INTRODUCCIÓN
Los contaminantes en las aguas residuales son normalmente, una mezcla compleja de
compuestos orgánicos e inorgánicos y por ello no es práctico ni posible, en la mayoría de los
casos, obtener su análisis completo. Por las razones anteriores, se ha desarrollado una serie de
métodos empíricos para la evaluación de la concentración de contaminantes en aguas
residuales, cuya aplicación no requiere un conocimiento completo de la composición
química específica de las aguas residuales que se trate.
Esta es la razón del porqué la medición de los llamados parámetros combinados o
compuestos es la opción que más se usa a menudo para el control de la calidad de las aguas
residuales, ya que proporciona a los usuarios una vía rápida y global de apreciar los efectos
potenciales de una contaminación no específica.
Entre este los métodos de este tipo se encuentran la demanda química de oxígeno (DQO), la
demanda bioquímica de oxígeno (DBO) los aceites y grasas, el nitrógeno total Kjeldahl, los
fenoles totales y otros.
Los métodos analíticos que se utilizan, con mayor frecuencia en los estudios
medioambientales se tienen los de determinación de nitrógeno, debido a la importancia que
este tiene como indicador en los procesos de tratamientos control de la calidad de las aguas y
en el control de las descargas de las aguas residuales al medio. El nitrógeno es un nutriente
esencial para todas las formas de vida y cambios pequeños en las concentraciones de
nitrógeno biológicamente asequible pueden afectar drásticamente los niveles de la vida de
los animales y las plantas. En el agua de origen residual existe amoníaco (NH3) en forma no
ionizada, que es tóxico y la forma ionizada (ion amonio, NH4+) relativamente no tóxico. El
método tradicional de determinación de nitrógeno total es el método Kjeldahl, el cual
mantiene su vigencia en la actualidad, a pesar de que data de hace casi 130 años, ya que fue
en 1883 que el químico danés Johan Kjeldahl presentó por primera vez en la Danish
Chemical Society un método para la determinación de lo que se conoce como nitrógeno
Kjeldahl, que proporciona el contenido de nitrógeno orgánico más nitrógeno amoniacal de
una muestra.
El nitrógeno total Kjeldahl es un indicador utilizado en química analítica cuantitativa. Refleja
la cantidad total de nitrógeno en el agua analizada, suma del nitrógeno orgánico en sus
diversas formas (proteínas y ácidos nucleicos en diversos estados de degradación, urea,
aminas, etc.) y el ion amonio NH4+. También se utiliza para determinar proteínas en
alimentos.
Es un parámetro importante en estaciones depuradoras de aguas residuales (EDAR) ya que
mide el nitrógeno total capaz de ser nitrificado a nitritos y nitratos y, posteriormente y en su
caso, desnitrificado a nitrógeno gaseoso. No incluye, por tanto, los nitratos ni los nitritos.
La determinación de nitrógeno total por este método aún hoy en día es uno de los más
utilizados en el análisis químico. Es la técnica más versátil para el análisis de nitrógeno. De
hecho, es el único método que puede ser usado para el análisis del contenido de nitrógeno en
muestras con elevada diversidad. Su universalidad, veracidad y precisión ha hecho que sea
un método internacionalmente reconocido para la determinación de nitrógeno total y del
contenido de proteína en alimentos. Es el método estándar contra el cual todos los demás
métodos deben ser comparados y está aceptado por numerosas e importantes organizaciones
internacionales.
METODOLOGÍA
Aplicación
El método Kjeldahl se utiliza en química analítica para la determinación del contenido de
nitrógeno en muestras orgánicas lo cual es de gran interés en ámbitos de tanta transcendencia
hoy en día como son el alimentario y el medioambiental.
Es un indicador utilizado en química analítica cuantitativa. Refleja la cantidad total de
nitrógeno en el agua analizada, suma del nitrógeno orgánico en sus diversas formas ;
proteínas y ácidos nucleicos en diversos estados de degradación, urea, aminas, etc
El método se aplica en este laboratorio para la matriz aguas residuales industriales y
superficiales. Se emplea para el intervalo de 0,50 a 1.000 mg de N/L. Es un método
electrométrico, en el que se determina el amoniaco y se expresa como Nitrógeno (N)
Este método electrométrico determina el pH , midiendo el potencial generado (en milivolts)
por un electrodo de vidrio que es sensible a la actividad del ión H+ , este potencial es
comparado contra un electrodo de referencia, que genera un potencial constante e
independiente del pH.
El contenido de Nitrógeno orgánico en un agua incluye el Nitrógeno de aminoácidos, aminas,
polipéptidos, proteínas y otros compuestos orgánicos del Nitrógeno.
Para el desarrollo de la curva de nivel proporcionamos El método fotométrico
independientemente de cual sea su tipo consiste en la determinación de la presencia
cualitativa de un analito mediante el estudio de la dispersión que forma el disolvente.
Dispersón de la radiación por partículas en disolución.
El método Kjeldahl determina el Nitrógeno en estado tri negativo; el “Nitrógeno Kjeldahl” es
la suma del Nitrógeno Orgánico y el Nitrógeno Amoniacal.
En general, el método Kjeldahl tiene la ventaja de poderse ejecutar mediante equipos no muy
sofisticados y puede ser realizado por técnicos poco experimentados.
FUNDAMENTACIÒN CIENTÌFICA
D’Elia, en 1983, refirió ‘‘...los cambios más significativos en la práctica de la determinación
de nitrógeno han resultado no tanto de la expansión del empleo de este método, sino de la
expansión de su aceptación en la mejora de sistemas automatizados...” Dentro de las
modificaciones del método Kjeldahl están aquellas que han introducido cambios para hacerlo
tecnológico y ambientalmente más seguro. Este es el caso de la Norma Mexicana
NMX-AA-026-SCFI-2010,16 que utiliza mineralización con sulfato de potasio y la
modificación con tiosulfato de sodio, la cual es más adecuada que la propuesta por la norma
ISO 5663:1984,10 que emplea mineralización con selenio.
Mediante una publicación realizada en una revista menciona (Carmen, 2013) que entre los
indicadores que es preciso analizar en estos casos, se exige que la determinación de nitrógeno
total, se realice mediante el método Kjeldahl. Cuando estos cuerpos de agua se han
clasificado como Clase A (acción que corresponde al organismo rector de las aguas
terrestres, Instituto Nacional de Recursos Hidráulicos), el LMPP correspondiente al
contenido de nitrógeno total es de 5 mg/L, valor que coincide con el límite de cuantificación
(LC) del método Kjeldahl según establecen los métodos normalizados de la American Public
Health Association (APHA) .
(Zarela, 2012) Mediante un experimento en Eichhornia crassipes que es una de las plantas
que más nutrientes remueve, su elevado consumo en NTK, (Nitrógeno total) demuestra la
utilización de estos macronutrientes para procesar la proteína que forma su estructura
corporal está relacionado con los estudios como el de Rodríguez et al.(2005) demuestran
que el consumo de N.T.K disminuye en el agua de 29 a 8 mg/l.
En un experimento realizado por el (Torres, 2009) de la Escuela Politécnico Nacional
menciona que en las plantas desarrolladas con agua potable, la proporción de nitrógeno y
fosforo resulto ser mayor cuando se utilizó como soporte el tezontle rojo. Esto concuerda con
lo que aporta (Salisburri, 2000) que comenta que es necesaria la presencia de hierro para
llevar a cabo una mejor absorción de nitrógeno por la planta.
Mediante un experimento realizado por (Zarela, 2012) en la Remoción de nitritos y nitratos
en el cultivo de Azolla menciona que el nitrógeno total de Kjeldahl, los niveles de remoción
muestran un comportamiento relativamente igual donde la variación en la remoción no es
muy elevada, pero existen mayores ingresos en diferentes épocas según la APA (2005), Para
época de verano los nitritos presenta una remoción de 0.02 mg/l al final con un inicial de 0.35
mg/l, es decir hasta el 95% de remoción; en época de otoño se puede observar incrementos
que van de 0.71 mg/l a 0.59 mg/l es decir un incremento solo del 17%; y en época de invierno
se observa una remoción del 69% presentando al inicio 0.26 mg/l a 0.08 mg/l. Sin embargo
para todos los estanques se observa bajas concentraciones de nitritos. El nitrógeno en forma
de nitrito, rara vez su concentración excede 1 mg/l en agua residual y 0.1 mg/l en agua
superficial o subterránea. A pesar de estar presente en concentraciones tan bajas, los nitritos
son de gran importancia en aguas residuales o aguas contaminadas porque son altamente
tóxicos para muchos peces y otras especies acuáticas.
Otro experimento realizado por (Zarela, 2012) muestra el comportamiento presentada por
Azolla filiculoides en parámetros de Nitrógeno Total de Kjeldahl (NTK), N Amoniacal
(Amonio), Nitritos y Nitrato, donde esta última es incrementada ligeramente durante su
desarrollo a los estanques en un intento. Según la APA (2005), la concentración de nitratos
en aguas residuales tratadas puede variar desde 2 a 30 mg/l de N (nitrógeno), dependiendo
del grado de nitrificación y desnitrificación del tratamiento. Azolla filiculoides demuestra
una sola remoción y no muy elevada en NTK donde la segunda medición fluctúa entre 5.14
mg/l y 1.37 mg/l alcanzando remociones de 3.77 mg/l en un 73.4%. Según la APA (2005), el
nitrógeno total de Kjeldahl incluye el nitrógeno orgánico y el nitrógeno amoniacal, es decir
se observa mayor concentración en nitrógeno orgánico.
PROCEDIMIENTO
Procedimiento del nitrato
EL Nitrato: Durante la digestión Kjeldahl, un exceso de nitrato superior a 10 mg/L puede
oxidar una porción del amoniaco liberado a partir del Nitrógeno orgánico digerido, para
producir N2O y causar una interferencia negativa.
Cuando está presente suficiente materia orgánica en un bajo estado de oxidación, el nitrato
puede ser reducido a amoniaco, resultando en una interferencia positiva. Las condiciones
bajo las cuales ocurren interferencias significantes no están bien definidas y no hay una vía
probada para eliminar la interferencia en conjunción con los métodos Kjeldahl.
Sales y sólidos inorgánicos: El contenido de ácido y sal del reactivo de digestión Kjeldahl
tiene la intención de producir una temperatura de digestión cercana a380ºC.
Si la muestra contiene una cantidad muy grande de sales o sólidos inorgánicos que se
disuelvan durante la digestión, la temperatura puede elevarse sobre 400ºC, punto en el cual
empieza a ocurrir una pérdida pirolítica de Nitrógeno.
Para prevenir una temperatura de digestión excesiva, agregar más H2SO4 para mantener el
balance ácido-sal. No todas las sales causan precisamente la misma elevación de
temperatura, pero la adición de 1 mL H2SO4/g de sal en la muestra da resultados razonables.
Demasiado ácido puede disminuir la temperatura de digestión por debajo de 380ºC y resultar
en una digestión y recuperación incompleta.
Grandes cantidades de sales o sólidos también pueden causar sacudidas durante la
destilación. Si esto ocurre, agregar más agua de dilución después de la digestión.
Materia orgánica: Durante la digestión Kjeldahl, el H2SO4 oxida la materia orgánica a CO2
y H2O. Si está presente una gran cantidad de materia orgánica, se consumirá una gran
cantidad de ácido, se incrementará la relación de sal a ácido, y se incrementará la temperatura
de digestión.
Si está presente suficiente materia orgánica, la temperatura puede ascender sobre 400ºC,
resultando en una pérdida pirolítica de Nitrógeno. Para prevenir esto, diluir la muestra de
manera que sea suficiente el reactivo de digestión adicionado
Procedimiento de limpieza de vidriería:
Lave toda la vidriería con jabón alcalino, enjuague con agua de la llave, posteriormente
déjelo en H2SO4 diluido al 5% y enjuague muy bien con agua destilada.
Remítase al Procedimiento TP0125 (Lavado de material) ,Utilice la vidriería a la que se le
haya efectuado control de calidad .
Procedimiento de preparación de estándares
En una pesa - sustancias coloque 13,4286 gramos de EDTA. Transfiéralos de forma
cuantitativa a un balón aforado de 1 litro, utilice agua ultrapura para esta operación. La
solución así obtenida tiene una concentración de 1000 mg N/L.
Para las diluciones posteriores es conveniente preparar una solución de 100 mg/L, a partir de
la solución de 1000 mg/L. Estándares de calibración y control:
Estándar de 1,0 mg N/L. Tome 10 mL del patrón de 10 mg/L y adicione 40 mL de agua
ultrapura en el tubo de digestión. La concentración reportada se encuentra en el destilado.
Estándar de Control de 5,0 mg N/L. Tome 5 mL del patrón de 100 mg/L y adicione 45 mL de
agua ultrapura en el tubo de digestión.
La concentración reportada se encuentra en el destilado, este es el estándar de control de bajo.
Estándar de 10,0 mg N/L.
Tome 10 mL del patrón de 100 mg/L y adicione 40 mL de agua ultrapura en el tubo de
digestión. La concentración reportada se encuentra en el destilado. Estándar de Control de 50
mg N/L.
Tome 5 mL del patrón de 1000 mg/L y adicione 45 mL de agua ultrapura en el tubo de
digestión.
La concentración reportada se encuentra en el destilado, este es el estándar de control alto.
Estándar de 100 mg N/L.
Tome 10 mL del patrón de 1000 mg/L y adicione 40 mL de agua ultrapura en el tubo de
digestión.
La concentración reportada se encuentra en el destilado.
Procedimiento de análisis
• Verificación del Medidor de Iones y del Electrodo: Es recomendable que el analista
verifique que el sistema de medición esté funcionando adecuadamente.
Utilice estándares no digeridos de NH4Cl, para hacer una precalibración y lea a manera de
prueba uno o dos estándares como muestras. Evalué los resultados para continuar con el
procedimiento de análisis.
• Digestión: agregue cuidadosamente 10 mL de reactivo de digestión al tubo que contiene 50
mL de la muestra o alícuota conveniente, completada a 50 con agua ultrapura. Ajuste cada
unidad de calentamiento en el aparato de digestión hasta el punto 3 y coloque los tubos
accionando el equipo de evacuación disponible para remover los vapores ácidos. Aumente el
calentamiento gradualmente hasta la posición 5 pero evitando que la ebullición sea muy
fuerte y produzca salpicadura. Continuar la ebullición hasta que la solución se haga
transparente y verde esmeralda y se observen copiosos vapores en todos los tubos, entonces
gire el control de cada unidad de calentamiento al punto 6 y permita que haya digestión entre
10 y 15 min adicionales. La digestión se ha completado en el punto en el cual, se observa el
ácido sulfúrico en reflujo en la parte más alta del tubo (aproximadamente 5 cm por debajo de
la boca del tubo). Apague la unidad y saque el montaje colóquelo en el soporte para este fin,
deje enfriar y apague la unidad de extracción.
• Destilación: Prepare el número de balones conveniente de 100 mL con 30 mL de H2SO4
0.02 M, coloque el balón en el soporte e introduzca el tubo se salida del destilador cuidando
que quede sumergido en la solución absorbente. Realice un enjuague a las paredes del tubo
con una pequeña porción de agua, coloque el tubo de digestión en el soporte del equipo y siga
el procedimiento descrito en el manual del destilador BÜCHI 323. Verifique en la
programación del equipo las siguientes condiciones: 10 mL de agua, 15 mL de hidróxido de
sodio al 32% y un tiempo de destilación de tres minutos.
• Medición final de amonio: transfiera la muestra destilada a un erlenmeyer de 125 mL,
añadir suficiente solución de NaOH 10 N (1 mL suele ser suficiente) para aumentar el pH por
encima de 11, agite de manera constante e introduzca el electrodo selectivo de amoniaco.
Permita que haya estabilidad en la lectura y registre el resultado en el formato TF0021
Captura de datos – Electrometría. Calibración del Medidor de Iones: Comprobar el
funcionamiento del elemento sensor del electrodo según las instrucciones del fabricante para
asegurar que es correcto. Ver instructivo No. TI0364.
Procesamiento de datos y cálculo de resultados:
La concentración de Nitrógeno Total es determinada directamente por el instrumento de
medida, pero, es importante tener en cuenta el factor de dilución para realizar el cálculo
respectivo. Debido al proceso de digestión sobre 50 mL de muestra y destilación a 100 mL,
esta se encuentra afectada por un factor de dilución de dos. Si se realiza dilución adicional
multiplicar los factores de dilución.
ANALISIS
El nitrógeno es un indicador relevante en los estudios medioambientales, debido a la
importancia que este tiene en los procesos de tratamiento, en el control de la calidad de las
aguas y de las descargas de las aguas residuales al medio. El método Kjeldahl es el más
ampliamente utilizado para la determinación de nitrógeno total (Ntotal) y en las aguas
residuales se encuentran diferentes especies nitrogenadas, como son: nitrógeno orgánico y
amoniacal, nitritos, nitratos, entre otras.
La determinación de nitrógeno total por este método aún hoy en día es uno de los más
utilizados en el análisis químico. Es la técnica más versátil para el análisis de nitrógeno. De
hecho, es el único método que puede ser usado para el análisis del contenido de nitrógeno en
muestras con elevada diversidad. Su universalidad, veracidad y precisión ha hecho que sea
un método internacionalmente reconocido para la determinación de nitrógeno total y del
contenido de proteína en alimentos. Es el método estándar contra el cual todos los demás
métodos deben ser comparados y está aceptado por numerosas e importantes organizaciones
internacionales. No requiere de equipamiento sofisticado y se adapta con facilidad a los
análisis de rutina de un gran número de muestras, con diferentes matrices.
Con el desarrollo tecnológico y científico han surgido diferentes formas de determinación de
nitrógeno, en diferentes matrices, pero en todos los casos, el método de referencia para su
validación antes de implementarlas, es el método Kjeldahl. Los resultados obtenidos por este
método se han utilizado para calibrar los métodos automáticos. D’Elia, en 1983, refirió ‘‘los
cambios más significativos en la práctica de la determinación de nitrógeno han resultado no
tanto de la expansión del empleo de este método, sino de la expansión de su aceptación en la
mejora de sistemas automatizados.
CONCLUSIONES
Se determina que el método de Kjeldahl es el método más eficiente para calcular el
nitrógeno en muestras con elevada diversidad como proteínas y ácidos nucleicos en
diversos estados de degradación, urea, aminas, etc. Ya que es el método estándar
contra el cual todos los demás métodos deben ser comparados.
RECOMENDACIONES
El método Kjeldhal se lo aplica para varios tipos de productos, por su alta fiabilidad, y ha
sido recomendado como base de cálculo, es decir es un método de referencia, sin embargo,
tiene la desventaja de utilizar catalizadores tóxicos, caros y siempre se realizará con factores
de conversión.
En el análisis Kjeldahl se sugiere aplicar materiales de muestra con baja homogeneidad,
debido a la precisión que tiene este método al momento de su aplicación.
BIBLIOGRAFÍA
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Torres, J. (13 de Noviembre de 2009). Fitorremediaciòn de aguas residuales. Recuperado el
10 de Enero de 2018, de
[Link]
Zarela. (2012). “COMPARACIÓN Y EVALUACIÓN DE TRES PLANTAS ACUÁTICAS.
Obtenido de [Link]
ANEXOS
General
El procedimiento descrito en esta norma ha sido optimizado y su rendimiento evaluado para
el análisis del nitrógeno en el agua. Si una norma separada no existe, un laboratorio puede
utilizar el mismo procedimiento, con una ligera modificación, para la determinación del
contenido de nitrógeno.
