TERMINOLOGIA VALIDACIÓN
Adecuación al propósito: es la adaptación de un método para un fin previsto.
Analito: Sustancia (química, física o biológica) buscada o determinada en una muestra
la cual se desea analizar.
Blanco matriz: Matriz que no contiene el analito de interés u objetivo para el método
seleccionado.
Calibración: Establece primero una relación entre los valores con incertidumbres de
medición proporcionados por las normas de medición y las indicaciones
correspondientes con las incertidumbres de medición asociadas, y utiliza luego esta
información para establecer una relación a fin de obtener un resultado de medición a
partir de una indicación.
Es decir es un procedimiento de comparación entre lo que indica un instrumento y su
"valor verdadero" de acuerdo a un patrón de referencia con valor conocido.
Criterios de aceptabilidad: parametro y exigencias que se toman para desarrollar un
método analítico.
Ensayo: operación que se realiza de acuerdo a un procedimiento especifico
Error sistemático: Aquel que se produce de igual modo en todas las mediciones,
Puede estar originado en un defecto del instrumento, en una particularidad del
operador o del proceso de medición, etc.
Error aleatorio: Es aquel error inevitable que se produce por eventos únicos
imposibles de controlar durante el proceso de medición
Incertidumbre: parametro que caracteriza la dispersión de los datos obtenidos en
una grafica.
Intervalo de trabajo: Parámetro no negativo que caracteriza la dispersión de la
cantidad de valores que se atribuyen a una medición.
Limite máximo permitido (LMP): Nivel máximo o tolerancia establecida para un analito
en una norma.
Limite máximo Residual (LMR): Concentración máxima de residuos de una sustancia
que se permite legalmente su uso en la superficie o parte interna de un producto.
Material de Referencia (MR): material homogéneo y estabale para su medición.
Mensurando: cantidad de materia a medir.
Método de ensayo validado: método para el cual ha sido validado, on el fin de
determinar u precisión y fiabilidad.
Método oficial: método reglado o normado por el pais, o por entes comerciales.
Método cualitativo: determina la ausecncia o presencia del analito.
Método cuantitativo: determina la cantidad de analito en la muestra.
Requerimiento del método: características escenciales para poder aplicar un método.
Resultado de un ensayo (X): valor final obtenido, después de aplicar los
procedimientos de medición.
Testigo reactivo o blanco: solución que contiene todos los reactivos excepto el analito
a medir, y sigue todos los pasos establecidos en la tecnca.
Validación: verificación de los parametro, los cuales están establecidos y demuestra
que el método es el idóneo.
Veracidad: es el grado de confiabilidad de el resultado del ensayo.
Valor de referencia: concordancia con un valores obtenidos del msmo tipo.
Verificacion: comprobar si el método establecido cumple con las condiciones del
método.
PARAMETROS DE VALIDACION
Tenemos los siguientes parámetros de validación, los cuales serán desarrollados
posteriormente.
SELECTIVIDAD
LINEALIDAD
SENSIBILIDAD
LIMITES
EXACTITUD
PRECISIÓN
ROBUSTEZ
APLICABILIDAD
SELECTIVIDAD
Una prueba de Selectividad comúnmente utilizada, consiste en analizar un mínimo de tres
testigo reactivos, tres blancos de matriz y tres muestras o estándares de concentración
conocida del analito de interés.
Se deben comparar las lecturas (señales de medición) obtenidas para cada caso, y observar si
existen variaciones entre los testigos reactivos, blancos de matrices y estándares o muestras
con analito. Si se encuentran diferencias significativas deberán ser identificadas y en lo posible
eliminadas.
La selectividad de un método analítico indica el grado de ausencia de interferencias, debidas a
otras especies contenidas en la matriz de la muestra
LINEALIDAD
La linealidad es la capacidad de un método de análisis, dentro de un determinado intervalo, de
dar una respuesta o resultados instrumentales que sean proporcionales a la cantidad del
analito que se habrá de determinar en la muestra de laboratorio
“define su aptitud para obtener resultados proporcionales a la concentración de analito”.
Con el fin de determinar el rango lineal se puede realizar mediante un gráfico de concentración
versus respuesta, que se conoce como Función Respuesta
Luego de realizar el grafico se puede observar el comportamiento de la curva y establecer
cualitativamente el rango lineal:
SENSIBILIDAD
La sensibilidad de un instrumento o método se define como, su capacidad para discriminar
entre pequeñas diferencias en laconcentracion de un analito
La IUPAC, define la sensibilidad como la pendiente de la curva de calibración a la concentracion
de interés
La sensibilidad viene limitada por la pendiente de la curva de calibración y la reproducibilidad o
precisión del sistema de medida. Para dos métodos que tengan igual precisión, el que presente
mayor pendiente en la curva de calibración será el más sensible
En una regresión lineal la sensibilidad corresponde a la pendiente (m) de la recta de
calibración. Se calcula como:
∑
∑ 𝑋𝑖 𝑌𝑖 − ( 𝑋𝑖 𝑌𝑖⁄𝑛)
𝑚=
(∑ 𝑋𝑖 )2⁄
∑ 𝑋2 𝑖 − ( 𝑛)
LIMITES
Limites de detección y cuantificación
El limite de detección de un analito se define como: aquellaconcentracion que proporciona
una señal instrumental significativamente diferente de la señal de una muestra en blanco, o la
señal de fondo.
Es la cantidad de analito que proporciona una señal igual a la del blanco más tres veces la
desviación estándar del blanco:
yLD = yB + 3 SB
limite de cuantificación o determinación considerado como el limite de concentracion más
bajo para mediciones cuantitativamente precisas
Se define como la cantidad de analito que proporciona una señal igual a la del blanco más diez
veces la desviación estandar del blanco
yLQ = yB + 10 SB
Rango dinámico =LOL /LOQ
EXACTITUD
La validación de un método busca cuantificar la exactitud probable de los resultados
evaluando los efectos sistemáticos y azarosos sobre los resultados.
Así, la exactitud se estudia normalmente como certeza y precisión
El manual del Codex Alimentarius define la exactitud como el grado de concordancia entre el
resultado de un ensayo y el valor de referencia.
El término “exactitud”, esta aplicado a un conjunto de resultados de un ensayo, y supone una
combinación de componentes aleatorios y un componente común de error sistemático o
sesgo.
Como se puede observar entre más veraz y preciso sea un resultado analítico, es más exacto.
VERACIDAD: Determina el grado de coincidencia existente entre el valor medio obtenido de
una serie de resultados y un valor de referencia aceptado. Puede ser determinada por sesgo o
recuperación.
PRECISION
La precisión podrá establecerse en términos de repetibilidad y reproducibilidad.
Repetibilidad: Es la precisión bajo las condiciones de repetibilidad, es decir, condiciones donde
los resultados de análisis independientes se obtienen con el mismo método en ítems de
análisis idénticos en el mismo laboratorio por el mismo operador utilizando el mismo
equipamiento dentro de intervalos cortos de tiempo.
Reproducibilidad: Es la precisión bajo las condiciones de reproducibilidad, es decir,
condiciones donde los resultados de los análisis se obtienen con el mismo método en ítem
idénticos de análisis en condiciones diferentes ya sea de laboratorio, diferentes operadores,
usando distintos equipos, entre otros.
A partir de la desviación estándar de la repetibilidad ( σ o s r) es útil calcular el límite
de repetibilidad “ r ”, el cual le permite al analista decidir si es significativa la diferencia
entre análisis duplicados de una muestra, realizados en condiciones de repetibilidad.
A partir de la desviación estándar de la reproducibilidad ( σ o s r) es útil calcular el
límite de reproducibilidad “ R ”, el cual le permite al analista decidir si es significativa la
diferencia entre análisis duplicados de una muestra, realizados en condiciones de
reproducibilidad.
ROBUSTEZ
“Medida de la capacidad de un procedimiento analítico para no ser afectado por
variaciones pequeñas pero deliberadas en los parámetros del método y que provee una
indicación de su fiabilidad durante su uso habitual”
Un método de ensayo es más robusto entre menos se vean afectados sus resultados frente
a una modificación de las condiciones analíticas.
Entre las condiciones analíticas que podrían afectar a un método se encuentran:
• Analistas
• Equipos
• Reactivos
• pH
• temperatura.
• Tiempo de reacción.
• Estabilidad de la muestra.
• Otros.
Para esta determinación se aplica el Test de Youden y Steiner para la evaluación de la robustez
de un método químico analítico.
Para aplicar este método debemos detectar posibles factores que afecten el resultado final
(ejemplo: temperatura, composición de fase móvil o soluciones reactivas, pH de solución,
tamaño de celda espectrofotométrica, flujo gas carrier, split, etc.)
Las variables se estudian mediante una valor alto y uno bajo, una vez hecho esto se desarrollan
8 ensayos; a partir de los resultados puede calcularse el efecto de cada una de las variables
Se deben establecer las siete comparaciones posibles, es decir las diferencias entre la variable
de mayor valor versus la de menor valor:
(A – a), (B – b), (C – c), (D – d), (E – e), (F – f) y (G – g)
APLICABILIDAD
Se utiliza el término de Aplicabilidad, cuando un método de análisis puede utilizarse
satisfactoriamente para los analitos, matrices y concentraciones previstas
En la aplicabilidad de un método se debe considerar que esté libre de interferencias
producidas por otros materiales presentes en la muestra, asimismo influye el rango en
que se va a usar el método.
