INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS
BIOQUIMICA GENERAL
Nombres: León Peralta María José Grupo: 3IV1
Osorio Andrea Eunice Sección: 2
Profesor: Víctor Hugo Peñafort Sotelo
Determinación de Aminoácidos Terminales con el grupo Alfa Amino Libre
Método de Sanger.
Objetivos. DNFB siga reaccionando en otras zonas de
la proteína .
Identificar el aminoácido que
contiene el grupo alfa-amino 3) Con la extracción con éter/FeSO4
terminal de las cadenas de la observamos un cambio a color amarillo
hemoglobina mediante el método ligero y la formación de dos fases: etérea y
de Sanger. acuosa. En esta etapa se elimina el DNFB
Recordar la elaboración de la que no reacciono. La fase acuosa se
cromatografía. desechó y esta se encuentra la DNP-Tyr, la
DNP-His y la DNP-Lys porque son
Resultados. aminoácidos polares.
Fase estacionaria: Papel cromatográfico. 4) La hidrolisis que se llevó acabo fue
Fase Móvil: Ácido cítrico/Citrato de sodio acida, al agregar HCl 6N y también se
Frente disolvente:37cm sometió a condiciones de presión (15
Derivado [Link] Rf lb/pulg2) y temperatura (121 °C) durante 3
DNFB hrs para romper los enlaces de la proteína
Hemoglobina 28.1 0.75 .5) Hicimos una segunda extracción con
DNFB 17 0.45
éter y se formaron 2 fases: una acuosa (se
Alanina 0
desechó) y otra etérea y esta se evaporo
Valina 28.1 0.75
Fenilalanina 23.3 0.62 hasta eliminar todo el éter y quedarnos solo
con el residuo. Se agregó alcohol y se
realizó la cromatografía sobre papel.
6) En etapa de la cromatografía
observamos que la DNFP-Ala no se quedó
tan impregnada sobre el papel.
Colocamos el cromatograma en una
cámara con solución de ácido cítrico-citrato
de sodio (ambos disolventes son polares).
Discusión.
7) Después de que corrió el disolvente,
1) Cuando se agregó la DNFB, la marcamos hasta donde recorrió cada
hemoglobina se tornó color verde oscuro sustancia. Se observa que la mancha de la
mientras lo agitamos para que el DNFB se sustancia problema coincide con el
uniera a los grupos –R de la muestra. En derivado de Valina. Y también coinciden
esta etapa se desprotona el grupo COOH- con los valores de Rf calculados. Notamos
terminal y el DNFB se une al grupo amino la mancha de Fenilalanina pero esta no
terminal, liberando HF. coincidió con al del problema .No se
observó las manchas de DNP-Ala debido a
2) Al agregar las 12 gotas de HCl se logró que
que el pH bajara a uno más acido con el fin
de protonar el grupo COO- y evitar que el
Conclusión.
El aminoácido terminal de la hemoglobina 2. PRATT, Charlotte; Voet Donald; [et.
humana es la L-Val . Con este método al.]. 2009. Fundamentos de
obtuvimos buenos resultados Bioquímica. La vida a nivel
molecular. 2a ed. Medica
Preguntas extras. Panamericana. España. 109 – 110
pp.
1. ¿Cómo se une la L-His al DNFB?
El DNFB se combina con la
histidina liberándose ácido
fluorhídrico y se forma un
dinitrofenilaminoácido.
2. ¿Qué es el método de Edman ?
Es un método de degradación para
la identificación de aminoácidos N-
terminales.
Se produce un feniltiocarbanil
derivado del aminoácido, que se
cicla en medio ácido débil o por
acción del calor. El
feniltiohidantoin-aminoácido
producido es característico de
aminoácido, ya que su naturaleza
depende del grupo R.
Bibliografía
1. GARRIDO Pertierra, Armando;
Teijon R. José M; [et. al.]. 2006.
Fundamentos de Bioquímica
Estructural. 2a ed. Tebar. España.
67 – 68 pp.
