PRÁCTICA 3. EL MICROSCOPIO ÓPTICO Y SU MANEJO.
El objetivo fundamental de esta práctica es la familiarización con el manejo del microscopio
óptico. Se utilizará un microscopio compuesto o lumínico, en el que la luz atraviesa la muestra
con el material a observar y, a través de un juego de lentes, llega al ojo del observador una
imagen aumentada. En la primera parte de la práctica se revisa brevemente la estructura del
microscopio y se aprende a enfocar una preparación y las normas para el correcto uso del
aparato. En segundo lugar, se realizarán preparaciones sencillas para observar distintas
estructuras biológicas de tejidos tanto animales como vegetales.
1. Estructura y manejo del microscopio óptico
Las partes esenciales que componen un microscopio óptico (ver figura adjunta) son:
Parte mecánica
Pie o soporte: sirve como base al microscopio y en él se encuentra la fuente de
iluminación.
Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se encuentra
un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un sistema de pinza o
similar, para sujetar el portaobjetos con la preparación, y unas escalas que ayudan a
conocer qué parte de la muestra se está observando. La platina presenta 2 tornillos,
generalmente situados en la parte inferior de la misma, que permiten desplazar la
preparación sobre la platina, en sentido longitudinal y transversal respectivamente.
Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte de
oculares y objetivos.
Revólver portaobjetivos: estructura giratoria que contiene los objetivos.
Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomar el microscopio
para trasladarlo de lugar.
Tornillo macrométrico o de enfoque grosero: sirve para obtener un primer enfoque de la
muestra al utilizarse el objetivo de menor aumento. Desplaza la platina verticalmente
de forma perceptible.
Tornillo micrométrico o de enfoque fino: sirve para un enfoque preciso de la muestra,
una vez que se ha realizado el enfoque con el macrométrico. También desplaza
verticalmente la platina, pero de forma prácticamente imperceptible. Es el único
tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el primer enfoque, al ir
cambiando a objetivos de mayor aumento.
Parte óptica
Oculares: son los sistemas de lentes más cercanos al ojo del observador, situados en
la parte superior del microscopio. Son cilindros huecos provistos de lentes
convergentes cuyo aumento se reseña en la parte superior de los mismos
(normalmente 10X en los microscopios que se utilizarán en esta práctica).
Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los microscopios pueden se mono o
binoculares.
Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la parte inferior del
tubo, mediante el revólver. En esta estructura se pueden acoplar varios objetivos
(ordenados de forma creciente según sus aumentos, en el sentido de las agujas el
reloj). Un anillo coloreado es distintivo de los aumentos de cada objetivo, que también
van reseñados en el lateral del mismo. Algunos objetivos no enfocan bien la
preparación al aire, y se deben de utilizar con un aceite de inmersión (normalmente van
marcados con un anillo rojo). Estos objetivos de inmersión no se utilizarán
normalmente en estas prácticas.
Condensador: sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los
concentra sobre la preparación, de manera que proporciona mayor o menos contraste.
Se regula en altura mediante un tornillo (letra J de la figura).
Fuente de iluminación: en los microscopios a utilizar, el aparato de iluminación está
constituido por una lámpara halógena de bajo voltaje (12V) situada en el pie del
microscopio. La luz procedente de la bombilla pasa por un reflector que envía los rayos
luminosos hacia la platina.
Diafragma o iris: sobre el reflector de la fuente de iluminación. Abriéndolo o cerrándolo
permite graduar la intensidad de la luz.
Transformador: ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red, es necesario
para enchufar el microscopio. Algunos modelos ya lo llevan incorporado en el pie del
microscopio. Además, el transformador dispone de un potenciómetro para regular la
intensidad de la luz.
1.1. Montaje y enfoque de una preparación microscópica
Antes de observar la preparación al microscopio, esta debe de ser montada sobre vidrio.
Para ello existen dos piezas de vidrio denominadas portaobjetos (porta), que, como su
nombre indica, es el soporte sobre el que va la muestra, y cubreobjetos (cubre) que siempre
ha de colocarse sobre la muestra. Una vez colocada la muestra en el porta, se debe añadir una
gota de agua, o de la solución acuosa pertinente, antes de colocar el cubre, para evitar
interfases agua-aire, que provocan zonas ciegas.
Para enfocar la preparación se ha de seguir de forma minuciosa el protocolo descrito
debajo de la figura.
Consejos prácticos
En los microscopios que requieren transformador, el enchufe a la red y desenchufe
debe hacerse sobre el transformador, y nunca debe desenchufarse el microscopio del
transformador.
Se debe mantener apagada la luz del microscopio siempre que no se esté utilizando,
ya que la vida media de la bombilla es corta.
Siempre se debe comenzar el enfoque con el objetivo de menor aumento.
Anotar siempre el número de aumentos con el que se observa la preparación. Para
calcularlo basta multiplicar el número de aumentos del objetivo por el de los
oculares. Hacer esquemas y dibujos de lo observado con cada aumento.
Salvo que se indique lo contrario no utilizar nunca el objetivo de inmersión, ya que se
requiere un aceite especial sin el que, además de no enfocar bien, existe una gran
probabilidad de dañar la lente al rozar con el cubreobjetos.
Una vez enfocada, procurar recorrer, con los tornillos de la platina, toda la preparación.
EL MICROSCOPIO ÓPTICO
a) OCULARES (A)
b) REVOLVER (B)
c) OBJETIVOS (C) (los aumentos
en el ext.)
d) PLATINA (D)
e) Tornillos para desplazar la
preparación sobre la platina en
sentido longitudinal y
transversal (E)
f) CONDENSADOR (F)
g) Tornillo MACROMÉTRICO (G)
h) Tornillo MICROMÉTRICO (H)
i) DIAFRAGMA IRIS (I)
j) Tornillo para regular la altura
del condensador (J)
k) INTERRUPTOR (K)
l) Regulador de la Intensidad de
Luz (L)
m) PINZAS para ajustar la
preparación sobre la platina (M)
n) PIE O SOPORTE (N)
ENFOQUE DEL MICROSCOPIO
Los pasos a seguir para la perfecta utilización del microscopio son las siguientes:
1. Enchufar el microscopio al transformador y éste a la red (NUNCA ENCHUFAR EL
MICROSCOPIO DIRÉCTAMENTE A LA RED. SIEMPRE QUE NO SE ESTÉ
MIRANDO POR EL MICROSCOPIO HAY QUE APAGAR LA LUZ).
2. Colocar la preparación sobre la platina de forma que la estructura a observar quede en
el orificio central de la platina.
3. Poner el objetivo de menor aumento cuyo amplio campo visual facilita el hallazgo de
estructuras importantes.
4. Subir la pletina accionando el tornillo macrométrico y mirando la preparación desde
fuera hasta alcanzar el tope superior. En ningún caso tocar la preparación con los
objetivos.
5. Mirando por los oculares, bajar lentamente la platina con el tornillo macrométrico hasta
conseguir ver el objeto lo más nítido posible.
6. Ajustar el enfoque con el tornillo micrométrico hasta verlo claramente.
7. Para observar la preparación a mayores aumentos cambiar de objetivo con un simple
giro del revolver (SIN MOVER EN NINGÚN CASO EL TORNILLO MACRO). Las
pequeñas variaciones que se observen en el enfoque se producen al cambiar de
objetivo y se corrigen con el micro.
8. Para observar otros campos, desplazar la preparación moviendo los tornillos de la
platina.
Para cambiar la preparación:
Bajar la platina.
Colocar el objetivo de menor aumento.
Quitar la preparación y colocar la siguiente.
Para desconectar el microscopio, además de los tres pasos anteriores:
Apagar y desenchufar el transformador de la red.
Tapar el microscopio con su funda.
2. Observación de células animales y vegetales
Para comenzar a utilizar el microscopio, se observarán células animales y vegetales, y
se estudiarán sus diferencias. Además, se observarán orgánulos celulares, en concreto plastos
de células de tubérculo de patata.
Práctica 2.1. Observación de células del epitelio de la mucosa bucal
Este epitelio está constituido por células de un contorno irregular, prácticamente
incoloras a la luz blanca, por lo que, para su observación es preciso realizar un proceso previo
de tinción, en este caso con azul de metileno, que permitirá observar un citoplasma granulado
y un núcleo claramente diferenciado.
Método
1. Raspar suavemente la cara interior de la mejilla con un abatelenguas, y depositar el
contenido en un portaobjetos extendiéndolo con cuidado.
2. Fijar la muestra a la llama para estabilizar las estructuras y adherirla al portaobjetos.
Para ello, se pasa la cara inferior del portaobjetos por encima de la llama brevemente,
con cuidado de no quemar las células.
3. Añadir 1-2 gotas de azul de metileno sobre las células fijadas y dejar teñir durante 3
minutos.
4. Lavar suavemente la preparación para eliminar el exceso de colorante con agua.
5. Secar la parte inferior del portaobjetos y colocar un cubreobjetos.
6. Observar la preparación
3. Observación de plastos de células de tubérculo de patata
Los plastos son orgánulos típicos de células vegetales. En la parte anterior de la
práctica se han observado cloroplastos de células estomáticas y de células parenquimáticas.
En este parte se observará la estructura y propiedades de los amiloplastos de patata.
Práctica
Los leucoplastos son orgánulos incoloros, con formas diversas, cuya función es
almacenar distintos tipos de sustancias. Concretamente, los amiloplastos de patata, almacenan
almidón que se deposita en capas sucesivas, por lo que poseen forma de concha de mejillón,
donde se distingue un punto muy refringente en la punta, llamado hilo (donde se acumula
mayoritariamente la amilosa), y unos anillos de crecimiento que en conjunto constituyen la
loncilla (donde se acumula mayoritariamente la amilopectina). Debido a la presencia de
almidón, los amiloplastos se pueden teñir con lugol.
Método
1. Raspar suavemente con el bisturí la superficie de un trozo de patata pelada, y extender
sobre un portaobjetos una pequeñísima cantidad del raspado.
2. Añadir una gota de agua y colocar un cubreobjetos.
3. Observar al microscopio.
Una vez estudiada la estructura de los amiloplastos:
1. Levantar el cubreobjetos y añadir una gota de lugol (diluido 1/10), volver a colocar el
cubreobjetos.
2. Observar la preparación.
Cuestionario
1. ¿Por qué los amiloplastos aparecen libres y no incluidos dentro de una célula?
2. ¿Por qué en la loncilla hay fundamentalmente amilopectina, mientras que la amilosa
está en el hilo interior?
3. ¿Qué diferencias se aprecian entre las células animales y vegetales observadas?
¿Cuáles pueden ser generalizables?
4. ¿El azul de metileno es un colorante ácido o básico? ¿Por qué?
5. ¿Qué interferencias aparecen al observar las preparaciones?
NOTA
El material que deberán traer para la realización de la práctica es:
1 abatelenguas.
1 papa.
