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Fijación de Nitrógeno en Frijoles con Rhizobium

Este documento presenta un informe de práctica sobre la microbiología de suelos. El objetivo es analizar la fijación biológica de nitrógeno atmosférico a través de la inoculación de la bacteria Rhizobium en semillas de frijol. Se espera que las plantas inoculadas tengan un mejor desarrollo y presenten nódulos en las raíces, mientras que las plantas sin inocular tendrán un desarrollo menor. Adicionalmente, se resuelve un cuestionario sobre la importancia de la simbiosis y

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Fijación de Nitrógeno en Frijoles con Rhizobium

Este documento presenta un informe de práctica sobre la microbiología de suelos. El objetivo es analizar la fijación biológica de nitrógeno atmosférico a través de la inoculación de la bacteria Rhizobium en semillas de frijol. Se espera que las plantas inoculadas tengan un mejor desarrollo y presenten nódulos en las raíces, mientras que las plantas sin inocular tendrán un desarrollo menor. Adicionalmente, se resuelve un cuestionario sobre la importancia de la simbiosis y

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AGRONOMIA

INFORME DE PRCTICA

PRESENTADO POR:
DONALD ALEXANDER CAICEDO ORTIZ
87.941.954
ALBA MARIBEL ARBOLEDA CASTILLO
CC: 1087119286

CDIGO DEL CURSO:


303019A_38

CURSO:
MICROBIOLOGA DE SUELOS
Tuctor virtual

TUTOR VIRTUAL
ANDRES FERNANDO RUBIANO

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA


ESCUELA DE CIENCIAS AGRCOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO
AMBIENTE
ECAPMA
AGRONOMIA
21 DE MAYO 2017

INTRODUCCIN.

En este trabajo que llevaremos a cabo podrn observar el crecimiento de una


planta de frijol, de modo ms detallado ya que podrs ver el crecimiento de ella,
da a da y con gran visibilidad de el crecimiento de su raz, de un modo casero
y con materiales fcil de conseguir as como lo es unos vasos desechables de
15 onzas limpio, en tierras esterilizadas y no esterilizadas, donde a unas se les
aplicara inoculantes y a otras no, para mirar sus etapas de desarrollo fisiolgico
y el desarrollo de sus races, donde podremos observar las cantidad de ndulos
que forman de acuerdo a los procedimientos adquiridos.
Adems se desarrollara un cuestionario donde se le dar respuesta a unas
preguntas que van ligadas a la agricultura limpia, donde se hace nfasis en el
uso o incorporacin de los microorganismo.
Trabajaremos por medio de microorganismo que aportan para la produccin de
los cultivos, en este caso usaremos la bacteria de Rhizobium s.p que gracias a
las la enzima nitrogenada convierten el nitrgeno gaseoso en nitrgeno
combinado. Induciendo en las races (o en el tallo) de las leguminosas la
formacin de estructuras especializadas, los ndulos, dentro de los cuales el
nitrgeno gaseoso es reducido a amonio. Se estima que este proceso contribuye
entre el 60-80 % de la fijacin biolgica de nitrgeno. Con la utilizacin de
semillas de frijol en diferentes tratamientos observaremos las ventajas que lleva
su utilizacin, algo ms sano para el medio ambiente y con menores costos en
la produccin tambin por medio de este proceso podemos Identificar
claramente como diferentes tipos de microorganismos, con diferentes tipos de
metabolismo.
AGRONOMIA

OBJETIVOS.

OBJETIVOS GENERALES
Analizar la fijacin biolgica de nitrgeno atmosfrico a travs de la
inoculacin de Rhizobium en semillas de frijol.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Comprobar que los microorganismos son un o juegan un papel importante


en la fijacin de nitrgeno.
Describir los cambios fisiolgicos en el crecimiento de la plana en dos
escenarios diferentes por medio de los tratamientos para la
implementacin o siembra de las semillas de frijol.
Conocer acerca de la bacteria Rhizobium como microorganismo del suelo
y su importancia.
Estudiar cada uno de los diferentes tratamientos a usar.
AGRONOMIA

HIPTESIS DE INVESTIGACIN.

Los tratamientos 2, 3 y 4 estn inoculados con la bacteria y se espera que las


plantas tengan un mejor desarrollo que el tratamiento testigo donde solo est la
semilla sin nada, a cambio las semillas inoculadas debern ser de un color verde
ms intenso y presentar ndulos en sus races, debido a la presencia de
bacterias fijadoras de nitrgeno preexistentes en la tierra o por causa de la
aplicacin de inoculantes. Las semillas inoculadas debern presentar mayor
nmero de ndulos que en el tratamiento sin inoculacin. En el tratamiento 1 no
debern visualizarse ndulos porque los microorganismos preexistentes
deberan haberse degradado por la esterilizacin.

Los Vio inoculantes son productos que contienen microorganismos vivos o


latentes (bacterias y hongos solos o combinados), y que al ser agregados a los
cultivos incrementan el suministro o la disponibilidad de nutrimientos primarios
para las plantas?
AGRONOMIA

MARCO TERICO.
Simbiosis
Es una relacin de beneficio mutuo: las bacterias utilizan el nitrgeno del aire y
lo convierten en compuestos nitrogenados asimilables por las plantas y stas, a
su vez, le suministran a las bacterias carbohidratos originados en la fotosntesis,
como fuente de energa.

Ndulos
Los ndulos radicales son asociaciones simbiticas entre bacterias y plantas
superiores. La ms conocida es la de Rhizobium con especies de Leguminosas.
La planta proporciona a la bacteria compuestos carbonados como fuente de
energa y un entorno protector, y recibe nitrgeno en una forma utilizable para la
formacin de protenas. La simbiosis entre cada especie de leguminosa y
de Rhizobium es especfica.

Fijacin biolgica del nitrgeno atmosfrico


La fijacin biolgica del nitrgeno atmosfrico, consistente en la reduccin de
N2 a NH4+ por la enzima nitrogenasa, es, despus de la fotosntesis, la ruta
metablica ms importante para el mantenimiento de la vida en la Biosfera.
Curiosamente, este proceso crucial slo puede ser llevado a cabo por unos
pocos grupos de seres vivos, todos e
Los microorganismos fijadores de nitrgeno no constituyen un grupo taxonmico
homogneo, la nica caracterstica que comparten es la presencia de la enzima
nitrogenasa procariotas.

Leguminosas
Las leguminosas son las semillas comestibles que crecen en vainas en plantas
anuales, arbustos o enredaderas de la familia de las Leguminosae o Fabaceae.
Estas semillas pueden ser comidas frescas, germinadas, secas y molidas en
forma de harina, o preparadas en un sinnmero maneras.
AGRONOMIA

Rhizobium.
Bacterias gram-negativas del suelo que fijan nitrgeno atmosfrico. Pertenece a
un grupo de bacterias fijadoras de nitrgeno que se denominan colectivamente
rizobio.

CUESTIONARIO RESUELTO. CON ARGUMENTACIN ACADMICA

QUE ES UNA SIMBIOSIS. PORQUE ES IMPORTANTE EN LA


AGRICULTURA?
R/ Simbiosis es un concepto que procede del griego y que puede traducirse como
medios de subsistencia. Para la biologa, se trata de un vnculo asociativo
desarrollado por ejemplares de distintas especies. El trmino se utiliza
principalmente cuando los organismos involucrados (conocidos como
simbiontes) obtienen un beneficio de esa existencia en comn.
Cuando dos o ms especies viven en contacto ntimo y obtienen beneficios
mutuos de su interrelacin, donde la simbiosis casi siempre es de carcter
obligatorio para que el simbionte realice ciertas funciones vitales. Existe la
simbiosis en la cual los dos organismos se benefician de su relacin (simbiosis
mutualista) y aquella donde un integrante se beneficia sin afectar al otro
(simbiosis parastica) Las micorrizas (asociacin de raz y ciertos hongos),
constituye un ejemplo de simbiosis de tipo mutualista, donde el hongo aporta
nutrientes que la planta por s mima no podra alcanzar y a su vez, la planta
brinda al hongo parte de sus fotosintatos para que pueda desarrollarse.

PORQUE ES IMPORTANTE EN LA AGRICULTURA.


En la agricultura es muy importante porque ayuda al sostenimiento del medio, en
este caso la simbiosis de los arboles desempea un importante papel a travs
de su copa y sus races. En primer lugar, a travs de su copa; sta protege el
AGRONOMIA
suelo y las siembras que cubre, tanto contra el exceso de sol como contra la
repercusin de las violentas lluvias tropicales, que son los dos factores
principales de la degradacin del suelo tropical.
Los microorganismos contribuyen en la formacin del suelo, participan en la
degradacin de la materia orgnica y en los ciclos de elementos, que aportan a
la fertilidad del suelo y son utilizados por los seres vivos en su metabolismo.
Adems, muchos de estos microorganismos viven alrededor de las races de las
plantas e influyen en su crecimiento, y tienen gran importancia para los cultivos
agrcolas como las leguminosas y algunos forestales. El crecimiento de las
plantas es estimulado por estos microorganismos del suelo que ayudan a
absorber nutrientes y las protegen o evitan el ataque de microorganismos
patgenos.
COMO SE TRANSFORMA EL NITRGENO ATMOSFRICO LAS
PLANTAS PARA INCORPORARLO Y UTILIZARLO EN SU
METABOLISMO?
R/ Es importante anotar que tan slo ciertos microorganismos son capaces de
asimilar nitrgeno molecular transformndolo en biomolculas utilizables para
ellas (Bidwell, R., 1989).
Es un proceso simbitico reductivo dado en bacterias fijadoras como las del
gnero Rhizobium, que viven en ndulos de las races de leguminosas y de
algunas plantas leosas las cianobacterias que son propias de ambientes
acuticos. La FBN, consiste en la conversin del nitrgeno gaseoso (N2)
mediante la enzima nitrogenasa que cataliza la ruptura del triple enlace, hasta
producir amonaco (NH3), forma utilizable para los organismos.
PORQUE ES NECESARIO MENOR ADICIN DE FERTILIZANTE
NITROGENADO EN ALGUNAS ESPECIES DE LEGUMINOSAS?
R/La adiccin en menor cantidad de fertilizante nitrogenados al suelo y en
especial en algunas especies como las forrajeras, causan gran daos y ayudan
en gran parte a la contaminacin de los suelos.
AGRONOMIA
Las leguminosas muestran una amplia diversidad tanto morfolgica como de
hbitats y ecologa, encontramos desde formas herbceas anuales hasta rboles
tropicales. Muchas leguminosas son noduladas por los rizobios. La fijacin de
nitrgeno en la simbiosis rizobio-leguminosa es de considerable importancia en
agricultura, porque causa un aumento significativo del nitrgeno combinado en
el suelo.
Estos efectos tiene dos consecuencias generales: a corto plazo disminucin de
la produccin y aumento de los gastos de explotacin (cada vez el suelo necesita
mayor cantidad de abonos y cada vez produce menos); a largo plazo infertilidad
total y desertificacin del territorio (Gaiak, 2007).
Tenido en cuenta la pregunta se puede considerar que los fertilizantes
nitrogenados no absorbidos quedan en el suelo y alteran su estructura,
destruyendo las bacterias con la consiguiente reduccin de fertilidad, que ayudan
al buen desarrollo fisiolgico de las plantas.
Los nitratos pueden ser absorbidos directamente por microorganismos y plantas
o pueden perderse por volatilizacin y lavado (Boixadera y Corts, 2000).
COMO LOS MICROORGANISMOS ASOCIADOS INDUCEN EL
CRECIMIENTO DE LAS PLANTAS AL PRODUCIR SUSTANCIAS
PROMOTORAS, PROTEGERLAS DE LA SEQUA O DE LOS
PATGENOS?
R/ los microorganismos protegen a las plantas de los patgenos aumentando su
defensa o induciendo la produccin de sustancias antimicrobianas. La materia
que forma parte del planeta sufre numerosas transformaciones al ser utilizada
por los seres vivos. Algunos minerales son asimilados por los organismos foto
sintetizadores (como plantas y cianobacterias) que los incorporan a sus
estructuras y rganos y utilizan para cumplir distintas funciones metablicas. A
su vez, cuando un ser vivo se alimenta de otro, incorpora esos elementos
qumicos a travs de la cadena alimentaria, y en algn momento retornan al
ambiente, ya sea al agua, suelo o aire como parte del ciclo de la materia.
AGRONOMIA

MATERIALES Y MTODO EVIDENCIAS Y RESULTADOS

Semilla de frijol (Phaseolusvulgaris )


Frascos de plstico con tapa
Tierra
Lavandina (hipoclorito de sodio )
Agua hervida
1. Material vegetal semilla de frijol (Phaseolus vulgaris) es la especie ms
conocida del gnero Phaseolus en la familia Fabaceae. Es una
especie anual nativa de Mesoamrica y Suramrica, y sus numerosas
variedades se cultivan en todo el mundo para el consumo, tanto de sus
vainas verdes como de sus semillas frescas o secas.
2. Se esterilizo la mitad de la tierra durante 30 minutos, luego de este tiempo
se procedi a filtrar con una tela.
3. Se hicieron agujeros en los frascos para permitir que le agua drenara.
4. Se esterilizaron 8 de las 12 semillas con cloro al 20 % durante 20 minutos
luego se lavaron con agua desinfectada.
5. Se sembraron 12 semillas de frijol el da 23 de abril del 20017 en los
frascos dos semillas por cada tratamiento.
6. En este procedimiento no se hizo uso del inoculante.
7. Se procedi a sembrar de la siguiente manera:
Tratamiento 1: Siembra de semilla estril y tierra no estril
Tratamiento 2: Siembra semilla estril y tierra estril
AGRONOMIA
Tratamiento 3: Siembra semilla no estril y tierra no estril
Se procedi a regar las plantas con agua hervida fra durante el proceso del
cultivo.

EVIDENCIAS Y RESULTADOS

Tratamiento 1: Siembra de semilla estril y tierra no estril


Sema 1. Del 23 de abril al 25de abril
PLANTA 1 PLANTA 2
GERMINACION : GERMINACION :
La raz scotisa se da el da 23 de abril La raz scotisa se da el da 23de abril
El entorno comprometedor y la El entorno comprometedor y la prevencin
prevencin propia sedan el da 25de propia sedan el da 25 de abril.
abril.
Semana 2. del 26 de abril al 2 marzo

FASE VEGETATIVA : FASE VEGETATIVA :


Se presenta el brote de hojas (dos) Se presenta el brote de hojas (dos) estas
estas no llegan a la etapa e floracin. no llegan a la etapa e floracin. Brote
Brote 29abril 29abril.
Semana 3. del 4marzo al 10 de marzo
En esta semana se presenta ms Esta semana presenta ms crecimiento de
crecimiento de al ancho de hojas, en el al ancho de hojas, en el meristemo apical
meristemo apical de vstago brotan 3 de vstago brotan 3 hojas pequeas.
hojas pequeas. Donde se procedi a Donde se procedi a observar los vasos,
observar los vasos, para mirar la raz y para mirar la raz y su ndulos
su ndulos Ancho hoja : 6 cm
Ancho hoja : 9,5cm Alto planta : 15 cm
Alto planta : 13,6 cm Poca nodulacion
Poca nodulacin.
AGRONOMIA

Tratamiento 2: Siembra semilla estril y tierra estril


Sema del 19 de abril al 25 de abril.
PLANTA 1 PLANTA 2
GERMINACION : GERMINACION :
La raz scotisa se da el da 23 de abril La raz scotisa se da el da 23 de abril
El entorno comprometedor y la El entorno comprometedor y la
prevencin propia sedan el da 25 de prevencin propia sedan el da 25 de
abril abril
Semana 2. Del 26 2 marzo

FASE VEGETATIVA : FASE VEGETATIVA :


Se presenta el brote de hojas (dos) Se presenta el brote de hojas (dos) estas
estas no llegan a la etapa e floracin. no llegan a la etapa e floracin. Brote
Brote hojas 27 de abril hoja 27 de abril.
Semana 3. del 3 al 10 de marzo
En esta semana se observa que En esta semana se observa que
presenta ms crecimiento de al ancho presenta ms crecimiento de al ancho
de hojas, en el meristemo apical de de hojas, en el meristemo apical de
vstago brotan 3 hojas pequeas. Se vstago brotan 3 hojas pequeas. Se
tomo medidas y se procedi a retirar de tomo medidas y se procedi a retirar de
los vasos para observar la raz y su los vasos para observar la raz y su
ndulos. ndulos.
Ancho hoja : 11 cm Ancho hoja : 9 cm
Alto planta : 24 cm Alto planta : 26 cm
Se observa que hay mejor Se observa que hay mejor
concentracin de clorofila y concentracin de clorofila y mayor
mayornodulacion que el tratamiento nodulacion que el tratamiento uno.
uno.
AGRONOMIA
Tratamiento 3: Siembra semilla no estril y tierra no estril
Sema 1. Del 19 de abril al 25 de abril
PLANTA 1 PLANTA 2
GERMINACION : GERMINACION :
La raz scotisa se da el da 19 de abril. La raz scotisa se da el da 19 de abril.
El entorno comprometedor y la El entorno comprometedor y la
prevencin propia sedan el da 25 de prevencin propia sedan el da 25 de
abril abril
Semana 2. del 26 2 de marzo

FASE VEGETATIVA : FASE VEGETATIVA :


Se presenta el brote de hojas se Se presenta el brote de hojas se
marchitan. marchitan.

DISCUSIN DE RESULTADOS.

En los tratamiento uno y dos se pudo observar los ndulos que son los que
proporcionan el nitrgeno que necesitan las plantas para crecer a esto se debe
que el tratamiento numero dos creciera ms la planta puesto que presenta mayor
nodulacion que le tratamiento uno.
Se observo la fijacin simbitica que es la caracterstica esencial para la
formacin de tejido nodular, en las races de las leguminosas una vez que han
sido infectadas por un tipo de Rhizobium especfico de leguminosa.
En el tratamiento tres se observo que las plantas se marchitaron y se observo
que la raz no tena nodulacion, esto puede darse porque en si la leguminosa no
pueden fijar el nitrgeno solo cuando crecen en presencia de un suministro
limitado de nitrgeno y oxgeno. Es decir se crea una conexin entre bacteria y
planta.
AGRONOMIA
En resumen las plantas que fueron inoculadas, con respecto a las no inoculadas
en tierras estril, presentaron problema fisiolgico de crecimiento, ya que estas
plantas presentaron marchites temprana y no presentaron ndulos.
Las plantas que se aplico inoculantes en tierra no estril presentaron un buen
desarrollo fisiolgico, donde se observo nodulaciones y un buen colorido de las
hojas, y a dems los ndulos se encontraban activados de color rojizos, en
diferencia de las plantas donde la tierra, fue esterilizada no presentaron ndulos
activados, sino unos pocos y de color blanquecinos.

Resultados esperados: en los tratamientos 2, 3 y 4 las plantas deberan crecer


ms que las del tratamiento 1, debern ser de un color verde ms intenso y
presentar ndulos en sus races, debido a la presencia de bacterias fijadoras de
nitrgeno preexistentes en la tierra o por causa de la aplicacin de inoculantes.
Las semillas inoculadas deberan presentar mayor nmero de ndulos que en el
tratamiento sin inoculacin. En el tratamiento 1 no deberan visualizarse ndulos
porque los microorganismos preexistentes deberanhaberse degradado por la
esterilizacin.

Resultados Obtenidos.

En los tratamientos 2, 3 y 4 las plantas crecieron ms que las del tratamiento 1,


se observo color verde poco intenso y presentaron ndulos en sus races, debido
a que se les aplico inoculantes que ayuda a la fijacin de bacterias fijadoras de
nitrgeno preexistentes en la tierra.
En el tratamiento uno no hubo nodulacin debido a que no se le aplico inoculante
y la tierra fue esterilizada.
AGRONOMIA

CONCLUSIN

Los microorganismos son muy importantes ya que sin ellos la fijacin del
nitrgeno no sera posible, son las bacterias las que proporcionan tal proceso
que es en gran suma benfico, queda claro que gracias a algunas bacterias y
muchos de los procesos en los que se encuentra inmiscuidas hay vida en la
tierra se le da importancia de conocer microorganismos. Como en el trabajo que
realizamos se identific el factor para que la planta pueda ser fijadora de
nitrgeno y con esto sea de ayuda para cultivar.
AGRONOMIA

WEBIOGRAFA
Felipe de Jess Martnez Gaspar, Dmaris L. Ojeda Barrios, O. Adriana
Hernndez Rodrguez, Jaime J. Martnez Tllez & Guadalupe de La O Quezada.
(2011). El Exceso de Nitratos: un Problema Actual en la Agricultura. Noviembre
10, De 2015. Aventuras del Pensamiento. Tomado del Sitio Web.
[Link]
nitratos_un_problema_actual_en_la_agricultura.pdf
Sonia Aguirre & Nelson Piraneque. (2013). Microbiologia del Suelo. Noviembre
13, de 2015, de Universidad Nacional Abierta y A Distancia Unad Sitio Web:
Http://[Link]/Contenidos/303019/Microbiologia_De_Suelos_20
13/Microbiologia_Del_Suelo_303019.Pdf.
AGRONOMIA

ANEXOS

FOTOGRAFAS SEGUIMIENTO ENSAYO Y COSECHA DE PLANTAS.

MATERIALES.

PROCEDIMIENTOS.
ESTERILIZACIN DE LA TIERRA
AGRONOMIA

SIEMBRA Y CRECIMIENTO FISIOLGICA.


AGRONOMIA

TRATAMIENTO CON TIERRA ESTRIL, CON INOCULANTE


AGRONOMIA

OBSERVACIN DE NDULOS.

TRATAMIENTO 1
AGRONOMIA

TRATAMIENTO 2

TRATAMIENTO 3
AGRONOMIA

TRATAMIENTO 4
AGRONOMIA

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Julio Martnez RomeroRhizobium y su destacada simbiosis con plantas-


Recuperado de [Link]

[Link]
s/[Link]

Aguirre, S., piraneque, N. (2013). Contenido didctico del curso de Microbiologa


del Suelo. . 09/11/2015, de UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A
DISTANCIA UNAD Escuela de Ciencias Agrcolas Pecuarias y del Ambiente.
Sitio web:
[Link]
S_2013/MICROBIOLOGIA_DEL_SUELO_303019.pdf

Luis G. Hernndez Montiel y Miguel A 2003 Microorganismos que benefician


a las plantas: las bacterias PGPR Recuperado de
[Link]
s/[Link]

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