Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional De Ciencias Biológicas
Prolongación Manuel Carpio y Plan de Ayala s/n, Miguel Hidalgo, Santo Tomás, 11350 Ciudad de México, CDMX.
Separación de fosfolípidos contenidos en la yema de huevo de gallina
por cromatografía en capa fina
Introducción Para comenzar la extracción de los fosfolípidos de
la yema de huevo, primero mezclamos una yema
Los lípidos son un grupo heterogéneo de con 30 mL de cloroformo-metanol (2:1 v/v). Los
biomoléculas relativamente insolubles en agua y lípidos, al ser no polares, son solubles en
solubles en solventes no polares como el éter, cloroformo, por ello quedan en la parte inferior del
cloroformo y benceno. vaso de precipitados. Por otro lado, en la parte
superior de la mezcla se evidencia la formación de
Existen numerosas clasificaciones de los lípidos; la una capa grumosa, la cuál es originada por el
más sencilla es aquella que considera en principio metanol que al reducir la constante dieléctrica del
sólo dos grandes grupos: los lípidos complejos y los medio provoca la aglomeración y precipitación de
lípidos simples; los primeros son los que contienen las proteínas.
ácidos grasos en su estructura y están unidos a un
grupo -OH de otra molécula. Ejemplos de estos son Esta mezcla se agita durante 20 minutos en un
lecitinas, cerebrósidos y lanolina. baño de hielo, el cual evita que el disolvente se
evapore.
El grupo de los lípidos simples comprende a
aquellas moléculas que son derivadas del isopreno Una vez terminado el tiempo procedemos a filtrar,
y no pueden ser saponificadas; dentro de él se no sin antes mojar el papel filtro con cloroformo-
incluyen las sustancias con las propiedades más metanol para evitar que se absorban en el papel los
variadas. Algunos ejemplos son mentol, cortisona y lípidos disueltos.
prostaglandina E.
El filtrado tiene una fase orgánica (inferior) donde
Las funciones de los lípidos son múltiples: se encuentran los lípidos y una fase acuosa
(superior) que proviene del agua contenida en la
a) Función energética o de reserva. Las yema de huevo y que además contiene
grasas neutras se almacenan en los aminoácidos, vitaminas, metanol, entre otras
adipocitos y suministran calorías, sustancias polares.
fácilmente utilizados en períodos de
escasez. Para purificar este extracto se realizó un lavado con
b) Funciones estructurales. Todas las KCl 0.1 M, una sal iónica que permite que los
membranas biológicas están formadas aminoácidos hidrofóbicos se incorporen a la fase
por fosfolípidos y glicolípidos (y a veces acuosa.
esteroides) estructurados en bicapas.
c) Funciones catalíticas. Algunos lípidos Una vez que esta listo el filtrado se procede a
actúan en microcantidades como agentes desechar la fase acuosa.
activadores o reguladores del
metabolismo.
d)
Objetivos
- Aplicar la técnica de cromatografía en capa fina
para la separación de los fosfolípidos de la yema de
huevo.
- Discutir las ventajas de la técnica de separación
respecto a la cromatografía en papel.
Resultados
Análisis de la técnica
Tabla 1. Relación de frentes de los fosfolípidos estructuras, por etanolamina que también posee
separados en capa fina. una amina primaria.
Fosfolípido Molibdato Ninhidrina Bismuto Yodo
Lípidos - - - 0.948
neutros y
colesterol El bismuto se utiliza para revelar fosfolípidos que
contienen colina. Aparecen 3 manchas de color
naranja. La primera corresponde a LFC, la segunda
FEA 0.583 0.620 - 0.689
a la EM (formada por fosforilcolina y ceramida) y la
última a FC.
FC 0.483 - 0.932 0.517
FS 0.4 0.344 - 0.396
EM 0.183 - 0.576 0.258
LFC 0.133 - 0.152 0.206
El yodo revela a los lípidos que en su estructura
tienen dobles enlaces, donde se adiciona para dar
una coloración café. En la placa aparecen 6
manchas en el siguiente orden de menor a mayor
Rf: LFC, EM, FS, FC, FEA y lípidos neutros y
colesterol.
Discusión
Conclusión
El molibdato revela fosfolípidos en general al
reaccionar con el grupo fosfato, por lo que se - Determinamos por medio de la
obtuvieron 5 manchas de color azul rey que cromatografía en placa fina que la yema
corresponden a LFC, EM, FS, FC y FEA. Se de huevo de gallina contiene los
observa una sexta mancha que no tiene color y siguientes fosfolípidos:
corresponde a lípidos neutros y colesterol. Esta Lisofosfatidilcolina
ausencia de color es debido a que éstos no poseen Esfingomielina
un grupo fosfato, es decir, no son fosfolípidos y por Fosfatidilserina
lo tanto el molibdato no los revela. Fosfatidilcolina
Fosfatidiletanolamina
Lípidos neutros y colesterol
-
Bibliografía
La ninhidrina revela fosfolípidos que contienen - Cervantes, M., Hernández, M., “Biología
grupos amino libres. Se observan 2 manchas de general”, 3ª Ed. Patria, pp. 70-73, (2015).
color violeta: una de FS que en su estructura está - Macarulla, J., Marino, A., “Bioquímica
el aminoácido serina con una amina primaria, y cuantitativa”, Ed. Reverté, pp. 133-137,
FEA, el cual está compuesto, entre otras (1988).
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Tapia, R. I., “Bioquímica”, Ed. Limusa, pp.
105-119, (2004).
- Teijón, J. M., “Fundamentos de
bioquímica estructural”, 2ª Ed. Tébar, pp.
345-348, (2006).
Preguntas extra
1. ¿Cómo será el perfil de fosfolípidos de los
siguientes extractos cuando se comparan
con el de yema de huevo de gallina?
a) Gorrión
b) Pato
c) Avestruz
d) Tiranosaurio Rex
e) Cerebro de ratón
R= Evolutivamente las aves provienen de los
dinosaurios, por lo tanto, el perfil
cromatográfico de todas las aves y del
dinosaurio será igual al de la gallina, que
contiene lisofosfatidilcolina, esfingomielina,
fosfatidilserina, fosfatidilcolina,
fosfatidiletanolamina, algunos lípidos neutros,
colesterol y triacilglicéridos, en diferente
cantidad según sea el tamaño del ave. En el
caso del cerebro de ratón el perfil de
fosfolípidos es la fosfatidilcolina, fosfatidil
serina, fosfatidiletanolamina, esfingomielina y
el fosfatidilinositol que es característico en los
mamíferos (rata), en comparación con la yema
de huevo de gallina la cual no tiene
fosfatidilinositol pero si lisofosfatidilcolina y los
demás fosfolípidos.
2. Escriba las estructuras químicas de los
fosfolípidos identificados, así como del
ácido fosfatídico.
