UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
CARRERA DE INGENIERÍA AGRÍCOLA MENCIÓN AGROINDUSTRIAL
LABORATORIO MICROBIOLOGÌA DE LOS ALIMENTOS
TEMA:
TINCION DE GRAM
MATERIA:
MICROBIOLOGÌA DE LOS ALIMENTOS II
DOCENTE:
ING.PAULA PINTO RODAS
INTEGRANTES:
ACUÑA DANILO
ALVARADO ARELYS
ANGULO LADY
AYOVI MARCO
ARELLANO MARIO
TERCER SEMESTRE
PARALELO: “B”
2018-2019
GUAYAQUIL-ECUADOR
PRACTICA # 2
TEMA: TINCION DE GRAM
OBJETIVO:
ENSEÑAR AL ESTUDIANTE A REALIZAR EL PROCEDIMIENTO DE LA TINCION DE
GRAM Y APRENDER A CLASIFICAR EN BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM
NEGATIVAS.
INTRODUCION
Un frotis es tratado con una solución de cristal violeta el cual se une a las paredes
celulares bacteriana, luego de un tratamiento con lugol, algunas bacterias debido a
la composición química de su pared celular que contiene una capa gruesa de
peptidoglucano o mureina, poseen la capacidad de retener el cristal violeta, aun
luego del tratamiento con un decolorante organico (alcohol acetona). Tales
bacterias se denominan GRAM POSITIVAS, mientras que las bacterias GRAM
NEGATIVAS presumiblemente debido a su mayor contenido lipidico en su pared
celular y fina capa de peptidoglucano, no pueden retener el cristal violeta y son
decoloradas con el alcohol, siendo teñidas con el colorante de la contraste,
safranina, fijándola a la pared celular por lo que toma la coloración roja o rosada, y
las GRAM POSITIVAS aprecen al microscopio de color azul intenso o violeta.
MATERIALES
Placa petri con cultivo bacteriano (practica anterior)
1 placa cubreobjeto
1mL de caldo estéril
Palillos de dientes estériles
Aceite de inmersión
Kit de tinción de Gram: violeta de genciana, yodo de Gram, safranina,
alcohol 95%
Pipetas automáticas
Puntas de 200 mL.
Mechero de bunser
PREPARACIÓN DEL FROTIS BACTERIANO
Colocar una gota de solución salina o caldo estéril sobre el portaobjeto
limpio
Con ayuda de un palillo de dientes estéril, tomar un pequeño inoculo de
cultivo en agar y resuspender en la gota del caldo estéril, extender o
esparcir el inoculo en un área de 1cm2 y dejar secar al ambiente.
Fijar el frotis, pasando tres veces el portaobjeto sobre la flama de un
mechero
TINCIÓN DEL FROTIS
Ponemos el cristal violeta, esperamos 30 segundos y lavamos con
suficiente agua.
Ponemos el lugol yodo, esperamos 1 minuto y lavamos con suficiente agua.
Luego lavamos con etanol lo suficiente por 20 a 30 segundos.
Ponemos la safranina durante 30 segundos y lavamos con suficiente agua.
Por último dejamos secar, y ya podemos observar las bacterias por el
microscopio.
OBSERVACIÓN EN EL MICROSCOPIO
Procedemos a colocar la placa cubreobjeto en el microscopio.
Primero enfocamos la bacteria con el objetivo de 40x , luego con el objetivo de
100x y colocamos aceite de inmersión.
REGISTRO DE RESULTADOS OBSERVADOS
Procedemos a registrar lo que observamos en el microscopio
Forma de bacteria Morfología de bacteria Tipo de bacteria
Bacilos convexa Gram negativas
RESULTADOS
Se observo bacterias con forma de bacilos (forma de barra o vara) y de color
rosadas, lo que indica que son bacterias Gram negativas en su pared celular.
Debido a que las bacterias Gram negativas poseen en su pared celular una capa
delgada de peptidoglucano unida a una membrana externa, la cantidad de
colorante cristal violeta y mordiente lugol que retiene es mínima,
CONCLUSIONES
Tanto las bacterias Gram positivas como las bacterias Gram negativas se
presentan morfológicamente como cocos o bacilos, sin embargo al ejecutar tinción
de Gram en estas para identificar su grupo taxonómico, las Gram positivas se
tiñeron de color violeta mientras que las Gram negativas se tiñeron de color
rosado. Mediante la tinción de Gram se identifican bacterias Gram positivas y
Gram negativas gracias al color que tornan después de ser teñidas; en el caso de
las bacterias Gram positivas se tiñen de violeta, esto se debe a que gracias a que
contienen pared gruesa de peptidoglucano. En cambio en las Gram negativas, las
cuales tienen pared delgada con poco peptidoglucano, la cual necesita de un
colorante como la safranina.
BIBLIOGRAFÍA
http://labmicrofarmaciaulat.blogspot.com/p/tincion-de-gram_20.htm
ANEXOS
Podemos observar paso a paso todo sobre la tinción de Gram desde la muestra hasta lo
observado en el microscopio que sería el resultado, seguimos estos pasos:
Ponemos el cristal violeta, esperamos 30 segundos y lavamos con
suficiente agua.
Ponemos el lugol yodo, esperamos 1 minuto y lavamos con suficiente
agua.
Luego lavamos con etanol lo suficiente por 20 a 30 segundos.
Ponemos la safranina durante 30 segundos y lavamos con suficiente
agua.
Por último dejamos secar, y ya podemos observar las bacterias por el
microscopio.
ANEXO 1 ANEXO 2 ANEXO 3 ANEXO 4
ANEXO 5 ANEXO 6 ANEXO 7 ANEXO 8
ANEXO 9 ANEXO 10 ANEXO 11 ANEXO 12
ANEXO 13 ANEXO 14 ANEXO 15 ANEXO 16
ANEXO 17 ANEXO 18 ANEXO 19 ANEXO 20
ANEXO 21 ANEXO 22 ANEXO 23
