ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO
FACULTAD: CIENCIAS
ESCUELA DE BIOQUMICA Y FARMACIA
CARRERA: BIOQUMICA Y FARMACIA
GUIA DE LABORATORIO DE ANLISIS CLNICOS II
DETERMINACIN DE TRIGLICRIDOS
PRCTICA No. 4
1. OBJETIVO(S):
2.1. GENERAL
Determinar de los valores de Triglicridos en suero
2.2. ESPECFCOS
Realizar la determinacin de Triglicridos por el mtodo enzimtico -
colorimtrico presente en una muestra de suero, siguiendo para ello las
instrucciones de un kit comercial.
Determinar los valores obtenidos mediante la tcnica y compararlos segn los
valores de referencia.
2. METODOLOGA
1. Para la determinacin de triglicridos por el mtodo enzimtico -colormetro
se requiere ayuno de 12 horas.
2. Anotar el historial clnico de los pacientes
3. Extraer tres muestras de sangre de los pacientes con el tubo lila o rojo.
Centrifugarlo por 5 minutos a 3500 rpm
4. Equilibrar las muestras y reactivos a temperatura ambiente.
5. Rotulamos en tubos el blanco ,estndar y muestras
6. Una vez obtenido el suero separado correctamente pipeteamos 10ul de las
3 muestras en tubos limpios y agregamos 1000 ul de reactivo de trabajo
en estos.
7. Respectivamente 1000ul de reactivo en blanco y estndar (ms 10 ul del
estndar)
8. Homogenizamos e incubamos los tubos a bao Mara durante 5 minutos
a 37 C junto con el estndar y blanco de reactivo
9. Ajustar el espectrofotmetro a cero de absorbancia (DO) a la longitud de
onda de 505 nm y utilizando el tubo blanco, y leer los tubos restantes.
10. Leer la absorbancia del Patrn y de la Muestra a 505 nm frente al Blanco.
11. Anotar y comparar los resultados
3. EQUIPOS Y MATERIALES: REACTIVOS
Espectrofotmetro Reactivo de triglicridos
Centrifuga Agua destilada
Bao Mara
Cronometro
Jeringa, torniquete, algodn, alcohol 5 tubos tapa roja
Pipetas y tips descartables de 10 y 500 ul
tubos limpios
Gradillas
4. MARCO TERICO:
Los triglicridos son lpidos absorbidos en la dieta y tambin producidos en forma
endgena a partir de los carbohidratos. Su medicin es importante en el
diagnstico y manejo de las hiperlipidemias. Estas enfermedades pueden tener
origen gentico o ser secundarias a otras tales como nefrosis, diabetes mellitus y
disfunciones endcrinas. El aumento de triglicridos se ha identificado como un
factor de riesgo en enfermedades aterosclerticas.
Una concentracin en ayunas de triglicridos menores de 150 mg/dl es
considerada normal. Una concentracin en el lmite es de 150-199mg/dl se
considera elevado una concentracin de triglicridos en ayunas entre 200-499
mg/dl..Valores mayores de 499mg/dl en un paciente en ayunas se consideran muy
altos
Principio del mtodo
Los triglicridos son enzimticamente hidrolizados por lipasa a cidos grasos
libres y glicerol. El glicerol es fosforilado por adenosin-trifosfato (ATP) por la
glicerol cinasa (GK) para producir glicerol-3-fosfato y adenosin-difosfato (ADP).
Glicerol-3-fosfato es oxidado a dihidroxiacetona-fosfato (DAP) por la glicerol
fosfato oxidasa (GPO) para producir perxido de hidrgeno (H2O2). La produccin
de color es catalizado por perxidasa, el H2O2 reacciona con 4-
aminoantipirina (4AAP)y 4clorofenol(4CP) para producir un derivado rojo. La abs
orbancia de este producto es proporcional a laconcentracin srica de
triglicridos presente en la muestra
CP) para producir un derivado rojo. La absorbancia de este producto es proporci
onal a la concentracin srica de triglicridos presente en la muestra
PROCEDIMIENTO
Homogeneizar la muestra antes de usar, especialmente frente a sueros lechosos
En 3 tubos medir 10 ul de muestra, y agregar 1000ul de Reactivo de trabajo, de
igual manera agregar 1000ul de reactivo en el blanco y estndar
Mezclar e incubar 5 minutos a 37o C. Retirar del bao y enfriar. Leer a 505 nm en
espectrofotmetro o en colormetro con filtro verde (490-530 nm), llevando a cero
con el Blanco.
Procesamiento de datos
Concentraciones Muestra1 Muestra2 Muestra3
1 111 mg/dl 81mg/dl 234mg/dl
2 124mg/dl 120mg/dl 90mg/dl
3 170mg/dl 34mg/dl 69mg/dl
4 103mg/dl 165mg/dl 82mg/dl
5 162mg/dl 52mg/dl 143mg/dl
5. CLCULOS Y RESULTADOS
(A)Muestra x Conc.Patrn=mg/dl de triglicridos en la muestra
(A)Patron
Desviacin Muestra Muestra Muestra3
estndar 1 2
30.29 52.88 67.83
Coeficiente Muestra Muestra Muestra3
de 1 2
variacion
22.60 58.60 54.88
6. OBSEVACIONES
Es necesario que el paciente este en ayuno 12 horas para que no
haya interferencia en los resultados
En esta prctica se determin el nivel de triglicridos en la sangre, el
resultado obtenido en la muestra 1 se encuentra por encima de los
valores normales (hipertrigliceridemia), es posible que el paciente
curse por una cirrosis, dieta baja en protenas y alta en
carbohidratos, sndrome nefrotico o hipertiroidismo.
Los niveles de triglicridos varan con la edad y del tiempo que tenga
el paciente de haber ingerido alimentos.
Puede existir un margen de error debido a un mal pipeteo o un mal
tiempo para hacer la lectura.
El estndar del reactivo se prepara con 10 ul del estndar ms 1ml
del reactivo de colesterol
El blanco del reactivo se prepara con 1ml del reactivo y la muestra
con 10ul del suero mas 1ml de reactivo
Los niveles normales son menos de 150 mg/dl, los resultados fueron 34mg/dl
y 69 mg/dl que son valores muy variados se encuentra dentro del rango. Salvo
por el valor de 170 mg/dl que es un valor alto.
Rango de medida: Desde el limite de deteccin de 0,7 mg/dL hasta
el limite de linealidad de 1000 mg/dL. Si la concentracin es superior
al limite de linealidad, diluir la muestra 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar
el resultado final por 2.
Indicadores de deterioro de los reactivos: - Presencia de partculas y
turbidez. - Absorbancia (A) del Blanco a 505 nm > 0,14
La reaccione entre el suero y el reactivo produce un complejo
coloreado cuya intensidad de color es directamente proporcional a la
concentracin de la muestra
Los resultados
.
7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Determinamos, experimentalmente, la concentracin de triglicridos
en la suero, por medio de la espectrometra
La prueba de triglicridos es un anlisis que se utiliza para
determinar el nivel de estos en la sangre, as como tambin para
evaluar la funcin heptica y un posible riesgo cardiovascular. Los
triglicridos son transportados a todo el organismo para dar energa
o bien para ser almacenados como grasa
Pudimos establecer los valores y compararlos con los de referencia
Para garantizar o tener la certeza de que los resultados estn
correctos es necesario anotar el historial clnico
Es importante su correcta realizacin ya que ayuda en el
diagnstico oportuno deformacin de ateromas que provocan los
infartos.
Tomar las medidas correctas de bioseguridad tanto en el laboratorio
como en la tcnica para obtener resultados confiables.
Verificar la calidad y tiempo de conservacin de reactivos y
muestras
Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensacin.
Tener equipos y materiales en buen estado para disminuir el riesgo
de errores en los resultados.
8. BIBLIOGRAFA:
http://es.scribd.com/doc/8740724/Trigliceridos-en-suero#scribd
http://www.wienerlab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espa
nol/tg_color_gpo_pap_aa_sp.pdf
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003493.htm
http://www.trigliceridos.net/11
ANEXOS
