PROTOCOLO DE LIMPIEZA COLUMNA: AS20
De acuerdo con el manual, para el correcto lavado de la columna AS20 se debe
seguir el protocolo de limpieza establecido por el fabricante, el cual varía
dependiendo del tipo de contaminante que se encuentre dentro de la columna (fase
móvil o muestra), ya sean ácidos, bases solubles o contaminantes orgánicos
(solventes orgánicos).
Es importante antes de realizar el protocolo de limpieza tomar en cuenta las
siguientes consideraciones para un correcto lavado de la columna:
Tomar en cuenta que las presiones demasiado altas pueden alterar la
uniformidad el empaquetado de la columna y alterar el rendimiento de la
columna de forma irreversible.
Las precipitaciones de sales en solventes durante los enjuagues de la
columna pueden producir zonas de alta presión.
Las zonas de alta presión en la columna pueden ser creadas por el bombeo
sucesivo de eluyentes que no son miscibles a través de la columna.
En caso de duda, incluya siempre pasos cortos de enjuagado de la columna
para reducir el contenido de disolvente del eluyente a niveles <5% y la fuerza
iónica del eluyente a niveles <50mM para evitar la creación de zonas de alta
presión en la columna que puedan alterar la uniformidad del relleno de la
columna.
Elección de la solución de limpieza adecuada
Cuadro 1
Contaminante Solución
Contaminación Las soluciones de hidróxido concentrado tales como un concentrado 10X
hidrofílica de del eluyente más concentrado utilizado en la aplicación es suficiente para
baja valencia eliminar la contaminación hidrófila de baja valencia.
Contaminación Las soluciones ácidas concentradas tales como HCl 1 a 3 M eliminarán los
de Iones iones hidrófilos de alta valencia por supresión iónica y elución por el ion
Hidrofílicos de cloruro.
Alta Valencia
La contaminación del metal a menudo da como resultado formas de pico
asimétricas y / o recuperaciones de analito variables. Por ejemplo, la
contaminación con hierro o aluminio a menudo resulta en la formación de
Contaminación residuos de sulfato y fosfato. La contaminación del aluminio también puede
con metal provocar una baja recuperación de fosfato.
Las soluciones ácidas concentradas tales como HCl 1 a 3 M eliminan una
variedad de metales. Si después del tratamiento con ácido, la cromatografía
todavía indica la presencia de la contaminación del metal, se recomienda el
tratamiento con ácidos quelantes como el ácido oxálico 0,2 M
Contaminación Los solventes orgánicos pueden usarse solos si la contaminación es no
no iónica e iónica e hidrofóbica. El grado de carácter no polar del disolvente se debe
hidrofóbica aumentar según el grado de hidrofobicidad de la contaminación dentro del
rango de solventes aceptables.
Las soluciones ácidas concentradas, como HCl de 1 a 3 M, se pueden usar
con solventes orgánicos compatibles para eliminar la contaminación que es
Contaminación iónica e hidrofóbica. El ácido suprime la ionización y las interacciones de
iónica e intercambio iónico de la contaminación con la resina.
hidrofóbica Una solución de limpieza frecuentemente utilizada es 200 mM de HCl en
80% de acetonitrilo. Esta solución debe prepararse inmediatamente antes
de su uso porque el acetonitrilo se descompondrá en la solución ácida
durante el almacenamiento a largo plazo.
PROCEDIMIENTO DE LIMPIEZA DE COLUMNA
1. Prepare una solución de 500 ml de la solución de limpieza adecuada
siguiendo las instrucciones en "Elección de la solución de limpieza adecuada"
presentada en el cuadro 1.
2. Desconecte el ASRS 300, ACES 300 o AMMS 300 de la columna analítica /
capilar IonPac AS20.
3. Si su sistema está configurado con una columna de protección y una columna
analítica o capilar, invierta el orden del protector y la columna analítica /
capilar en la ruta de flujo del eluyente
4. Verifique que el eluyente fluye en la dirección designada en cada una de las
etiquetas de columna.
Al limpiar una columna analítica y una columna protectora (o capilar y
protector capilar) en serie, asegúrese de colocar la columna protectora
después de la columna analítica / capilar en la ruta de flujo del eluyente. De
lo contrario, los contaminantes que se han acumulado en la columna de
protección se pueden eluir en la columna analítica / capilar y dañar
irreversiblemente. En caso de duda, limpie cada columna por separado.
5. Configure la velocidad de flujo de la bomba en 1.0 mL / min para una columna
analítica o de protección AS20 de 4 mm o configure la velocidad de flujo de
la bomba a 0.25 mL / min para una columna analítica o de protección AS20
de 2 mm. Ajuste la velocidad de flujo de la bomba a 0.010 mL / min para una
Columna capilar o capilar tipo AS20.
6. Enjuague la columna durante 10 minutos con agua desionizada antes de
bombear la solución de limpieza elegida sobre la columna.
7. Bombee la solución de limpieza a través de la columna durante al menos 60
minutos.
8. Enjuague la columna durante 10 minutos con agua desionizada antes de
bombear el eluyente sobre la columna.
9. Equilibrar la (s) columna (s) con eluyente durante al menos 60 minutos antes
de reanudar el funcionamiento normal.
10. Vuelva a conectar el ASRS 300, ACES 300 o AMMS 300 a la columna
analítica o capilar AS20.
11. Coloque la columna de protección en línea entre la válvula de inyección y la
columna analítica o capilar si su sistema se configuró originalmente con una
columna de protección.
