ARTÍCULO DE REVISIÓN_________________________________________________________
DESARROLLO EMBRIONARIO DE PECES MARINOS, COSTEROS Y
DULCEACUÍCOLAS
Ávila Johan1, Miranda Lindys1 & Rivera Jesús R. 1
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Estudiante del programa de Biología, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad Del Atlántico,
Barranquilla, Colombia.
RESUMEN
Con ayuda de los artículos revisados, se logró sintetizar una gran parte del conocimiento del
desarrollo embrionario de los peces marinos, costeros y dulceacuícolas, haciendo énfasis en el
cuidado y mantenimiento de los organismos tanto vivos como muertos y su relación con las
mediciones necesarias para analizar las etapas de desarrollo. Así también el adecuado método con el
cual se deben realizar las actividades de muestreo y técnicas específicas en el buen manejo de las
muestras en el laboratorio, uso de hormonas para estimular los cambios necesarios para la
maduración y métodos de tinción para el reconocimiento de las estructuras durante las etapas de
desarrollo. Así también como el aprovechamiento de las nuevas tecnologías como el uso de cámaras
fotográficas para evidenciar de forma precisa los procesos presentes en las muestras a través de los
aparatos electrónicos, ya sea estetoscopios, microscopios o estéreo-microscopio de barrido.
Palabas claves: revisión, desarrollo embrionario y larval, peces, muestreo, laboratorio.
ABSTRACT
With the help of the articles reviewed, it was possible to synthesize a large part of the knowledge of
the embryonic development of marine, coastal and freshwater fish, with emphasis on the care and
maintenance of both living and dead organisms and their relationship with the measurements
needed to analyze the stages of development. Also the appropriate method with which to perform
the sampling activities and specific techniques in the proper management of the samples in the
laboratory, use of hormones to stimulate the necessary changes for maturation and staining methods
for the recognition of structures during the developmental stages. As well as the use of new
technologies such as the use of cameras to accurately evidence the processes present in the samples
through electronic devices, be it stethoscopes, microscopes or stereo-scanning microscope.
Key words: revision, embryonic and larval development, fish, sampling, laboratory.
INTRODUCCIÓN
El desarrollo embrionario en peces es un proceso complejo. Éste inicia después de la fecundación
con la formación del cigoto el cual, después de numerosas divisiones y arreglos celulares da lugar a
la formación de un nuevo individuo pluricelular. Este proceso consta de 7 etapas: periodo de cigoto,
periodo de clivaje, de blástula, gástrula, segmentación, faringula y eclosión (Gilbert, 2005).
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La determinación de las características de las especies y comunidades de peces constituye un
elemento básico para el manejo adecuado de los ecosistemas marinos y su máximo
aprovechamiento, desde el punto de vista económico y ecológico. Por tanto, el estudio de estos
estadíos se torna imprescindible para el entendimiento de la historia de vida y de la dinámica de las
poblaciones naturales de peces (Lasker 1987; Nakatani et al. 2001). Por lo cual es necesario el
estudio de las características morfo-fisiológicas y conductuales de las especies, por lo que toma
gran importancia el estudio de los primeros días de vida (Pezzato, 1997).La descripción del
desarrollo embrionario en peces puede tener innumerables ventajas, como favorecer el
reconocimiento de los embriones en sus ambientes naturales permitiendo una mejor evaluación de
desove de los peces y estudios relativos al crecimiento de las especies en su ambiente natural,
también es importante en estudios ontogénicos para la detección de alteraciones relacionadas con
sustancias toxicas en el desarrollo de las larvas en el ambiente acuático y evaluar el efecto en su
productividad (Alves, & Moura, 1972).Por otra parte el pez cebra ( D. rerio) es considerado como
el modelo de los estudios en el desarrollo embrionario de los peces, debido a que sus embriones son
transparentes, a la considerable cantidad de huevos que puede poner, y a que presentan un corto
tiempo de desarrollo. Son fáciles de manipular genéticamente y no son frágiles.
En la actualidad existe una gran variedad de especies de las cuales se desconoce su desarrollo
embrionario y larval, Por lo anterior es necesario definir los procesos biológicos al menos de las
especies de mayor importancia económica y las de aquellas que sin serlo desempeñan un papel en la
estructura y el funcionamiento del ecosistema (Claro, 1994),la presente investigación tiene como
objetivo describir la formación del embrión y el desarrollo larval, y las metodologías utilizadas para
dicho fin.
OBJETIVOS
Resumir información de diferentes estudios relacionados con el desarrollo embrionario de
peces.
proporcionar al lector información básica sobre el desarrollo embrionario de peces.
Conocer metodologías adecuadas para el estudio de peces y su desarrollo embrionario.
GENERALIDADES DEL DESARROLLO EMBRIONARIO EN PECES
El desarrollo embrionario de los peces consta de siete etapas que culminan con la eclosión. Estas
etapas son el período cigótico, el período de clivaje, blástula, gástrula, segmentación, faringula y
finalmente, la eclosión. En las diferentes especies se presentan algunas diferencias significativas en
las etapas, pero en general todos los peces en su desarrollo embrionario pasan por las 7 estadíos ya
mencionadas.
- PERIODO DE CIGOTO
Caracterizado por que en este período se produce la segregación del blastodisco en el cual el
citoplasma se diferencia del vitelo donde se distingue el polo animal.
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Figura 1: estadio de cigoto en diferentes especies especies a) y b) huevos de Prochilodus lineatus,
c) y d) y e) huevo de Xenomelaniris brasiliensis, donde se observa d) blastodisco y e) espacio
previtelino
- PERIODO DE CLIVAJE
El período de clivaje abarca las primeras seis divisiones, hasta que el embrión presenta 64 células. .
Esta etapa se caracteriza por una serie de divisiones rápidas que llevan a un aumento en el número
de blastómeras y a una disminución del tamaño de las mismas (Botta et al., 2010).
El clivaje de las primeras divisiones celulares se lleva a cabo de la siguiente forma: La
segmentación se inicia con la división del núcleo, a la cual sigue la división del citoplasma, se
generan contracciones oscilatorias que causan la migración del citoplasma cortical periférico hacia
el polo animal, donde se forma el blastodisco. Dos pequeñas marcas en el blastodisco sirven para
identificar la localización del surco de segmentación (del Río, Rosas, Velásquez, & Cabrera, 2005),
el primer ciclo de división celular se da en un plano de clivaje vertical, dando lugar a dos
blastómeras (Botta et al., 2010), un surco atraviesa desde la mitad del polo animal y termina en la
unión con el polo vegetal (Botero, Fresneda, Montoya, & Olivera, 2004).
En el segundo ciclo el plano de división fue vertical y perpendicular al primero formó ángulos
rectos con el primer plano de segmentación (Botero et al., 2004). , se reconoce como un surco que
divide las dos células del polo animal en forma perpendicular al surco de clivaje anterior (Botero et
al., 2004) dando lugar a 4 blastómeras en una disposición 2x2 (Botta et al., 2010)
En el tercer ciclo la división celular se da en dos planos verticales y paralelos al plano del primer
ciclo de división, dando lugar a ocho blastómeras en una disposición de 2x4(Botta et al., 2010). El
plano de la tercera división forma ángulos rectos con los dos primeros planos y el eje principal del
huevo. De los ocho blastómeros, cuatro se situaran encima de los otros cuatro, igualmente
superpuestos. Los cuatro primeros blastómeros incluyendo el hemisferio animal del huevo y los
restantes en el hemisferio vegetativo (del Río et al., 2005).
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En el cuarto ciclo la división se da en cuatro planos verticales y paralelos al plano de la segunda
división, dividió las dos filas de blastómeros en cuatro blastómeros cada una, formándose 16
blastómeros en una disposición de 4x4 (Botta et al., 2010)
La quinta división celular da origen a 32 blastómeros y la última división de este período se realiza
en un plano horizontal y genera 64 células que se distribuyen en dos capas de células, cada una de
ellas ubicada una sobre la otra en el blastodisco. En esta última división se ve claramente es como
unas blastómeras cubren a las otras y se aprecia la envoltura del blastodisco Por lo tanto se
considera que concluye este estadío cuando se reconoce la blástula (Botero et al., 2004), el embrión
adquiere el aspecto característico de una mora, por lo cual es denominado mórula, observándose
hacia el polo animal del huevo. Los blastómeros se disponen en una capa, y se origina la cavidad
llamada blastocele dispuesta internamente entre la capa germinal y el vitelo (del Río et al., 2005).
Figura 2: Estadíos del período de Clivaje A) 2 células, 4 células, 8 células, 16 células, 32 células,
64 células, en Prochilodus lineatus B) estadio de clivaje en Xenomelaniris brasiliensis, quinta
division celular, Morula, Blastula. C) estadio periodo de clivaje en Piaractus brachypomusse
observa embrión de dos células, embrión de cuatro células, embrión de ocho células, Período de
división celular. Embriones de 16 células, 32 células y 64 células y envoltura de blastodisco.
- PERÍODO DE BLÁSTULA
Durante este período el blasto se aprecia el borde de la capa sincitial vitelina y el embrión adopta
una forma esférica característica. El período de blástula abarca un tiempo aproximado 3 horas en
Prochilodus lineatus y 4 horas en Piaractus brachypomus y Colossoma macropomum, desde el
estadío de 128 células hasta la formación del anillo germinal en el embrión (que indica el inicio de
la gastrulación). A medida que se avanza en este período se produce la transición de la blástula
media (TBM), donde el embrión inicia la transcripción de su genoma; se forma la capa vitelina
sincitial (CVS), El eje de la blástula del polo animal al polo vegetal se acorta, el blastodisco
comprime el vitelo (Botero et al., 2004) y comienzan los movimientos de epibolia que luego
continúan en la gastrulación (Botta et al., 2010).
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Figura 3. Estadíos del período de Blástula. A) Periodo blástula en Prochilodus lineatus a) 128
células, b) estadío Alto, las flechas indican la constricción en la CVS; c) estadío de transición
Alto-Ovoide d) estadío de transición Ovoide-Esfera, e) Domo, la flecha indica el movimiento en
dirección vegetal-animal de la CVS; f) Domo, flecha indica el movimiento en dirección vegetal-
animal de la CVS, el círculo encierra la zona asimétrica que se encuentra en el domo de la CVS. B)
Período de blástula en Piaractus brachypomus (a) polo animal, (b) polo vegetal, (c) Capa sincitial
del blastodisco.
- PERÍODO DE GÁSTRULA
Durante este estadío el movimiento de epibolia continúa, pero a él se suman los movimientos
morfogenéticos de involución, convergencia y extensión, que llevan finalmente a la generación de
las diferentes capas germinales y los ejes embrionarios (Botta et al., 2010). El blastodermo se
expande sobre la superficie del vitelo por epibolia, caracterizada por un crecimiento y
multiplicación rápida de las células que formaran el blastodisco (Montoya, Jara, Solis, Colin, &
Habit, 2012). Las células empiezan a extenderse superficialmente sobre la zona vegetativa del
huevo, englobándolo. A consecuencia de ello el blastodisco cubrió el vitelo, hasta que sus bordes
convergen y se cerraran en el extremo posterior al embrión, formando el tampón vitelino con el
cual concluye la gastrulación (Botero et al., 2004).
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Figura 4: Estadíos del período de Gástrula. A) periodo de gástrula en Prochilodus lineatus (a)
50% epibolia, las flechas indican el anillo embrionario; (b) 70% epibolia; la flecha indica el sitio de
formación del escudo embrionario; (c) 90% epibolia, la flecha inferior señala la zona de evacuación
y la superior el sitio donde se generará la placa neural. B) Periodo de gástrula en Colossoma
macropomum. (A) Cabeza, (B) borde del periblasto, (C) vitelo, (D) cola, (E) anillo germinal.
- PERÍODO DE SEGMENTACIÓN
El período de segmentación, es caracterizado por la morfogénesis, el desarrollo de somitas y la
elongación del embrión (Botero et al., 2004), ocurrió entre las 11 y las 17 horas posteriores a la
inseminación en Piaractus brachypomus y tiene una duración aproximada de 10h en Prochilodus
lineatus. Durante el transcurso de este período se forma el tubo neural, y a medida que avanza el
desarrollo se pueden identificar el proencéfalo (telencéfalo y diencéfalo), el mesencéfalo y el
romboencéfalo; se desarrollan los somitos y se hacen visibles los rudimentos de los órganos
primarios, el primordio de la cola aumenta su tamaño, se produce la elongación del embrión y se
producen las primeras diferenciaciones morfológicas y los primeros movimientos corporales, en
este periodo se da la aparición de la vesícula de Kuppfer , que es una estructura transitoria que sólo
aparece en el desarrollo de los teleósteos durante el período de segmentación (Botta et al., 2010).
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Figura 5: Estadíos del período de segmentación en Prochilodus lineatus (a) 3 somitos; (b) 8
somitos, (c) 13 somitos, (d) 18 somitos; B) Período de segmentación en Piaractus brachypomus.
Diferenciación de somitas. (A) somita, (B) ectodermo, (C) ojo.
- PERÍODO DE FARINGULA
El período de faringulación, se reconoció porque el embrión presenta morfología con simetría
bilateral, se ve alargado, la cola se distingue claramente y crece (Botero et al., 2004). En este
periodo se puede ver al embrión en un estadío de desarrollo más avanzado donde presenta
movimiento dentro del corion (primeras contracciones musculares originadas por el desarrollo de
las inervaciones de las células neuromotoras.
figura 6: Periodo de faringulacion A) estadío de farigula en Prochilodus lineatus (a) 20 somitos;
(b) 23 somitos; (c) el embrion presenta movimiento dentro del corion; B) Período de faringulación
en Colossoma macropomum , > mayor a 25 somitas. (A) rudimentos de columna vertebral, (B)
saco vitelino, (C) ectodermo.
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- PERÍODO DE ECLOSIÓN
A las 17 horas posteriores a la inseminación el embrión comienza el movimiento fuerte y avanza en
forma rectilínea, para alcanzar la eclosión a las 19 horas. No todos los embriones eclosionan al
mismo tiempo, se da un 90% de eclosión en dos horas (Botero et al., 2004). Donde se destaca la
ausencia de pigmentación (Botta et al., 2010).
Figura 7: Periodo de eclosion A) eclosion en larva de Prochilodus lineatus; B) Larva de
Piaractus brachypomus
METODOLOGÍA
Existen un sinnúmero de técnicas para medir el desarrollo embrionario de los peces, metodologías
complejas como también sencillas. En la mayoría de los artículos revisados, los estudios empezaban
con trabajo de campo (Rosas, Mata, Velásquez, & Cabrera, 2008) que bien pueden ser uno cuantos
días o varios años de estudio para analizar el desarrollo reproductivo, también habiendo utilizando
metodologías especificas dependiendo del estadio en el que se encontraban los huevos (Montoya et
al., 2012); empleando redes de ictioplancton para los huevos y búsqueda visual y captura manual
para la recolección de los mismos sí estos presentan fragilidad. Pero otros se dedicaban solo a lo
teórico realizando comparaciones de los peces en estudios con modelos ya previamente analizados
como le es el artículo del desarrollo embrionario del goldfish (Tsai, Chang, Liu, Abe, & Ota, 2013).
En todo caso, posterior a la metodología de campo las muestras se almacenaban dependiendo a la
forma en la se iban a utilizar posteriormente, ya sea para medición y clasificación (Tombari,
Volpedo, & Echeverría, 2005) en la cual se congelan las muestras y permitir diferenciarlas en sus
distintas etapas de desarrollo o realizar análisis morfo-métricos para determinar el desarrollo
gonadal y reproductivo de una especie en específico (Santamaría, Elorduy, Villalejo, & Rojas,
2003) la fijación se realizó en la mayoría de los artículos con formalina tamponada al 5% o 10%,
alguno otros utilizaban un fijador antes la formalina como es el caso del fijador de Bouin (Morrison,
Miyake, & Wright, 2001), para la identificación de las estructuras se utilizaron método de tinción
con hematoxilina y eosina, tinción tricrómica de Masson (Drury, Wallington, & Cameron, 1967),
Schiff de ácido periódico y azul de Alcian a pH 2,5 (Vacca, 1985) o una técnica
inmunohistoquímica para la insulina de tilapia (Yang, Morrison, Conlon, Laybolt, & Wright, 1999).
En el caso de que de los especímenes se necesiten con vida en el caso de los huevos y los adultos
maduros, es imprescindible transportarlos en material del medio en el cual se colectaron, en este
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caso el agua (Rosas et al., 2008) para que las condiciones en las cuales se transporten sean lo más
cercano al medio natural; para la obtención de gametos en el caso de los adultos, el modo practico
para que expulsen los expulsen es por medio de masaje abdominal (del Río et al., 2005) y la
fertilización se realiza en seco (Woynarovich, 1986); la cual tiene un gran porcentaje de eficacia. En
el caso de los peses a los cuales no es posible reproducirlos en el laboratorio por todos los agentes
atmosféricos que necesitan para lograr su madurez, dichos factores atmosféricos pueden ser
compensados con la utilización de hormonas que estimulan la producción de gametos, en el artículo
revisado (Botta, Sciara, Arranz, Murgas, Pereira, & Oberlender, 2010) fueron dos inyecciones
utilizada, la segunda a las 12 horas de la primera y a las 8 horas después de la segunda se llevó a
cabo la extracción de los huevos. Retomando el tema de los huevos, estos se almacenan en cajas
Petri tapados con mallas y puestos en una bandeja de incubación; para evitar la contaminación por
hongos es posible mantenerlos bajo flujo constante de agua (Montoya et al., 2012) y en caso de que
se tengan muestras de distintas especies (como es el caso de varios de los artículos tratados), es
necesario seguirle de desarrollo ontogénico y si es posible también hacer análisis genéticos para la
identificación de la especie. Para poder visualizar y analizar los distintos estadios de desarrollo de
un embrión y a su vez evidenciar la segmentación, es necesario que el embrión este vivo, para
realizar esto, este debe anestesiarse y retirarse del corion utilizando tijeras y pinzas, viéndolo con
detalle en un estéreo-microscopio de disección y con ayuda de fotografías es más sencillo el
proceso de identificación de las etapas (Kimmel, Ballard, Kimmel, Ullmann, & Schilling, 1995) con
esta serie de pasos, el desarrollo en peces puede evidenciarse hasta su metamorfosis cuando deja su
fase de larva y se transforma en adulto (Silva, 1995).
DISCUSIONES
El desarrollo de los peces tiene particularidades en los diferentes grupos como en el tiempo
desarrollo que presenta cada grupo en las diferentes períodos, en el caso de Piaractus
brachypomus el desarrollo embrional es más rápido con un tiempo de 19h , que el del pez Cebra es
de 48 h (Botero et al., 2004), en el caso de Piaractus brachypomus es de 18h (Botta et al., 2010),
en Hemirhamphus brasiliensis a las 114h (del Río et al., 2005), se requieren observaciones más
continuas , pero en generaal no esta deteminado un tiempo entre fertilizacion y eclosion en los
peces, principalmente el estudio del desarrollo embrionario va de la mano con la importancia
economica y alimenticia que produce las especies que se les raliza este tipo de estudio, por lo que
no se puede definir un rango de tiempo en el desarrollo embrionario a falta de estudio, por lo
menos un mayor numero de especies de los diferentes grupo de peces. En el estadio de blastula en
Piaractus brachypomus Los clivajes de 32 y 64 células, son difíciles de clasificar en el
estereoscopio; lo que si se ve claramente es como unas blastómeras cubren a las otras y se aprecia la
envoltura del blastodisco, en la etapa de clivaje en Xenomelaniris brasiliensis Las células del
blastodermo fueron más pequeñas que en las etapas previas, formando capas de cuatro o cinco filas
de células, lo que dificultó el conteo de las células de la siguiente división, al igual que en el pez
Cebra, la división celular es meroblástica Colossoma macropomum en ya que el clivaje es
orientado verticalmente y se pueden contar fácilmente el número de células (Botero et al., 2004)..
Por lo general la metodología usada para el estudio del desarrollo embrionario en peces, es similar
en todas las especies, en las que se ha realizado dichos estudio, difiere principalmente en la
obtención de los gametos para la fertilización ya que en alguno casos como en Prochilodus
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lineatus el cual Esta especie no puede reproducirse en cautiverio, por lo cual se realizó una
inducción hormonal inyectando por vía intramuscular de una solución compuesto de glándulas
hipófisis enteras liofilizadas diluidas en solución fisiológica 0,9%, para lograr el desove tanto en
hembras como en machos (Botta et al., 2010), otra forma para el estudio del desarrollo embrionario
cuando realiza en varias especies general se recolectan huevos ya fecundados de su habitad natural
y se sigue un estudio consecutivo, los diferentes estadíos en los que se encuentran los huevos
recolectados (Montoya et al, 2012), este tipo de procedimiento se recomienda para los peces que en
estrés no pueden reproducirse (Rosas et al., 2008). Aunque varíen en alunas formas de la obtención
de las muestras, el seguimiento es muy similar en todos los grupos.
CONCLUSIÓN
El desarrollo embrionario de los peces está conformado por siete etapas, estas etapas no siguen un
patrón periódico, ya que puede presentar algunas variaciones dependiendo de la especie de pez que
se esté estudiando, las variaciones más marcadas se ponen de manifiesto en el periodo de tiempo
que tardan en desarrollarse los embriones desde el periodo de cigoto, al periodo de eclosión según
las especies. En cuanto a las metodologías utilizadas para este tipo de estudios, en la mayoría de
peces es la misma, no se logró determinar preferencia por una metodología determinada, aunque sí
estuvieron presentes indicativos o patrones en el uso de las mismas , como se pudo evidenciar en la
bibliografía consultada, pero hay que tener consideraciones especiales ya que algunas clases de
peces necesitan unas condiciones específicas especiales para poder llevar acabo el respectivo
proceso de reproducción, estos requerimientos son resueltos por el uso de hormonas de
estimulación.
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