PRCTICAS DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGA:
BACTERIOLOGA Y MICOLOGA
M PAZ MERINO
JIMNEZ MIREIA
LLINARES
MARCELO
Autoras: M Paz Merino jimenez, Mireia Llinares Marcelo
Maquetacin: Patricia Penavella Soto
Edita: Educlia Editorial, S.L.
Imprime: Publidisa SA
ISBN: En curso
Depsit Legal: En curso
Printed in Spain/Impreso en Espaa.
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PREFACIO
El Cuaderno de Prcticas de Microbiologa es un trabajo
fundamental en el desarrollo de la asignatura de
FUNDAMENTOS Y TECNICAS DE ANALISIS
MICROBIOLOGICOS. Dicha asignatura lleva una carga
terica que paralelamente tiene que ir desarrollada con
prcticas que se realizan en el laboratorio. Por ello debe
existir una consecucin en la ejecucin de las prcticas al
mismo tiempo que se vaya impartiendo la teora.
Con este cuaderno el desarrollo de las prcticas seguira
un orden, fundamental para cumplir los protocolos de
actuacin en el laboratorio de Microbiologa. El alumno
siguiendo los pasos de dicho cuaderno ir desarrollando la
prctica con correccin hasta la obtencin de los resultados
finales que es lo que se pretende.
INDICE CUADERNO DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA
MANEJO DEL MICROSCOPIO
RECONOCIMIENTO DE MATERIAL
DISTRIBUCION DE MICROORGANISMOS EN LA NATURALEZA.
ESTERILIZACIN POR CALOR SECO.
ESTERILIZACIN POR CALOR HMEDO.
ACTIVIDADES DE ESTERILIZACIN Y DESINFECCIN.
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
CNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO
URINOCULTIVO
PLEGADO DE UN FILTRO
INDICA LA MORFOLOGIA, DISPOSICION Y MOVILIDAD DE LAS
BACTERIAS VIVAS QUE CONTIENE LA MUESTRA.
PREPARACIN DE COLORANTES Y REACTIVOS PARA LA TINCION
SIMPLE Y TINCION NEGATIVA.
PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARA TINCIONES
DIFERENCIALES:TINCION DE AAR
PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARA TINCIONES
DIFERENCIALES:TINCION DE AAR
PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARA TINCIONES
DIFERENCIALES:TINCION DE ESPORAS
PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARA TINCIONES
DIFERENCIALES:TINCION DE CAPSULAS
REALIZACION DE UNA TINCION SIMPLE.
REALIZACION DE UNA TINCION NEGATIVA.
REALIZACION DE UNA TINCION DE GRAM
REALIZACION DE UNA TINCION DE ZIEHLNEELSEN O ACIDO
ALCOHOL RESISTENTE.
REALIZACION DE UNA TINCION DE ESPORAS
REALIZACION DE TINCION DE CAPSULAS. METODO DE BURRI O
DE LA TINTA CHINA.
PRUEBAS BIOQUMICAS.
ANTIBIOGRAMA.
HACER UNA SIEMBRA EN CONDICIONES ANAEROBIAS
TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL PORTAOBJETOS
TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL CUADRADITO
DE AGAR
TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL HOYO EN PLACA
TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL CUBRE
ESCAVADO EN PLACA
TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DE LA GOTA
PENDIENTE
TECNICA DE VISUALIZACION DE HONGOS: VISUALIZACIN
DIRECTA CON LA TCNICA DE LA CINTA ADHESIVA.
PRCTICA 26. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL
PORTAOBJETOS.
VISIN MACROSCPICA
MATERIAL
Alcohol
Mechero Bunsen
Portaobjetos
Placa Petri
Papel filtro
Agua destilada
Medio de cultivo Sabouraud
Pipeta Pasteur estril
Asa de siembra
Muestra de hongos
Estufa Pasteur
TCNICA
1. Preparar 100 ml de medio de cultivo Sabouraud (Prctica 7.6).
2. Limpiar el portaobjetos con alcohol, secar y flamear.
3. Cubrir el portaobjetos con una fina capa de medio de cultivo (todava en estado lquido) con
la ayuda de una pipeta Pasteur estril.
4. Dejar secar el medio.
5. Recortar un crculo de papel de filtro de la misma medida que la placa de Petri.
6. Colocarlo en el fondo de la placa y humedecerlo con un poco de agua destilada para
mantener el ambiente hmedo para el crecimiento del hongo.
7. Con el asa de siembra esterilizada y humedecida con agua estril tomar un poco de
muestra.
8. Colocar la muestra en el centro del portaobjetos realizando un pequeo movimiento
circular con el asa.
9. Colocar el portaobjetos en la placa de Petri.
10. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.
PROCEDIMIENTO EN IMGENES
1
7
Preparar 100 ml de Sabouraud
Tomar muestra
3
2
Cubrir con medio Sabouraud
Limpiar portaobjetos
Cortar crculo de papel de filtro
Dejar secar
8
6
Sembrar en el centro del porta
Humedecer
INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO
VISIN MICROSCPICA
MATERIAL
Cubreobjetos
Pipeta Pasteur
Colorante azul de lactofenol
Muestra ya incubada (tcnica del portaobjetos)
Pinzas
Mechero Bunsen
Microscopio
TCNICA
1. En el portaobjetos donde habamos realizado la tcnica, echamos una gota de azul de
lactofenol.
2. Poner un cubreobjetos encima.
3. Observar al microscopio a 40x.
PROCEDIMIENTO EN IMGENES
Gota azul en porta
Cubre sobre la muestra
3
Observar al microscopio
INDICAR EL RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO
PRCTICA 27. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL
CUADRADITO DE AGAR.
VISIN MACROSCPICA
MATERIAL
Alcohol
Mechero Bunsen
Placa Petri con medio agar Sabouraud
Bistur
Pinzas
Asa de siembra
Muestra con hongos
Portaobjetos
Cubreobjetos
Placa Petri vaca
Papel filtro
Agua destilada
2 capilares de microhematocrito
Estufa
Regla
Tijeras
TCNICA
1. Dibujar en un papel un cuadradito de 15x15 cm. Colocar sobre Sabouraud y cortar un cuadrado siguiendo las
lneas dibujadas anteriormente con la ayuda de
un bistur.
2. Con unas pinzas estriles coger el cuadradito de agar y ponerlo en el centro de un portaobjetos. El
portaobjetos deber haberse limpiado anteriormente con alcohol y flameado.
3. Coger con el asa de siembra, esterilizada y humedecida, un poco de muestra.
4. Sembrar tocando con el asa en los cuatro laterales del cuadrado.
5. Colocar un cubreobjetos limpio sobre el agar.
6. Colocar el portaobjetos en una placa con papel de filtro humedecido y dos capilares.
7. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.
PROCEDIMIENTO EN IMGENES
2
1
Cortar cuadrado de agar Colocar en portaobjetos
3 4
Coger muestra Sembrar en los laterales
Colocar en la cmara hmeda
Colocar cubreobjetos
5
6
INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO
VISIN MICROSCPICA
MATERIAL
Portaobjetos
Cubreobjetos
Pipeta Pasteur
Colorante azul de lactofenol
Muestra ya incubada (tcnica del cuadradito de agar)
Pinzas
Mechero Bunsen
Microscopio
TCNICA A
1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.
2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habamos puesto sobre el
cuadradito de agar.
3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.
4. Poner el cubre sobre la gota de azul.
5. Observar al microscopio a 40x.
PROCEDIMIENTO EN IMGENES
Limpiar portaobjetos
Coger el cubre
Poner cubre sobre la gota de azul
Poner gota de azul
TCNICA B
1. Coger un cubreobjetos, limpiar con alcohol y flamear.
2. Con las pinzas esterilizadas retiramos el cuadradito de agar que quedar sobre el
portaobjetos.
3. En el portaobjetos ponemos una gota de azul de lactofenol. 4. Poner el cubreobjetos
limpio sobre la gota de azul.
5. Observar al microscopio a 40x.
INDICAR EL RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO
PRCTICA 28. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL
HOYO EN PLACA.
VISIN MACROSCPICA
MATERIAL
Alcohol
Mechero Bunsen
Placa de Petri (la que hemos usado en la prctica 27)
Cubreobjetos
Asa de siembra
Muestra con hongos
Pinzas
TCNICA
1. Con un asa de platino esterilizada cogemos un poco de muestra.
2. Cogemos la placa que hemos usado en la prctica anterior, y sembramos en las paredes del
hoyo que ha quedado tras sacar el cuadradito de agar.
3. Con una pinza estril colocar sobre el hoyo sembrado un cubreobjetos (previamente lavado
con alcohol y flameado).
4. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.
PROCEDIMIENTO EN IMGENES
Sembrar paredes del hoyo
Coger un poco de muestra
Colocar cubreobjetos
INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO
VISIN MICROSCPICA
MATERIAL
Portaobjetos
Pipeta Pasteur
Colorante azul de lactofenol
Muestra ya incubada (tcnica del hoyo en placa)
Pinzas
Mechero Bunsen
Microscopio
TCNICA
1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.
2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habamos puesto sobre el hoyo.
3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.
4. Poner el cubre sobre la gota de azul.
5. Observar al microscopio a 40x.
PROCEDIMIENTO EN IMGENES
Poner gota de azul
Limpiar portaobjetos
3
Coger el cubre
Poner cubre sobre la gota de azul
INDICA RESULTADO
MICROSCPICO OBTENIDO
PRCTICA 29. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL
CUBRE ESCAVADO EN PLACA.
VISIN MACROSCPICA
MATERIAL
Alcohol
Mechero Bunsen
Placa de Petri con medio de cultivo Sabouraud.
Cubreobjetos
Asa de siembra
Muestra con hongos
Pinzas
TCNICA
1. Con unas pinzas estriles, colocar 3 4 cubreobjetos limpios en un ngulo de 45 o en la
placa con medio Sabouraud.
2. Coger un poco de muestra con un asa de siembra estril.
3. Sembrar donde se juntan el cubreobjetos con la superficie del medio.
4. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo
PROCEDIMIENTO EN IMGENES 3
Sembrar
Cubreobjetos en ngulo de 45 o
2
4
Coger muestra
Cerrar e incubar
INDICAR EL RESULTADO
MACROSCPICO OBTENIDO
VISIN MICROSCPICA
MATERIAL
Portaobjetos
Pipeta Pasteur
Colorante azul de lactofenol
Muestra ya incubada (tcnica del cubre inclinado en placa)
Pinzas
Mechero Bunsen
Microscopio
TCNICA
1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.
2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos uno de los cubreobjetos que habamos puesto en la
placa.
3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.
4. Poner el cubre sobre la gota de azul.
5. Observar al microscopio a 40x.
PROCEDIMIENTO EN IMGENES
3
Poner gota de azul
Limpiar portaobjetos
2
4
Coger el cubre
Poner cubre sobre la gota de azul
INDICAR EL RESULTADO
MICROSCPICO OBTENIDO
PRCTICA 31. TCNICA DE VISUALIZACIN DE HONGOS.
VISUALIZACIN DIRECTA CON LA TCNICA DE LA CINTA
ADHESIVA.
MATERIAL
Alcohol
Mechero Bunsen
Pipeta Pasteur estril
Cinta adhesiva transparente
Portaobjetos
Azul de lactofenol
Muestra con hongos
Microscopio
TCNICA
1. Limpiar un portaobjetos con alcohol, secar y flamear.
2. Cortar un trozo de cinta adhesiva y pegarlo a la parte de la muestra donde se encuentran
los hongos.
3. Poner una gota de azul de lactofenol en el portaobjetos.
4. Colocar la cinta adhesiva sobre la gota de azul de lactofenol.
5. Observar al microscopio a 40x.
PROCEDIMIENTO EN IMGENES
Tomar muestra
Limpiar portaobjetos
4
Gota de azul en porta
Colocar cinta sobre la gota
INDICAR EL RESULTADO MICROSCOPICO OBTENIDO
