos o, que tipos de procedimientos se podrían hacer

para visualizar las manchas incoloras de la mezcla?

Hay varios métodos para visualizar las manchas correspondientes a cada componente
de la mezcla, los principales son:

1. Utilizar luz ultravioleta para observar la placa. Normalmente se adiciona un

colorante fluorescente al adsorbente, de forma que la placa sea fluorescente en
todas partes excepto donde haya una mancha correspondiente a un compuesto
orgánico.
2. Emplear reactivos específicos para desarrollar coloración en las manchas. Esto se
puede hacer sumergiendo la placa de CCF en una disolución que los contenga o
en forma de spray.

6. En nuestra primera prueba cromatográfico se observó que la elución de la mezcla

era demasiada lenta ¿Porque?

El objetivo de trabajar con una cromatográfica en columna es separar las sustancias de

una mezcla en su forma pura, pero para ello actúa la fuerza de gravedad, lo que pasó
con nuestra parte experimental es que no se hizo un procedimiento adecuado, en el
caso de introducir el algodón en la columna; se usó mucho de este y así impidió que
actué la fuerza de gravedad pues el algodón tapó la boquilla de la columna.
CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es la principal diferencia entre cromatografía en columna y

cromatografía en capa fina (TLC)?

La principal diferencia entre la cromatografía en columna y la cromatografía en capa

fina es que en la cromatografía en capa fina se analizan simultáneamente la muestra
y el patrón.
Mientras que en la cromatografía en columna las muestras se analizan
individualmente.

2. ¿Qué tipo de fuerza causa el movimiento de la fase móvil en la cromatografía

liquida de adsorción en columna?

El tipo de fuerza causada por el movimiento de la fase móvil en la cromatografía es

la fuerza de gravedad.

3. ¿Qué tipo de fuerza causa el movimiento de la fase móvil en la cromatografía

liquida de adsorción en capa fina?

El tipo de fuerza causada por el movimiento de la fase móvil en la cromatografía es

la fuerza de gravedad.

4. Ordenar según polaridad ascendente CH3CH2OCH2CH3, CCl4, CH3CO2H,

CH3CH2OH, H2O, CH3COOCH2CH3, CH3COCH3

 CH3CH2OCH2CH3
 CH3CH2OH
 CCl4
 H2O
 CH3CO2H
 CH3COCH3
 CH3COOCH2CH3

5. Escribir las formulas químicas y nombres químicos de:

Fenilalanina, acido aspártico y β -alanina.

Formula Química Nombre Químico

Ácido 2-amino-3-
Fenilalanina C9H11NO2
fenilpropanoico

Ácido 2-
Acido Aspártico C4H7NO4
aminobutanodioico

Β -Alanina C3H7NO2 ácido 3-aminopropanoico

CONCLUSIONES
→ La cromatografía en columna permite el análisis de cada componente de una mezcla por
separado y la cromatografía en capa fina permite estudiar una mezcla de compuestos en
un solo paso.
→ La cromatografía en columna requiere cuidados para la construcción y el mantenimiento
de la columna.
→ Se debe elegir correctamente bien los solventes para la cromatografía de columna debido
a que una mala elección puede influir en la velocidad de flujo y puede hasta permitir la
obtención de la mezcla, sin obtener sus componentes por separado.
→ Se debe tener cuidado con el material que empaqueta la columna ya que la presión debe
permitir el flujo de las sustancias: eluyente y componente extraído pero no debe ser
mínima por que permitiría el paso exagerado de las sustancias y por lo tanto una
extracción erróneo.