Universidad Nacional de Colombia
Departamento de Farmacia
Farmacognosia y Fitoquímica – 2015659
Extracción e identificación de Flavonoides en Saponaria officinalis y Sambucus nigra
Grupo de trabajo No. 1 - Viernes
Nombres:
Camilo Andrés Mora Coy
Diego Andrés Campos Mendoza
OBJETIVOS
● Identificar y reconocer flavonoides a partir de una patrón (Sambucus nigra) y comparar con los
resultados arrojados para nuestra muestra problema (Saponaria officinalis).
● Conocer y manejar las pruebas de reconocimiento de flavonoides en extractos y drogas vegetales.
●
MARCO TEÓRICO
Los flavonoides (lato sensu) son pigmentos casi universales en los vegetales. Casi siempre hidrosolubles, son
responsables de la coloración de las flores, frutos y a veces de las hojas. Todos los flavonoides poseen un
origen biosintético común y por este motivo, un mismo elemento estructural básico. Se pueden agrupar en una
docena de clases según el grado de oxidación del núcleo de pirona central, que puede estar abierto y vuelto a
ciclar en una estructura furánica. Separar los derivados flavónicos, antocianósidos e isoflavonoides es
conveniente, teniendo en cuenta su comportamiento y sus propiedades particulares; es importante mencionar
que el término de flavonoides acoge a las flavonas, flavonoles, sus derivados 2,3-hidrogenados, sus dímeros y
los flavonoides ‘amarillos’, auronas y chalconas [1].
Los flavonoides están conformados por un esqueleto básico C 6 − C 3 − C 6 , como se observa en la figura No. 1,
del cual derivan cada uno de los grupos de compuestos que componen esta familia de moléculas. Los
flavonoides también se caracterizan por una fuerte actividad antioxidante, por irrupción en la actividad de los
radicales libres en el organismo, a partir de diferentes mecanismos, como: quelación de metales de transición,
previniendo reacciones catalizadas por los mismos; inhibición directa de la actividad de los radicales libres, y
acciones cooperativas con otros antioxidantes [2].
Figura 1. Estructura general de los flavonoides [2].
Aunque en general los flavonoides son hidrosolubles y solubles en alcoholes, muchos de ellos poseen una
escasa hidrosolubilidad (rutósido, hesperidósido). Las geninas en su mayoría, son solubles en disolventes
orgánicos apolares; cuando contienen al menos un grupo fenólico libre, se disuelven en soluciones de
hidróxidos alcalinos. Los heterósidos pueden extraerse normalmente en caliente, con acetona o alcoholes
(etanol, metanol) a los que se adiciona agua (20 a 50 % según sea la droga seca o fresca). Se puede
seguidamente realizar una evaporación a vacío y, cuando el medio contenga solamente agua, proceder a una
serie de extracciones líquido-líquido con disolventes no miscibles con el agua: con éter de petróleo que
elimina la clorofila y lípidos; con dietiléter que extrae las geninas libres; con acetato de etilo que arrastra la
mayoría de los heterósidos. Los azúcares libres permanecen en la fase acuosa junto con, en caso de fracaso,
los heterósidos más polares.
Existen diferentes reacciones coloreadas que permiten la identificación de flavonoides en los extractos
vegetales, la prueba de shinoda es una de ellas, en esta se usa zinc o magnesio que reacciona con HCl. El
hidrógeno generado produce reducción del ión flavilio (figura No. 2) de color rojo (varía desde el rosa muy
débil hasta el rojo escarlata). Todos los flavonoides excepto chalconas, auronas e isoflavonas dan positivo para
esta prueba [3].
Figura 2. Ión flavilio, su color rojo indica la presencia de cierto tipo de flavonoides.
La prueba de Prueba de cloruro férrico permite detectar compuestos fenólicos, estos producen una coloración
parda en presencia de una solución de cloruro férrico al 10 %. Si los fenoles están presentes producen una
coloración marrón. La coloración se debe a la formación de enlaces cristalinos entre el ión de hierro (III) y los
pares electrónicos libres de los fenoles. Un color verde indica un derivado de catecol y un color azul de un
derivado de pirogalol (Mirar figura No. 3) [4].
Figura 3. Reacción de los flavonoides fenólicos con el ión hierro (III).
Como última Prueba está la de leucoantocianidinas, las leucoantocianidinas o flavan-3,4-dioles son
compuestos incoloros presentes en varios géneros de plantas. Este ensayo se hace en un medio ácido, y con
calentamiento lo que ocurre es que se forman flobafenos que son tintes rojos e insolubles y que son polímeros
de leucoantocianidinas. La adición de alcohol isoamílico mejora la visibilidad al ser medio polar. La presencia
de colores rojos oscuros es indicativo de antocianidinas y flavonoides derivados de chalcona [5].
Finalmente, Saponaria officinalis perteneciente a la familia Caryophyllaceae corresponde a una planta nativa
de Europa y medio oriente la cual es frecuentemente utilizada en la elaboración de jabones (contenido de
saponinas) debido a su capacidad detergente, problemas dermatológicos, desórdenes reumatoideos y como
expectorante en la bronquitis. Es bien sabido que la actividad farmacológica de esta planta es debida a la
presencia de saponinas triterpénicas, que, en mayor parte, corresponden a saponinas A y B; sin embargo, no se
han reportado más investigaciones acerca de los constituyentes químicos de esta planta.
RESULTADOS
Los resultados obtenidos en las pruebas de detección de flavonoides se encuentran descritos en la siguiente
tabla. Para una correcta apreciación de los resultados en cada imagen se ubica al lado izquierdo el blanco del
extracto y a la derecha el resultado de cada prueba. Los extractos vegetales utilizados en la práctica fueron
Sambucus nigra y Saponaria officinalis, ambas muestras diluidas previamentes en etanol:agua en una
proporción 1 : 1
Prueba Muestra Patrón Muestra Problema
(Sambucus nigra) (Saponaria officinalis)
Shinoda
Positivo Negativo
F eCl3
Positivo Negativo
Leucoantocianidinas
Positivo Negativo
Tabla 1. Resultados obtenidos de las diferentes pruebas de identificación de flavonoides para extractos de
Sambucus nigra y Saponaria officinalis.
El resultado de la CCD, que se realizó con una fase móvil de acetato de etilo-ácido acético-ácido fórmico-agua
(100:11:11:27) cuya polaridad es muy elevada y una fase estacionaria de sílica gel 60254F , que posteriormente
se reveló con el reactivo de productos naturales (ácido difenilbórico aminoetilester) 1 % en metanol y una
solución de PEG 400 (5 % en etanol). Para la cromatografía, las fracciones fueron disueltas en metanol para
luego ser aplicadas en las placas de sílica, estas se observaron a la luz ultravioleta antes y después de ser
reveladas.
Tabla de Factores de Retención (Rf)
(S.) (S.O.) (R.) (Q.)
0.37 0.35 0.40 0.94
0.54 0.51
0.62 0.51 0.62
0.91
Figura 4. Cromatograma de los extractos obtenidos con los respectivos Rf de las manchas tomadas de abajo
hacia arriba; donde (S.) representa la muestra aplicada de Sambucus nigra, (S.O.) la muestra de Saponaria
officinalis, (R.) rutina y (Q.) quercetina.
Figura 5. Placa cromatográfica observada a la luz ultravioleta con una longitud de onda de 254 nm.
Figura 6. Placa cromatográfica revelada con NP-PEG observada a la luz ultravioleta con una longitud de onda
de 312 nm. Todo lo que es color azul-verde corresponde a cumarinas y lo que posee un color amarillo-naranja
corresponde a compuestos fenólicos a los cuales se les midió sus Rf.
DISCUSIÓN
Como se observa en la tabla 1, el blanco de Sambucus nigra difiere de los extractos que fueron sometidos a las
pruebas de Shinoda, Cloruro férrico y leucoantocianidinas. Por su parte, el blanco del extracto de Saponaria
officinalis no presenta diferencias físicas observables respecto a los extractos sometidos a las diferentes
pruebas a parte de que en la prueba de shinoda se aprecia una coloración marrón un poco más tenue respecto
al blanco. Es posible que la disminución de absorbancia se deba a una disminución de la concentración del
extracto debido a un aumento de volumen al ser diluida en un solvente de Etanol-agua 1:1 y a que debido al
ser tratado con un ácido concentrado fuerte, es posible que los compuestos presentes en el extracto
(presumiblemente sapogeninas triterpénicas), produciendo agliconas, como fue expuesto en informes
anteriores.
Es relevante destacar que todas las pruebas fueron realizadas tras diluir el extracto seco de ambas plantas para
permitir las reacciones, debido a que los reactivos de las pruebas son insolubles en solventes orgánicos no
polares, como el solvente de extracción. Las demás pruebas químicas para Saponaria officinalis también
resultaron negativas, indicándonos que esta droga no posee flavonoides, sin embargo, no podemos indicar de
que se trate de un resultado esperado debido a que, como fue expuesto en informes anteriores, no existen
investigaciones fitoquímicas de otros componentes en esta planta. Por otra parte, la cromatografía de S.
officinalis indica que esta planta contiene compuestos fenólicos compuestos, como se observa en la imagen 6,
sin embargo, podemos sugerir que no se trata de quercetina o rutina debido a que a pesar de que fueron
corridos por la misma fase móvil, ningún compuesto tiene el mismo Rf que rutina (la diferencia es
significativa) y el compuesto que presenta el mismo Rf que quercetina no presenta la coloración anaranjada
tras la revelación, por lo cual, debe tratarse de algún otro compuesto fenólico. Es importante destacar que la
quercetina presenta un Rf muy inferior a Rutina debido a que el primero, al ser un flavonol no glicosilado,
presenta menor afinidad por la fase estática respecto a Rutina, el cual se encuentra glicosilado en el carbono 3,
confiriendo una mayor afinidad al tener más enlaces de hidrógeno con la sílica.
Se ha reportado que la composición química de esta especie es bastante variada, conteniendo glicósidos
cianógenos, taninos, algunas antocianinas y algunos flavonoides, entre los cuales destaca rutina (6), el cual
corresponde al compuesto patrón con el cual se corrió la cromatografía. Como indicamos anteriormente, las
pruebas químicas realizadas sobre la solución acuosa de S. nigra fueron positivas. En la tabla 1, podemos
apreciar que la prueba de Shinoda dio una coloración roja, muy diferente al blanco. El test de Shinoda es una
prueba química que consiste en someter flavonoides a reducciones mediante el uso de magnesio como un
reductor y un ácido fuerte (en este caso ácido clorhídrico) como estabilizador de antocianinas, dando como
productos flavonoles y antocianinas. Por lo tanto, la prueba resultó positiva (coloración roja) debido a una
formación de una antocianidina derivada de la rutina o algún otro flavonoide presente, debido a que al estar en
forma de antocianinas, ocurre un efecto resonante que permite que los electrones absorben ciertas longitudes
de onda.
Por otra parte, la prueba de cloruro férrico también fue positiva al evidenciar la presencia de un precipitado
marrón, el cual se forma debido a la producción de un complejo insoluble del ión férrico debido a la quelación
por parte de los pares de electrones libres presente en los grupos hidroxilo y cetona de los flavonoides, los
cuales, probablemente se trate de los hidroxilos de posiciones 3, 4 y 5 en el caso de la Quercetina y 4 y 5 en
Rutina (7), no se apreció una coloración azulada o verdosa debido a que el ión férrico no fue quelado por los
hidroxilos de los anillos A y B, respectivamente.Finalmente, la prueba de leucoantocianidinas también fue
positiva, al observarse una coloración un poco más rojiza que el blanco, indicando la formación de flobafenos.
La cromatografía realizada en la muestra de S. nigra fue comparada con dos patrones: Rutina y Quercetina.
Como se aprecia en la figura 4, y en la tabla 2, el Rf de uno de los compuestos que fueron separados por la
cromatografía del extracto de S. nigra es bastante similar al del Rf producido por rutina, y este, al ser también
un compuesto fenólico, podemos considerar que serían equivalentes y que la mínima diferencia entre estos
(0.03) es debida a que la muestra de S. nigra tenía un radio un poco superior y los Rfs fueron tomados desde la
base, por lo que la diferencia sería debida a la diferencias entre los tamaños de los radios. Sin embargo, en la
imagen 6, podemos apreciar que es posible que esta muestra no presenta Quercetina, debido a que el (o los)
compuestos de la muestra cuyos Rf son equivalentes a las de Quercetina no presentan una coloración
anaranjada tras la revelación con NP-PEG. Finalmente las manchas de color azul-verdoso corresponden a
cumarinas, las cuales han sido reportadas también por otros investigadores (6).
CONCLUSIONES
- Según las pruebas químicas, la muestra de Saponaria officinalis no presentaron flavonoides,
sin embargo, no se ha reportado esta información por otros investigadores, y la prueba por sí
no es concluyente.
- Se reafirmó la presencia de Rutina en la muestra de Sambucus nigra, sin embargo, la
revelación con NP-PEG no sugiere la presencia de Quercetina en la muestra.
- Las técnicas químicas de shinoda, FeCl3 y Leucoantocianidinas son útiles para la detección
de antocianidinas y están basadas en formación de coloraciones y precipitado.
BIBLIOGRAFÍA
1. Jean Bruneton, Farmacognosia, fitoquímica, plantas medicinales, 2da. ed., Madrid. 2001, p. 727-733.
2. César Augusto Martínez García; Identificación de flavonoides con actividad antioxidante presentes
en Alchornea coelophylla (Euphorbiaceae). 2014, Escuela de Química, Facultad de Tecnología,
Universidad Tecnológica de Pereira.
3. Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco , Facultad de Ciencias Naturales, Departamento
de Farmacia. Cátedra de Farmacognosia. URL:
http://fcn.unp.edu.ar/sitio/farmacognosia/wp-content/uploads/2009/04/tp5_glicosidos_2009.pdf.
4. eanna Marcano, Masahisa Hasegawa; Fitoquímica Orgánica; Segunda edición; Consejo de
D
Desarrollo Científico y Humanístico; Universidad Central de Venezuela, Caracas, 2002.
5. Flavonoides. Metabolitos secundarios. Disponible en:
//es.slideshare.net/kdcloop/flavonoides-repaso-de-metabolitos-secundarios-1.
6. Muñoz, O. Montez, M. Wilkomirski, T. (1999). Plantas medicinales de uso en Chile: Química y
farmacología. Segunda edición. Editorial universitaria. Santiago de Chile. Páginas: 257.
7. Guo, M. Perez, C. Wei, Y. Rapoza, E. Su, G. Iron-binding properties of plant phenolics and
cranberry's bio-effects. Dalton transactions. 43. 2007.
