INSTRUCTIVO PARA ADOPCION DE GUIAS DE PRACTICA CLINICA

FORMULACION CODIGO VERSION PAG

Subgerencia de Salud e Investigación IN- AGC 1.0 1

PROTOCOLO DE
HEMATOLOGIA
VERSION 1.0

SAN JUAN DE PASTO

2014
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PROTOCOLO DE HEMATOLOGIA
PASTO SALUD E. S. E.

Elaborado por:

ANA ISABEL PAREDES CALPA

DORA MILENA LOPEZ
Bacteriólogas

San Juan de Pasto

2014
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CONTENIDO
PAG

RESOLUCION 499 DEL 26 DE NOVIEMBRE DE 2014 4

CONTROL DE CAMBIOS 9
INTRODUCCIÓN 10
1. OBJETIVOS 11
1.1 OBJETIVO GENERAL 11
1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS 11
2. ALCANCE 12
3. PROTOCOLOS DE HEMATOLOGIA 13
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CONTROL DE CAMBIOS

E: Elaboración del Documento

M: Modificación del Documento

X: Eliminación del Documento

CONTROL DE INFORMACIÓN DE CAMBIOS ACTO

VERSIÓN CAMBIOS AL ADMINISTRATIV
DOCUMENTO ACTIVIDADES O O DE ADOPCIÓN
E M X ELABORÓ /ACTUALIZÓ
JUSTIFICACIÓN

Se requiere una ANA ISABEL PAREDES

Resolución 499
Adopción del herramienta CALPA
del 26 de
1.0 protocolo de X estandarizada para el DORA MILENA LOPEZ
hematología manejo de muestras de noviembre de
Bacteriólogas
hematología 2014
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INTRODUCCIÓN

Las instituciones de salud, que prestan servicios de baja y mediana complejidad, tienen
entre sus servicios de salud el apoyo diagnostico, siendo de gran ayuda para el personal
médico en la determinación de una patología, para lo cual es necesario que se
implementen y ejecuten procedimientos que lleven a la optimización de procesos para
garantizar y brindar un servicio seguro.

Para poder garantizar la reproducibilidad, consistencia y uniformidad de los distintos

procesos en el Servicio de Medicina, es necesario el adecuado ordenamiento y
descripción de los procesos a través de un Manual de Procedimientos, guías y protocolos,
que son los documentos que proporcionan las instrucciones necesarias para la correcta
ejecución de las actividades administrativas o técnicas. La norma ISO 9000 lo define
como una “Forma especificada para llevar a cabo una actividad o un proceso”. Es
necesario que estén al alcance del personal del área que realiza estos procedimientos.
Además son vitales para llevar a cabo la implementación del sistema de gestión de la
calidad; y por último la estandarización de las pruebas de rutina. Para el desarrollo de las
pruebas y técnicas, son necesarios los reactivos de uso diario, los cuales, antes de su
utilización, deben pasar por un estricto control de calidad.
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1. OBJETIVOS

1.1 OBJETIVO GENERAL

Facilitar al personal que labora en los distintos laboratorios clínicos de la E.S.E. Pasto
Salud una guía que les permita realizar los exámenes del área de hematología de una
forma práctica, correcta y acertada que les ayude a correlacionar los resultados con la
patología del paciente.

1.2 OBJETIVO ESPECÍFICO

 Servir de apoyo al profesional cuando tenga dificultades o dudas sobre el

montaje del examen.
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2. ALCANCE

Para todo el personal nuevo y para todos aquellos profesionales que sea necesario una re
inducción en el montaje de los exámenes del área de Hematología
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3. PROTOCOLOS DE HEMATOLOGIA

3.1 ANTIGENO D DÉBIL

Se denomina Du al mismo antígeno D cuando se expresa de forma tan débil que

únicamente es detectable por la prueba de la antiglobulina indirecta. Se trata de una
cuestión simplemente cuantitativa. El número de lugares antigénicos D en la superficie de
los hematíes Du es tan pequeño que no permite la aglutinación de los mismos al
enfrentarlos a sueros anti-D, por lo que debe recurrirse a métodos indirectos para
detectarlos.

Las personas Du positivas deben considerarse Rh (D) positivas a todos los efectos.

Todas las sangres que den resultado negativo en la determinación del antígeno D por
cualquier técnica directa (placa o tubo) deben ser confirmadas mediante una prueba de
antiglobulina indirecta (investigación del Du).

- MATERIAL NECESARIO

Anti-D, con igual consideración que para la determinación Rh (D). Los reactivos deben
contener anticuerpos humanos IgG, que reaccionen en la fase de antiglobulina.

Reactivo antiglobulina humana (AGH) poliespecífico o anti-IgG.

Suspensión de hematíes al 5% en S/S

SEROFUGA

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

 Verificar que la Hoja de Vida de la serofuga se encuentre actualizada y calibrada.

 Realizar mantenimiento diario de la serofuga
 Verificar la calidad de la s / s
 Al finalizar el trabajo de cada turno correspondiente limpiar con un paño suave y
alcohol la serofuga.

- MUESTRA

Sangre entera con anticoagulante o suspensión de hematíes al 40% en suero, plasma o

solución fisiológica

- ACTIVIDADES

 Colocar 2 gotas de la suspensión de hematíes en un tubo limpio y seco.

 Agregar 2 gotas del anti-D.
 Mezclar suavemente y centrifugar 1 minuto a 3500 rpm.
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 Resuspender suavemente el botón celular observando la presencia de aglutinación.

 Incubar 30 minutos a 37°C
 Centrifugar 1 minuto a 900-1000 rpm.
 Resuspender el botón celular suavemente observando la presencia de aglutinación.
 Si los eritrocitos de la prueba son aglutinados registrar la muestra como RhD positiva.
Si esta lectura da negativa seguir con el punto 9.
 Lavar las células 3 veces con solución fisiológica (1 min a 3500 rpm).
 Después del último lavado, descartar totalmente el sobrenadante y agregar 2 gotas
de anti globulina humana (suero de Coombs).
 Centrifugar 1 minuto a 3500 rpm.
 Resuspender el botón celular suavemente observando la presencia de aglutinación.

Nota: Si la suspensión de hematíes se prepara con LISS, la incubación es de 10 minutos

a 37°C

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

Se rechazan muestras hemolizadas, coaguladas, que no conserven la relación sangre –

anticoagulante.

- INFORME DE RESULTADOS

Cuando esta prueba da resultado positivo en fase antiglobulínica, debe considerarse

como D débil (antiguamente llamado Du). Este resultado debe confirmarse con un test de
Coombs directo (TCD). La prueba de Coombs directa sirve para identificar aquellos
individuos que tienen, en forma anormal, sus hematíes recubiertos por IgG ó C3d y que
son aglutinados por la antiglobulina humana dando un falso positivo.

La ausencia de aglutinación debe ser considerada como un resultado negativo y estos

individuos se clasifican como Rh (D) negativo.

- VALORES DE REFERENCIA

N/A

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A
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- CONTROL DE CALIDAD

Aspecto: Ausencia de hemolisis, precipitado, partículas o formación de gel mediante

inspección visual.

Reactividad y especificidad: Ausencia de hemolisis inmune, formación de rouleaux o

fenómeno de prozona. Reacciones claras con hematíes que poseen los correspondientes
antígenos.

Registrar el resultado en el registro de control de calidad interno sección Hematología.

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematologia, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados

3.2 PROTOCOLO COOMBS DIRECTO

La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar anticuerpos que ya se han fijado a la
superficie de los glóbulos rojos. Muchas enfermedades y fármacos (quinidina, metildopa y
procainamida) pueden llevar a la producción de estos anticuerpos. Estos anticuerpos
algunas veces destruyen los glóbulos rojos y causan anemia. Esta prueba algunas veces
se lleva a cabo para diagnosticar la causa de anemia o ictericia.

- MATERIAL NECESARIO

 Solución salina
 Suero de coombs
 Serofuga

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

No aplica

- MUESTRA

Muestra tomada con anticoagulante EDTA

- ACTIVIDADES

 Marcar dos tubos 1 con control y el otro con paciente.

 Tubo1: agregar dos gotas de suero de coombs y dos gotas de solución salina.
 Tubo 2: agregar dos gotas de glóbulos rojos lavados del paciente y se agrega dos
gotas de suero de coombs.
 Se centrifugan tubo 1 y 2 ( 1 min a 3500 rpm ), Resuspender el botón celular
suavemente observando la presencia de aglutinación.
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- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

Se rechazan muestras hemolizadas, coaguladas, que no conserven la relación sangre –

anticoagulante.

- INFORME DE RESULTADOS

Por aglutinación: positivo o negativo

Si es positivo se realizan diluciones y se reporta la última dilución que dio positivo

Si el CD es positivo repetir con sueros

Monoespecíficos.

La reacción positiva indica presencia de anticuerpos fijados sobre los antígenos de

superficie del hematíe.

La reacción negativa indica ausencia de anticuerpos fijados sobre los antígenos de

superficie del hematíe.

Un resultado positivo en la prueba de antiglobulina directa suele indicar que los eritrocitos
están recubiertos in vivo por inmunoglobulinas, complemento o ambos.

Pacientes con Anemia Hemolítica Autoinmune (AHAI), Enfermedad Hemolítica del Recién
nacido se relacionan con IgG acompañado de fracciones del complemento C3 en un 24%
de los casos.

Pacientes con enfermedad de aglutininas frías se relacionan con fracciones del

complemento pero es posible detectar IgM e IgA o ambas

- VALORES DE REFERENCIA

N/A

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A
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- CONTROL DE CALIDAD

Aspecto: Ausencia de hemolisis, precipitado, partículas o formación de gel mediante

inspección visual

Reactividad y especificidad: Ausencia de hemolisis inmune, formación de rouleaux o

fenómeno de prozona. Reacciones claras con hematíes que poseen los correspondientes
antígenos.

Registrar el resultado en el registro de control de calidad interno sección Hematología.

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematología, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados.

3.3 PROTOCOLO COOMBS INDIRECTO

- FUNDAMENTO

La prueba sirve para la comprobación del anticuerpo IgG libre en suero del paciente. El
suero es incubado con una mezcla de eritrocitos grupo sanguíneo O POSITIVO que
tienen la mayoría de los antígenos eritrocitarios conocidos.

Si el suero del paciente contiene antiuerpos libres que pueden fijarse al eritrocito estos se
aglutinan.

Una prueba de coombs positiva solo es estrictamente verdadera cuando el suero de

coombs es de tipo gamma puro, es decir cuando reacciona con la globulina del
anticuerpo.

Además la prueba:

 Identifica anticuerpos en el suero del paciente

 Revela la presencia de anticuerpos anti-Rh en la sangre de la madre durante el
embarazo.
 Tiene valor para detectar incompatibilidades que no se obtienen por otros métodos.

Positivo en:

 Existencia de anticuerpos específicos como resultado de una transfusión o de

embarazo.
 Presencia de anticuerpos inespecíficos como en la enfermedad de aglutinación en frió
y en anemia hemolítica inducida por fármacos.

Es necesario hemoclasificar al paciente antes de realizar la prueba para comprobar que

realmente sea factor Rh negativo.
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- MATERIAL NECESARIO

 Solución salina
 Suero de coombs
 Albúmina bovina
 Serofuga
 Baño Maria

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPO

 Verificar que la Hoja de Vida del microscopio se encuentre actualizada.

 Realizar mantenimiento diario del microscopio.
 Al finalizar el trabajo de cada turno correspondiente limpiar con un paño suave y
alcohol los oculares y objetivos.

- MUESTRA

 Muestra tomada con anticoagulante EDTA y

 Muestra tomada en tubo sin anticoagulante
 Muestra de un paciente grupo sanguíneo O POSITIVO

- ACTIVIDADES

 Marcar tres tubos 1 con control, el otro con células I y el otro con células II.
 Tubo1: agregar dos gotas de suero del paciente y dos gotas de glóbulos rojos o
positivos lavados del paciente.
 Tubo 2: agregar dos gotas de suero del paciente y se agrega dos gotas de células I
comerciales
 Tubo 3: agregar dos gotas de suero del paciente y se agrega dos gotas de células II
comerciales.
 Se agrega a los tubos 1, 2 y 3 albumina bovina o liss.
 Se centrifugan tubo 1, 2 Y 3 ( 1 min a 3500 rpm ), Resuspender el botón celular
suavemente observando la presencia de aglutinación , Incubar a 37º c por 20
minutos, centrifugar 1 minuto y leer por aglutinación.
 Lavar tres veces con solución salina. Agregar 2 gotas de suero de coombs al control y
a las muestras.
 Centrifugar 1 minuto y leer por aglutinación.
 Si el resultado es positivo hacer dilución en cascada del suero del paciente y repetir el
procedimiento

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

Se rechazan muestras hemolizadas, coaguladas, que no conserven la relación sangre –

anticoagulante.
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- INFORME DE RESULTADOS

Por aglutinación: positivo o negativo

Si es positivo se realizan diluciones y se reporta la última dilución que dio positivo

- VALORES DE REFERENCIA

N/A

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A

- CONTROL DE CALIDAD

Aspecto: Ausencia de hemolisis, precipitado, partículas o formación de gel mediante

inspección visual.

Reactividad y especificidad: Ausencia de hemolisis inmune, formación de rouleaux o

fenómeno de prozona. Reacciones claras con hematíes que poseen los correspondientes
antígenos.

Registrar el resultado en el registro de control de calidad interno sección Hematología.

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematologia, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados

3.4 GOTA GRUESA

La coloración de FIELD es una coloración acuosa basada en la coloración de

Romanovsky que consiste en dos soluciones (solución A y solución B) y una solución
tampón (amortiguadora). La coloración de FIELD es una coloración rápida para la
identificación de hemoparasitos.

El típico color de los núcleos celulares, mayoritariamente rojo purpura, se basa en la

interacción molecular entre eosina y un complejo azur A-ADN. La intensidad de la
coloración depende del contenido de azur A y de la relación entre azur A y eosina
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amarilla. El resultado de tinción puede ser influido por diferentes factores como el valor del
pH de la solución y de la solución tampón, las substancias tampón (amortiguadores, el
tiempo de tinción y la fijación.

Mediante el uso de la coloración de FIELD, permite visualizar las formas parasitarias de la

malaria.

- MATERIAL NECESARIO

 Laminas
 Cubre objetos
 Lancetas
 Algodón
 Alcohol
 Reactivos para coloración de FIELD
 Aceite de inmersión
 Cronómetro

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

 Verificar que la Hoja de Vida del microscopio se encuentre actualizada.

 Realizar mantenimiento diario del microscopio, el cual debe quedar debidamente
registrado en la planilla SIS destinada para este fin.
 Al finalizar el trabajo de cada turno correspondiente limpiar con un paño suave y
alcohol los oculares y objetivos.

- MUESTRA

Sangre capilar

- ACTIVIDADES

 Puncionar el dedo lateralmente

 Acercar el dedo a la placa
 Colocar dos gotas de sangre extendiéndolas con la laminilla, haciendo una N
formando un rectángulo, dejando una distancia de un centímetro entre cada uno.
 Dejar secar a temperatura ambiente por un lapso mínimo de 30 minutos.
 Realizar coloración
 Hacer lectura de la placa
 Observar mínimo 200 campos

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

Se rechazan muestras que no cumplan con las normas en la coloración del extendido.
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Cumplir esquema de tres gotas gruesas en pacientes con resultados negativos, que sean
procedentes de zonas endémicas. Una vez realizadas y reportadas las tres gotas
gruesas ya se descarta que sea un caso de Malaria.

En pacientes con resultados de gota gruesa inicial positivo, repetirla después de dos días
para descartar un caso de malaria mixta

- INFORME DE RESULTADOS

P. Falciparum se debe informar aparte las formas sexuadas de las asexuadas. Observar
mínimo 200 campos

Recuento para el Plasmodium Falciparum:

Contar el número de gametocitos y el número de trofozoitos de PL Falciparum observados

en 100 leucocitos homogéneamente distribuidos.

Cálculo:

No. de gametocitos x 80 = No. de gametocitos

microlt. de sangre
No. de trofozoitos x 80 = No. de trofozoitos
microlt. de sangre

- VALORES DE REFERENCIA

NEGATIVO

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A

- CONTROL DE CALIDAD

Control de calidad externo:

El Instituto Departamental de Salud, envía periódicamente pruebas de idoneidad la cual

consiste en el envió de cinco laminas de gota gruesa para que leamos lo observado en
cada una de ellas, hagamos el reporte y además digamos cual sería el tratamiento para
los pacientes. Esto hace parte del programa de control de calidad externa el cual permite
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evidenciar la calidad y la precisión con la que estamos haciendo los reportes y así tomar
las acciones correctivas del caso.

Se envía al IDS, sede Tumaco, el 100% de las placas positivas y el 10 % de negativas

obtenidas. SE deben enviar en los meses de: Enero, Abril y en Junio, los cinco primeros
días.

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematología, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados.

3.5 HEMOGRAMA AUTOMATIZADO

El hemograma electrónico permite realizar el recuento de eritrocitos, leucocitos y

plaquetas con alta precisión, mediante el sistema de impedancia eléctrica también
conocido como Principio Coulter. El principio de la impedancia eléctrica mide el número y
el tamaño de las células al pasar por un pequeño orificio de acuerdo con los cambios que
se producen en la conducción de la electricidad entre dos electrodos (ánodo y cátodo)

- MATERIAL NECESARIO

Tubos con anticoagulante EDTA 5% (0,1 anticoagulante en 5 cc de sangre)

Marcador
Miniclean
Minilyse
Minidil
Equipo de la casa comercial ANNAR DIAGNOSTICA
Controles de calidad internos: MInotrol ( normal, Alto y Bajo . )

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

 Verificar que la Hoja de Vida del equipo que se encuentre actualizada.

 Realizar mantenimiento diario del equipo.
 Al finalizar el trabajo de cada turno correspondiente limpiar con un paño suave y
alcohol
 Realice la revisión del estado de los reactivos del equipo, limpieza y drenaje
 Remitirse al manual operacional del equipo

- MUESTRA

Sangre total con anticoagulante EDTA 5%

- ACTIVIDADES

 Mezclar las muestras suavemente, con una rotación continua más o menos 30
veces
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 Ingresar muestras al equipo con su código correspondiente, identificación, nombres,

apellidos,sexo, edad , servicio y nombre del médico que ordena el examen.
 Revisar el resultado obtenido
 Hacer la lectura del extendido de sangre con el fin de complementar y correlacionar
con los parámetros e histogramas del hemograma electrónico.
 Correlacionar histograma de glóbulos blancos con recuento de los mismos y
diferencial tanto del equipo como del FSP.

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

Control de puntos críticos:

Se rechazan muestras hemolizadas, coaguladas, que no conserven la relación sangre –

anticoagulante (muestras concentradas o muestras diluidas)

Esperar 20 minutos después de tomada la muestra para procesarla.

Hacer excepción en casos de urgencia como: sangrado masivo – solicitudes del

quirófano etc.

Presencia de Fragmentos de glóbulos rojos:

 Verifique el conteo de glóbulos rojos comparando el Hematocrito manual con el

automático.
 De ser necesario realice un conteo manual de plaquetas.
 Busque la presencia de las siguientes condiciones en la historia clínica del paciente:
CID,
 Quemaduras, reacciones transfusionales, prótesis de válvulas cardiacas.

Microcitosis:

 Busque en el frotis la presencia de glóbulos rojos microcíticos.

 Verifique el conteo de plaquetas.

Presencia de plaquetas gigantes:

 Busque en el frotis la presencia de plaquetas gigantes.

 Realice recuento manual de plaquetas.
 Revise el histograma de plaquetas.
 De ser necesario verifique el conteo de glóbulos rojos con un Hematocrito manual.

Presencia de cúmulos de plaquetas:

 Verifique la presencia de cúmulos de plaquetas en el frotis

 Revise el histograma de plaquetas y vea si hay irregularidades o picos múltiples
 Obtenga una nueva muestra utilizando una mejor técnica de sangrado.
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Hemólisis in vivo o in Vitro:

 Centrifugue la muestra y observe el plasma para ver si existe Hemólisis.

 Busque en el frotis fragmentos de glóbulos rojos y esferocitos.
 Obtenga una nueva muestra utilizando una mejor técnica de sangrado para distinguir
entre
 Hemólisis in vivo o in Vitro.

Ruido eléctrico:

 Verifique el conteo de fondo y busque en el histograma anormalidades.

 Haga un hematocrito manual para verificar el conteo de glóbulos rojos.
 Analice la muestra nuevamente.
 Realice ciclo de limpieza.

Fenómeno de Roleaux causados por anticuerpos fríos o calientes:

 Confirme la presencia de anticuerpos fríos o calientes.

 Si anticuerpos fríos existen, incube la muestra por 10 minutos a 35 °C.

Glóbulos rojos nucleados:

 Verifique la presencia de normoblastos en el frotis y corrija el conteo de glóbulos

blancos
 Según la fórmula.

Transfusiones recientes:

 Observe los picos múltiples en el histograma que indican la presencia de poblaciones

dismórficas.

Tratamientos médicos por anemias:

 Busque en le histograma la presencia de picos múltiples.

 Busque en el frotis la presencia de dos poblaciones de glóbulos rojos.

Glóbulos rojos resistentes al agente lisante:

 Verifique que no se encuentran en la muestra glóbulos rojos nucleados o cúmulos de

plaquetas.
 Verifique en la historia médica del paciente la presencia de hemoglobinas anormales
como S.C ó S-C.

Plaquetas gigantes:

 Observe el histograma de plaquetas buscando anormalidades Busque la presencia

de plaquetas gigantes en el frotis.
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 Los glóbulos blancos podrían estar falsamente elevados corríjalos haciendo un

conteo de cámara.

Glóbulos rojos aglutinados

 Observe si los glóbulos rojos están disminuidos. Revise la regla:

RBC x 3 = HGB
RBC x 9 = HCT
HGB x 3 = HCT

 Busque las señales de los glóbulos rojos y anormalidades en la parte derecha del
histograma.
 Observe la elevación de los parámetros MCV, MCHC y RDW.
 Revise el frotis y busque células rojas aglutinadas.
 Busque en el historial médico la presencia de aglutininas frías o calientes y las
transfusiones recientes.

Presencia de Fibrina:

 Busque en el frotis la presencia de fibrina

 Verifique el conteo de glóbulos rojos y plaquetas.

En caso de Malaria:

 Los parásitos pueden estar presentes en la curva de los linfocitos. Busque en el frotis
su presencia.

No hay valle debido a la presencia de células blancas grandes inmaduras:

 Observe el histograma.
 Busque en el frotis glóbulos blancos inmaduros.
 Verifique el historial médico del paciente

No se distingue el pico de los linfocitos:

 Realice el diferencial manual

Linfocitos atípicos:

 Realice un diferencial manual

Aumento de poblaciones mixtas:

 Busque la presencia de Monocitos

 Busque la presencia de eosinófilos

Incremento de precursores de neutrófilos:

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 Verifique la presencia de células blancas inmaduras.

 Busque en la historia del paciente la presencia de infecciones, reacciones
leucemoides
 leucemia.
 Realice el diferencial manual y repórtelo

Ausencia de neutrófilos:

 Verifique la historia por la presencia de neutropenia o quimioterapia.

 Reporte el diferencial manual.

Conteo elevado de glóbulos blancos:

 Verifique si se ha excedido la linealidad del instrumento. Si es así haga una dilución

con diluyente del equipo y multiplique los resultados por el factor correspondiente.

Satelitismo de plaquetas:

 Verifique la presencia de este fenómeno en el frotis. Haga un diferencial manual.

 Obtenga una nueva muestra cambiando el anticoagulante y mezclando
correctamente.

Neutrófilos hipersegmentados

 Realice un diferencial manual.

Ruido eléctrico:

 Realice el mantenimiento preventivo

 Haga correlación de plaquetas con el extendido

Plaquetas pequeñas:

 Verifique el conteo de plaquetas manualmente.

Fragmentos de glóbulos blancos:

 Verifique si el paciente está bajo tratamiento tóxicos.

 Busque en la historia clínica la presencia de LLC.
 Verifique el conteo de plaquetas y glóbulos blancos y realice un conteo manual si es
necesario.
 Incremento de recuento de leucocitos causada por la precipitación de proteínas en el
mieloma múltiple.
 Hiperlipidemia – hiperproteinemia – hiperbilirrubinemia
 En algunos casos se requiere recurrir al método manual para lograr la precisión en
 La hemoglobina.
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Hiperglicemia:

 Puede causar un falso aumento del VCM y del hematocrito.

- INFORME DE RESULTADOS

Si el equipo informa glóbulos blancos: mayor de 12.000 y menores de 4.000 se confirma

con ESP.

Si el equipo informa en el diferencial los monocitos mayores de 12 % y los Eosinofilos

mayores de 8 %se realizaran Esp y se reportara diferencial manual.

Si el equipo informa plaquetas aumentadas o disminuidas mayores de 500.000 o menores

de 149.0000 se realizará ESP y se reportará Recuento estimado de plaquetas

Si no hay correlación entre hemoglobina y hematocrito informado por el equipo, se

realizara hematocrito manual para su confirmación.

- VALORES DE REFERENCIA

Recuento de leucocitos: 4.500 – 11.000 / ul

Polimorfonucleares Neutrofilos

En el momento de nacer: 60 - 75
1 semana a 6 años: 19 - 63
6 a 16 años 32 - 54
16 a 18 años 34 - 64
Mayor de 18 años 50 - 62

Linfocitos:

En el momento de nacer: 25 - 40
1 semana a 6 años: 40 - 70
6 a 16 años 50 - 70
16 a 18 años 40 - 55
Mayor de 18 años 40 - 50

Monocitos : 3–8%
Eosinófilos: 3–6%
Basófilos: 0–1%

Parámetros Plaquetarios: 150.000 – 400.000 / uL

Volumen Medio Plaquetario 6.9 – 10.5 fL
Ancho de Distribución de las Plaquetas 15.4 – 16.8 %

Variaciones patológicas de los índice eritrocitarios en las anemias mas frecuentes:

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MCV MCH MCHC

Anemia Normocitica 81 - 98 27 - 33 31 - 34
Anemia Ferropénica 64 - 74 20 - 24 29 - 33
Talasemia 57 - 67 18 - 22 32 - 34
Esferocitosis H. 78 - 90 28 - 32 34 - 36
Anemia Macrocitica > 98 > 33 > 34

INDICES ERITROCITARIOS: Rangos de referencia

Volumen corspuscular medio: 86 - 96 fl

Hemoglobina corpuscular media: 25 – 31 pg
Concentración de la hemoglobina corpuscular media %: 32 – 38 g/dl
Ancho de distribución de los eritrocitos: 11.5 - 15.1 %

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

Enviar informe de inmediato al médico tratante ante datos muy elevados de glóbulos
blancos, valores muy altos y bajos de hematocrito – hemoglobina.

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS N/A

- CONTROL DE CALIDAD

Control de calidad interno:

 Diariamente se corren 3 controles comerciales antes de iniciar el análisis de las

muestras: Normal - Bajo – Alto
 Analizar los resultados y verificar si los datos son aceptados, de ser así correr las
muestras, caso contrario repetir nuevamente el procedimiento hasta obtener un valor
aceptable, después de aplicar los correctivos del caso a cualquier inconveniente o
interferencia presentada
 A fin de obtener resultados óptimos, estas mediciones deben hacerse con sumo
cuidado y en condiciones constantes como sea posible.
 El equipo automáticamente grafica los valores obtenidos, ingresar a cada grafica de
calidad y analizar la distribución de los puntos a los lados de la media y si están
ubicados dentro de la (s) desviación standard permitida.
 Después de 21 datos se calcula el coeficiente de variación
 Imprimir la gráfica obtenida

Control de calidad externo:

El hospital está inscrito con el instituto nacional de salud, en el área de hematología, el

instituto envía seis muestras de hemolizado para la medición de la hemoglobina y
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además envía junto con el paquete seis diapositivas para hacer el reporte de todas las
células que se encuentren presentes.

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematología, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados

3.6 DETERMINACION ABO

Un grupo sanguíneo es una clasificación de la sangre de acuerdo con las características

presentes o no en la superficie de los glóbulos rojos. Las dos clasificaciones más
importantes para describir grupos sanguíneos en humanos son los antígenos (el sistema
ABO) y el factor Rh.

- MATERIAL NECESARIO

 Antisueros A, B
 SEROFUGA
 SOLUCION SALINA

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

 Verificar que la Hoja de Vida de la serofuga se encuentre actualizada.

 Realizar mantenimiento diario de la serofuga
 Verificar la calidad de la s / s
 Al finalizar el trabajo de cada turno correspondiente limpiar con un paño suave y
alcohol la serófuga.

- MUESTRA

Sangre total con anticoagulante o suspensión de hematíes al 40% en suero, plasma o

solución fisiológica

- ACTIVIDADES

Hemoclasificación directa en lámina:

 Marcar tres laminas portaobjeto como A, B

 Adicionar una gota de Anti-A, a la placa A; anti-B a la palca B.
 Mezclar con palillo en forma circular y agitar suavemente durante algunos segundos
hasta que forme aglutinación.
 Cuantificarla por cruces.

Hemoclasificación directa en tubo:

 Preparar una suspensión de glóbulos rojos al 5%.con s/s

 Seleccionar tres tubos e identificarlos como A, B respectivamente
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 Colocar en el tubo marcado A, dos gotas de suero anti -A; en el tubo marcado B dos
gotas de suero anti -B,
 Agregar a cada tubo dos gotas de la suspensión de hematíes.
 Mezclar suavemente y centrifugar a 3500 r.p.m por 1 minuto.
 Desprender el botón de células del fondo del tubo agitándolo suavemente.
 Observar la aglutinación y cuantificarla en cruces.

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

Se rechazan muestras hemolizadas, coaguladas, que no conserven la relación sangre –

anticoagulante

- INFORME DE RESULTADOS

Anti-A Anti-B Grupo ABO

+ o A

Hematíes en o + B
estudio + + AB
o o O

- VALORES DE REFERENCIA

N/A

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A

- CONTROL DE CALIDAD

Aspecto: Ausencia de hemolisis, precipitado, partículas o formación de gel mediante

inspección visual

Reactividad y especificidad: Ausencia de hemolisis inmune, formación de rouleaux o

fenómeno de prozona. Reacciones claras con hematíes que poseen los correspondientes
antígenos.
Registrar el resultado en el registro de control de calidad interno sección Hematología.
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- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematología, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados

3.7 EOSINOFILOS EN MOCO NASAL

Los Eosinofilos responden a patologías alérgicas. El recuento de Eosinofilos en moco

nasal, permite determinar el grado de la afección alérgica (rinitis) y vigilar la respuesta al
tratamiento

- MATERIAL NECESARIO

 Frotis de cada fosa nasal coloreada con Wright

 Aceite inmersión
 Piano cuenta células

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

 Verificar que la Hoja de Vida del microscopio se encuentre actualizada.

 Realizar mantenimiento diario del microscopio.
 Al finalizar el trabajo de cada turno correspondiente limpiar con un paño suave y
alcohol los oculares y objetivos.

- MUESTRA

Secreción de cada Fosa Nasal

- ACTIVIDADES

Realizar frotis de cada fosa por aparte, Dejar secar Colorear con Wright

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

 La aplicación de medicamentos en las fosas nasales afecta el resultado

 La toma de muestra es de alta importancia, se debe sostener firmemente a los
niños pequeños para obtener muestras representativas y además evitar un
accidente.

- INFORME DE RESULTADOS

Número de Eosinofilos por %

- VALORES DE REFERENCIA

Eosinofilos: O - 5 %
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- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A

- CONTROL DE CALIDAD

N/A

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematología, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados.

3.8 FROTIS DE SANGRE PERIFERICA

Para diagnosticar los trastornos de la sangre es esencial estar en condiciones de

reconocer al microscopio las células normales y anormales de la sangre. A pesar de los
adelantos científicos en técnicas hematológicas, incluso estudios con marcadores
celulares y procedimientos inmunológicos, el examen de la morfología en el frotis de
sangre, continúa siendo una importante investigación inicial en pacientes que sufren
trastornos hematológicos.

- MATERIAL NECESARIO

 Laminas Cubre y portaobjetos

 Microscopio
 Contador de células

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

 Verificar que la Hoja de Vida del microscopio se encuentre actualizada.

 Realizar mantenimiento diario del microscopio.
 Al finalizar el trabajo de cada turno correspondiente limpiar con un paño suave y
alcohol los oculares y objetivos.

- MUESTRA

Sangre con anticoagulante

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- ACTIVIDADES

 Colocar sobre la placa 5 ul de sangre proveniente de la aguja que no tenga coagulo,

caso contrario se debe realizar el extendido del tubo de la muestra con
anticoagulante.
 Colocar la laminilla sobre la muestra en ángulo de 30 – 45º por capilaridad la sangre
se distribuye uniformemente.
 Hacer una extensión de 30 mm aproximadamente.
 Secar el frotis a temperatura ambiente mínimo quince minutos en posición horizontal.

Coloración de Wright:

 Cubrir el portaobjetos por completo con el colorante después de dos minutos agregar
una cantidad igual de buffer soplar con suavidad para lograr una mezcla uniforme.
Aparecerá un resplandor verde metálico.
 Después de cinco minutos enjuagar bien con agua potable
 Limpiar la parte posterior del portaobjetos para eliminar los residuos del tinte
 Secar a temperatura ambiente colocando el portaobjetos en posición vertical en una
rejilla para portaobjetos
 Hacer lectura con objetivo de 100 en la zona ideal del extendido

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

 Se rechazan muestras hemolizadas y coaguladas

 En personas con transfusiones recientes no estudiar la morfología celular. En caso
de ser prioritario reportarla, hacer nota aclaratoria sobre esta situación

- INFORME DE RESULTADOS

 Hacer lectura con objetivo de 100 en la zona ideal del extendido.

 El área más apropiada para estudiar la morfología celular es aquella donde la
mayoría de los hematíes apenas se tocan sin llegar a superponerse igualmente debe
haber distribución uniforme de los glóbulos blancos.
 Calcular recuento diferencial de leucocitos (Neutrófilos, linfocitos, Eosinófilos,
monocitos, basófilos, cayados, blastos, células inmaduras de la línea mieloide).
 En caso de observarse reportar: Los glóbulos rojos nucleados, glóbulos blancos
atípicos.
 Determinar las características detalladas de la morfología de los glóbulos rojos,
glóbulos blancos y plaquetas. Informar parásitos que causan paludismo,
tripanosomas.

Modelo de reporte de la morfología eritrocitaria:

Anisocitosis, poiquilocitosis, policromatofilia y/o hipocromia.

Ligera: (+) 1 - 5 células presentan la característica.

Moderada: (++) 6 - 10 células presentan la característica.

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Marcada: (+++) Más de 10 células presentan la característica.

Incluir en el reporte: La morfología de los leucocitos – plaquetas y la formula leucocitaria

- VALORES DE REFERENCIA

Morfología globular normal: sin alteraciones morfológicas evidentes en todas las líneas
celulares: Ligera, moderada, marcada hipocromía, poliromatofilia, poiquilocitosis o
anisocitosis.

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A

- CONTROL DE CALIDAD

Control de calidad interno

 Registrar los datos obtenidos

 Control de la coloración de wright y el extendido determinado la calidad de los
mismos mediante el uso de muestras conocidas, procedentes de pacientes con
diversas patologías tales como: hipocromía, poiquilocitosis, anisocitosis,
policromatofilia , trombocitopenia, leucemias y muestras de usuarios normales.

Control de calidad externo:

El Instituto Nacional de Salud envía seis diapositivas anuales, las cuales son analizadas
mediante un visor o proyector.

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematologia, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados, Control de empaquetamiento de la microcentrifuga (realizarlo
mensualmente).

3.9 HEMATOCRITO

Esta prueba determina la masa eritrocitaria. Los resultados se expresan como porcentaje
de eritrocitos en un volumen de sangre. Constituye una medida muy importante de la
anemia o policitemia.
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- MATERIAL NECESARIO

 Tubos con anticoagulante EDTA

 Hematocrito con o sin heparina
 Plastilina
 Lector de hematocrito
 Microcentrífuga

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

 Verificar que la Hoja de Vida de la microcentrifuga se encuentre actualizada.

 Realizar mantenimiento diario a la microcentrifuga.
 Al finalizar el trabajo de cada turno correspondiente limpiar con un paño suave y
alcohol.
 La prueba de empaquetamiento de la microcentrifuga se realiza con el fin de
determinar el menor tiempo en que la microcentrífuga logra el mayor
empaquetamiento. Esta prueba se realiza quincenalmente.
 La medición de las revoluciones por minuto la hace el Ingeniero periódicamente con
el tacómetro.

- MUESTRA

Sangre total con E.D.T.A

- ACTIVIDADES

 Colocar las muestras en el agitador

 Introducir el tubo capilar en la muestra y llenar hasta las dos terceras partes, retirar,
limpiar y sellar con plastilina
 Colocar los capilares correctamente equilibrados en la microcentrifuga.
 Cerrar bien la tapa interna y externa poner en funcionamiento.
 Centrifugar por tres minutos a 12.000 R.P.M
 Hacer la lectura correspondiente en el lector de Hematocrito

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

 Se rechazan muestras hemolizadas, coaguladas, que no conserven la cantidad la

relación sangre –anticoagulante. El uso prolongado del torniquete afecta el valor.
 No realizar hematocrito capilares a pacientes edematizados, se puede obtener
valores menores de lo real.
 El hematocrito puede o no ser confiable después de una hemorragia moderada, e
inmediatamente después de las transfusiones.
 El hematocrito puede estar normal durante la hemorragia aguda, pero en la fase de
recuperación disminuir en forma acentuada.

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL
Ante valores muy bajos o altos de hematocrito reportar urgentemente.
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- INFORME DE RESULTADOS

Valor que da en la lectura en %

- VALORES DE REFERENCIA

ADULTOS %
MUJERES 36 - 48
VARONES 42 - 52
NIÑOS %
0 - 2 Semanas 44 – 64
2 - 8 Semanas 39 - 59
2 - 6 meses 35 - 46
6 meses -1 año 30 - 43
1 - 6 años 30 - 40
6 - 16 años 32 - 42
16 - 18 años 34 - 44

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A

- CONTROL DE CALIDAD

Control de calidad interno:

Teniendo en cuenta que el analizador de hematología se encuentra completamente

calibrado en los diferentes parámetros, utilizamos éste método automatizado como
referencia para el control del hematocrito manual. Se hacen controles con niveles bajo,
normal y alto procedentes de muestras de usuarios. Anotar en el registro de control
interno los valores obtenidos.

Nota aclaratoria: El hematocrito manual da valores mayores respecto al automatizado

Control de calidad externo:

Ninguna institución certificada conocida, ofrece el control de calidad para esta prueba.
Pero el disponer de un control externo para la hemoglobina, indirectamente permite tener
un valor de referencia para el hematocrito.
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- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematología, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados.

3.10 LEISHMANIA

La prueba estándar para el diagnóstico de la Leishmaniasis cutánea es el frotis directo

método rápido, económico y de fácil realización. El colorante de Wright permite visualizar
los amastigotes de Leishmania. Tambien puede realizar la coloración de Field

La Leishmaniasis es una zoonosis que afecta la piel, mucosa y vísceras resultantes del
parasitismo de los macrófagas por un protozoario flagelado del genero de Leishmania,
introducido al organismo por la picadura de un insecto Flebotomínio, que en el nuevo
continente pertenece a genero Lutzomyia.

- MATERIAL NECESARIO

 Guantes
 Alcohol
 Solución salina
 Jabón quirúrgico
 Gasa estéril
 Algodón
 Laminas portaobjetos
 Lancetas
 Hojas de bisturí
 Colorante de Wright o Field
 Microscopio
 Aceite de inmersión
 Lápiz vidriograf
 Cronómetro

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

 Verificar que la Hoja de Vida del microscopio se encuentre actualizada.

 Realizar mantenimiento diario del microscopio.
 Al finalizar el trabajo de cada turno correspondiente limpiar con un paño suave y
alcohol los oculares y objetivos.

- MUESTRA

Linfa obtenida de la lesión

- ACTIVIDADES

 Colocarse los guantes

 PROTOCOLO DE HEMATOLOGIA
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 Realice limpieza del sitio de la lesión utilizando gasa impregnada de solución salina
 En caso de haber costra remuévala cuidadosamente.
 Sobre la cara interna del borde de la úlcera realice un raspado con el borde romo de
una hoja de bisturí. Hágalo de manera tal que no sangre mucho, presionando el sitio
de la lesión hasta hacer isquemia.
 El material así obtenido se extiende en forma suave sobre una lámina portaobjetos
nueva, previamente limpiada, desengrasada y debidamente rotulada.
 Tome otras tres muestras de la misma manera colocando dos muestras por lámina
portaobjetos.
 Cuando la lesión es abierta el frotis directo se realiza a partir de linfa obtenida por
raspado del borde interno de la lesión, sin necesidad de hacer otra incisión. Si la
lesión es cerrada como pápula o nódulo se realiza una pequeña incisión con cuchilla
de bisturí o un aspirado de la lesión.
 Deje secar las muestras a temperatura ambiente ,Filtrar previamente los colorantes
 Realice la coloración de Wright o Field durante el tiempo estipulado por el laboratorio.
 Observe al microscopio de luz con un aumento de 100 X todo el frotis para buscar los
amastigotes que pueden encontrarse intra o extracelulares.

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

 Si el paciente presenta más de una lesión obtener la muestra de la lesión más

reciente. La obtención de resultados positivos de la prueba varía de acuerdo al
tiempo de evolución de la lesión. A menor tiempo mayor sensibilidad.
 Si el resultado es negativo y se sospecha de una Leishmaniasis, el personal del
laboratorio clínico lleva al paciente al laboratorio del IDSN Sede Tumaco para
valoración clínica.
 La capacitación y el interés de bacteriólogo que realiza el procedimiento es
importante para esta prueba.

- INFORME DE RESULTADOS

Negativo para Amastigotes de Leishmania

- VALORES DE REFERENCIA

N/A

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A
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- CONTROL DE CALIDAD

Control de calidad interno:

 Se hace periódicamente.
 Estandarización de los tiempos de coloración de Wright.
 Filtración periódica de los colorantes.

Control de calidad externo:

 El Instituto Departamental de Salud, envía periódicamente pruebas de idoneidad.

 Se envía al IDSN sede Tumaco, el 100% de las placas positivas. En casos negativos
con alta sospecha clínica de Leishmania se solicita a la persona responsable del
programa de ETV del IDSN, la colaboración para la toma de una nueva muestra y el
análisis de la misma. Registro de enfermedades transmitidas por vectores.

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematología, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados.

3.11 Rh (D)

El factor Rh es una proteína integral de la membrana aglutinógena de los glóbulos rojos.

Son Rh positivas aquellas personas que presenten dicha proteína en sus eritrocitos y Rh
negativa quienes no presenten la proteína. Un 85% de la población tiene en esa proteína
una estructura dominante, que corresponde a una determinada secuencia de aminoácidos
que en lenguaje común son denominados habitualmente Rh+. Alrededor de la sexta
semana de gestación, el antígeno Rh comienza a ser expresado en los glóbulos rojos
humanos.

- MATERIAL NECESARIO

 Sangre entera con anticoagulante o suspensión de hematíes 40% en suero, plasma o

solución fisiológica.
 Reactivo anti-D: los reactivos apropiados pueden ser hiperproteicos policlonales,
hipoproteicos químicamente modificados o hipoproteicos monoclonales/ policlonales
(IgM/ IgG). Seguir las instrucciones
 Serófuga

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

 Verificar que la Hoja de Vida de la serófuga se encuentre actualizada y Calibrada.

 Realizar mantenimiento diario de la serófuga
 Verificar la calidad de la s / s
 Al finalizar el trabajo de cada turno correspondiente limpiar con un paño suave y
alcohol la serófuga.
 PROTOCOLO DE HEMATOLOGIA
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Subgerencia de Salud e Investigación PR-HEM 1.0 40

- MUESTRA

Sangre entera con anticoagulante o suspensión de hematíes al 40% en suero, plasma o

solución fisiológica

- ACTIVIDADES

Determinación en placa

 Colocar 1 gota de glóbulos rojos de la suspensión al 40%

 Agregar 1 una gota del reactivo anti- D.
 Mezclar con palillo en forma circular y agitar suavemente durante algunos segundos
hasta que forme aglutinación.

Determinación en tubo

 En un tubo colocar 2 gotas de glóbulos rojos de suspensión

 Agregar 2 gotas del reactivo anti- D.
 Mezclar suavemente y centrifugar1 minuto a 1000 r.p.m.

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

Se rechazan muestras hemolizadas, coaguladas, que no conserven la relación sangre –

anticoagulante

- INFORME DE RESULTADOS

 Cuantificarla por cruces, positivo o negativo.

 Resuspender suavemente el botón celular observando la presencia de aglutinación

- VALORES DE REFERENCIA

N/A

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A
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Subgerencia de Salud e Investigación PR-HEM 1.0 41

- CONTROL DE CALIDAD

 Aspecto: Ausencia de hemolisis, precipitado, partículas o formación de gel mediante

inspección visual
 Reactividad y especificidad: Ausencia de hemolisis inmune, formación de rouleaux o
fenómeno de prozona. Reacciones claras con hematíes que poseen los
correspondientes antígenos.
 Registrar el resultado en el registro de control de calidad interno sección
Hematología.

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematología, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados.

3.12 RECUENTO DE LEUCOCITOS MANUAL

El ácido acético al 2% lisa los glóbulos rojos pero no los leucocitos ni los eritrocitos
nucleados. El líquido de Turk también contiene azul de metileno que tiñe los núcleos. Es
necesario corregir el recuento de leucocitos, si el frotis de sangre presenta eritrocitos
nucleados.

- MATERIAL NECESARIO

 Tubos con anticoagulante EDTA

 Pipeta automática
 Reactivo o diluyente de Turk (preparar 98 cc de H2O destilada + 2 ml de ácido
acético
 glacial + 1 gota de azul de metileno) O el preparado por casa comercial.
 Puntas
 Tubos de ensayo
 Reactivo de Turk
 Cámaras de Neubawer
 Laminas de cuarzo
 Papel kleenex

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

 Verificar que la Hoja de Vida del microscopio se encuentre actualizada.

 Realizar mantenimiento diario del microscopio.
 Al finalizar el trabajo de cada turno correspondiente limpiar con un paño suave y
alcohol los oculares y objetivos.

- ACTIVIDADES

 Aspirar 20 ul de muestra con la pipeta automática, limpiar la punta, dispensar en el

tubo que contiene 380 ul de diluyente de Turk
 PROTOCOLO DE HEMATOLOGIA
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Subgerencia de Salud e Investigación PR-HEM 1.0 42

 Mezclar muy bien.

 Desechar la punta en el recipiente respectivo para la desinfección.
 Dispensar en la cámara de Neubawer
 Dejar reposar entre 3 - 4 minutos.
 Observar en el microscopio con el objetivo de 10 X, realizar el recuento y multiplicar
por 50.

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

 Se rechazan muestras hemolizadas, coaguladas, que no conserven la relación

sangre -
 anticoagulante apropiada
 El uso prolongado del torniquete afecta los recuentos celulares

- INFORME DE RESULTADOS

Contar el número de células en los cuatro cuadrantes de los extremos y multiplicar por 50

- VALORES DE REFERENCIA

ADULTOS: 5.- 10 x 10³μl

NIÑOS:
0 -2 semanas: 9.0 - 15 x 10³μl
2 - 8 semanas: 5.0 - 12 x 10³μl
2 meses - 6 años: 5.0 - 10 x 10³μl
6 - 18 años: 4.8 – 10 x 10³μl

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A

- CONTROL DE CALIDAD

Control de calidad interno:

Teniendo en cuanta que existe un analizador de hematología con un control de calidad

interno y externo óptimo, lo tomamos como referencia para el control de calidad del
recuento de leucocitos por método manual
 PROTOCOLO DE HEMATOLOGIA
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Control de calidad externo:

Ninguna institución conocida certificada ofrece el control de calidad para esta prueba.

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematología, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados

3. 13 RECUENTO DE NORMOBLATOS

Los normoblastos son eritrocitos nucleados que normalmente no aparecen en la sangre

periférica, por lo general, su presencia acompañada de policromatofilia, obedece a estrés
medular. Se presentan en anemias hemolíticas, policitemia vera, mieloma múltiple,
hematopoyesis extramedular, anemias megaloblásticas

- MATERIAL NECESARIO

 Muestra tomada con anticoagulante EDTA

 Láminas
 Cubre objetos
 Reactivo Wright
 Cronómetro
 Aceite de inmersión
 Piano cuenta células
 Microscopio

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

 Verificar que la Hoja de Vida del microscopio se encuentre actualizada.

 Realizar mantenimiento diario del microscopio.
 Al finalizar el trabajo de cada turno correspondiente limpiar con un paño suave y
alcohol los oculares y objetivos.

- MUESTRA

Sangre total con anticoagulante EDTA al 5 %

- ACTIVIDADES

Hacer el extendido sanguíneo

Colorear con Wright
Contabilizar el número de normoblastos en 100 leucocitos,

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

El extendido no cumpla con las normas de calidad.

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- INFORME DE RESULTADOS

CORECCION DE LEUCOCITOS: Esta se realiza si se pasa de 11% normoblastos y se

corrige así: No de leucocitos X 100 / Normoblastos + 100 y se informa RECUENTO DE
LEUCOCITOS CORREGIDO:--------

- VALORES DE REFERENCIA

N/A

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A

- CONTROL DE CALIDAD

Control de calidad interno:

 Se realizan controles de reproducibilidad del dato.

Control de calidad externo:

 Ninguna institución conocida certificada ofrece el control de calidad para esta prueba

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematología, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados

3.14 RECUENTO MANUAL DE PLAQUETAS

Las plaquetas son fragmentos de citoplasma de megacariocitos, miden entre 1 – 4 um de

diámetro. Circulan entre 8 – 11 días.
Si se produce un daño a nivel de vasos sanguíneos, las plaquetas circulantes forman un
tampón, constituyendo así el primer paso en el control del daño vascular.
El recuento manual de plaquetas aplica a fin de correlacionar con el recuento
automatizado de plaquetas.
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- MATERIAL NECESARIO

 Tubos con anticoagulante EDTA 5%

 Reactivo de Wright
 Microscopio
 Piano cuenta células.
 Porta objetos
 Laminillas.
 Aceite de inmersión
 Cronómetro

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

 Verificar que la Hoja de Vida del microscopio se encuentre actualizada.

 Realizar mantenimiento diario del microscopio.
 Al finalizar el trabajo de cada turno correspondiente limpiar con un paño suave y
alcohol los oculares y objetivos.

- MUESTRA

Sangre total con anticoagulante EDTA al 5 %

- ACTIVIDADES

 Realizar el extendido de sangre que

 Cumpla con las normas de calidad
 Contar en la parte adecuada del extendido (interface)
 Hacer el recuento en 10 campos que incluya 100 glóbulos rojos cada vez, promediar
y multiplicar por 15.000, si es periférica y si es capilar por 20.000.

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

 Muestras que no conserven la relación sangre – anticoagulante

 Muestras hemolizadas y coaguladas
 El uso prolongado del torniquete afecta los recuentos celulares

- INFORME DE RESULTADOS

 Si es capilar el valor leído en 10 campos se multiplica por 20.000

 Si es periférica el valor leído en 10 campos se multiplica por 15.000

- VALORES DE REFERENCIA

Adultos: 150.000-450.000 x mm3. Neonatos: 95.000-350.000 7 mm3

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- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A

- CONTROL DE CALIDAD

Control de calidad interno:

 Realizar el procedimiento por duplicado con dos láminas diferentes (reproductibilidad

Control de calidad externo:

 El Instituto nacional de salud envía un CD para el reporte de un ESP cada dos meses,
donde incluye las plaquetas.

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematología, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados.

3.15 RECUENTO DE RETICULOCITOS

Los reticulocitos son glóbulos rojos juveniles sin núcleo, que contienen residuos de RNA
y quizá de ribosomas en el citoplasma. Cuando los reticulocitos se incuban con los
colorantes supravitales como el azul de Cresil brillante, el RNA residual se agrega al
retículo y se precipita, formando un complejo ribonúcleo-proteína evidenciando los
gránulos de color oscuro o red de reticulina, de allí su aspecto reticulado (filamentos
azules)

La cuenta de reticulocitos se utiliza para distinguir las anemias producidas por

insuficiencia de la médula ósea de las que son causadas por hemorragia o hemólisis; para
vigilar lo efectivo del tratamiento de la anemia perniciosa o la recuperación de la función
de la médula ósea en la anemia aplástica y para determinar los efectos de las sustancias
radiactivas en los individuos expuestos a este factor.

- MATERIAL NECESARIO

 Tubos de ensayo
 Portaobjetos
 Laminilla
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 Colorante azul de cresil brillante

 Pipetas automáticas
 Puntas
 Aceite de inmersión
 Cronómetro

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

 Verificar que la Hoja de Vida del microscopio se encuentre actualizada.

 Realizar mantenimiento diario del microscopio.
 Al finalizar el trabajo de cada turno correspondiente limpiar con un paño suave y
alcohol los oculares y objetivos.
 Encender el Baño para alcanzar la temperatura de 37 º C
 verificar la temperatura del baño maría

- MUESTRA

Sangre total con anticoagulante EDTA al 5 %

- ACTIVIDADES

 Filtrar el colorante azul de cresil brillante antes de usarlo

 Colocar las muestras en el agitador
 Colocar en un tubo 2 gotas de sangre y mezclarla suavemente con 2 gotas de
azul de cresil brillante.
 La suspensión sangre-colorante se agita suavemente y se deja a 37° C en baño
maría durante 15 min
 Realizar el extendido.
 Colorear dos placas con Wright.
 Mediante el objetivo de bajo aumento buscar el área más adecuada para realizar el
recuento correspondiente, esta zona es aquella dónde los hematíes están
bien individualizados y regularmente distribuidos.
 Cambiar a 100 X y contar 10 campos dónde haya 100 eritrocitos.

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

Control de puntos críticos

 La filtración del colorante azul de cresil brillante es importante para evitar la

contaminación de las placas, con precipitados del mismo
 La mezcla de la muestra tomada antes de realizar la dilución con el colorante es
definitiva para obtener una alícuota uniforme.
 Muestras hemolizadas, coaguladas y que no conserven la relación sangre
anticoagulante son inadecuadas porque alteran la distribución y cantidad de células.
 La muestra solo es estable durante 2 horas para su procesamiento ya que los
reticulocítos maduran in Vitro
 El tiempo máximo de incubación de la muestra con el colorante es 10 minutos.
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 Extendidos gruesos o muy delgados no son adecuados para el recuento.

 Revise que el material esté completamente limpio puesto que los restos de
detergente o hipoclorito interfieren.
 El uso prolongado del torniquete afecta los recuentos celulares

- INFORME DE RESULTADOS

Cálculo de reticulocitos corregido: HTO PCT X No de Reticulocitos / HTO normal. Y se

informa recuento de RETICULOCITOS CORREGIDOS: ---------

- VALORES DE REFERENCIA

VARONES: 0.5 -1.5% de los eritrocitos totales

MUJERES. 0.5 - 2.5% de los eritrocitos totales
NIÑOS: 0.5 - 4.0% de los eritrocitos totales
RECIEN NACIDOS: 2-5% de los eritrocitos totales

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A

- CONTROL DE CALIDAD

Control de calidad interno

 Probar cada nuevo lote de colorante examinando una muestra de sangre que se sabe
es normal. Si se dispone de una muestra anormal conocida debe utilizarse como
testigo.
 Hacer doble montaje de una muestra con el fin de hacer control de reproductibilidad

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, Registro de Hematologia, Registro de Control de calidad interno, Reporte

de resultados.

3.16 VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR - SISTEMA CERRADO

El Sistema Cerrado para la determinación de la velocidad de eritrosedimentación VSG

VACUETTE 1.6 mL se utiliza en la recolección de muestras de sangre venosa y su
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determinación se realiza dentro del tubo de recolección. El anticoagulante de referencia

(CLSI) para esta prueba es el Citrato de Trisodio y se utiliza el método Westergren.

- MATERIAL NECESARIO

Un tubo estéril de 9 x 120 mm con una solución de citrato, el volumen del tubo es 1.6 mL.
Una gradilla especial con escala para los tubos de 1.6 mL, para realizar lecturas en 30
minutos.

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

N/A

- MUESTRA

Sangre total con anticoagulante citrato de sodio.

- ACTIVIDADES

Luego de tomar la muestra y antes de empezar la medición de la prueba, homogenice

suavemente el tubo entre 5-10 veces para obtener una mezcla correcta.

Coloque la Gradilla VACUETTE para VSG de 1.6 ml en una mesa donde no vaya a ser
movida o manipulada durante la prueba. La temperatura del lugar de trabajo debe estar
entre +18 °C y +25 °C.

Coloque el tubo de 1.6 ml en posición vertical y utilizando la gradilla correspondiente.

Realice la alineación de la marca 0 en la parte superior de la escala con la parte inferior
del menisco donde se encuentra la interfase sangre-aire.

Programe el cronómetro para un tiempo de 30 minutos

Cuando el cronómetro indique la finalización del tiempo, note el nivel del menisco formado
entre los eritrocitos sedimentados y el plasma sobrenadante en la escala de la gradilla
VACUETTE para VSG de 1,6 ml.

Descarte los tubos VSG VACUETTE sin abrirlos en un dispositivo de desecho

conveniente.

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

Control de puntos críticos:

 Se rechazan muestras hemolizadas, coaguladas que no conservan la relación

sangre- anticoagulante.
 Si la muestra se conserva a temperatura ambiente hay que efectuar la prueba antes
de que transcurra una hora.
 Mezclar adecuadamente la muestra antes de iniciar con el montaje.
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 Realizar un correcto lavado del material.

 Una mala mezcla puede resultar en coagulación y/o resultados incorrectos de VSG.
 Para la gradilla especial para tubos de 1.6 mL, se utiliza un tiempo de 30 minutos.
Nota: La gradilla utilizada en tubos de 1.6 ml indica el valor de Westergren de 1 hora
después de 30 minutos de lectura.

- INFORME DE RESULTADOS

El valor numérico en milímetros se obtiene midiendo la distancia entre el menisco de la

superficie y él límite superior del sedimento de glóbulos rojos

- VALORES DE REFERENCIA

HOMBRES MUJERES NIÑOS RECIEN NACIDO

3 - 15 5 - 20 5 – 15 0–8

- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

N/A

- METODOS ALTERNOS

N/A

- CONTROL DE CALIDAD

Control de calidad interno:

Control de reproducibilidad

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, orden médica, registro de muestras rechazadas, reporte de resultados.

3.17 VSG (WESTERGREEN)

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR O MÉTODO DE WESTERGREN: La

velocidad de sedimentación de eritrocitos VSG mide la velocidad sedimentación de los
glóbulos rojos en el citoplasma. Esta prueba se basa en el hecho de que los procesos
inflamatorios y necróticos alteran las proteínas sanguíneas, causando que los eritrocitos
se aglomeren, se tornen más pesados y es más probable que caigan rápidamente si se
colocan en pipeta vertical. La velocidad de sedimentación globular no es diagnóstica de
ninguna enfermedad en especial, indica que existe alguna patología que debe ser
investigada.
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- MATERIAL NECESARIO

 Tubos con anticoagulante EDTA 5%

 Pipeta
 Pipetas de Westergren
 Cronometro
 Papel kleenex
 Soporte para pipeta de sedimentación

- ALISTAMIENTO Y CALIBRACIÓN DE EQUIPOS

N/A

- MUESTRA

Sangre total con anticoagulante EDTA al 5 %

- ACTIVIDADES

 Aspirar la muestra de sangre con la pipeta hasta aforar el menisco a 0 en la pipeta de

Westergren,
 Colocar la pipeta en el soporte en un lugar donde no quede expuesta a la luz directa
del sol y que no existan vibraciones ni corrientes de aire.
 Leer después de una hora exactamente.
 El valor numérico en milímetros se obtiene midiendo la distancia entre el menisco de
la superficie y él límite superior del sedimento de glóbulos rojos

- CONTROL DE PUNTOS CRITICOS

Control de puntos críticos:

 Se rechazan muestras hemolizadas, coaguladas que no conservan la relación

sangre-anticoagulante.
 Si la muestra se conserva a temperatura ambiente hay que efectuar la prueba antes
de que transcurran dos horas
 Mezclar adecuadamente la muestra antes de iniciar con el montaje.
 Realizar un correcto lavado del material.

- INFORME DE RESULTADOS

El valor numérico en milímetros se obtiene midiendo la distancia entre el menisco de la

superficie y él límite superior del sedimento de glóbulos rojos

- VALORES DE REFERENCIA

HOMBRES MUJERES NIÑOS RECIEN NACIDO

3 - 15 5 - 20 5 – 15 0–8
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- NOTIFICACIÓN ESPECIAL

N/A

- METODO DE CONFIRMACIÓN DE RESULTADO

Ver Control de Calidad Interno.

- METODOS ALTERNOS

N/A

- CONTROL DE CALIDAD

Control de calidad interno:

Control de reproducibilidad

- REGISTROS GENERADOS

Registro diario, orden médica, registro de muestras rechazadas, reporte de resultados.