UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL

EVALUACIN DEL COMPORTAMIENTO CINTICO DEL Bifidobacterium

BB12, Y LA INFLUENCIA DEL pH Y ACIDEZ EN LAS CARACTERSTICAS

SENSORIALES DEL YOGURT PROBITICO ENRIQUECIDO CON

SUCEDNEO DE LECHE DE QUINUA (Chenopodium quinoa Willd.).

TESIS

PRESENTADA POR:

LYDA RACHEL YANA CONDORI

PARA OPTAR EL TTULO PROFESIONAL DE:

INGENIERO AGROINDUSTRIAL

PROMOCIN 2010

PUNO PER
2016
rea: Ingeniera y tecnologa
Tema: Desarrollo de procesos y productos agroindustriales sostenibles y eficientes
DEDICATORIA

A mis queridos padres con cario Andrs A.

Yana Q. y Griselda Condori L.; a mis

hermanas Bony y Yois; A ellos mi eterna

gratitud.
 AGRADECIMIENTOS

A la Universidad Nacional del Altiplano, a la Facultad de Ciencias Agrarias y la

Escuela Profesional de Ingeniera Agroindustrial por la formacin profesional

recibida en sus aulas.

A mi Director de tesis Ing. [Link]. Florentino Vctor Choquehuanca Cceres y Asesor

Ing. [Link]. Thomas Ancco Vizcarra por su acertada direccin y asesoramiento en la

ejecucin del presente trabajo de investigacin.

A los miembros del jurado por su aporte y correcciones realizados en el presente

trabajo de investigacin.

Al Sr. Pablo, laboratorista de Microbiologa Agroindustrial; al Sr. German,

laboratorista de Procesamiento de Productos Agropecuarios, por su pre disposicin

en la ejecucin de este trabajo.

A mis padres y hermanas por su incondicional apoyo y cario durante la ejecucin

del presente trabajo de investigacin y toda mi vida.

Finalmente mi eterno agradecimiento a Edwin y Jess por motivarme, apoyarme en

todo momento de mi vida.

 NDICE GENERAL

NDICE DE TABLAS
NDICE DE FIGURAS
NDICE DE ANEXOS
I. INTRODUCCIN...................................................................................................... 1
II. REVISIN BIBLIOGRFICA ......................................................................................... 4
2.1. ALIMENTOS FUNCIONALES ................................................................................ 4
2.2. YOGUR ........................................................................................................................ 6
2.2.1. Caractersticas Fisicoqumicas y Sensoriales del Yogur .................................. 6
2.2.2. Factores que Afectan a las Propiedades del Yogur .......................................... 9
2.3. PROBITICOS ........................................................................................................ 11
2.3.1. Microbiota del Tracto Gastrointestinal........................................................... 12
2.3.2. Seguridad de los Probiticos ............................................................................ 14
2.4. QUINUA .................................................................................................................... 26
2.4.1. Descripcin......................................................................................................... 27
2.4.2. Valor Nutritivo .................................................................................................. 28
2.4.3. Proceso de Transformacin de la Quinua ....................................................... 30
2.5. MICROBIOLOGA PREDICTIVA........................................................................ 33
2.5.1. Modelos Matemticos Predictivos ................................................................... 34
2.5.2. Construccin del Modelo .................................................................................. 36
2.5.3. Descripcin Matemtica del Modelo ............................................................... 38
2.6. CRECIMIENTO MICROBIANO ........................................................................... 39
2.6.1. Fase de Crecimiento .......................................................................................... 39
2.6.2. Parmetros cinticos del Crecimiento Microbiano ....................................... 40
III. MATERIALES Y MTODOS......................................................................................... 45
3.1. LUGAR DE EJECUCIN ....................................................................................... 45
3.2. MATERIAL EXPERIMENTAL ............................................................................. 45
3.3. MATERIALES Y EQUIPOS ................................................................................... 45
3.3.1. Materiales........................................................................................................... 45
3.3.2. Equipos de Laboratorio .................................................................................... 46
3.3.3. Reactivos ............................................................................................................ 46
3.3.4. Medio de Cultivo ............................................................................................... 46

13
 3.4. METODOLOGA EXPERIMENTAL.................................................................... 46
3.4.1. Descripcin del Proceso Experimental ............................................................ 48
3.5. MTODO DE ANLISIS ........................................................................................ 51
3.5.1. Mtodo para el Anlisis Microbiolgico.......................................................... 51
3.5.2. Mtodo para el anlisis Fisicoqumico ............................................................ 52
3.6. UNIDADES DE ANLISIS Y OBSERVACIONES .............................................. 54
3.6.1. Factores de Estudio ........................................................................................... 54
3.6.2. Factores de Respuesta ....................................................................................... 54
3.7. DISEO DE INVESTIGACIN ............................................................................. 55
IV. RESULTADOS Y DISCUSIN....................................................................................... 56
V. CONCLUSIONES ............................................................................................................. 74
VI. RECOMENDACIONES ................................................................................................... 75
VII. BIBLIOGRAFA ............................................................................................................... 76
 NDICE DE TABLAS

Tabla 1. Modificaciones hechas a los alimentos para convertirlos en alimentos

funcionales. ....................................................................................................................... 5

Tabla 2. La lista actual de especies incluidas dentro del gnero Bifidobacterium ......... 22

Tabla 3. Valor Nutritivo en Variedades de Quinua. ....................................................... 29

Tabla 4. Tiempo de Adaptacin () del Bifidobacterium ............................................... 56

Tabla 5. Anlisis de Varianza (ANVA) del tiempo de adaptacin () del

Bifidobacterium. ............................................................................................................. 57

Tabla 6. Anlisis de Varianza (ANVA) para el tiempo de generacin (Tg) del

Bifidobacterium. ............................................................................................................. 60

Tabla 7. Anlisis de Varianza (ANVA) para Velocidad Mxima de Crecimiento (mx)

del Bifidobacterium......................................................................................................... 62

Tabla 8. Anlisis de varianza (ANVA) para la variacin de pH. ................................... 64

Tabla 9. Anlisis de varianza (ANVA) para la variacin de acidez. .............................. 67

Tabla 10. Prueba de comparacin mltiple de Tukey del Sabor .................................... 69

Tabla 11. Anlisis de varianza (ANVA) para la variacin del sabor. ............................ 70

Tabla 12. Prueba de comparacin mltiple de Tukey del Aroma .................................. 71

Tabla 13. Anlisis de varianza (ANVA) para la variacin del aroma. ........................... 72

Tabla 14. Acidez ............................................................................................................. 73

Tabla 15. Anlisis de varianza (ANVA) para la variacin de la acidez. ........................ 73

 NDICE DE FIGURAS

Figura 1. Morfologa del gnero Bifidobacterium. ......................................................... 24

Figura 2. Diagrama de flujo del Proceso de Elaboracin del Sucedneo de leche a partir

de quinua ......................................................................................................................... 33

Figura 3. Grfica del Modelo de Gompertz (Cabeza, 2013) .......................................... 35

Figura 4. Diagrama de flujo del comportamiento cintico del Bifidobacterium BB-12,

en el yogurt probitico enriquecido con sucedneo de leche de quinua. ....................... 47

Figura 5. Descenso del pH para los 3 tratamientos......................................................... 65

Figura 6. Desarrollo de la acidez (% cido lctico) para los 3 tratamientos. .................. 68

 NDICE DE ANEXOS

ANEXO 1. Parmetros ajustados por el Modelo de Gompertz modificado para

Bifidobacterium BB12. .................................................................................................. 89

ANEXO 2. Parmetros de crecimiento cintico del Bifidobacterium BB12. ................ 89

ANEXO 3. Curvas de crecimiento del Bifidobacterium BB12 ajustadas por el Modelo

de Gompertz Modificado. ............................................................................................... 90

ANEXO 4. Resultados de la evolucin del pH obtenidos en cada tratamiento .............. 92

ANEXO 5. Resultados de la evolucin de la acidez (% cido lctico) obtenidos en cada

tratamiento ...................................................................................................................... 93

ANEXO 6. Anlisis sensorial del yogur probitico enriquecido con sucedneo de leche

de quinua Escala Hednica. ......................................................................................... 94

ANEXO 7. Resultados de la Evaluacin sensorial ......................................................... 95

ANEXO 8. Resultados Finales. ...................................................................................... 96

ANEXO 9. Panel Fotogrfico. ........................................................................................ 97

 ACRNIMOS

: Velocidad de Crecimiento

mx : Velocidad Mxima de Crecimiento

ANVA : Anlisis de Varianza

BAL : Bacterias cidolcticas

BB-12 : Bifidobacterium

DCA : Diseo Completo al Azar

FAO : Organizacin para la Agricultura y Alimentacin

LA-5 : Lactobacillus acidophilus

Lb : Lactobacillus

MRS : Man Rugosa Sharpe

NTP : Norma Tcnica Peruana

OMS : Organizacin Mundial de la Salud

pH : Potencial de hidrogeno

PMP : Patogen Modelling Program

RTP : Recuento Total en Placa

Tg : Tiempo de generacin

TGI : Tractro Gastrointestinal

UFC : Unidad Formadora de Colonia

USDA : United States Departament of Agriculture

: Tiempo de adaptacin
 RESUMEN

El trabajo de investigacin se realiz en la Universidad Nacional del Altiplano

Puno, ubicada a 3827 msnm. en el Laboratorio de Microbiologa Agroindustrial de la

Escuela Profesional de Ingeniera Agroindustrial. Las materias primas que se utilizaron

fueron: leche entera fresca adquirida del Distrito de Paucarcolla (densidad de

1,029g/cm3, grasa 5,02%, acidez 0,16% de cido lctico y pH 6,7); y Quinua Variedad

Chullpi que se adquiri de la Asociacin de Productores Agroindustriales del Distrito de

Cabana. El objetivo fue evaluar el comportamiento cintico del Bifidobacterium BB12,

y la influencia del pH y acidez en las caractersticas sensoriales del yogurt probitico

enriquecido con sucedneo de leche de quinua (Chenopodium quinoa Willd). Para ello

se plante 3 tratamientos con niveles de sustitucin de sucedneo de leche de quinua,

T1 = 0%, T2 = 15% y T3 = 20%. Sometindose a la leche entera fresca a incubacin a

42C por 6 horas; determinndose las UFC/ml, pH y acidez titulable. Con los resultados

de crecimiento cintico del Bifidobacterium, se grafic la curva de crecimiento y se

ajust los parmetros cinticos de crecimiento mediante el modelo matemtico de

Gompertz Modificado; el tiempo de adaptacin () es influido por el nivel de

sustitucin, el Bifidobacterium demora en adaptarse al medio; el tiempo de generacin

(Tg) es influido por el nivel de sustitucin y el pH, el Bifidobacterium se reproduce en

menos tiempo que otros microorganismos; mientras que en la velocidad mxima de

crecimiento (mx) a medida que aumenta el nivel de sustitucin su valor se incrementa.

En cuanto al pH, fue influenciada por el nivel de sustitucin, se obtuvieron valores de

4,63; 4,88 y 5,33; y la acidez mostr un mejor valor en el tratamiento 2 con 1,0 % de

cido lctico estando entre el rango permitido. Para el anlisis sensorial sabor, aroma y

acidez, el mejor tratamiento aceptado fue el 2 seguido del 1 y 3. Por ultimo

mencionamos que los tratamientos 1 y 2 se considera como probiticos, porque

contienen una poblacin de >107 UFC/ml de Bifidobacterium, segn recomienda el

Codex Alimentarius

Palabras clave: Chenopodium quinoa Willd, probitico, yogurt, Bifidobacterium, pH,

acidez, tiempo de adaptacin, tiempo de generacin, velocidad mxima de crecimiento.

 I. INTRODUCCIN

Un yogur probitico es aquel que contiene suficiente cantidad de microorganismos

viables que producirn beneficio ms all de los valores nutricionales al ser ingeridos

porque afectan beneficiosamente a una o varias funciones del organismo

proporcionando un mejor estado de salud y bienestar y/o reducen el riesgo de

enfermedad. El consumo de yogurt aumenta cada da ms a nivel mundial, debido a sus

propiedades nutricionales. El yogurt se digiere mejor que la leche ya que ayuda asimilar

los nutrientes, y constituye uno de los principales vehculos para el aporte de

probiticos (Mani, 2005).

La Organizacin de las Naciones Unidas para los Alimentos y la Agricultura (FAO)

afirma que los cultivos probiticos pretenden ayudar a la flora intestinal del cuerpo

humano a restablecerse por s misma y adems se comenta que los probiticos

estimulan el buen funcionamiento del sistema inmune. La lgica de los probiticos es

que el cuerpo contiene una ecologa microbiana con una gran variedad de especies de

bacterias. El balance de estas bacterias se pierde por varias circunstancias que incluyen

el uso de antibiticos u otras drogas, exceso de alcohol, estrs, enfermedades o

exposicin a sustancias txicas. En estos casos, las bacterias que viven en simbiosis con

el cuerpo humano decaen, lo cual permite que los competidores patgenos ataquen y

deterioren la salud (FAO, 2005).

La bacteria Bifidobacterium se encuentra de forma natural en el tracto

gastrointestinal humano y en ciertas leches fermentadas tradicionales. Estas bacterias

son resistentes al cido y a la bilis y cuando se ingieren, son capaces de sobrevivir al

trnsito a lo largo del tracto gastrointestinal. Las bfidobacterias se consideran como

1
probiticos debido a que su consumo en ciertas cantidades puede ejercer diversos

beneficios sobre la salud (Villalobos, 2005).

Segn Chr. Hansen (2004), los probiticos Bifidobacterium (BB-12) y Lactobacillus

acidophilus (LA-5) son principalmente utilizados en la produccin de productos lcteos

probiticos y normalmente se utilizan en combinacin con otras cepas probiticas o

cultivos de yogur. Los cultivos liofilizados BB-12 y LA-5 son muy estables y tienen

una alta resistencia frente a los cidos en los productos lcteos fermentados (Chr.

Hansen, 2004).

El consumo de quinua se est convirtiendo cada vez ms popular entre las personas

interesadas en la mejora y el mantenimiento de su estado de salud mediante el cambio

de los hbitos alimentarios, ya que es un excelente ejemplo de "alimento funcional", que

contribuye a reducir el riesgo de varias enfermedades y/o ejerciendo promocin de la

salud (Vasconcelos, 2000). La quinua por ser un grano altamente nutritivo y tener

enorme potencialidad de uso en la agroindustria es necesario transformarla, lo cual

permite un mejor aprovechamiento de sus cualidades nutritivas, facilidad de preparacin

y mejor presentacin. Este alimento, por sus caractersticas nutricionales superiores,

puede ser muy til en las etapas de desarrollo y crecimiento del organismo. Adems es

fcil de digerir, no contiene colesterol y se presta para la preparacin de dietas

completas y equilibradas (Mujica et a.l, 2006).

La quinua tambin puede ser consumida en combinacin con productos lcteos y

utilizada tanto en las dietas comunes como en la alimentacin vegetariana, as como

para dietas especiales de determinados consumidores como adultos mayores, nios,

deportistas de alto rendimiento, diabticos, celiacos y personas intolerantes a la lactosa.

El propsito de este trabajo fue desarrollar un yogur probitico enriquecida con

2
sucedneo de leche de quinua utilizando una mezcla comercial de BAL y una bacteria

probitica. Por tal razn se plantearon los siguientes objetivos:

1. Determinar el tiempo de adaptacin (), velocidad mxima de crecimiento

(mx) y tiempo de generacin (Tg)) del Bifidobacterium BB12 en el proceso

de elaboracin del yogurt probitico a diferentes sustituciones con sucedneo de

leche de quinua.

2. Determinar el pH y acidez en el proceso de elaboracin del yogurt probitico

enriquecido con sucedneo de leche de quinua.

3. Determinar las caractersticas sensoriales (aroma, sabor y acidez) del yogurt

probitico enriquecido con sucedneo de leche de quinua.

3
 II. REVISIN BIBLIOGRFICA

2.1. ALIMENTOS FUNCIONALES

En los aos recientes, una categora llamada alimentos funcionales ha aparecido

en el mercado, y sus ventas han crecido exponencialmente (Chassy et al., 2006); lo

anterior es consecuencia del creciente inters del ser humano por obtener dietas ptimas

para mantener una buena salud, por extender los aos de vida, la desconfianza hacia los

alimentos procesados y el aumento en el mercados de los alimentos naturales; dicha

influencia ha provocado un estado de revolucin tecno-cientfica para los alimentos

funcionales, algunos de los factores que han contribuido a la presente revolucin de la

dieta y al inters en los alimentos funcionales son (Vasconcelos 2000):

1. La evidencia en el mantenimiento de la salud y la concurrencia de las

enfermedades.

2. El papel de la dieta en la mayora de las causas de muerte incluyendo:

enfermedades del corazn, cncer, derrame cerebral, diabetes,

arterosclerosis, enfermedades hepticas y otras enfermedades no fatales,

las cuales tambin resultan de una dieta inadecuada y pueden causar

problemas de discapacidad temporal.

Debido a esto es importante conocer los beneficios y tener claro el significado de

este tipo de alimentos que son definidos como aquellos a los cuales se les adicionan

ingredientes que proporcionan beneficios a la salud de los consumidores adems de los

que proporcionan los alimentos por s mismos.

Los alimentos funcionales han sido asociados con la prevencin y/o tratamiento

de por lo menos cuatro de las principales causas de muerte en los Estados Unidos:

cncer, diabetes, enfermedades cardiovasculares e hipertensin (Chassy et al, 2006).

4
 Los procesos de transformacin que se le pueden aplicar a un alimento con la

finalidad de volverlo un alimento funcional, las cuales se mencionan en la Tabla 1.

Tabla 1. Modificaciones hechas a los alimentos para convertirlos en alimentos

funcionales.

Modificaciones del alimento Ejemplos de posible funcionalidad

Adicin de pptidos bioactivos Mejora las funciones inmunolgicas y
mejora la biodisponibilidad de los
minerales
Adicin de fibra diettica Prevencin del estreimiento, disminucin
del riesgo de cncer de colon, disminucin
de colesterol en la sangre.

Adicin de cidos grasos poliinsaturados Disminucin del riesgo de ataque cardiaco

-3 y de algunos cnceres, mejoramiento del
sistema inmunolgico.

Adicin de probiticos Mejoramiento de la funcin

gastrointestinal, del sistema
inmunolgico, y disminucin del riesgo
de cncer de colon.

Adicin de prebiticos Mejoramiento de la funcin

gastrointestinal, mejoramiento del sistema
inmunolgico, disminucin del riesgo de
cncer de colon.

Adaptada de Berner y ODonnerll (Shah, 2001)

5
 2.2. YOGUR

Se entiende por yogur al producto lcteo coagulado, obtenido a travs de la

fermentacin lctica por accin de las bacterias Lactobacillus delbruekii subsp.
bulgaricus y Streptococcus termophilus de la leche concentrada. La proporcin entre
ambos grmenes influye tambin de una manera esencial sobre la aromatizacin del
yogurt. El Lactobacillus bulgaricus es el principal productor de aroma y contribuye a la
hidrolisis de la materia grasa de la leche liberando cidos grasos (por ejemplo caprico,
caprilico y caproico) y puede producir cantidades considerables de acetaldehdos.. La
coagulacin de la leche se produce cuando esta ha alcanzado el punto isoelctrico. El
yogurt se elabora a partir de leche entera o descremada y a este producto tambin se le
conoce como leche cuajada blgara. La leche ms apropiada para elaborar yogurt es la
que posee un elevado contenido de protenas (Tello et al., 2006).

Segn la Norma Tcnica Peruana (202.092:2008 Leche y productos lcteos. Yogurt.

Requisitos). Aplica las siguientes definiciones:

Yogurt: El producto obtenido por fermentacin lctica mediante, la accin de

Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus y Streptococcus salivarius subsp.

thermophilus a partir de leche pasteurizada y/o productos obtenidos de la leche con o

sin modificaciones en su composicin, pasteurizados; pudindose o no agregarse otros

cultivos de bacterias adecuadas productoras de acido lctico, adems de los cultivos

esenciales. Estos cultivos de microorganismos sern viables, activos y abundantes en el

producto, hasta la fecha de duracin mnima. Si el yogurt es tratado trmicamente luego

de la fermentacin, no se aplica el requisito de microorganismos viables.

2.2.1. Caractersticas Fisicoqumicas y Sensoriales del Yogur

[Link]. Densidad

La densidad de los productos lcteos se encuentra entre 1.028 1.032g/cm3 (Harper

y Hall, 1981).

6
 La densidad es un parmetro que permanece constante durante toda vida til del

yogurt, de acuerdo a lo reportado por (Del Fabbro 2001), (Alatriste 2002), (Daz 2002)

y (Aprtela 2003), razn por la cual la densidad solo se determin al tiempo cero. Los

valores de la densidad obtenidas fueron del rango 1000 a 1050kg/m3.

[Link]. pH

El valor del pH es una medida de la acidez o alcalinidad de una sustancia (es la

medida de la concentraciones de iones de hidrogeno presentes). Los valores de pH se

presentan en una escala que se va de 1-14, donde el valor 7, es para productos neutros

como el agua, por arriba de este valor son producto bsicos y por debajo son cidos,

como es el caso del yogurt. La leche tiene un valor de pH entre 6,56,7 (Tamine y

Robinson, 1991). Los valores de pH de un yogurt estn en un rango de 4,04,5 (Teuber,

1995) y (Mndez, 2000), pero (Oberam, 1985), menciona que este valor est entre 4,2

4,3 y (Meyer y Marcos, 1982) mencionan que estos valores debe ser de 3,7 a 4,5

momento en el cual se produce el acetaldehdo, sustancia que le confiere al yogur su

sabor caracterstico.

El pH del yogurt es una de las propiedades principales, debido a que en su

elaboracin se busca disminuir el pH de la leche (6,5-6,7) y llegar al pH del yogurt lo

cual contribuye al olor y sabor caracterstico (Illescas, 2001) y (Amiot, 1991).

[Link].cido Lctico

El aumento de la acidez del yogurt por la produccin de cido lctico ocasiona la

coagulacin de la casena, adems afecta la textura y el sabor en el producto (Fennema,
1993).

La acidez de un yogurt debe oscilar entre 0,8-1,8% de cido lctico(Ankenman, 1996),

pero (Fennema, 1993) menciona que la acidez se encuentra entre el 0,6 1,5 % cido

7
lctico. El porcentaje de cido lctico adecuado es extremadamente importante para
obtener un yogurt de alta calidad con sabor propio, cuerpo y textura propia, esto es para
que el producto tengue el mnimo porcentaje de sinresis durante el almacenamiento

La formacin de cido lctico hasta alcanzar concentraciones ms o menos

superiores a las que determinan la coagulacin, se controla en funcin al tipo de yogur,

este debe tener un mnimo de 0,7 g de cido lctico por cada 100g de yogur, por tanto la

determinacin de acidez es un parmetro importante para su produccin. La actividad

metablica de los microorganismos del yogur est dada por la velocidad de crecimiento

y el desarrollo de la acidez, de ah la importancia de determinar y dar seguimiento a la

acidez desarrollada durante la elaboracin del yogur. La acidez puede expresarse en

distintos grados, pero el ms comn es el grado Dornic (D); cada grado Dornic

equivale a un decigramo de cido lctico por litro; es decir si una leche tuviera 17

grados Dornic, su acidez ser de 1.7 gramos de cido lctico por litro (Gmez, 1999)

[Link]. Humedad

La humedad es la cantidad de agua presente en el alimento, el conocer la cantidad de

agua del alimento que se encuentra libre, ayuda a prevenir algunas reacciones de
crecimiento microbiano indeseable. El contenido de humedad del yogur es de 87,8%
segn (Gambelli et al, 1999), pero su valor depende del tipo de leche y slidos solubles
en ella.

[Link].Formacin del Sabor y Aroma

La formacin de cido lctico a partir del metabolismo de las bacterias lcticas

proporciona a las leches fermentadas un sabor ligero y finalmente la produccin de
acetaldehdo y de diacetilo da el aroma caracterstico del yogur. El sabor cido
caracterstico del yogur es causado principalmente por la formacin de cido lctico,
originado por las bacterias cido lcticas que atacan a la lactosa (Gomez, 1999).

8
 2.2.2. Factores que Afectan a las Propiedades del Yogur

[Link]. Efecto sobre las Protenas de la Leche

Segn Tamime y Robinson (1991) las protenas de la leche (la casena y las protenas
del lactosuero) pueden experimentar una o varias de las siguientes modificaciones:

Desnaturalizacin de las protenas del lactosuero

Interacciones entre la casena y las protenas del lactosuero como resultado

de la desnaturalizacin de las ltimas y/o de una modificacin del equilibrio

salino.

Produccin de compuesto sulfhidrilo a partir de las protenas del lactosuero

desnaturalizadas.

[Link]. Tratamiento Trmico de la Leche

Segn Tamime y Robinson (1991) el calentamiento de la leche por ebullicin ha

sido utilizado en el proceso de elaboracin de yogurt como mtodo para conseguir
incrementar la concentracin de extracto seco lcteo en la mezcla base, los efectos del
tratamiento trmico se pueden resumir fundamentalmente en los siguientes:

Destruccin y/o eliminacin de microorganismos patgenos y otros

microorganismos indeseables.

Produccin de factores estimulantes o inhibidores de los cultivos estrter del

yogurt.

Cambios de la propiedades fsico qumicas de los componentes de la leche.

[Link]. Homogenizacin

Los glbulos grasos naturales de la leche tienen un efecto muy pequeo sobre la
textura del yogurt, pero la homogenizacin influye favorablemente. Por un lado se
produce la incorporacin mecnica de los pequeos glbulos grasos dentro de la
estructura del coagulo y por otro la incorporacin de la casena en la superficie de los
nuevos glbulos hace que actu como grandes partculas de casina, lo que implica que

9
la concentracin efectiva de superficie de casena se ve incrementada contribuyendo a la
formacin de un gel ms consistente (Mestres y Del Castillo, 2004).

[Link]. pH Acidez

El pH 4,6 influye desfavorablemente en la consistencia. Un pH de 4,6 o inferior

contribuye a la hidratacin de las protenas y por tanto a la consistencia del yogurt, pero
una acidez demasiado elevada, pH 4,0 favorece la concentracin del coagulo, lo que
se traduce en un aumento de la sinresis (Spreer, 1991).

[Link]. Efecto de la adicin de azcar

La principal finalidad de la adicin de azcar o edulcorantes es atenuar la acidez del

producto. La cantidad de azcar o edulcorante aadido depende de (Gomez, 199):

El tipo de azcar o tipo edulcorante;

Preferencia del consumidor;

La fruta utilizada.;

Efectos inhibidores sobre los microorganismos en el cultivo de yogur;

las limitaciones legales;

Consideraciones econmicas.

El yogur de frutas y el yogur aromatizado contienen en promedio hasta un 20% de

carbohidratos, los cuales proceden de (Gomez, 1999):

La leche (lactosa, galactosa, glucosa), cuya concentracin vara en funcin del

extracto seco de la mezcla base y del mtodo empleado para lograr el

incremento del mismo.

Los azcares presentes en las frutas aadidas (sacarosa, fructosa, glucosa y

maltosa).

Los azucares aadidos al yogur o de las mezclas de las frutas.

10
 2.3. PROBITICOS

El termino probitico se popularizo por Fuller en 1992, y fue definido ms

recientemente por un experto como microorganismo viviente que por medio de la

ingestin de un determinado nmero, proporciona beneficios a la salud inherente a la

nutricin general y probitico es un suplemento microbiano vivo que afecta de

manera benfica al husped, mejorando el balance microbiano intestinal (Ouwehand et

al., (2002), mencionada por Vsquez, 2008).

La FAO define los probiticos como: "microorganismos vivos que ejercen una

accin benfica sobre la salud del husped al ser administrados en cantidades

adecuadas". Los alimentos probiticos poseen niveles importantes de estas bacterias las

cuales producen una serie de componentes biolgicamente activos que ofrecen efectos

fisiolgicos deseables ms all de sus efectos nutricionales (Taranto, 2005).

Segn Rasic (1993), para que un individuo obtenga efectos beneficiosos al ingerir

estas bacterias se requiere un nmero muy alto de clulas viables (107 -109/ da).

Las bacterias probiticas, tanto autctonas como las aportadas al organismo

mediante la alimentacin pueden controlar la instauracin y/o el desarrollo de diversos

microorganismos patgenos, entre los que destacan Salmonella Typhimurium, Shigella

spp., Clostridium difficile, Campylobacter jejuni y Escherichia coli, y tambin

proporcionan una proteccin importante frente a patgenos urogenitales como

Gardnerella vaginalis, Bacteroides bivius, Candida albicans y Chlamydia trachomatis

(Hilton et al., 1995).

11
 2.3.1. Microbiota del Tracto Gastrointestinal

El tracto gastrointestinal es un ecosistema complejo en el cual coexisten e interaccionan

permanentemente tres componentes principales: las clulas del husped (muchas de

ellas con capacidad inmunolgica), los nutrientes y los microorganismos, indgenos

(microbiota) y los que provienen de la dieta.

La microbiota intestinal es un conjunto diverso y dinmico compuesto por

microorganismos que se han adaptado a vivir en la superficie de la mucosa intestinal o

dentro de la luz intestinal. El estmago y el duodeno alojan nmeros muy bajos de

microorganismos: <103 UFC por gramo de contenido. Streptococcus, Lactobacillus,

Candida albicans y Helicobacter pylori son los microorganismos comnmente

encontrados en el estmago y el duodeno. Las secreciones cidas, biliares, y

pancreticas inhiben a la mayora de los microorganismos ingeridos. En yeyuno e leon

el nmero de bacterias aumenta progresivamente desde aproximadamente 104 clulas en

el yeyuno hasta 107 clulas por gramo de contenido en el leon distal. La microbiota que

se encuentra en el yeyuno est constituida por Streptococcus, Lactobacillus, C. albicans

y Bacteroides mientras que en el leon estn presentes Lactobacillus, Enterococcus,

Bacteroides, Veillonella, Clostridium y enterobacterias. El intestino grueso, en cambio,

se encuentra densamente poblado por microorganismos anaerobios: aprox. 1012 UFC

por gramo de contenido intestinal. Los microorganismos encontrados son Bacteroides,

Bifidobacterium, Clostridium, Ruminococcus, Peptostreptococcus, Fusobacterium,

Eubacterium, Bacillus, Streptococcus y Enterococcus. Tannis (2008) mencionada por

Burns (2010).

La composicin de la microbiota, as como las interacciones entre sus componentes

y con la mucosa intestinal, condicionan tanto los estados de salud como de enfermedad.

12
Entre ellos, los probiticos son microorganismos implicados en el mantenimiento o

mejora de la salud del TGI por ser, en su mayora, habitantes naturales de este nicho con

funciones fisiolgicas exclusivamente benficas en l. El equilibrio entre las diferentes

poblaciones microbianas es dinmico y se modifica por factores tales como la edad del

individuo, el estrs, su estado de salud, la dieta, la administracin de antibiticos o las

terapias con rayos (Montalto et al., 2009 mencionado por Burns, 2010).

Collado y Sanz (2007); Ventura et al. (2007) mencionan que durante el trnsito en el
tracto gastrointestinal las bifidobacterias deben sobrevivir a las condiciones extremas de
acidez en el estmago y a la inmediata presencia de sales biliares del duodeno para
asegurar su funcionalidad. Las bfidobacterias resisten a altas concentraciones de acidez
(Arenas, 2012).

[Link]. Capacidad de Adhesin y Colonizacin Transitoria del TGI

Algunos de los efectos benficos de los microorganismos probiticos sobre la salud del
consumidor estn relacionados a la capacidad de los mismos de adherirse a la mucosa
intestinal. La adhesin es un pre requisito para colonizar el intestino, estimular el
sistema inmune y para ejercer actividades antagonistas contra microorganismos entero
patgenos a travs de la exclusin competitiva. Aunque en la actualidad se conoce que
la colonizacin del intestino es solamente transitoria y no permanente (Gardiner et al.,
1999, Ohashi et al., 2004) ni siquiera es posible una colonizacin permanente en
neonatos donde la falta de una microbiota instalada y madura podra hacer pensar en la
posibilidad de una intervencin con probiticos para lograr una colonizacin
permanente (Gueimonde et al., 2006).

Actividad Antimicrobiana

En el complejo ecosistema gastrointestinal, los probiticos han desarrollado

mecanismos para competir y sobrevivir frente a otros microorganismos. En general, la

actividad antagnica se produce a travs de la competencia por nutrientes y por espacio

fsico, pero tambin a travs de la produccin de sustancias antimicrobianas tales como

13
cidos orgnicos, etanol, H2O2 y componentes tipo bacteriocina. No obstante, queda por

dilucidar cuan metablicamente activos estn los probiticos durante el trnsito

gastrointestinal para que realmente puedan sintetizar y excretar los compuestos

antimicrobianos (Oozeer et al., 2004).

2.3.2. Seguridad de los Probiticos

Un aspecto fundamental en la eleccin de un probitico es el nivel de seguridad de

la cepa. Las cepas ms utilizadas pertenecen generalmente a los gneros Lactobacillus y

Bifidobacterium, que han sido catalogados como microorganismos seguros en la

fermentacin de los alimentos (Salminen et al., 2004). Aunque tericamente el uso en

de estos microorganismos podra tener efectos colaterales, los casos que relacionan

infecciones sistmicas y consumo de probiticos son muy escasos y todos se han

detectado en pacientes inmunodeprimidos (Antony et al., 1996; Sanz et al., 2003;

Salminen et al., 2004; Cannon et al., 2005; Salvana y Frank, 2006).

Caractersticas Generales de Probiticos en Productos Lcteos

En el American Journal of Clinical Nutrition, Heller (2006), en su artculo titulado:

Probiotic bacteria in fermented foods: product characteristics and starter organisms

Bacterias Probitica en alimentos Fermentados, afirma que aparte de los beneficios de

salud provistos por los probiticos y la esperada supervivencia a travs de tracto

digestivo, es importante que no tengan efectos adversos en el sabor, textura o aroma de

los productos finales. Adems no deben intensificar la acidez a travs de la vida til del

producto. Heller (2006), contina mencionando que los microorganismos vivos

interactan activamente con su ambiente intercambiando componentes del medio por

productos de su metabolismo, por tanto, a composicin qumica que los lcteos es de

14
alta importancia en las caractersticas de los productos finales debido a las propiedades

proteolticas y lipolticas de los probiticos, las cuales pueden afectar

considerablemente el sabor de los productos lcteos.

El control de calidad de los productos lcteos con bacterias vivas se ha hecho

tradicionalmente basado en evaluacin sensorial y en la determinacin de ciertos

parmetros con valores conocidos (Kneifel et al., 1992). Harper (1991) en su estudio

Sensory Ratings of Commercial Plain Yogurts by Consumer and Descriptive Panels,

demuestra que los atributos de acidez, dulzura y apariencia son los descriptores de

mayor relevancia en la aceptacin de los consumidores.

Dairy and Food Culture Technologies (2006) afirma que las bacterias consideradas

probiticas comnmente se relacionan a los productos lcteos. Esto se debe a que

algunos de estos microorganismos pueden jugar un rol en la transformacin de la leche

a productos fermentados y adems brindar beneficios a la salud humana. Se menciona

que los productos lcteos proveen el vehculo adecuado para el transporte de probiticos

por varias razones:

Proteccin de la bacteria: los productos lcteos neutralizan la acidez de los

cidos estomacales y de las altas concentraciones biliares en el intestino

delgado, que pueden reducir por muerte o dao la concentracin de bacterias.

Refrigeracin: la refrigeracin de los lcteos promueve la estabilidad de los

probiticos.

Imagen de los cultivos vivos: el uso de cultivos activos vivos en los productos

lcteos da una imagen positiva ante los consumidores lo cual facilita la

transmisin de mensajes de salud.

15
 Salud: las propiedades de salud de los probiticos se combinan con las

propiedades saludables de los lcteos para crear un alimento funcional. Se ha

demostrado el efecto benfico de los productos lcteos probiticos en el balance

de la microflora intestinal, hipertensin, osteoporosis, cncer, intolerancia a la

lactosa y alto colesterol entre otros.

[Link]. Yogur Probitico

Un yogur probitico es aquel que tambin contiene suficiente cantidad de

microorganismos viables que producirn beneficio ms all de los valores nutricionales

al ser ingeridos porque afectan beneficiosamente a una o varias funciones del organismo

proporcionando un mejor estado de salud y bienestar y/o reducen el riesgo de

enfermedad. El yogur constituye uno de los principales vehculos para el aporte de

probiticos; porque durante la fermentacin de la leche, la lactosa se separa en dos

componentes ms simples glucosa y galactosa, con la produccin de cido lctico. Esta

condicin hace que el producto resulte ms conveniente para quienes sufren de

intolerancia a la leche, causada por la carencia de una enzima llamada lactasa, haciendo

a estos alimentos de gran aceptacin en los distintos grupos de poblacin por su fcil

digestin (Mani, 2005).

El yogur elaborado con Bifidobacterium presento valores de acidez de 1,00 a 1,79%

de cido lctico, cumpliendo con el criterio establecido por Briceo et al., (2001) y

Ramrez, (2007).

[Link]. Cultivos Iniciadores

Los microorganismos que se utilizan en la industria lctea como cultivos iniciadores son
principalmente las bacterias lcticas, que se aaden a la leche para que inicien y dirijan
correctamente su fermentacin. Tambin se utilizan otras bacterias, como las llamadas
probiticas, que en ocasiones se aaden por separado. Tambin en algunos productos

16
lcteos, como por ejemplo queso o kfir, se aaden otros microorganismos como
hongos y levaduras para que inicien determinados proceso. Segn Walstra et al. (1999)
los objetivos de los cultivos iniciadores son:

Acidificacin: por produccin de cido lctico a partir de la lactosa, como

consecuencia desciende el pH.

Higienizacin, por acidificacin, produccin de bacteriocinas y competencia con

los microorganismos indeseables.

Por precipitacin de la casena.

Por produccin de mucilagos.

Modificacin del gusto y del aroma

Por produccin de cido.

Por produccin de sustancias aromticas a partir de la lactosa o del citrato.

Por produccin de sustancias aromticas y spidas por protelisis y lipolisis.

Con el uso de cultivos iniciadores seleccionados se puede controlar mejor la calidad y la

uniformidad de los productos lcteos.

[Link].1. Bacterias Lcticas

[Link].1.1. Streptococcus salivarius subsp. thermophilus

Segn Dellaglio et al. (1992) las caractersticas principales del Streptococcus

thermophilus son:

En forma de clulas esfricas u ovoides de 0,7 a 0,9 m de dimetro unidas en

parejas o largas cadenas, segn la temperatura de crecimiento y el medio de cultivo,

vive en la leche y los productos lcteos; es homofermentativa, en la leche produce 0,7-

0,8% cido lctico L(+), algunas cepas son capaces de producir hasta un 1% de cido

lctico. No produce amoniaco a partir de la arginina, ni metaboliza el citrato. Algunas

17
cepas son capaces de producir polisacridos que forman un mucilago, lo cual es

interesante para la viscosidad del yogurt. En la leche, adems de cido lctico grasos

voltiles: frmico, actico, propionico, butrico, isovalerico y caproico, adems produce

acetoina y pequeas cantidades de acetaldehdo.

Presenta una actividad proteolica muy pequea en la leche y la mayora de

aminocidos liberados son consumidos durante la fase de crecimiento logartmico, por

ser una bacteria termfila su temperatura ptima de crecimiento es de 42-45C, la

mnima de 10C y la mxima de 50C, tambin es una bacteria termodurica, aguanta un

tratamiento de calor en la leche de 30 minutos a 60C; y es muy sensible a la presencia

de inhibidores y en especial de antibiticos, por ejemplo su crecimiento es inhibido por

0,01 U.I de penicilina o 5 m de estreptomania por ml de leche. Tambin es muy

sensible a la sal, hecho que se aprovecha para diferenciarlo de otros lactococcos y

enterococcos, no crece en presencia de un 4% de sal y algunas cepas en presencia de un

2% de sal.

[Link].1.2. Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus

Segn Dellaglio et al. (1992) las caractersticas principales del Lactobacillus

bulgaricus son:

Se presenta en forma de bacilos alargados con la punta rodeada, separados o

formando cadenas. El tamao medio en la leche es de 0,8-1 m de largo, vive en la

leche y los productos lcteos; es homofermentativa. En la leche produce

aproximadamente un 1,7% de cido lctico D(-). Adems de cido lctico, produce

pequeas cantidades de otros productos como los cidos grasos voltiles: actico,

propionico, butrico, isovalerico, caproico y caprico; adems produce acetoina,

acetaldehdo, acetona y 2-butanona.

18
 Presenta una actividad proteoltica mediana, pero importante por la liberacin que

supone de aminocidos, por ser una bacteria termfila. Su temperatura ptima de

crecimiento es de 40-43C, la mnima de 15C y la mxima de 52C (algunas cepas

crecen hasta 60C). Aunque no se considera una bacteria termodurica, algunas cepas

aguantan temperaturas de 75C durante 20-30 min; y presenta una mayor resistencia a

los antibiticos que el S. thermophilus, es inhibido por 0,3-0,6 U.I de penicilina.

Tambin es muy sensible a la sal; no se desarrolla en presencia de sales biliares o en

caldos con un 2% de NaCl.

Ambos microorganismos son microacrfilos, soportan una acidez elevada y viven en

simbiosis.

[Link].2. Bacterias Probiticas

Para que un microorganismo sea considerado como un probitico debe de cumplir con

la funcin de proteccin, tiene que formar parte de la flora intestinal normal, tener un

tiempo corto de reproduccin, ser capaz de producir compuestos antimicrobianos y ser

estable durante el proceso de produccin, comercializacin y distribucin para que

pueda estar vivo en el momento de ingerirse y llegar al intestino (Pardio, 1994).

Se trata como probiticos, a las bacterias cido lcticas integrantes de los gneros

Lactobacillus, Bifidobacterium, y algunas cepas de Streptococcus. Para que se considere

como alimento probitico un yogur debe de contener aparte de Lactobacillus bulgaricus

y Streptococcus thermophilus alguno de estos otros grupos bacterianos en suficiente

cantidad para que promuevan una actividad beneficiosa a nivel del intestino humano. La

mayora de las bacterias mueren cuando atraviesan la pared gstrica; pero los

probiticos, debido a su alto nivel de produccin de cido lctico, son capaces de

sobrevivir una vez han atravesado el tracto gastrointestinal. Ellos interaccionan con la

19
microflora y/o clulas de la mucosa intestinal, induciendo o modulando distintas

actividades biolgicas beneficiosas (Fuller, 1994) y (Lee et al., 1995).

La proteccin que dan estas bacterias se lleva a cabo por la competencia por los

nutrientes o los sitios de adhesin que impiden la multiplicacin de los patgenos y la

produccin de toxinas lo que imposibilita su accin daina, mediante esta modulacin

inmune protegen al husped de las infecciones induciendo a un aumento de la

produccin inmunoglobulinas, ampliacin de la activacin de las clulas mononucleares

y de los linfocitos. En el yogur, las protenas del suero (lactoalbmina y lactoglobulina)

permanecen dentro del producto, mientras que la presencia simultnea de lactosa y

cido lctico permiten que los oligoelementos tales como calcio y fsforo, resulten ms

disponibles para ser asimilados y en mayor abundancia por la accin de los probiticos

a nivel intestinal (Guerin, 1998).

[Link].2.1. Genero Bifidobacterium

Las bacterias probiticas del genero bfidobacterium, que constituyen una de las

pocas especies de bacterias predominantes en la microflora del colon a lo largo del ciclo

de vida, y se asocian a un estado saludable en humanos. Las funciones del

bfidobacterium en el colon no se han explicado en su totalidad; pero sus beneficios son

numerosos. Cuando se utilizan para fermentar la leche, proporcionan diferentes perfiles

de sabor en comparacin con aquellos productos que contienen solamente bacterias

acido lcticas (BAL); porque no solamente producen cido lctico sino tambin cido

actico, como uno de sus principales productos de fermentacin. Adems poseen

ventajas probiticas potenciales, en particular efectos antimicrobianos, en la reduccin

del riesgo de contraer cncer, y en el equilibrio de la microflora intestinal. En general,

las bfidobacterias son bastones Gram positivos y anaerobios estrictos, tienen

20
necesidades nutricionales especiales y crecen lentamente en la leche. Muy pocas cepas

se han adaptado lo suficientemente bien a la leche y pueden crecer en nmero suficiente

como para sobrevivir durante la vida de anaquel de las leches fermentadas. Pero en los

ltimos aos, estudios in vivo en adultos y en bebs han confirmado que algunas cepas

de bfidobacterias son capaces de sobrevivir a su paso a travs del tracto

gastrointestinal, y tambin sobreviven ms que algunas bacterias acido lcticas (BAL).

A medida que los retos tecnolgicos relacionados con su viabilidad y su enumeracin

estn siendo superados, las leches fermentadas por estos microorganismos (solos o en

combinacin con BAL) tienen la capacidad de proporcionar productos consistentemente

satisfactorios que contienen un gran nmero de microorganismos viables (Guerin,

1998).

El crecimiento del Bifidobacterium depende de los aminocidos disponibles que

son liberados por bacterias proteolticas, las cuales fueron utilizadas como iniciadores;

sin embargo los aminocidos esenciales estn presentes en la quinua, contribuyendo en

el crecimiento de las bacterias. Las bfidobacterias difieren del resto de las bacterias

acido lcticas, en que no solamente producen cido lctico sino tambin cido actico,

como uno de sus principales productos de fermentacin (Farnworth et al., 2007) y

(Scardovi, 1996).

[Link].2.1.1. Taxonoma

La clasificacin de las bifidobacterias ha sido modificada a lo largo de la historia

desde que se descubri en 1899 el microorganismo denominado Bacillus bifidus; y que

en la actualidad representa al gnero Bifidobacterium como especie tipo con el nombre

de Bifidobacterium bifidum. En los ltimos aos han aparecido nuevas cepas y se han

21
reclasificado, en la actualidad el gnero se encuentra formado por un total de 28

especies, como se muestra en la Tabla 2.

Tabla 2. La lista actual de especies incluidas dentro del gnero Bifidobacterium

ESPECIE REFERENCIA

Bifidobacterium psychraerophilum Reuter, 1963

Simpson et al., 2004a
Bifidobacterium pullorum Trovatelli et al.
Scardovi y Crociani, 1974
1974
Bifidobacterium ruminatium Biavati y (Mitsuoka 1969)
Mattarelli 1991
Bifidobacterium saeculare Biavati et al. Scardovi y Trovatelli, 1969
1992
Tissier, 1900
Bifidobacterium scardovii Hoyles et al.,
Orla-Jensen, 1924
2002
Scardovi et al., 1979
Bifidobacterium subtile Biavati et al. 1982
Bifidobacterium thermacidophilum subsp.
Reuter, 1963
porcinum Zhu et al. 2003
Scardovi y Crociani, 1974
subsp. thermacidophilum Dong et al. 2000
Bifidobacterium thermophilum Mitsuoka
Scardovi et al., 1979
1969
Scardovi y Trovatelli, 1969
Bifidobacterium psychraerophilum
Biavati et al., 1982
Simpson et al., 2004a
Bifidobacterium pullorum Trovatelli et al. Scardovi et al., 1979
1974
Bifidobacterium ruminatium Biavati y
Scardovi y Crociani, 1974
Mattarelli 1991
Bifidobacterium saeculare Biavati et al. Lauer, 1990
1992
Bifidobacterium scardovii Hoyles et al.,
Watabe et al., 1983
2002
Bifidobacterium subtile Biavati et al. 1982 Scardovi y Trovatelli, 1969
Bifidobacterium thermacidophilum subsp.
Sakata et al., 2002
porcinum Zhu et al. 2003
subsp. thermacidophilum Dong et al. 2000 Scardovi and Zani 1974
Bifidobacterium thermophilum Mitsuoka Biavati y Mattarelli 1991
1969
Bifidobacterium psychraerophilum
Biavati et al. 1982
Simpson et al., 2004a
Bifidobacterium pullorum Trovatelli et al. Scardovi et al. 1979
1974

22
Bifidobacterium ruminatium Biavati y Mitsuoka 1969
Mattarelli 1991 Yaeshima et al. 1992
Bifidobacterium saeculare Biavati et al.
Simpson et al., 2004a
1992
Bifidobacterium scardovii Hoyles et al., Trovatelli et al. 1974
2002
Bifidobacterium subtile Biavati et al. 1982 Biavati y Mattarelli 1991
Bifidobacterium thermacidophilum subsp. Biavati et al. 1992
porcinum Zhu et al. 2003
Hoyles et al., 2002
subsp. thermacidophilum Dong et al. 2000
Bifidobacterium thermophilum Mitsuoka
Biavati et al. 1982
1969
Bifidobacterium psychraerophilum Zhu et al. 2003
Simpson et al., 2004a Dong et al. 2000
Bifidobacterium pullorum Trovatelli et al.
Mitsuoka 1969
1974
Fuente: List of Bacterial names with Standing in Nomenclatura,
[Link] 2004.

[Link].2.1.2. Hbitats

Las bifidobacterias son habitantes normales del tracto gastrointestinal humano y de

diversos animales y estn presentes durante toda la vida pero en distintas cantidades,
apareciendo a los pocos das despus del nacimiento. Constituyen una de las especies
predominantes de la microflora del colon, junto con Peptostreptococcus, Eubacterias,
Clostridia y Bacteroides, las cuales se encuentran presentes en niveles que van desde
108 a 1011 bacterias por gramo de material del colon. Segn Guarner y Malagelada
(2003); Collins y Gibson (1999) la flora intestinal beneficiosa, representada
principalmente por los gneros Lactobacillus y Bifidobacterium, contribuye de forma
significativa al estado de salud del husped, por sus funciones:

Metablicas, interviniendo en la asimilacin de nutrientes de la dieta;

Protectoras, contribuyendo al efecto barrera y al desplazamiento de

microorganismos patgenos,

Trficas, interviniendo en la modulacin del sistema inmune y en el desarrollo y

la proliferacin celular.

23
 [Link].2.1.3. Caractersticas Culturales y Morfolgicas

Son bacilos de variada morfologa, generalmente de forma bacilar, pueden ser

cortos, regulares, con ramificaciones. Son Gram-positivos, inmviles, no son
esporulados y se tien irregularmente con azul de metileno. Son anaerobios estrictos,
sin embargo el grado de tolerancia al oxgeno depende de la especie y del medio de
cultivo (De Vries y Stouthamer, 1969) mencionado por Collado (2004). Esos bacilos,
con una pared externa irregular, son usualmente cncavos y sus extremidades pueden
adquirir diversas morfologas con extremos en forma de esptula. En algunos casos
incluso pueden presentar morfologa cocoidea. Se disponen aislados, en cadenas, en
empalizada o en forma de V, Y, T. La morfologa es muy variable y depende del medio
de cultivo donde se desarrollen, como se observa en la Figura 1.

Figura 1. Morfologa del gnero Bifidobacterium.

Su temperatura ptima de crecimiento oscila entre 36-38C para las especies de

origen humano y 41-43C para las especies de origen animal. No existe crecimiento a
temperaturas menores de 20C y las bacterias pertenecientes a este gnero no resisten

24
bien temperaturas mayores de 46C. Por ejemplo, Bifidobacterium bifidum muere a
60C, Rasic y Kurmann, (1983). El pH requerido para su crecimiento oscila entre 6.5-7
y a pHs menores o iguales el crecimiento es muy lento o incluso nulo, por todo ello, es
importante controlar el descenso del pH en los productos lcteos que contienen este
microorganismo. No existe crecimiento a pH menor de 4.0 o mayor de 8.0 (Scardovi,
1986). Gmez (1999) y Daz et al., (2004) indican que el pH desciende por accin de la
fermentacin microbiolgica de la lactosa, por las bacterias cidolcticas (Lactobacillus
delbrueckii subsp. bulgaricus y Streptococcus salivarius subsp. termophilus). La
apariencia de las colonias de este gnero bajo condiciones de anaerobiosis puede variar
mucho en funcin del medio que se emplee. En general, las colonias que se forman son
redondeadas, pueden ser brillantes y de dimetro muy variable, pero Scardovi (1986)
distingui dos diferentes tipos de colonias de B. bifidum, algunas colonias son muy
lisas, convexas, blancas, y brillantes, mientras que otras son rugosas, con bordes
desiguales. Por ello, la morfologa de colonia no es una buena referencia para la
identificacin del gnero.

[Link]. Requisitos de los Cultivos Probiticos

Segn Cspedes (1995), citada por Hernndez (2003) los microorganismos

probiticos se inoculan en una alta concentracin (mayor que 107 UFC/ml). Deben
cumplir con una serie de requisitos; entre ellos, los ms importantes son:

Mantener su viabilidad en las condiciones de preparacin del alimento en el que

se utilizan, por ejemplo, la presencia de azucares y aditivos.

Mantener su viabilidad en las condiciones de extrema acidez en el estmago, y

ser capaces de colonizar el intestino.

Tener una alta velocidad de crecimiento para dominar sobre los otros

microorganismos intestinales.

[Link]. Beneficios de la Ingestin del Yogur Probitico

Los efectos de los probiticos son varios, porque modifican la flora intestinal
evitando la colonizacin patgena, evitando su desequilibrio. En la actualidad, todava

25
se desconocen muchos aspectos relativos a su mecanismo de accin; sin embargo, se
reconoce su funcionalidad en (Lee, 1995):

Prevencin y tratamiento de enfermedades infecciosas

Disminucin de los niveles de colesterol.

Tratamiento de diarreas de origen bacteriano o viral.

Contribucin en el tratamiento de la intolerancia a la lactosa.

Estimulacin del sistema inmune.

Formacin de una flora intestinal balanceada.

Prevencin de ciertas manifestaciones alrgicas

Prevencin del cncer de Colon

Tratamiento contra tumores

Promueven la produccin de vitaminas como la B2, B6 y biotina.

Ayuda en la asimilacin de oligoelementos.

2.4. QUINUA

Quinua (Chenopodium quinoa Willd.), especie que posee una gran variabilidad y

diversidad, con elevadas cualidades nutricionales, fundamentalmente el de su protena,

considerada superior a la de los cereales. Este cultivo puede adaptarse muy fcilmente a

las nuevas exigencias de los mercados por alimentos de origen orgnico. Al igual de la

papa, maz, amaranto, lupino, oca, olluco, mashua y muchos otros cultivos andinos fue

base nutricional en los principales culturas americanas, con la llegada de los espaoles a

Amrica, se introdujo a otros cultivos, muchos de los cuales desplazaron a los

tradicionales, razn por la cual la quinua paso a constituirse en un cultivo marginal

practicado por algunas comunidades campesinas, con tecnologas propias de la cultura

andina. Hoy este cultivo ha tomado una inusitada importancia entre los agricultores y

26
agroindustriales, como consecuencia de la promocin sobre sus bondades nutricionales

que la quinua ofrece en sus granos, hojas e inflorescencias, para la alimentacin

humana. La saponina de los granos puede ser utilizada como detergente y medicina. En

Cuba ha sido introducido el cultivo de quinua a travs del instituto de Ciencia Animal,

con vista a su empleo al estudio de los aspectos de medicina humana relativo a las

saponinas y el colesterol srico; as la quinua se convierte en un producto de

exportacin, con un potencial enorme para ampliar la frontera agrcola de cultivo

(Apaza et al., 2005).

2.4.1. Descripcin

Nomenclatura Comn de la Quinua

Espaol : quinua, quinoa, quinqua, kinoa, trigo inca.

Quechua : kiuna, quinua.

Aymara : shupa, Jopa, Jupha, jiura, aara, ccallapi.

Chibcha : suba, pasca.

Mapuche : quinhuia, quinua.

Azteca : huatzontle.

Francs : quinoa, riz de peruo, anserine, petit riz de perou.

Ingls : quinoa, Petty rice, inca rice, Peruvian rice.

Alemn : Reismelde, ankaweizen, peruanisher, Reis-

Gerwacks.

Italiano : quinua, chinua.

27
Portugus : arroz miudo do Peru, quinoa.

La importancia de las protenas de la quinua se debe a la calidad de las mismas

(Repo-Carrasco et al., 2001). Las protenas de quinua tienen una composicin

balanceada de aminocidos esenciales parecida a la composicin aminocidica de la

casena, la protena de la leche.

2.4.2. Valor Nutritivo

[Link]. Protenas

Lo que caracteriza a la quinua es su elevado valor proteico, y que la calidad de sus

protenas y equilibrio, son superiores a las de los dems cereales, fluctuando entre 12,5

a 16,7%. El 37% de las protenas que posee la quinua est formado por aminocidos

esenciales. Los aminocidos esenciales son aquellos que no produce el organismo, por

lo que necesitan ser ingeridos a travs de la dieta. La carencia de estos aminocidos en

la dieta limita el desarrollo del organismo, ya que no es posible reponer las clulas de

los tejidos que mueren o crear nuevos tejidos, en el caso del crecimiento. Los

aminocidos esenciales para el ser humano son: valina, leucina, treonina, lisina,

triptfano, histidina, fenilalanina, isoleucina, arginina y metionina. Los aminocidos

que contiene en mayor cantidad con respecto a otros cereales son: cido glutmico,

cido asprtico, isoleucina, lisina, fenilalanina, tirosina y valina. El cido glutmico

participa en los procesos de produccin de energa para el cerebro y en fenmenos tan

importantes como el aprendizaje, la memorizacin y la plasticidad neuronal, el cido

asprtico mejora la funcin heptica y es indispensable para el mantenimiento del

sistema cardiovascular, la tirosina tiene un importante efecto antiestrs y juega un papel

fundamental en el alivio de la depresin y la ansiedad, entre otras funciones, la lisina

por ser su contenido el doble en la quinua que en los dems cereales, mejora la funcin

28
inmunitaria al colaborar en la formacin de anticuerpos, favorece la funcin gstrica,

colabora en la reparacin celular, participa en el metabolismo de los cidos grasos,

ayuda al transporte y absorcin del calcio e, incluso, parece retardar o impedir -junto

con la vitamina C- las metstasis cancerosas, por mencionar slo algunas de sus

numerosas actividades teraputicas (FAO, 2001). En la Tabla 3 se observa el valor

nutritivo de la quinua.

Tabla 3. Valor Nutritivo en Variedades de Quinua.

Componentes Blanca de Juli Kancolla Salcedo-INIA Pasankalla Chullpi

Humedad % 7.71 8.09 7.94 7.69 7,69

Cenizas % 2.81 2.58 2.36 3.30 1.20

Protenas % 14.73 14.73 14.49 20.80 8.60

Grasa % 5.79 6.89 8.08 6.10 1.50

Fibra % 3.50 3.29 3.34 2.78 1.99

Carbohidratos % 65.45 64.41 63.78 59.37 84.13

Energa (Kcal./100g) 396.2 402.10 409.4 401.3 382.9

Fuente: Laboratorio EE. [Link];2004, mencionado por Apaza et al., 2005

[Link]. Vitaminas

La quinua posee un alto contenido de vitaminas del complejo B, C y E, y su

contenido de vitamina B y C es superior a la del trigo. Es rica en caroteno y niacina

(B3). Contiene sustancialmente ms riboflavina (B2), tocoferol (vitamina E) y caroteno

que el trigo y el arroz (FAO, 2001).

[Link]. Grasa

29
En la quinua la mayora de sus grasas son monoinsaturadas y poliinsaturadas, que son

beneficiosas para el cuerpo por ser elementales en la formacin de la estructura y en la

funcionalidad del sistema nervioso y visual del ser humano, a la vez que disminuyen el

nivel de colesterol total y el colesterol LDL (colesterol malo) en la sangre, slo por

nombrar algunos de los mltiples beneficios que tiene el consumo de los cidos grasos

omega para el organismo. Los valores de cidos grasos en el grano crudo son de 8,1%,

52,3%, 23% de omega 3, omega 6, omega 9 respectivamente (FAO/OMS, 2001).

[Link]. Minerales

El grano de la quinua tiene casi todos los minerales en un nivel superior a los

cereales, contiene fsforo, calcio, hierro, potasio, magnesio, manganeso, zinc, litio y

cobre. Posee 1,5 veces ms calcio en comparacin con el trigo - este mineral es

responsable de varias funciones estructurales de huesos y dientes - y participa en la

regulacin de la transmisin neuromuscular de estmulos qumicos y elctricos, la

secrecin celular y la coagulacin sangunea. Por esta razn el calcio es un componente

esencial de la alimentacin. El aporte recomendado de calcio en nios de 4 a 9 aos es

de 600-700 mg/da y para adultos va entre 1000 a 1300 mg/da. El calcio es absorbido

por el organismo, debido a la presencia simultnea del zinc, lo que la hace muy

recomendable para, por ejemplo, evitar la descalcificacin y la osteoporosis, a

diferencia de otros alimentos que si contienen calcio pero que no logra ser absorbido

por el cuerpo. El contenido de zinc en la quinua es el doble que en el trigo, y comparada

con el arroz y el maz, las diferencias son an mayores (FAO/OMS, 2001).

2.4.3. Proceso de Transformacin de la Quinua

La quinua (Chenopodium quinoa Willd.), constituye un cultivo nativo de mucha

importancia para la alimentacin en la zona andina, es necesario darle la prioridad

30
necesaria en la investigacin desde el punto de vista agroindustrial para realizar el uso

adecuado de sus enormes potencialidades, a travs de una transformacin industrial que

permite valorar verdaderamente estos productos. La quinua perlada, hojuelas, harina,

expandido, colorantes, fideos, extruidos y otros, son productos que pueden ser

elaborados a travs de una serie de procesos y operaciones, mediante los cuales son

convertidos en alimentos muy apreciados y necesarios para la dieta del hombre. La

quinua es un alimento que rene caractersticas favorables y excepcionales para ser

transformadas y obtener productos agroindustriales que permita un uso mas elaborado y

directo, por ello es necesario tener una definicin clara de cada proceso (Rurales y Fair,

1992; mencionado por Apaza et al., 2005).

[Link]. Sucedneo de Leche a partir de Quinua

De la quinua se han obtenido, productos transformados y que actualmente se

encuentran en el mercado, los cuales requieren promocin e incluso difusin de la

forma de consumo puesto que la poblacin no conoce plenamente sus cualidades y

formas de preparacin: sin embargo, dada la necesidad de disponer de productos

nutritivos y cuyo conocimiento ya son de dominio pblico y de la poblacin

consumidora, se ha efectuado investigacin en los laboratorios de la Universidad

Nacional del Altiplano, para obtener leche de quinua, dado el gran potencial que tendra

esta forma de consumo de la protena vegetal de alta calidad nutritiva (Mujica et al.,

2006).

[Link]. Beneficios del Sucedneo de Leche a partir de Quinua

La nutricin moderna, va confirmando con su minuciosa descripcin qumica las

razones por las que los indgenas americanos, intuitivamente, eligieron la quinua y otros

cultivos andinos como preciosas semillas para incluir en la alimentacin. Entre un 14 y

31
18% de su composicin esta formada por sus protenas, predominando tres aminocidos

importantes para la asimilacin de otras pequeas sustancias fundamentales en el

crecimiento. Todo parece indicar que la ausencia de osteoporosis tiene relacin con la

dieta del altiplano que es rica en granos que contienen fitoestrogenos que son sustancias

que permiten la absorcin de calcio y esto hace que las mujeres de esta regin no sufran

osteoporosis ni problemas propios de la menopausia (Mujica et al., 2006).

[Link]. Elaboracin del Sucedneo de Leche a partir de Quinua

La elaboracin del sucedneo de leche de quinua se muestra en la Figura 2, cuyo

proceso consiste en recepcionar la quinua variedad Chullpi lavada, desaponificada y

secada; se lleva a coccin en una olla de presin durante 30 minutos, utilizando 5 litros

de agua para 1kg. de quinua, luego se procede a enfriar a temperatura ambiente. Se

licua, agregando su propio lquido en la que se produjo la coccin del grano, la relacin

de quinua: agua es de 1:2, la licuacin se da a alta velocidad durante 5 10 minutos. Se

separa la parte solida de la liquida, pasando por un tamiz # 100, para obtener un

sucedneo de leche a partir de quinua de alta calidad. Se da una emulsin homognea,

lo cual la har ms cremosa y ms uniforme. Se somete a ebullicin durante 2 minutos.

32
 Figura 2. Diagrama de flujo del Proceso de Elaboracin del Sucedneo de leche a
partir de quinua

QUINUA

LAVADO
RECEPCIN
DESAPONIFICADO
SECADO

Olla a presin
COCCIN t =30 min.

QUINUA: AGUA (1:2)

MOLIENDA
Tiempo de licuado: 5 minutos

FILTRADO Tamiz #
100

HOMOGENIZACIN Y 2 minutos
EBULLICIN

FILTRADO Tamiz #
100

SUCEDNEO DE LECHE DE
QUINUA

Fuente: Mujica, 2006

2.5. MICROBIOLOGA PREDICTIVA

La microbiologa predictiva consiste en la prediccin a travs de modelos, el

comportamiento de microorganismos alimentarios en respuesta a las condiciones

ambientales que se dan en la produccin de alimentos y en las operaciones del

procesado. Los modelos predicen el tiempo que tardaran estos microorganismos en

33
empezar a proliferar bajo determinadas condiciones y a qu velocidad creceran una vez

que comienzan (Aguirre y Aquino, 2008).

La microbiologa predictiva utiliza modelos matemticos (construidos a partir de datos

de pruebas de laboratorio) conocidos como los modelos predictivos en software para

describir grficamente esta respuesta. Las pruebas microbiolgicas bsicas de

laboratorio se utilizan tpicamente en la toma de decisiones crticas relacionadas con la

inocuidad alimentaria y la vida de anaquel de los productos. El crecimiento,

supervivencia e inactivacin de los microorganismos en los alimentos son respuestas

reproducibles, es por ello que los modelos predictivos sirven para evaluar de forma

combinada el efecto de factores ambientales que puedan afectarlos (Gutirrez, 2011)

2.5.1. Modelos Matemticos Predictivos

Los modelos se evalan bajo condiciones especficas para ver cuales satisfacen los

estndares establecidos y demuestran un nivel de aceptabilidad que permita su uso por

la industria agroalimentaria (Aguirre y Aquino, 2008).

[Link]. Modelo Gompertz Modificado

La ecuacin de Gompertz fue originalmente desarrollada para describir la mortalidad

humana como una funcin de la edad. Gibson et al., (1987) fueron los primeros en

utilizar la ecuacin de Gompertz para ajustar las curvas de crecimiento microbiano y

encontraron que la ecuacin poda describir con precisin las fases exponencial y

estacionaria de las curvas sigmoides de crecimiento microbiano, pero no era eficaz para

la fase de latencia. En la Figura 3 se observa el modelo de Gompertz.

34
Figura 3. Grfica del Modelo de Gompertz (Cabeza, 2013)

Para solventar este problema, Gibson et al., (1987) propusieron el modelo

modificado de Gompertz, el cual fue considerado como el mejor modelo sigmoidal para

curvas de crecimiento (Gibson et al., 1987; Zwietering et al., 1990; McMeckin et al.,

1993). Con la adopcin de este modelo por el consorcio Food MicroModel en el Reino

Unido y el grupo Pathogen Modelling Program (PMP) del USDA, este modelo ha sido

ampliamente usado en Microbiologa Predictiva. El modelo modificado de Gompertz se

expresa en la siguiente ecuacin:

{B[tM]} ]
Y(t) = A + Ce[e

Segn Zwietering et al., (1992) en el modelo anterior podemos deducir que:

Y (t) = Conteo de la poblacin al tiempo t (log10 poblacin).

A = Logaritmo de la poblacin al tiempo , lo que equivale a la densidad de poblacin

al tiempo inicial (Y min = Y0).

C = Incremento final en el nmero de bacterias (log10), equivalente a Ymx Y min.

35
M = Tiempo en el cual el cultivo alcanza su mxima velocidad de crecimiento (h)

B = Velocidad mxima de crecimiento al tiempo M (1/h), equivalente a la pendiente en

el punto de inflexin.

t = tiempo (h).

Si tomamos la ecuacin modificada de Gompertz en una curva de crecimiento,

los parmetros del modelo pueden representarse grficamente como se muestra en la

Figura 3:

A partir de la ecuacin anterior, pueden calcularse diversos parmetros del

crecimiento tales como:

1
Fase de latencia: =M- B (horas)

e
Tiempo de generacin: Tg = log2 BC (horas)

BC
Velocidad mxima de crecimiento: mx = (log UFC/ml)/hora
e

2.5.2. Construccin del Modelo

Agatangelo (2007) indica que para la elaboracin de un modelo existen algunos

procedimientos bsicos que han de ser tenidos en cuenta para la generacin de datos.

Para ello, es necesario hacer la eleccin de la cepa microbiana a estudiar, y, a

continuacin, decidir el mtodo para la generacin de datos.

[Link]. Generacin de Datos

El desarrollo del modelo requiere la generacin de datos de experimentacin bajo

condiciones controladas y conocidas. Mientras mayor sea la cantidad de datos

recolectados, mayor ser el carcter predictivo y la confiabilidad del modelo. Para

36
encajar en un modelo, se deben recolectar los datos durante todo el periodo de

crecimiento y frecuentemente se deben crear cientos de curvas primarias de crecimiento

(Cayr et al., 2010).

Para seguir el curso del crecimiento es necesario efectuar mediciones cuantitativas.

El crecimiento exponencial es, por lo general, equilibrado, de modo que para poder

determinar la velocidad de crecimiento puede utilizarse la medicin de cualquier

propiedad de la biomasa. Por comodidad, las propiedades habitualmente medidas son la

masa celular o el nmero de clulas (Stanier et al., 1989).

[Link]. Mtodo de Recuento Total en Placa

El mtodo estndar utilizado para monitorizar el crecimiento de la poblacin

bacteriana es el recuento total (Potter y Hotchkiss, 1999). Para la estimacin exacta de

los parmetros de una curva de crecimiento, son importantes el nmero y la calidad de

las observaciones (recuentos) hechas (Poschet et al., 2004)

Segn Madigan y Martinko (2004) el recuento microscpico directo se cuenta tanto

las clulas vivas como muertas. En muchos casos interesa contar solo las clulas vivas,

y con este fin se han desarrollado mtodos de recuento de clulas viables. Una clula

viable se define como aquella que es capaz de dividirse y dar lugar a una descendencia;

y el mtodo usual para realizar una determinacin de clulas viables se basa en contar el

nmero de las clulas de la muestra que es capaz de formar colonias sobre un medio

solido adecuado. Por esta razn, el recuento de clulas viables tambin se llama

recuento en placa o recuento de colonias. En este procedimiento se supone que cada

clula viable puede formar una colonia. Hay dos maneras de realizar un recuento en

placa para viables: el mtodo de extensin en placa y el mtodo de vertido en placa:

37
 En el mtodo de extensin en placa un cierto volumen de cultivo diluido que no

suele ser superior a 0,1 ml, se extiende sobre la superficie de una placa con

medio solido utilizando un asa estril de extensin. La placa se incuba despus

hasta que aparecen en las colonias y se cuenta su nmero. Es importante que la

superficie del medio este seca de modo que el lquido de la muestra se absorba.

No se suelen usar volmenes mayores de 0,1 ml porque el exceso de lquido no

se absorbe, y origina problemas en el recuento al favorecer la extensin y

mezcla de las colonias.

En el mtodo de vertido en placa se pipetea un volumen conocido (normalmente

0,1-1,0 ml) de cultivo en una placa Petri estril sobre la que se aade el medio

con agar fundido y se mezcla todo bien con suaves movimientos de la placa

sobre la superficie de la mesa antes de dejar que se solidifique. Como la muestra

se mezcla con el medio fundido, se puede usar volmenes de inculo mayores

que en el mtodo de recuento por extensin; sin embargo, con este mtodo el

organismo que se cuenta debe ser capaz de resistir la temperatura del agar

fundido a 45C.

2.5.3. Descripcin Matemtica del Modelo

Los datos obtenidos son convenientemente seleccionados y se ajustan a un modelo

primario, que explica la evolucin del comportamiento microbiano a lo largo del tiempo

de anlisis. Posteriormente, los parmetros obtenidos del modelo se relacionan con los

factores considerados mediante un modelo secundario. El ajuste de las funciones puede

emplear mtodos de regresin lineal o no lineal dependiendo del tipo de modelo. El

ajuste del modelo a los datos observados est basado en el mtodo de mnimos

cuadrados, por el cual se intenta minimizar los valores residuales, esto es, la suma de los

38
cuadrados de las diferencias entre los valores observados y predictivos (Mc Meekin et

al., 1993).

2.6. CRECIMIENTO MICROBIANO

El crecimiento se define como un aumento en el nmero de clulas microbianas de una

poblacin; tambin puede medirse como un incremento de la masa celular. La velocidad

de crecimiento es el cambio en el nmero de clulas o en la masa celular

experimentando por unidad de tiempo. Durante el ciclo de divisin celular, todos los

componentes estructurales de la clula se duplican. El intervalo para la formacin de

dos clulas a partir de una supone una generacin, y el tiempo transcurrido para que

esto ocurra se llama tiempo de generacin. Por tanto el tiempo de generacin es el

tiempo que se requiere para que la poblacin se duplique razn por la cual a veces el

tiempo de generacin se llama tiempo de duplicacin. Durante cada generacin, tanto el

nmero de clulas como la masa celular se duplican. Los tiempos de generacin varan

ampliamente entre los distintos microorganismos. Muchas bacterias tienen tiempo de

generacin comprendidos entre 1-3 horas, pero unas cuantas crecen muy rpidamente y

se dividen en tan solo 10 minutos mientras que otras tardan varios das. Adems el

tiempo de generacin de un microorganismo determinado tambin es funcin del medio

de cultivo utilizado y de las condiciones de incubacin empleadas (Farnworth, 2003).

2.6.1. Fase de Crecimiento

La fase de latencia, es el perodo de ajuste que las clulas experimentan al ser

transferidas de un medio al otro antes de iniciar su crecimiento. La duracin de esta fase

puede variar dependiendo del crecimiento de las clulas en el inculo, el cual debe tener

una edad tal que la mayor parte de las clulas que contiene deben encontrarse en fase

exponencial y metablicamente activas. Las clulas se adaptan al nuevo ambiente. No

39
existe o existe muy poco crecimiento (Castillo, 2013). Durante esta fase los

microorganismos se toman un tiempo para adaptarse a su nuevo ambiente fisicoqumico

y en ocasiones se sintetizan nuevas enzimas o componentes estructurales (Snchez,

2003; Duarte, 1998). La fase exponencial o logartmica es aquella durante la cual los

microorganismos crecen y se dividen hasta el nivel mximo posible, en funcin de su

potencial gentico, tipo de medio y las condiciones en que crece. En este perodo hay

una relacin lineal entre el logaritmo del nmero de clulas (o cualquier otra propiedad

medible de la poblacin) y el tiempo. Los microorganismos se dividen y duplican en

nmero en intervalos regulares. Como cada clula se divide en un momento ligeramente

diferente del resto, la curva de crecimiento aumenta suavemente, en lugar de realizar

discretos saltos. La fase estacionaria es resultado del agotamiento de los nutrientes

disponibles o del efecto de acumulacin de productos txicos de metabolismo que

tienen como consecuencia la disminucin de la velocidad del crecimiento. La transicin

entre la fase exponencial y la fase estacionaria se caracteriza por un crecimiento

desequilibrado, durante el cual los diversos componentes celulares son sintetizados a

diferentes velocidades. Y la fase de muerte es consecuencia de diversos factores: uno

importante es el agotamiento de las reservas celulares de energa. Al igual que el

crecimiento, la muerte tambin asume una funcin exponencial que puede ser

representada por una disminucin lineal del nmero de las clulas viables a lo largo del

tiempo (Madigan et al., 1997; Prescott et al., 1999)

2.6.2. Parmetros cinticos del Crecimiento Microbiano

[Link]. Tiempo de Latencia ()

El tiempo de latencia es la duracin de la fase de latencia. Un fenmeno inherente a la

cintica microbiana es la latencia, la cual es tpicamente observada como la respuesta

retardada de la poblacin microbiana ante un (repentino) cambio en el ambiente. La fase

40
de latencia puede producirse en ambos procesos, de crecimiento y de inactivacin

(Swinnen et al., 2004).

En el caso de las condiciones de crecimiento, la fase de latencia es el perodo de

ajuste durante el cual las clulas bacterianas se modifican por si mismas con el objetivo

de sacar ventaja del nuevo ambiente e iniciar el crecimiento exponencial (Buchanan y

Klawitter, 1991). Por tanto, durante la fase de latencia las clulas se adaptan a su nuevo

entorno induciendo o reprimiendo la sntesis y actividad de determinadas enzimas,

iniciando la replicacin de su material gentico, y, en el caso de las esporas,

diferencindose en clulas vegetativas (Montville, 2000).

La fase de latencia del crecimiento microbiano fue definida en 1914 por Penfold

como el intervalo entre la inoculacin del cultivo bacteriano y el tiempo del comienzo

de su velocidad mxima de crecimiento. Y suele ser convencionalmente medido como

el punto en el cul la pendiente de la fase exponencial de crecimiento (en una grfica

semi-logartmica) intercepta la lnea horizontal trazada desde la concentracin celular

inicial (Robinson et al., 1998).

Buchanan y Solberg definieron en 1972 la fase de latencia como el tiempo necesario

para que la densidad de poblacin se duplique (Robinson et al., 1998).

La duracin de la fase de latencia se ve afectada por factores como la identidad y el

fenotipo de la bacteria, el tamao del inculo, la historia fisiolgica de la poblacin, y

por los cambios en el medio fsico-qumico, tales como la temperatura, el pH, la

actividad de agua y la disponibilidad de nutrientes (Buchanan y Cygnarowicz, 1990).

41
 [Link]. Tiempo de Generacin (Tg)

El tiempo de generacin es el tiempo necesario para duplicar la poblacin bacteriana.

Segn Stanier et al., (1989) se define como el tiempo requerido para que todos los

componentes del cultivo aumenten en un factor de 2.

Segn Garcia (1995) llamado tambin tiempo de duplicacin (g) de una generacin

(doubling time) es el tiempo que tarda una poblacin en reproducirse hasta alcanzar el

doble de poblacin o lo que es lo mismo el tiempo medio que tarda una clula en

reproducirse.

Durante este perodo de generacin el nmero de clulas y la masa celular se

duplica. El tiempo de generacin vara entre los distintos microorganismos. Muchas

bacterias tienen tiempos de generacin de 1 a 3 horas, conocindose pocos

microorganismos que crezcan muy rpidamente dividindose en menos de 10 minutos.

Otras tienen tiempos de generacin de varias horas o incluso das. El tiempo de

generacin es til como indicador del estado fisiolgico de una poblacin celular, y es

usado con frecuencia para comprobar el efecto negativo o positivo de un determinado

tratamiento sobre un cultivo bacteriano (Madigan et al., 1997).

Agatangelo (2007) asocia el tiempo de generacin (Tg) a la fase exponencial, donde

los microorganismos se dividen y duplican en nmero en intervalos regulares, tambin

indica que cada clula se divide en un momento ligeramente diferente al resto, y la

curva de crecimiento aumenta suavemente. Ishibashi y Shimamura (1993) menciona

que el S. thermophilus acta como un eliminador de oxgeno en el bio-yoghurt

facilitando el crecimiento del Bifidobacterium.

El tiempo de generacin est directamente relacionado con la velocidad de crecimiento

exponencial, que se define como la pendiente de la curva de crecimiento logartmico en

42
la fase de crecimiento exponencial. Generalmente, estos dos parmetros son estimados

por el ajuste de los modelos primarios (Delignette y Muller, 1998), tales como la

ecuacin modificada de Gompertz (Gibson et al., 1988; Zwietering et al., 1990) o el

modelo propuesto por (Baranyi y Roberts, 1994).

[Link]. Velocidad Mxima de Crecimiento (max)

Como ya se ha indicado anteriormente, el crecimiento se define como un incremento en

el nmero de clulas microbianas en una poblacin, lo cual tambin puede ser medido

como un incremento en masa microbiana. En este contexto, la velocidad de crecimiento

se define como el cambio en nmero de clulas o masa celular por unidad de tiempo

(Madigan et al., 1999). Segn (Orozco, 2003), los microorganismos toman los

nutrientes del medio y lo utilizan para llevar a cabo todas sus funciones metablicas:

mantenimiento, crecimiento, reproduccin y biosntesis de metabolitos. Segn Montes

(2013) en promedio las bacterias poseen valores de max cercanos a 0.9 UFC/ml/h1, y

Saura (2003) menciona que las bacterias estn entre 0,6-1,0 UFC/ml/h1.

Un cultivo microbiano creciendo en equilibrio imita una reaccin autocataltica de

primer orden, es decir, la velocidad del aumento de bacterias en un tiempo dado es

proporcional al nmero o masa de bacterias presentes durante ese tiempo (Stanier et al.,

1989).. La tasa del crecimiento exponencial se ve influenciada por las condiciones

ambientales (temperatura, composicin del medio), as como por las caractersticas

genticas del microorganismo (Madigan et al., 1997) y afectada por el incremento de la

acidez en el medio (Cury, 2003).

La velocidad mxima de crecimiento especfico es de considerable importancia a

nivel industrial, debido a que es en este punto donde se obtiene el valor mximo de a

niveles de saturacin de sustrato, relacionando la dependencia de los microorganismos

43
con las condiciones del fermentador, donde a medida que aumenta la densidad de

poblacin decrece la concentracin del sustrato limitante del crecimiento, causando un

descenso de (Sanchez, 2003) (Duarte, 1998). A bajas concentraciones de nutriente, se

establece que la velocidad de crecimiento especfica depende de la concentracin de

nutrientes. A altas concentraciones, la velocidad de crecimiento especfica alcanza

valores mximos, fijados por la cintica intrnseca de las reacciones intracelulares, las

cuales estn relacionadas en la trascripcin y traslacin del DNA (Orozco, 2003).

44
 III. MATERIALES Y MTODOS

3.1. LUGAR DE EJECUCIN

El trabajo de investigacin se ejecut en el laboratorio de Microbiologa Agroindustrial,

de la Escuela Profesional de Ingeniera Agroindustrial de la Universidad Nacional del

Altiplano, ubicado a una altitud de 3827 m.s.n.m. en la ciudad de Puno.

3.2. MATERIAL EXPERIMENTAL

Las materias primas que se utilizaron fueron: leche entera fresca adquirida del Distrito

de Paucarcolla y Quinua variedad Chullpi que se adquiri de la Asociacin de

Productores Agroindustriales del Distrito de Cabana.

3.3. MATERIALES Y EQUIPOS

3.3.1. Materiales

Matraces Erlenmeyer, boca angosta graduado de 100, 250 y 500 ml Prex

Probeta graduada, con pie hexagonal y pico de 50, 100 y 250 ml

Esptulas de acero inoxidable

Frasco lavador piceta de polietileno boca angosta cap. 500ml

Gradilla esterilizable sin alambre No-Wire

Mechero de alcohol

Placas Petri marca STERIPLAN, en vidrio cal soda de 60

Vasos de precipitado de 50ml Prex

Pipetas volumtricas 0.5, 1, 5, 10 y 20 ml

Tubo de ensayo de 20 ml

Vasos precipitados de 25 y 50 ml, graduado con pico Beaker

Filas de 500 ml Prex

Varillas de agitacin

45
 3.3.2. Equipos de Laboratorio

Autoclave de mesa 16 Litros AUTBN 30 marca FRAVILL

Balanza analtica precisin marca SARTORIUS CP3235 Cap. de 0.001 a 320 g

Cocina elctrica

Contador de colonias BIO TECHNOLOGY.

Estufa Universal e incubadoras marca MEMMERT

pH-metro SevenGo de METTLER TOLEDO (0.0 a 14.0)

Esterilizador

Refrigeradora

Termmetros -5~120C marca Boeco.

Acidmetro

Lactoscan LA

3.3.3. Reactivos

Hidrxido de sodio (NaOH 0,1N)

Solucin alcohlica de fenolftalena al 1%

Alcohol etlico puro 96

3.3.4. Medio de Cultivo

Agar Man Rogosa Sharpe (MRS) provedo por MERCK KGaA.

Agua de Peptona marca MAST, provedo por Biosym E.I.R.L. Peruana.

Agua destilada qumicamente pura desmineralizada desionizada DIAMEDSA.

3.4. METODOLOGA EXPERIMENTAL

El presente trabajo de investigacin se ha realizado segn el diagrama experimental

mostrado en la Figura 4.

46
Figura 4. Diagrama de flujo del comportamiento cintico del Bifidobacterium BB12, en

el yogurt probitico enriquecido con sucedneo de leche de quinua.

LECHE pH: 6,7

Densidad: 1,029
Acidez:: 0,16% ac. lctico
RECEPCIN Grasa: 5,02

Leche entera de vaca:

100%, 85% y 80% HOMOGENIZACIN
Sucedneo:
0%, 15% y 20%
PASTEURIZACIN 85C por 20 minutos

Cultivos lcticos:
- Lactobacillus ENFRIAMIENTO T: 42C
bulgaricus,
- Streptococcus
thermophilus INOCULACIN T: 42C
Cultivo Probitico:
T: 42C
Bifidobacterium INCUBACIN Tiempo: 6 horas
BB12

0, 30, 60, 90, 120, 180,

240, 300 y 360 min.
REFRIGERACIN MUESTREO Para conteo de UFC/ml,
pH y acidez.

BATIDO Para Bifidobacterium,

SIEMBRA
Diluciones de 10-4 y 10-5

ANLISIS SENSORIAL Para Bifidobacterium,

INCUBACIN
a 35-37C por 24-72 horas

CONTEO DE COLONIAS En UFC/ml

PRE-PROCESAMIENTO DE DATOS En hojas de clculo Excel

AJUSTE DE CURVA Con el mtodo de lneas

DE CRECIMIENTO y un Software Estadstico

- Tiempo de adaptacin,
DETERMINACIN DE - Tiempo de generacin, Tg
PARMETROS - Veloc. Mx. Crecimiento,
mx

INTERPRETACIN DE RESULTADOS

47
3.4.1. Descripcin del Proceso Experimental

Recepcin de la materia prima

En esta etapa se realiz la recepcin de la leche, se filtr, para retener

materias extraas presentes, se analiz la densidad (1,029g/cm3), pH (6,7),

acidez (0,16% acido lctico) y grasa (5,02%) en el equipo analizador

LACTOSCAN LA.

Homogenizado

Se adiciono el sucedneo de leche de quinua (0%, 15% y 20%) a la leche

entera de vaca, homogenizndolo para obtener uniformidad.

Pasteurizacin

En esta operacin se calent la leche con agitacin constante para que no

se adhiera en el fondo de la olla y fundamentalmente para destruir bacterias

contaminantes (flora bacteriana competente del cultivo lctico). La temperatura

adecuada de pasteurizacin fue de 85 C por 30 minutos (Gmez, 1999).

Enfriamiento

Despus de la pasteurizacin se enfri a una temperatura de 42C para

llegar a una temperatura adecuada para el desarrollo de las bacterias cido

lctica del yogurt.

Inoculacin

Se inoculo con las cepas de Lactobacillus bulgaricus y Streptococcus

thermophilus, que se prepar y dosifico segn lo indicado por el proveedor de

los cultivos, aqu tambin se adiciono el cultivo probitico (Bifidobacterium BB-

12). La temperatura que se trabajo es de 42 C.

48
 Incubacin

En esta operacin se coloc la muestra en la cmara incubadora por un

tiempo de 6 horas a una temperatura constante de 42 C, para el desarrollo del

coagulo.

Muestreo

En esta etapa de la investigacin se sac muestras de 10 ml de muestra

para la siembra de la bacteria probitica estudiada (leche en proceso de

fermentacin) a los 0, 30, 60, 90, 120, 180, 240, 300 y 360 minutos. As mismo

se ha extrado muestras de 25 ml y 9 ml para determinar el pH y la acidez

respectivamente.

Siembra

En esta operacin se realiz las diluciones para la siembra de la bacteria

probitica. Para Bifidobacterium se hizo la siembra por duplicado las diluciones

bajas de 10-4 y 10-5.

Incubacin

Se coloc las placas Petri estriles en forma invertida en las estufas

calibradas a temperaturas indicadas para el desarrollo y crecimiento de las

bacterias.

Conteo de colonias

El conteo de las colonias despus de haber sido incubadas se realiz en

un contador de colonias BYO TECHNOLOGY.

49
 Pre procesamiento de datos

Una vez obtenida los datos de pH, acidez y nmero de microorganismo,

se agruparon los datos en una hoja de clculo de Excel para expresar la acidez en

% de cido lctico, el nmero de microorganismos en UFC/ml y log UFC/ml.

Ajuste de curvas de crecimiento

Con la ayuda de una hoja de clculo Excel se grafic el tiempo de

incubacin (proceso de fermentacin) versus el log UFC/ml y por el mtodo de

las lneas se determinaron los parmetros experimentales de crecimiento para

cada tratamiento, para luego ajustarlos con modelos de regresin no lineal cada

uno de los modelos primarios, con un software estadstico.

Determinacin de parmetros

Los valores obtenidos en la etapa anterior fueron introducidos a una hoja

de clculo del Excel, para luego reemplazarlos en los modelos matemticos

primarios.

Interpretacin de resultados

Finalmente se interpret los resultados para cada uno de los tratamientos

estudiados.

Refrigeracin

Se coloc en la refrigeradora, controlando una temperatura entre 4 -

10C.

50
 Anlisis Sensorial

Se realiz una prueba de escala hednica de 7 puntos (Anexo 6), donde se

convocaron a 16 evaluadores para calificar el yogur probitico enriquecido con

sucedneo de leche de quinua y que calificaron segn su agrado en cuestin de sabor,

aroma y acidez.

3.5. MTODO DE ANLISIS

3.5.1. Mtodo para el Anlisis Microbiolgico

[Link]. Preparacin de Muestras y Diluciones

Para la realizacin de los anlisis microbiolgicos, se utiliz la metodologa

propuesta por Montiel et al., (2010). Utilizando 10 g de muestra, los cuales fueron

diluidos en 90 ml de una solucin de agua peptonada al 0.1% estril. Posteriormente se

realiz las diluciones decimales pertinentes, de las cuales se inoculo 1mL, en placas

Petri estriles (100 mm x 15 mm).

Preparacin de las diluciones: Las diluciones se prepararon a partir de la muestra

homogenizada, tomando de ella 1 ml que se deposit en un tubo que contena 9 ml de

agua de peptona estril al 1%. Despus de agitado el tubo, se tom 1 ml que se aadi a

un nuevo tubo con 9 ml de agua de peptona estril y as sucesivamente, hasta conseguir

la dilucin deseada.

[Link]. Cuantificacin del Bifidobacterium

Se utiliz Agar MRS (De Man Rogosa Sharpe), el cual se disolvi en agua destilada

desionizada, ajustando el pH a 5.7, posteriormente se esteriliz a 118C durante 20 min.

A las placas Petri estriles se les adicion de 15 a 20 ml de medio de cultivo entre 40 y

45C, se dej solidificar para luego hacer la siembra en superficie de las muestras (10 -5

51
y 10-4) homogenizadas, luego se incubaron entre 35 y 37C, durante 72 horas, la

cuantificacin se realiz contando el nmero de unidades formadoras de colonias por

mililitro (UFC/ml), con la ayuda de un contador de colonias.

3.5.2. Mtodo para el anlisis Fisicoqumico

[Link]. Determinacin del pH

La medicin del pH fue realizada a los 0, 30, 60, 90, 120,180, 240, 300 y 360

minutos de incubacin (proceso de fermentacin) con un pH-metro marca SevenGo

de METTLER TOLEDO, de acuerdo con el mtodo de Coloma (2009). Se tom 25 ml

de muestra, en un vaso de 50 ml, posteriormente se midi el pH por introduccin directa

del electrodo en la misma.

[Link]. Determinacin de Acidez Titulable

La determinacin de la acidez se realiz por el mtodo propuesto por Lpez y Malo,

(2000). Para el tratamiento en estudio, en todo el proceso de fermentacin y formacin

del coagulo, en los tiempos de estudio establecidos; por titulacin con hidrxido de

sodio de normalidad conocida (N=0.1), tomando una muestra de 9 ml, empleando como

indicador solucin alcohlica de fenolftalena a la concentracin de 1%; con la siguiente

formula:

(ml NaOH)(N)(Meq)
%Acido = 100
Peso de la muestra

Dnde:

ml NaOH: Gasto de NaOH

N: Normalidad del NaOH

Meq: Mili equivalente de cido predominante en la muestra (Meq = 90/1000 = 0.09)

52
 Cabe indicar que este mtodo de titulacin se utiliz para la leche y para las

muestras de leche fermentada con bacteria probitica y sucedneo de leche de quinua en

el proceso de incubacin.

3.5.3. Determinacin de la Curva de Crecimiento y Parmetros de

Crecimiento Cintico

Los datos de crecimiento en Log UFC/ml y tiempo, fueron introducidos en una hoja

de clculo Excel para determinar los valores de los parmetros (A, B, C y M), para

luego ser ajustados con el modelo matemtico primario de Gompertz modificado con

Software Statgraphics y se efectu el proceso analtico.

[Link]. Modelo Gompertz Modificado

Para determinar los parmetros de crecimiento cintico: Tiempo de adaptacin (),

Tiempo de generacin (Tg) y Velocidad mxima de crecimiento (mx), se bas en el

modelo de Gompertz modificado, planteado por Gibson et al., (1987).

El modelo utilizado queda expresado de la siguiente forma:

log N = A + Cexp (exp(B(t M)))

Dnde:

Log N: Es el logaritmo decimal (Log10) del nmero de microorganismos (Log

UFC/ml) al tiempo t.

A: Es el logaritmo decimal del nmero inicial de microorganismos (Log

UFC/ml).

B: Es la velocidad de crecimiento mxima relativa al tiempo M (Log

UFC/ml/hora).
53
 C: Es el incremento en el logaritmo del nmero de microorganismos cuando el

tiempo se incrementa indefinidamente (nmero de ciclos de crecimiento) (Log

UFC/ml).

M: Es el tiempo requerido para alcanzar la mxima velocidad de crecimiento

(horas).

Los parmetros obtenidos a partir de la ecuacin de Gompertz modificado

permitieron calcular:

BC
Velocidad mxima de crecimiento: mx = e
(log UFC/ml)/hora

1
Fase de latencia: = M B (horas)

e
Tiempo de generacin: Tg = log2 BC (horas)

3.6. UNIDADES DE ANLISIS Y OBSERVACIONES

3.6.1. Factores de Estudio

a) Temperatura constante: 42C

b) Porcentaje de sucedneo de leche de quinua

0%

15%

20%

3.6.2. Factores de Respuesta

a) Parmetros cinticos de crecimiento microbiano

Tiempo de adaptacin ( )

Velocidad mxima de crecimiento (mx.)

Tiempo de generacin (Tg)

b) Propiedades Fisicoqumicas

pH

54
 Acidez titulable (expresado en % cido lctico)

c) Caractersticas Sensoriales

Aroma

Sabor

Acidez

3.7. DISEO DE INVESTIGACIN

Para procesar los datos obtenidos durante la investigacin se aplic:

Para los tres objetivos se aplic el anlisis de varianza (ANVA), con un 95.0%

de significancia (P<0.05) para determinar las posibles diferencias entre los tratamientos.

Se trabaj con un software estadstico.

55
 IV. RESULTADOS Y DISCUSIN

4.1. TIEMPO DE ADAPTACIN (), TIEMPO DE GENERACIN (Tg) Y

VELOCIDAD MXIMA DE CRECIMIENTO (max) DEL

Bifidobacterium BB12 EN EL PROCESO DE ELABORACIN DEL

YOGURT PROBITICO A DIFERENTES SUSTITUCIONES DE

SUCEDNEO DE LECHE DE QUINUA (Chenopodium quinoa Wild)

Para el mejor entendimiento de los resultados se ha visto conveniente presentarlos en

forma independientemente, siendo estos, los siguientes:

4.1.1. Tiempo de adaptacin () del Bifidobacterium en el proceso de

elaboracin del yogurt probitico a diferentes sustituciones de sucedneo de

leche de quinua

En la Tabla 4, se presenta los resultados del tiempo de adaptacin (), determinada

con los valores (M y B) mostrado en el Anexo 1, obtenidos por la metodologa de ajuste

de la curva de crecimiento con el modelo matemtico de Gompertz modificado

expresado por (Gibson et al., 1987); las curvas de crecimiento ajustadas para los 3

Tratamientos, se observan en las figuras del Anexo 3.

Tabla 4. Tiempo de Adaptacin () del Bifidobacterium

TRATAMIENTO (horas)

T1 (0% sucedneo de leche de quinua) 0,957

T2 (15% sucedneo de leche de quinua) 1,049

T3 (20% sucedneo de leche de quinua) 1,087

56
 Las curvas de crecimiento del Bifidobacterium para los 3 tratamientos, observados

en el Anexo 3 muestran la etapa de fase de latencia o adaptacin. En este tiempo las

bacterias se adaptan al nuevo ambiente y no existe o existe muy poco crecimiento segn

Castillo (2013). Segn Buchanan y Klawitter (1991) esta fase es el perodo de ajuste

durante el cual las clulas bacterianas se modifican por si mismas con el objetivo de

sacar ventaja de las nuevas condiciones ambientales (de abundancia de nutrientes) e

iniciar el crecimiento exponencial, Por lo que podemos citar que los microorganismos

se toman el tiempo para adaptarse a su nuevo ambiente fisicoqumico segn reportado

por Snchez (2003) y Duarte (1998). En la presente investigacin se observ que a 0%

se registr un tiempo de adaptacin de 0,957 horas (57,42 min), mientras que a 15% se

registr 1,049 horas (62,94 min) y a 20%, 1,087 horas (65,22 min); se observa que a

medida que aumenta el porcentaje de sustitucin de sucedneo de leche de quinua el

tiempo de adaptacin del Bifidobacterium es ms largo. Por lo que coincidimos con lo

aportado por Fu (2012) a medida que aumenta la concentracin de nutrientes en el

medio la fase de adaptacin se incrementa; y como indica Buchanan y Cygnarowicz

(1990) que la duracin de la fase de latencia se ve afectada por factores como el

fenotipo de la bacteria, el tamao del inculo, los cambios en el medio fsico-qumico,

tales como la temperatura, el pH y la disponibilidad de nutrientes.

Tabla 5. Anlisis de Varianza (ANVA) del tiempo de adaptacin () del

Bifidobacterium.

F. de V. G.L. S.C. C.M. RAZN-F VALOR-P Significancia

Tratamientos 2 0,467 0,233 6,47 0,032 *

Error exptal 6 0,216 0,036

Total 8 0,683

57
 En la Tabla 5 se presenta el anlisis de varianza (ANVA) observndose que existe

una diferencia estadsticamente significativa (p<0,05) entre los tiempos de adaptacin

del Bifidobacterium en los diferentes niveles de sustitucin de sucedneo de leche de

quinua), con un nivel de confianza del 95,0 %.

El coeficiente de determinacin (R) indica que el modelo as ajustado explica 68,33%

de la variabilidad en el tiempo de adaptacin (). El coeficiente de determinacin

ajustada (R), que es ms apropiada para comparar el modelo con diferente nmero de

variables independientes, es 57,78%, datos que coincide con lo reportado por Rodrguez

(2003), entre 48,30 y 68,53, estos valores bajos se debe a lo mencionado por

Agatangelo (2007) un bajo R2 ajustado podra ser porque es usado con datos recientes y

posiblemente expone un comportamiento lgico. Cabe indicar que en este nivel de

sustitucin el tiempo de adaptacin es influido por la sustitucin y un 42,22% es

influido por otros factores (factores ambientales y nutricionales).

4.1.2. Tiempo de Generacin (Tg) del Bifidobacterium en el proceso de

elaboracin del yogurt probitico a diferentes sustituciones de sucedneo de

leche de quinua

En el Anexo 2, se presenta los resultados del tiempo de generacin (Tg),

determinada con los valores (B y C) mostrada en el Anexo 1, obtenidos por la

metodologa de ajuste de la curva de crecimiento con el modelo matemtico de

Gompertz modificado expresado por (Gibson et al., 1987). Las curvas de crecimiento se

muestran en el Anexo 3.

El tiempo de generacin es el intervalo de tiempo requerido para que el

Bifidobacterium empiece a duplicarse. Lo que indica que el nivel de sustitucin de

sucedneo de leche de quinua influye en el tiempo de generacin.

58
 Agatangelo (2007) indica que cada clula se divide en un momento ligeramente

diferente al resto, y la curva de crecimiento aumenta suavemente; segn Garcia (1995)

es el tiempo que tarda una poblacin en reproducirse hasta alcanzar el doble de

poblacin o lo que es lo mismo el tiempo medio que tarda una clula en reproducirse; y

segn Mateos (2010) el tiempo que requiere una clula para completar su ciclo es muy

variable y depende de factores nutricionales y genticos. En la investigacin se observa

que a 0% se alcanz un Tg de 0,311 horas (18,66 min), para 15% un Tg de 0,390 horas

(23,40 min) y para 20% un Tg de 0,169 horas (10,14 min). Segn Madigan et al.

(1997) la mayora de las bacterias tienen tiempos de generacin de 1 a 3 horas,

conocindose pocos microorganismos que crezcan muy rpidamente dividindose en

menos de 10 minutos, dato que coincide con el tratamiento al 20% con 10,14 minutos,

esto puede ser a las altas concentraciones de nutrientes y a un valor alto de la max

como lo menciona Yousef y Carlstrom (2006), que durante la fase exponencial, el

tiempo de generacin alcanza valores bajos debido a que la velocidad mxima de

crecimiento alcanza valores elevados. Pisabarro (1998) indica que los tiempos de

generacin de bacterias en ambientes favorables pueden ser muy cortos (valores de Tg

de 20 minutos), en la presente investigacin se observ valores cercanos en los

tratamientos al 0 y 15%, para lo cual mencionamos que el medio ambiente es ptimo

para el crecimiento del Bifidobacterium.

Los datos menores de tiempos de generacin observados en los 3 tratamientos de la

presente investigacin pueden estar atribuidos a lo mencionado por Agatangelo (2007)

quien indica que el incremento del pH disminuye el tiempo de generacin en las

bacterias, esto puede ser por varios factores como lo menciona Snchez (2012) vara

significativamente segn la especie bacteriana y segn las condiciones del medio de

cultivo; tambin como el fenotipo de la bacteria, el tamao del inculo, y por los

59
cambios en el medio fsico-qumico, tales como el pH y sobre todo por la

disponibilidad de nutrientes (Buchanan y Cygnarowicz, 1990).

En la Tabla 6 se muestra el anlisis de varianza (ANVA) observndose que existe

una diferencia estadsticamente significativa (p<0,05) entre los tiempos de generacin

del Bifidobacterium y los diferentes niveles de sustitucin de sucedneo de leche de

quinua, con un nivel de confianza del 95,0 %. Con un coeficiente de determinacin (R)

de 65,96% y ajustada (R), de 55,09%, estos valores bajos se debe a lo mencionado por

Agatangelo (2007). El 44,91% nos indica que el tiempo de generacin puede haber sido

afectada por otros factores como el incremento del pH de 4,63-5,33 y las altas

concentraciones de nutrientes (niveles de sustitucin de sucedneo de leche de quinua

de 0-20%) lo que significa que coincide con el tratamiento 20% el tiempo de generacin

se reduce, pero en el caso del tratamiento al 15% es mayor al tratamiento anterior, esto

podra ser a causa de las bajas concentraciones de nutrientes (sucedneo de leche de

quinua al 15%); u otros factores como indica Buchanan y Cygnarowicz (1990).

Tabla 6. Anlisis de Varianza (ANVA) para el tiempo de generacin (Tg) del

Bifidobacterium.

F. de V. G.L. S.C. C.M. RAZN-F VALOR-P Significancia

Tratamientos 2 0,188 0,093 5,72 0,041 *

Error exptal. 6 0,097 0,016

Total 8 0,285

En conclusin el Bifidobacterium crece y se duplica ms rpido que otras bacterias

y esto va relacionado a la concentracin de nutrientes (nivel de sustitucin del

sucedneo de leche de quinua) y a valores elevados de la velocidad mxima de

60
crecimiento como lo indica Yousef y Carlstrom (2006). Por lo tanto Chr Hansen (2006)

menciona que el crecimiento es mucho ms rpido con menor tiempo de generacin.

4.1.3. Velocidad Mxima de Crecimiento (max) del Bifidobacterium en el

proceso de elaboracin del yogurt probitico a diferentes sustituciones de

sucedneo de leche de quinua.

En el Anexo 2, se presenta los resultados la velocidad mxima de crecimiento

(mx), determinada con los valores (B y C) mostrada en el Anexo 1, estos valores

fueron obtenidos por la metodologa de ajuste de la curva de crecimiento (Anexo 3) con

el modelo matemtico de Gompertz modificado expresado por (Gibson et al., 1987).

La velocidad mxima de crecimiento es de considerable importancia a nivel

industrial, debido a que es en este punto donde se obtiene el valor mximo de a

niveles de saturacin de sustrato, donde a medida que aumenta la densidad de poblacin

decrece la concentracin del sustrato limitante del crecimiento, causando un descenso

de (Snchez, 2003) (Duarte, 1998).

El coeficiente de determinacin (R) indica que el modelo as ajustado explica

65,77% de la variabilidad en la velocidad mxima de crecimiento (mx). El

coeficiente de determinacin ajustada (R), que es ms apropiada para comparar el

modelo con un diferente nmero de variables independientes, es 54,30%, estos valores

bajos se debe a lo mencionado por Agatangelo (2007). Este efecto significativo del %

de sustitucin demuestra la variacin de los resultados obtenidos en la presente

investigacin; donde se observa que a 0% se alcanz un mx de 0,968 Log

UFC/ml/hora, para 15% un mx de 0,771 Log UFC/ml/hora y para 20% un mx de

1,780 Log UFC/ml/hora. En donde Montes (2013) indica que en promedio las bacterias

poseen de valores de mx cercanos a 0,9 UFC/ml/hora; pero Saura (2003) reporta

61
valores de 0,6-1,0 UFC/ml/hora, datos que coincide con los tratamientos 1 y 2 donde

Orozco (2003) reporta que la velocidad de crecimiento especfica depende de la

concentracin de nutrientes, a altas concentraciones la velocidad de crecimiento

especfica alcanza valores mximos. De acuerdo a lo reportado la velocidad mxima de

crecimiento del tratamiento 3 estn directamente relacionados con el porcentaje de

sustitucin de sucedneo de leche de quinua como menciona Farnworth et al. (2007) el

crecimiento del Bifidobacterium depende de los aminocidos disponibles que son

liberados por bacterias proteolticas, las cuales fueron utilizadas como iniciadores; sin

embargo los aminocidos esenciales estn presentes tambin en la quinua,

contribuyendo en el crecimiento de las bacterias.

En la Tabla 7 se muestra el anlisis de varianza (ANVA) observndose que

existe una diferencia estadsticamente significativa (p<0,05) entre un tratamiento y otro,

con un nivel de 95,0 % de confianza. Por lo que la velocidad maxima de crecimiento es

afectada por el incremento de la acidez en el medio y es menor en los tratamientos

donde mayor acidificacin tiene (Cury, 2013) coincidiendo con el tratamiento 2 que es

baja la concentracin de nutrientes, y todo lo contrario en el tratamiento 3 donde la

acidez es baja, max y la concentracin de nutrientes es alta como lo reporta Orozco

(2003).

Tabla 7. Anlisis de Varianza (ANVA) para Velocidad Mxima de Crecimiento

(mx) del Bifidobacterium.

F. de V. G.L. S.C. C.M. RAZN-F VALOR-P Significancia

Tratamientos 2 1,681 0,840 5,76 0,0401 *

Error exptal 6 0,875 0,146

Total 8 2,556

62
 4.2. DETERMINACIN DEL PH Y ACIDEZ EN EL PROCESO DE

ELABORACIN DEL YOGURT PROBITICO ENRIQUECIDO CON

SUCEDNEO DE LECHE DE QUINUA

4.2.1. Determinacin del pH

En la Figura 5 se muestra la evolucin del pH a lo largo del proceso de

fermentacin de la leche durante la incubacin, desde las 0 minutos a 360 minutos,

resultados mostrados en el Anexo 4.

Como se observa en la Figura 5, el proceso de fermentacin comprendida entre

las 0 a 360 minutos (0 a 6 horas) se produce un descenso del pH en los 3 tratamientos a

diferentes porcentajes de sustitucin de sucedneo de leche de quinua donde alcanzan

valores de 4,63 al 0%, 4,87 al 15% y 5,33 al 20%. Segn Scardovi (1996) el pH

requerido para el crecimiento del Bifidobacterium oscila entre 6,5 7, y a pH < 6,5 el

crecimiento es muy lento y a 4>pH>8 no existe crecimiento.

En el tratamiento 1 que es al 0% en los primeros 30 minutos fue optimo el

crecimiento del Bifidobacterium, pero los siguientes 330 minutos el crecimiento es ms

lento, llegando a un pH final de 4,63; datos similares fueron reportados por Cruz (2008)

en un producto fermentado con licuado de soya con un pH de 4,60 despus de 6 horas

de fermentacin; y un pH de 4,64 en un yogurt con cepas probiticas (cepas de

Bifidobacterium y Lactobacillus acidphilus) (por Ruiz et al., 2009).

En los tratamientos 2 al 15% tiene un pH de 4,87 y 3 al 20% con 5,33, que entre 0 a

90 minutos tiene el pH ptimo para el crecimiento del Bifidobacterium, pero a los

siguientes 120 minutos hasta los 360 minutos el pH desciende y el crecimiento es ms

lento. Estos datos coinciden con lo mencionado por Gmez (1999) y Daz et al., (2004)

que el pH desciende por accin de la fermentacin microbiolgica de la lactosa y por las

63
bacterias cido lcticas (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus y Streptococcus

salivarius subsp. termophilus). En conclusin el aumento de los niveles de sustitucin

de sucedneo de leche de quinua 0-20% aumenta el valor del pH, es decir, que a ms

concentracin de nutrientes (sucedneo de leche de quinua) ms alto es el pH. Para lo

cual afirmamos que si aumentamos el nivel de sustitucin, la velocidad de crecimiento

del Bifidobacterium tendra un valor alto, un tiempo de generacin muy rpido, pero el

tiempo de adaptacin sera demasiado largo, es decir, que el proceso de elaboracin

este yogurt seria ms de 6 horas.

El anlisis de varianza mostrado en la Tabla 8 se observa que no existe una

diferencia estadsticamente significativa (p>0,05) sobre el pH con un 95,0% de nivel de

confianza. Es decir que no existe efecto alguno sobre el pH, para los 3 tratamientos

(0%, 15% y 20% de sucedneo de leche de quinua).

Tabla 8. Anlisis de varianza (ANVA) para la variacin de pH.

F. de V. G.L. S.C. C.M. RAZN-F VALOR-P Significancia

Tratamientos 2 0,004 0,002 0,49 0,635 n.s.

Error exptal. 6 0,025 0,004

Total 8 0,029

64
 Figura 5. Descenso del pH para los 3 tratamientos

7,0

T1 - 0%
T2 - 15%
6,5 T3 - 20%

6,0

pH
5,5

5,0

4,5
30 60 90 120 150 180 210 240 270 300 330 360 390
Tiempo (minutos)

65
 4.2.2. Determinacin de la Acidez

En la Figura 6, se muestra la variacin de la acidez expresado en % de cido lctico,

durante el proceso de fermentacin desde las 0 a 6 horas (360 minutos). Los resultados

para los diferentes tratamientos se muestran en el Anexo 5.

En los tratamientos 1 (0%), 2 (15%) y 3 (20%) reportaron valores 0,94; 1,0 y 0,87

% de cido lctico respectivamente, datos que coinciden con los tratamientos 1 y 3 con

lo reportado por Mora et al. (2014) que tiene valores de 0,8 1 % de cido lctico en el

yogur probitico de aguaymanto enriquecido con quinua; el tratamiento 2 se encuentra

en el rango de acidez reportado por Briceo et al., (2001) y Ramrez, (2007) que

menciona los valores de acidez del Bifidobacterium que se encuentra entre 1,00 -

1,79% de cido lctico. Arenas et al. (2012), investigo la leche fermentada enriquecida

con quinua utilizando una mezcla comercial de BAL y bacterias probiticas, en donde

la acidez titulable aument con la adicin de harina de quinua alcanzando el

requerimiento ms rpidamente, seguramente producido por la mayor actividad del

cultivo cido lctico ya que se observ mayor crecimiento de BAL en los tratamientos

con adicin de quinua, lo que sugiere un posible efecto prebitico.

Arenas (2012), Ventura et al. (2007), (Roy (2005) y Hansen (2004) mencionan que

durante el trnsito en el tracto gastrointestinal las bfidobacterias son muy estables y

tienen una alta resistencia a las condiciones extremas de acidez en el estmago y a la

inmediata presencia de sales biliares del duodeno para asegurar su funcionalidad, por

lo tanto pueden llegar a su sitio de accin para colonizar y ejercer su efecto probitico.

Pocos fabricantes evalan la supervivencia de las diferentes cepas en sus frmulas. Y si

las cepas no resisten los cidos estomacales y la bilis del intestino, los beneficios de los

probiticos se ven severamente reducidos, por lo que mencionamos que el

66
Bifidobacterium tiene tolerancia a la acidez en valores menores de los ptimos. En

conclusin el mejor tratamiento para un mejor crecimiento de las bfidobacterias es el 2

con un 15% de sucedneo de leche de quinua, ya que coincide su acidez con lo

reportado por Briceo et al., (2001) y Ramrez, (2007), es decir, que el Bifidobacterium

se encuentra en un medio con acidez ptima para su crecimiento. Por lo que a un

incremento mayor de 15% de sucedneo de leche de quinua el crecimiento del

Bifidobacterium es lento ya que tiene menores valores de acidez con respecto al ptimo.

El anlisis de varianza mostrado en la Tabla 9 se observa que no existe una

diferencia estadsticamente significativa (p>0,05) entre la media de acidez entre un

porcentaje de sucedneo de leche de quinua y otro, con un 95,0% de nivel de confianza.

Tabla 9. Anlisis de varianza (ANVA) para la variacin de acidez.

F. de V. G.L. S.C. C.M. RAZN-F VALOR-P Significancia

Tratamientos 2 0,004 0,002 0,49 0,637 n.s.

Error exptal 6 0,0264 0,004

Total 8 0,031

Por lo que se podra decir que la leche aunque sea incubado a diferentes porcentajes de

sucedneo de leche de quinua (0%, 15% y 20%), el comportamiento de la acidez a lo

largo del proceso de elaboracin. no ser diferente en cada tratamiento.

67
 Figura 6. Desarrollo de la acidez (% cido lctico) para los 3 tratamientos.

1,2

1,0

0,8
T1 - 0%
T2 - 15%
T3 - 20%
0,6

0,4

Acidez (% cido lctico)

0,2

0,0
0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300 330 360 390

Tiempo (minutos)

68
 4.3. DETERMINAR LAS CARACTERSTICAS SENSORIALES (SABOR,

AROMA Y ACIDEZ)

Para el mejor entendimiento de los anlisis y mayor precisin de los resultados se ha

visto conveniente presentar los resultados del estudio en forma independientemente:

4.3.1. Sabor

Reyes (2008) indica que la fermentacin de la lactosa (el azcar de la leche) en

cido lctico es lo que da al yogur su textura y sabor tan distintivo. Se realiz la prueba

de comparacin mltiple de Tukey mostrado en la Tabla 10, el sabor ms aceptado por

los evaluadores fue del yogur probitico con 15% de sucedneo de leche de quinua

mostrados en el Anexo 8, donde se observa el 1,00% de cido lctico, valor que se

encuentra dentro de los rangos y que a su vez aporta con el sabor cido y fresco de las

leches fermentadas (Olivera, 2011); seguido del tratamiento con 0% que no muestra

diferencias estadsticamente significativas y est a la vez con el tratamiento con 20%

que tambin no muestra diferencias estadsticamente significativas, pero si existe

diferencias estadsticamente significativas con un nivel del 95,0% de confianza entre los

tratamientos 15% y 20%, donde el sabor a quinua es mnima al 15% mientras que en el

20% se siente con intensidad.

Tabla 10. Prueba de comparacin mltiple de Tukey del Sabor

TRATAMIENTOS Media Separacin de medias Tukey

(P<0.05) *
T2 (15% Sucedneo de leche de Quinua) 6,130,81 A

T1 (0% Sucedneo de leche de Quinua) 5,750,86 AB

T3 (20% Sucedneo de leche de Quinua) 4,921,34 B

*Tratamientos seguidos de diferente letra son significativamente diferentes (P<0.05).

69
 Estos resultados probablemente se deben a la incorporacin de Lb, bulgaricus, S.

thermophilus y Bifidobacterium que garantizan la produccin de caractersticas

agradables y beneficiosas en la leche, ya que prolongan la vida til, y producen un

sabor y consistencia agradable; adems de contribuir a la buena salud de las personas

que los consumen habitualmente. Mateos (2004) indica que al yogur se puede agregar

saborizantes o trozos de frutas, aunque algunos consumidores lo prefieren en forma

natural.

El anlisis de varianza mostrado en la Tabla 11 se observa que existe una diferencia

estadsticamente significativa (p<0,05), entre la media de aroma entre un tratamiento y

otro, con un nivel del 95,0%. Concluimos que l % de cido lctico en el tratamiento

con 15% de sucedneo de leche de quinua con acidez de 1,00% de cido lctico influye

en el sabor del yogur probitico enriquecido con sucedneo de leche de quinua.

Tabla 11. Anlisis de varianza (ANVA) para la variacin del sabor.

F. de V. G.L. S.C. C.M. RAZN-F VALOR-P Significancia

Tratamientos 2 11,7917 5,89583 5,56 0,0069 *

Error exptal 45 47,6875 1,05972

Total 47 59,4792

4.3.2. Aroma

Reyes (2008) reporta que la dependencia entre ambas bacterias se da inicialmente

porque actividad la proteoltica del Lb. bulgaricus estimula el crecimiento de del S.

thermophilus por la liberacin de aminocidos y pptidos de la leche, que dan cuerpo y

aroma al yogur. En la Tabla 12 se observa que el tratamiento 2 (yogur probitico con

70
15% de sucedneo de leche de quinua) con un pH de 4,87 fue el ms aceptado por los

evaluadores, seguido de los tratamientos 1 y 3 con pH de 4,63 y 5,33 respectivamente,

grafico mostrado en el Anexo 8. Como Amiot (1991) indica que el descenso del pH

contribuye al aroma caracterstico del yogur. Se realiz la prueba de comparacin

mltiple de Tukey mostrado en la Tabla 12 donde nos indica que no hay diferencia

estadsticamente significativa entre los tratamientos 15% - 0% y 0% - 20%, pero si

existe diferencias estadsticamente significativas con un nivel del 95,0% de confianza

entre los tratamientos 15% y 20%.

Tabla 12. Prueba de comparacin mltiple de Tukey del Aroma

TRATAMIENTOS Media Separacin de medias Tukey

(P<0.05) *
T2 (15% Sucedneo de leche de Quinua) 5,940,68 A

T1 (0% Sucedneo de leche de Quinua) 5,440,73 A B

T3 (20% Sucedneo de leche de Quinua) 4,880,62 B

*Tratamientos seguidos de diferente letra son significativamente diferentes (P<0.05).

A estos resultados Mejia (2006) indica que los productos lcteos tienen mayor

aceptacin cuando de aade productos saborizantes, por lo que se debe tomar en cuenta

la referencia que exige la Norma general para Aditivos alimentarios (CODEX STAN

192-2000) en el que el yogur debe presentar un aroma caracterstico del producto

fresco.

Concluyendo podemos indicar que el pH no influye en el aroma del yogurt

probitico enriquecido con sucedneo de leche de quinua. Es decir que el aroma del

yogurt es mnimamente percibido.

71
 El anlisis de varianza mostrado en la Tabla 13 se observa que existe una diferencia

estadsticamente significativa (p<0,05), entre la media de aroma entre un tratamiento y

otro, con un nivel del 95,0% de confianza.

Tabla 13. Anlisis de varianza (ANVA) para la variacin del aroma.

F. de V. G.L. S.C. C.M. RAZN-F VALOR-P Significancia

Tratamientos 2 9,04167 4,52083 9,86 0,0003 *

Error exptal 45 20,625 0,458333

Total 47 29,6667

4.3.3. Acidez

Gomez (1999) indica que el sabor cido caracterstico del yogur es causado

principalmente por la formacin de cido lctico, originado por las bacterias cidos

lcticas que atacan a la lactosa y que adems el cido lctico es parte esencial en la

elaboracin de yogur. La acidez ms aceptado por los evaluadores fue el del yogur

probitico con 15% de sucedneo de leche de quinua que tiene 1,00 % de cido lctico,

seguido de los tratamientos de 0% y 20 con 0,94 y 0,87% de cido lctico

respectivamente, grafico mostrado en el Anexo 8. Se realiz la prueba de comparacin

mltiple de Tukey mostrado en la Tabla 14 donde nos indica que no hay diferencia

estadsticamente significativa entre los tratamientos 15% - 0% y 0% - 20%, pero si

existe diferencias estadsticamente significativas con un nivel del 95,0% de confianza

entre los tratamientos 15% y 20%.

72
Tabla 14. Acidez

TRATAMIENTOS Media Separacin de medias Tukey

(P<0.05) *
T2 (15% Sucedneo de leche de Quinua) 5,690.79 A

T1 (0% Sucedneo de leche de Quinua) 5,060,68 A B

T3 (20% Sucedneo de leche de Quinua) 4,941,03 B

*Tratamientos seguidos de diferente letra son significativamente diferentes (P<0.05).

Por tal razn podemos mencionar que l % de cido lctico influye en la acidez del

yogurt probitico enriquecido con sucedneo de leche de quinua, es decir que mientras

ms bajo sea la acidez en combinacin de sucedneo de leche de quinua menos tendr la

aceptacin de los consumidores.

El anlisis de varianza mostrado en la Tabla 15 se observa que existe una diferencia

estadsticamente significativa (p<0,05), entre la media de la acidez entre un tratamiento

y otro, con un nivel del 95,0%.

Tabla 15. Anlisis de varianza (ANVA) para la variacin de la acidez.

F. de V. G.L. S.C. C.M. RAZN-F VALOR-P Significancia

Tratamientos 2 10,1667 5,08333 7,08 0,0021 *

Error exptal 45 32,3125 0,718056

Total 47 42,4792

73
 V. CONCLUSIONES

1. Para el Bifidobacterium, el Tiempo de Adaptacin () es influido por el nivel de

sustitucin de sucedneo de leche de quinua, a medida que aumenta los niveles

de sustitucin, la adaptacin del Bifidobacterium es ms lento; el Tiempo de

Generacin (Tg) es influido por el nivel de sustitucin de sucedneo de leche de

quinua y el pH, el Bifidobacterium crece y se duplica en menos tiempo que

otros microorganismos; la Velocidad Mxima de Crecimiento (mx) es influida

por el nivel de sustitucin de sucedneo de leche de quinua, este valor se

incrementa a medida que aumenta la concentracin de nutrientes (sucedneo de

leche de quinua). Y por ltimo podemos mencionar que el tratamiento 2 (15%)

obtuvo valores >107 UFC/ml por lo que se considera un yogurt probitico.

2. Los valores de pH obtenidos fueron influenciados por el nivel de sustitucin de

leche de quinua, a mayor nivel sustitucin los valores de pH aumentan. En la

acidez (% cido lctico) no es influido por el nivel se sustitucin de sucedneo

de leche de quinua, pero podemos afirmar que la sustitucin ms adecuada es de

15% porque su valor de acidez se encuentra en los rangos permitidos.

3. El anlisis sensorial fue influenciada por la adicin de distintos porcentajes de

sustitucin de sucedneo de leche de quinua. En general el tratamiento mejor

aceptado por los jueces fue el 2 con 15 % de sucedneo de leche de quinua,

seguido de los tratamientos 1 y 3, esto se dio para el sabor, aroma y acidez. El

sabor y acidez es influido por el % de cido lctico y el aroma es influido por el

pH.

74
 VI. RECOMENDACIONES

Se recomienda lo siguiente:
1. Estudiar el efecto de la inclusin de otros cereales andinos en el yogur para

determinar su efecto en la composicin fsica, qumica, microbiolgica, y

organolptica.

75
 VII. BIBLIOGRAFA

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87
ANEXO

88
 ANEXO 1. Parmetros ajustados por el Modelo de Gompertz modificado para Bifidobacterium BB-12.

TRATAMIENTO A B C M R

Log UFC/ml Log UFC/ml/hora Log UFC/ml horas

T1 (0% sucedneo de leche de quinua) 5,882 1,917 1,373 1,479 0,998

T2 (15% sucedneo de leche de quinua) 5,659 1,515 1,383 1,709 0,994

T3 (20% sucedneo de leche de quinua) 4,304 2,047 2,365 1,094 0,992

ANEXO 2. Parmetros de crecimiento cintico del Bifidobacterium BB-12.

mx
TRATAMIENTO (horas) Tg (horas)
Log UFC/ml/hora
T1 (0% sucedneo de leche de quinua)
0,957 0,968 0,311
T2 (15% sucedneo de leche de quinua)
1,049 0,771 0,390
T3 (20% sucedneo de leche de quinua)
1,087 1,780 0,169
: Tiempo de adaptacin
mx: Velocidad mxima de crecimiento
Tg: Tiempo de generacin

89
ANEXO 3. Curvas de crecimiento del Bifidobacterium BB-12 ajustadas por el Modelo

de Gompertz Modificado.

Anexo 3. 1. Curva de crecimiento del Bifidobacterium BB-12 para el Tratamiento 1, al

0% de Sucedneo de Leche de quinua

Curva de Crecimiento del Bifidobacterium al 0% de Sucedaneo de Leche de Q uinua

7,3

7
Log UFC/ml

6,7

6,4

6,1

5,8
0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300 330 360 390 420
Tiempo (minutos)

Anexo 3. 2. Curva de crecimiento del Bifidobacterium BB-12 para el Tratamiento 2, al

15% de Sucedneo de Leche de quinua

Curva de Crecimiento del Bifidobacterium al 15% del Sucedaneo de Leche de Q uinua

7,1

6,8
Log UFC/ml

6,5

6,2

5,9

5,6
0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300 330 360 390 420

Tiempo (minutos)

90
Anexo 3. 3. Curva de crecimiento del Bifidobacterium BB-12 para Tratamiento 3, para

el Tratamiento 2, al 20% de Sucedneo de Leche de quinua

Curva de Crecimiento del Bifidobacterium al 20% de Sucedaneo de Leche de Q uinua

6,8

6,3
Log UFC/ml

5,8

5,3

4,8

4,3
0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300 330 360 390 420
Tiempo (minutos)

91
 ANEXO 4. Resultados de la evolucin del pH obtenidos en cada tratamiento

TRATAMIENTO 1 TRATAMIENTO 2 TRATAMIENTO 3

TIEMPO 0% Sucedneo de Leche de Quinua 15% Sucedneo de Leche de Quinua 20% Sucedneo de Leche de Quinua

R1 R2 R3 PROM R1 R2 R3 PROM R1 R2 R3 PROM

0 6,7 6,6 6,7 6,67 6,7 6,7 6,6 6,67 6,7 6,6 6,7 6,67

30 6,7 6,5 6,6 6,60 6,7 6,7 6,6 6,67 6,6 6,6 6,6 6,60

60 6,6 6,2 6,6 6,47 6,7 6,6 6,6 6,63 6,6 6,5 6,6 6,57

90 6,5 6,0 6,5 6,33 6,6 6,6 6,6 6,60 6,6 6,5 6,5 6,53

120 6,3 5,8 5,9 6,00 6,2 6,5 6,4 6,37 6,0 6,5 6,0 6,17

180 5,6 5,6 5,8 5,67 5,3 5,2 5,2 5,23 5,6 5,9 5,9 5,80

240 5,1 5,4 5,7 5,40 5,4 4,9 5 5,10 5,4 5,7 5,6 5,57

300 4,8 5 5,6 5,13 5,2 4,8 4,8 4,93 5,4 5,5 5,4 5,43

360 4,2 4,7 5 4,63 5,2 4,7 4,7 4,87 5,2 5,5 5,3 5,33

92
 ANEXO 5. Resultados de la evolucin de la acidez (% cido lctico) obtenidos en cada tratamiento

TRATAMIENTO 1 TRATAMIENTO 2 TRATAMIENTO 3

0% Sucedneo de Leche de Quinua 15% Sucedneo de Leche de Quinua 20% Sucedneo de Leche de Quinua
TIEMPO
R1 R2 R3 PROM R1 R2 R3 PROM R1 R2 R3 PROM

0 0,27 0,22 0,17 0,22 0,17 0,15 0,15 0,16 0,17 0,29 0,14 0,20

30 0,31 0,24 0,17 0,24 0,18 0,16 0,17 0,17 0,18 0,29 0,14 0,20

60 0,35 0,25 0,19 0,26 0,23 0,2 0,19 0,21 0,21 0,3 0,15 0,22

90 0,46 0,33 0,3 0,36 0,28 0,23 0,21 0,24 0,26 0,33 0,2 0,26

120 0,55 0,4 0,4 0,45 0,37 0,29 0,29 0,32 0,46 0,4 0,21 0,36

180 0,68 0,65 0,5 0,61 0,71 0,67 0,6 0,66 0,71 0,68 0,56 0,65

240 0,79 0,74 0,69 0,74 0,86 0,93 0,83 0,87 0,72 0,82 0,63 0,72

300 0,86 1,06 0,79 0,90 0,9 0,97 0,88 0,92 0,8 0,84 0,67 0,77

360 0,91 1,06 0,85 0,94 1,02 1,03 0,96 1,00 0,81 1,07 0,74 0,87

93
ANEXO 6. Anlisis sensorial del yogur probitico enriquecido con sucedneo de leche

de quinua Escala Hednica.

Nombre: Muestra N:

Estimado Sr. (Srta.), lea cuidadosamente cada una de las preguntas y marque con una
x la respuesta que a ud. le parezca.

A. SABOR DEL PRODUCTO

Me gusta muchsimo
Me gusta moderadamente
Me gusta poco
No me gusta ni me disgusta
Me disgusta poco
Me disgusta moderadamente
Me disgusta muchsimo

B. AROMA DEL PRODUCTO

Me gusta muchsimo
Me gusta moderadamente
Me gusta poco
No me gusta ni me disgusta
Me disgusta poco
Me disgusta moderadamente
Me disgusta muchsimo

C. ACIDEZ DEL PRODUCTO

Me gusta muchsimo
Me gusta moderadamente
Me gusta poco
No me gusta ni me disgusta
Me disgusta poco
Me disgusta moderadamente
Me disgusta muchsimo

94
 ANEXO 7. Resultados de la Evaluacin
sensorial

0% de Sucedneo de Leche de Quinua. 15% de Sucedneo de Leche de Quinua. 20% de Sucedneo de Leche de Quinua.

100% de Leche Entera Fresca de Vaca. 85% de Leche Entera Fresca de Vaca. 80% de Leche Entera Fresca de Vaca.
N N N
Sabor Aroma Acidez Sabor Aroma Acidez Sabor Aroma Acidez
Panelistas Panelistas Panelistas
1 7 5 4 1 6 6 6 1 5 5 7
2 5 5 6 2 6 7 6 2 4 4 4
3 5 5 6 3 4 4 4 3 4 4 4
4 4 5 5 4 6 6 6 4 4 4 4
5 6 6 5 5 6 6 6 5 3 4 5
6 5 5 6 6 7 7 7 6 3 5 5
7 6 5 5 7 6 6 5 7 6 5 5
8 6 5 5 8 6 6 6 8 7 6 5
9 5 4 4 9 6 6 5 9 6 5 5
10 6 6 5 10 6 6 6 10 6 5 5
11 6 6 5 11 7 6 6 11 3 5 3
12 5 6 5 12 7 6 6 12 6 6 6
13 7 5 4 13 5 5 6 13 6 5 4
14 6 6 5 14 7 6 6 14 6 5 3
15 6 6 5 15 6 6 6 15 4 5 4
16 7 7 6 16 7 6 4 16 6 5 4

95
ANEXO 8. Resultados Finales.

Anexo 8.1. Frecuencia

Puntaje
Me gusta muchsimo 7
Me gusta
6
moderadamente
Me gusta poco 5
No me gusta ni me
4
disgusta
Me disgusta poco 3
Me disgusta
2
moderadamente
Me disgusta muchsimo 1

Anexo 8.2. Resultados

EVALUACION SENSORIAL
7

5
FRECUENCIA

4 0%

3 15%
20%
2

0
SABOR AROMA ACIDEZ

96
ANEXO 9. Panel Fotogrfico.

97
98
99