Cultivo de Microalgas 2010

INSTITUTO DEL MAR DEL PER

IMARPE
SEDE REGIONAL MOQUEGUA

TECNOLOGIA DE CULTIVO
DE MICROALGAS
COMO ALIMENTO DE
MOLUSCOS

BLGA. SHEYLA ZEVALLOS

FERIA

2010

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CONTENIDO

CONTENIDO .............................................................................................................................................................................. 2
LISTA DE TABLAS .......................................................................................................... 3
LISTA DE FIGURAS ......................................................................................................... 3
PROLOGO ...................................................................................................................... 5
I. INTRODUCCIN........................................................................................................... 6
II. NUTRICIN Y ACUICULTURA ..................................................................................... 7
III. ESPECIES DE CULTIVO .............................................................................................. 9
IV. CONDICIONES DE CULTIVO NECESARIOS PARA EL CRECIMIENTO ............................. 11
V. DEMANDAS DE DESARROLLO .................................................................................. 13
VI. ESTERILIZACIN, DESINFECCIN Y ASEPSIA ........................................................... 15
6.1. ESTERILIZACIN ................................................................................................................................................................. 15
6.2. DESINFECCIN.................................................................................................................................................................. 16
6.3. ASEPSIA ............................................................................................................................................................................ 16
VII. INSTALACIONES Y EQUIPOS ................................................................................... 17
7.1. SALA DE FILTRACIN .......................................................................................................................................................... 17
7.2. SALA DE LAVADO ............................................................................................................................................................. 18
7.3. SALA DE OBSERVACIONES .................................................................................................................................................. 18
7.4. SALA DE CEPAS Y CULTIVO INICIAL ...................................................................................................................................... 19
7.5. SALA DE CULTIVO INTERMEDIO Y MASIVO ............................................................................................................................ 19
7.6. EQUIPOS COMPLEMENTARIOS ............................................................................................................................................ 19
VIII. TRATAMIENTO DE AGUA DE MAR Y MATERIALES ................................................ 20
8.1. SISTEMA DE TRATAMIENTO DE AGUA DE MAR ....................................................................................................................... 20
8.2. TCNICAS DE ASEPSIA Y ESTERILIZACIN DEL MATERIAL ......................................................................................................... 20
IX. MEDIOS DE CULTIVO ............................................................................................. 23
X. SISTEMAS DE CULTIVO ............................................................................................ 25
XI. METODOLOGA Y FASES DE CRECIMIENTO .............................................................. 29
XII. PROCEDIMIENTO PARA EL CULTIVO DE MICROALGAS ............................................ 31
12.1. CULTIVO DE CEPA ........................................................................................................................................................... 31
12.2. CULTIVO INICIAL.............................................................................................................................................................. 32
12.3. CULTIVO INTERMEDIO ...................................................................................................................................................... 32
12.4. CULTIVO MASIVO ............................................................................................................................................................ 33
XIII.- SUMINISTRO DE ALIMENTO VIVO ....................................................................... 34
13.1. CUANTIFICACIN CELULAR .............................................................................................................................................. 34
XIV. AISLAMIENTO ..................................................................................................... 35
XV. PARMETROS POBLACIONALES............................................................................. 36
XVI. RESULTADOS EN EL LABORATORIO DE INVESTIGACIN DE MOLUSCOS ................. 38
16.1. PRODUCCIN DE MICROALGAS ....................................................................................................................................... 38
16.2. DENSIDAD MICROALGAL ................................................................................................................................................. 39
16.3. ESPECIES DE MICROALGAS EN LA DIETA MIXTA DE A. PURPURATUS Y M. DONACIUM ............................................................. 41
XVII. PERSPECTIVAS ................................................................................................... 43
XVIII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS ........................................................................ 44

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LISTA DE TABLAS

Tabla Pg.

1 Especies de microalgas cultivadas en el Laboratorio de Investigacin 9

de Moluscos del IMARPE Ilo
2 Sistema de Tratamiento de agua para el cultivo de microalgas 20

3 Preparacin del medio F/2 modificado (Guillard 1975) para 23

microalgas marinas
4 Composicin de contenidos nutritivos en porcentajes de materia seca 25
total de algas fitoplanctnicas
5 Fluctuacin de las concentraciones del alimento vivo

LISTA DE FIGURAS

Figura Pg.

1 Material d vidrio en agua potable y jabn neutro 20

2 Enjuague de material de vidrio 20

3 Esterilizacin de material de vidrio en estufa 20

4 Almacenamiento de material de vidrio 20

5 Garrafones de 5 y 20 L 21

6 Garrafones de 20 L 21

7 Tanque de 200 L 21

8 Filtros de cuno de 10, 5 y 1 21

9 Enjuague de filtro de cuno 21

10 Piedras difusoras en agua potable con hipoclorito de sodio al 21

0,1%
11 Enjuague de garrafones de 20 L 22

12 Llenado de garrafones de 20 L 22

13 Llenado de tanque de 200 L 22

14 Reactivos 1: Macronutrientes, 2: Micronutrientes, 3: vitamina y 23

4: metasilicato
15 Fases de desarrollo del cultivo de microalgas 29

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16 Cmara de siembra artesanal 31

17 Transferencia de alicuota mediante micropipeta 31

18 Observacin al microscopio 31

19 Placa con medio de cultivo enriquecido 31

20 Siembra del inculo 31

21 Placa sellada 31

22 Placa rotulada 31

23 Matraces con medio de cultivo enriquecido 32

24 Transferencia del inculo 32

25 Distribucin de matraces bajo condiciones estriles 32

26 Agitacin manual 32

27 Aeracin mediante soplador regenerativo de aire 32

28 Transferencia de 90% del inculo 33

29 Matraces con tapones de goma 33

30 Matraces, garrafones de 5 y 20 L rotulados 33

31 Garrafones de 20 L con microalgas 33

32 Garrafones de 20 L cubiertos con papel aluminio 33

33 Tanques de 200 L con tapa de fibra 33

34 Tanques de 200 L rotulados 33

35 Hematocitmetro 34

36 Tcnica de aislamiento por dilucin sucesiva 35

37 Produccin anual de alimento vivo 39

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PROLOGO

En el presente captulo Cultivo de Microalgas, se aborda la tecnologa de

cultivo de microalgas, con el objetivo ampliar el conocimiento sobre esta
actividad complementaria a la produccin de moluscos en criaderos,
proponiendo posteriormente una serie de pautas para llevar a cabo la
implementacin de sus ambientes y el desarrollo de la tecnologa a nivel
experimental.

Este captulo se escribi pensando en varios grupos; en primer lugar para los
funcionarios de la industria relativamente joven de nuestro pas, as como de
las instituciones gubernamentales dedicados al sector pesquero acucola y
productivo; adems se ha pensado en los estudiantes de post grado orientados
a las ramas afines y finalmente, dirigido a aquellos que trabajan en terreno o
que pretenden disear proyectos similares, que ocasionalmente hacen
consultas de fuentes bibliogrficas extranjeras ante la inexistencia de
informacin local.

En este marco, se proveen directrices esenciales del captulo que no

constituyen un manual ni proponen instrucciones de cmo llevar adelante una
experiencia similar; por el contrario, las secciones plasman pautas
sistematizadas que se deben tener en cuenta para determinada etapa de
cultivo, en torno a la instalacin, sistemas de tratamiento del agua, sistemas de
cultivo, las necesidades y requerimientos de las especies de cultivo, siendo
relevante considerarlas como referencia para un desempeo adecuado de este
tipo de iniciativas.

Aspectos tambin muy importantes lo constituyen los resultados del trabajo

experimental evidenciando notables aportes a travs de este documento, que
se vislumbra como herramienta para alcanzar objetivos concretos y contribuir a
mejorar la produccin y calidad del producto.

Sheyla Zevallos Feria

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I. INTRODUCCIN

Las microalgas, son un grupo heterogneo de plantas que poseen una amplia
diversidad de tamaos, pigmentacin, bajo nivel de especializacin celular. Son
tpicamente acuticas y viven fijas a un substrato o flotando libremente en el
plancton (Uribe 1992).

Constituyen el alimento natural de bivalvos y la base esencial de la cadena

trfica acutica (Benemann 1992), soportan la produccin de la pesquera de
recursos renovables de 100 x 106 t por ao (Muller 2000)

El aumento de la produccin acucola y la necesidad de cultivo de nuevas

especies implican la masiva produccin de microalgas, que son un
complemento imprescindible para el desarrollo de la acuicultura (Leon et al.
2003).

Conforman un grupo altamente diverso de organismos unicelulares (Torrentera

y Tacn 1989), compuesta por protistas, eucariotas, procariotas, cianobacterias
o algas verde azules (Day et al. 1999); contienen diversos pigmentos entre
otros clorofilas y que son capaces a partir del anhdrido carbnico, sales
minerales y luz, de producir protenas, cidos grasos e hidratos de carbono,
constituyendo, por tanto, la principal fuente de alimento de los consumidores
primarios (Corral et al. 2000).

En general, podemos justificar la subsistencia de laboratorios o criaderos de

acuicultura en condiciones controladas en base al gran aporte de alimento que
representan las microalgas para el mantenimiento de organismos en cultivo,
sean reproductores y/o larvas; y que actualmente estn consideradas como el
mejor alimento para los filtradores de importancia comercial (Paniagua 1986).

El presente documento pretende ser un referente para dar a conocer las

tcnicas empleadas y las experiencias obtenidas para el cultivo de microalgas,
como parte de las contribuciones cientficas en torno al proceso de produccin
de alimento vivo para la obtencin de juveniles en el Laboratorio de
Investigacin de Moluscos (LIM) del Instituto del Mar del Per (IMARPE) sede
Regional Ilo.

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II. NUTRICIN Y ACUICULTURA

La alimentacin se define como el proceso de captura e ingesta del material de

origen biolgico necesario para el funcionamiento de los organismos vivos.
Mientras que la nutricin se define como el proceso por el que los organismos
utilizan el alimento para la obtencin de la energa para el crecimiento,
mantenimiento y reparacin de los tejidos (Civera et al. 2004)

Es de gran importancia conocer la composicin qumica de los alimentos vivos,

pues el utilizar un recurso pobre en nutrientes esenciales puede causar el
desarrollo anormal y muerte masiva de las especies en cultivo; siendo
relevante conocer y manejar las diferentes tcnicas de cultivo del alimento vivo
para establecer las condiciones ms adecuadas, que permitan el obtener un
alimento de alto contenido nutricional principalmente ricos en aminocidos y
cidos grasos esenciales entre otros nutrientes que favorezcan el desarrollo y
supervivencia de las diferentes especies de crustceos, moluscos y peces que
se obtienen por acuicultura (Torrentera y Tacn 1989)

Dependiendo de las especies que se desee cultivar, ser preciso disponer de

los organismos adecuados a la ingestin de las mismas, as, los moluscos se
alimentan a base de microalgas mientras que las larvas de peces y crustceos
necesitan un aporte nutritivo inicial en forma de organismo vivo, a modo de
presa que satisfaga a la vez unos mecanismos de comportamiento de captura,
de predacin y unos niveles adecuados de calidad nutritiva (Torrentera y Tacn
1989)

En acuicultura, las microalgas fototrficas se utilizan como alimento vivo y

como suplementos en la alimentacin de larvas y animales juveniles como
ostras, abaln juvenil, larvas de pez espada y rotferos (Hinzpeter 2008); para
la produccin de larvas y juveniles de moluscos, como para el zooplancton
requerido para alimentacin de juveniles de peces (Benemann 1992). La
nutricin de las larvas y juveniles depende del contenido y naturaleza de los
constituyentes bioqumicos de las algas, los que representan la base para la
formacin de los nuevos tejidos, restauracin de aquellos que han sido
afectados y para el metabolismo normal de los organismos de cra (Alvarez
1994). Las altas concentraciones de protenas, carbohidratos, cidos grasos y
vitaminas presentes en las microalgas las hace fundamentales para la
alimentacin del zooplancton, larvas y estadios juveniles de moluscos,
crustceos y ciertos peces herbvoros (Brown et al. 1997, Leal et al. 2003,
Prieto et al. 2005). Estos microorganismos, deben presentar determinadas
caractersticas para que puedan ser utilizados en acuicultura, como por
ejemplo: tamao adecuado para la ingestin (1 15 para organismos
filtradores), rpidas tasas de crecimiento que permitan realizar cultivos masivos
y estables a las condiciones propias del cultivo (temperatura, luminosidad,
nutrientes) y finalmente una buena composicin nutricional (Brown 2002 y
Guillot et al. 2008)

Los niveles nutricionales de las algas que se cultivan con los diferentes medios
enriquecidos y consecuentemente el poder alimenticio de una especie algal

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depende de las condiciones generales de crecimiento dadas en el laboratorio.

Una combinacin de algas como dieta brinda un mayor valor nutritivo debido a
que contienen un surtido de la mayora de los requerimientos nutricionales
necesarios para el crecimiento de las larvas, sean estas de camarn, moluscos
y peces (Alvarez 1994).

Brown (2002) indica que dietas de microalgas ricas en carbohidratos, han

resultado ser las mas adecuadas para el crecimiento de Ostrea edulis, mientras
que las dietas ricas en protenas entregan un mejor crecimiento para juveniles
de Mytilus trossulus y Crassostrea gigas.

Las microalgas proveen de cidos poli-insaturados (PUFA) que han

demostrado ser esenciales para el crecimiento y desarrollo de la fase larval de
muchos organismos; an no se puede concluir si dietas con mayores
cantidades de PUFA resultan ser las mejores para organismos herbvoros,
debido a la escasa evidencia experimental que existe (Leonardos & Lucas,
2000)

Dentro de los grandes grupos de microalgas utilizadas en acuicultura, la

composicin porcentual de cidos grasos es variable. As se tiene, que para
Primnesifitas (Pavlova sp e Isocrhysis sp T. ISO) y las Criptomonidas son
relativamente ricas en DHA (0,2 a 11%), las diatomeas presentan las mayores
porcentajes de AA (hasta un 4%), las clorfitas son deficientes en PUFA, lo que
implica una diferencia a nivel nutricional, por lo que en general son utilizadas
como suplemento de las dietas tradicionales en base a microalgas (Brown
2002)

Los sustitutos de microalgas para filtradores como los pectnidos han pasado
por un amplio abanico de posibilidades en la literatura. As se han propuesto
pasta de algas conservadas, algas secas y cultivos heterotrficos de
microalgas para sustituir los cultivos tradicionales de microalgas, en estos
casos el sustituto sigue siendo una microalga. Las levaduras se han ensayado
con cierto grado de xito en almejas pero no son adecuadas para pectnidos,
entre otras razones por su baja calidad nutricional y su alta tasa de
decantamiento (Farias et al. 2002).

Los substitutos completos de biomasa microalgal han obtenido escaso xito;

los avances alcanzados en la formulacin de emulsiones y alimentos han
tenido impacto en criaderos al presentar un esquema de alimentacin hbrido,
suministrando alimento vivo microalgal combinado con dietas inertes
preparadas. En moluscos el uso de alimento inerte es altamente experimental,
consistiendo en diferentes aproximaciones y formulaciones que intentan ser
substitutos efectivos y econmicamente aplicables tales como: algas secas,
pasta de algas, microencapsulados, dietas a base de levaduras y otros
(Coutteau et al. 1993 y Faras 2001). Se ha observado que el aporte de materia
orgnica inerte del seston proporcionara un aporte energtico importante a los
pectnidos de fondo (Hunauld, datos no publicados en Faras 2001); sin
embargo, la materia orgnica inerte va perdiendo su calidad nutritiva por la
descomposicin bacteriana y la lixiviacin de los micronutrientes, y por ello

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sigue siendo el fitoplancton el recurso alimenticio ms importante en los

pectnidos (Faras 2001).

III. ESPECIES DE CULTIVO

La diversidad de especies de microalgas que se cultivan y usan en criaderos es

amplia, siendo las ms frecuente las diatomeas y los flagelados. Ellas son
reconocidas mundialmente como especies adecuadas por su fase de cultivo y
elevado valor nutricional.

Tabla 1
Especies de microalgas cultivadas en el Laboratorio de Investigacin de
Moluscos del IMARPE Ilo

Grupo Clase Especie

Chaetoceros gracilis
Diatomeas Bacillarophyceae Chaetoceros muelleri (Mxico)
Phaeodactylum tricornutum(Espaa)
Isochrysis galbana var. Tahitiana
Flagelados Prymnesiophyceae
Pavlova lutherii (Monochrysis lutherii)
Nannochloris maculata
Verdes Chlorophyceae
Nannochloropsis oculata

3.1. Morfologa

Entre las especies destacadas, podemos hacer nfasis a:

Chaetoceros gracilis
Diatomea marina centrica de vida solitaria, de forma rectangular, midiendo de 4
a 6 micras sin incluir las setas. Se caracteriza porque su pared celular est
compuesta de slice, la que se denomina frstulo, compuesta de dos valvas, las
cuales se separan para formar nuevas clulas durante la divisin vegetativa. La
mayora de especies de Chaetocero se caracteriza por tolerar altas
temperaturas, siendo la temperatura mxima de crecimiento 37C, con
crecimiento ptimo entre 25 y 35C. La salinidad mnima para su crecimiento
es 6 UPS con crecimiento ptimo entre 17 y 25 ups (Gonzales 2000).

Isochrysis galbana
Flagelado en forma de esfera o pera, de color marrn de envoltura celular fina,
que habita en climas templados con dos flagelos mviles. Mide de 3 a 5 micras.
Cuando la densidad aumenta, el cultivo cambia de dorado amarillento a caf
marrn. No tan solo tolera cambios ambientales sino que parece suprimir
selectivamente el crecimiento contaminantes indeseables (bacterias), su
crecimiento mximo se encuentra a una temperatura de 16-20 C, a una
salinidad de 20 28 UPS. Debido a su tamao y a que es un flagelado
desnudo es fcilmente digerible por los consumidores. Su alto valor nutritivo la
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sita entre las especies ms importantes para la alimentacin de bivalvos

marinos (Gonzales 2000).

Pavlova lutheri
Microflagelado cuyos rangos de tamao van de 7-9 x 5-7 x 3-4 micras.
Dorsoventralmente se ven como clulas ovaladas, rmbicas, o casi
rectangualres y lateralmente aparecen comprimidas y cncavo-convexas
(Green 1975)
Las clulas son mviles, de color caf amarillo y carecen de pared celular; tiene
dos flagelos diferentes tamaos y un haptonema. Se encuentra en aguas
nerticas, de climas templados. La temperatura de crecimiento vara de 16 a
20C, en una salinidad de 22 a 30 0/00 y con una iluminacin de 4000 lux.
Desde su aislamiento original por Droop (1953) como Monocrhysis lutheri se ha
comprobado junto con Isocrhysis sp. que son los fitoflagelados nutricionalmente
ms valiosos. Debido a su pequeo tamao y alto valor nutritivo ha sido
utilizado por muchos investigadores en estudios de cintica, nutricin,
bioqumica y en Acuicultura como alimento para adultos u estadios larvales de
moluscos, principalmente ostiones (Paniagua 1986).

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IV. CONDICIONES DE CULTIVO NECESARIOS PARA EL CRECIMIENTO

El crecimiento de una poblacin de microalgas, responde a la interaccin

mutua de factores biolgicos, fsicos y qumicos:

En general, el cultivo de microalgas en sus diferentes etapas requiere de:

a) Luz
Normalmente provisto por lmparas fluorescentes; los tipos usados
comnmente son de de luz da luz blanca fra. El incremento de la intensidad
de luz favorece la velocidad de la divisin celular y consecuentemente la
produccin de alimento vivo (Laing 1991). Es esencial para realizar fotosntesis;
la misma que es suministrada artificialmente a travs de tubos fluorescentes de
20 wats en el LIM.

b) Temperatura
Varias especies de microalgas crecen entre temperaturas desde 17 22C.
Las temperaturas bajas no causan fenecimiento de microalgas pero retardan la
tasa de crecimiento (Laing 1991). El rango de temperatura ambiental
mantenido en las salas de cultivo de microalgas del LIM flucta en 19 1 C; el
mismo que se mantiene estable con ayuda de equipos de aire acondicionado.

c) Nutrientes
Los nutrientes son sales inorgnicas requeridas para el crecimiento microalgal
(Laing 1991). Para el desarrollo ptimo de las microalgas, en el LIM se
adicionan macronutrientes y micronutrientes (nitratos, fosfatos, silicato, metales
traza, vitaminas); cuyas concentraciones varan dependiendo el medio y
volumen de cultivo empleado.

d) Agitacin
Los cultivos de microalgas usualmente son mezclados empleando compresores
de aire (Laing 1991). En el LIM los volmenes iniciales (10 y 250mL) son
agitados manualmente, a partir de 500 mL hasta 200L son mezclados
empleando un soplador de aire (blower) de 2.5 HP de potencia.

e) Dixido de carbono
Las microalgas son provistas de carbono en forma de dixido de carbono
(CO2) mediante un cilindro con gas comprimido, que se suministra en
pequeas cantidades (1 por 100), ayudando a mantener el pH entre 7,8 y 8,0;
el mismo que puede ser medido con papel indicador o un pHmetro (Laing
1991). En el LIM an no se cuenta con este dispositivo implementado en el
sistema.

f) Salinidad
La salinidad en flagelados flucta entre 25 a 30 UPS, y entre 20 a 25 UPS para
diatomeas. La salinidad puede medirse con un hidrmetro o refractmetro
(Laing 1991). En el LIM el rango de salinidad de los cultivos se mantiene a 34.8
ppt (Oximetro YSI).

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g) Limpieza
Pequeas cantidades de agua de mar pueden ser tratados usando mtodos de
autoclavado o pausterizacin. Mientras que volmenes mayores de agua de
mar deben ser filtrados, los que pueden retener partculas hasta 2 micrones;
adems puede limpiarse grandes cantidades de agua de mar lentamente con
luz ultravioleta (Laing 1991). En el LIM el agua, instrumental e implementos
utilizados en el cultivo son mantenidos bajo condiciones aspticas; empleando
para el caso del agua de mar filtros de arena (50), filtros de cartucho (10, 5 y 1
), sistema de esterilizacin por radiacin UV, bomba de vaco con filtros de
nitrocelulosa de 0.45 y 0.20 y autoclave (20 L); mientras que el instrumental e
implementos son lavados minuciosamente con detergente lquido y secados a
temperaturas elevadas (150C).

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V. DEMANDAS DE DESARROLLO

A continuacin se exponen los requerimientos principales de las microalgas

para su desarrollo (Gonzales 2000 y Lepez et al. 2003):

a) Nitrgeno
Forma parte de un gran nmero de compuestos orgnicos necesarios,
aminocidos, protenas, coenzimas, cidos nuclicos y clorofila.
Funcin probable: Mayor importancia como componente.

b) Fsforo
Forma parte de un gran nmero de compuestos orgnicos importantes como la
glucosa, ATP, cidos nuclicos, fosfolpidos y ciertas coenzimas.
Funcin probable: Estructural, transfiere energa.

c) Azufre
Est incorporado dentro de diversos compuestos orgnicos que incluyen
aminocidos, protenas, coenzima A y las vitaminas Tiamina y Biotina.
Funcin Probable: Estructural, activa grupos de enzimas y coenzimas.

d) Magnesio
Es parte esencial de la molcula de clorofila y es necesario para la actividad de
muchas coenzimas, incluyendo aquellos pasos importantes en la actuacin del
ATP, as mismo es esencial para mantener la estructura del ribosoma.
Funcin Probable: Pigmentos fotosintticos, activacin de enzimas, transporte
inico, estabilidad ribosomal.

e) Calcio
Influye en la permeabilidad de la membrana, se encuentra en las vacuolas,
precipitado como cristales de oxalato clcico o pectato clcico en las paredes
de las clulas. Algunas veces interfiere la capa de magnesio para activar la
enzima.
Funcin Probable: Estructural, activacin de enzimas y transporte inico.

f) Hierro
Es necesario para la sntesis de clorofila, es parte esencial del citocromo el cual
acta como portador de electrones para la fotosntesis y en la respiracin.
Funcin Probable: Activa grupos de molculas de porfirinas y coenzimas.

g) Cloro
Necesario para la fotosntesis, donde activa enzimas para la produccin de
oxgeno a partir del agua se suponen otras acciones adicionales.
Funcin Probable: Fotosntesis II

h) Manganeso
Activa una o ms enzimas en la sntesis de cidos grasos as como es la
enzima responsable de la formacin de ARN y del ADN. Participa en la
produccin de oxgeno a partir del agua.

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Funcin Probable: Transporte electrnico en la fotosntesis II, mantenimiento

de la estructura del cloroplasto.

i) Cobre
Acta como portador de electrones y es parte de alguna enzima. Puede formar
parte en la fijacin del nitrgeno.
Funcin Probable: Transporte elctrico (fotosntesis) enzimas.

j) Molibdeno
Acta como portador de electrones en la conversin del NH4 a NO3 y es
esencial para la fijacin del nitrgeno.
Funcin Probable: Reduccin de nitrato, absorcin inica.

k) Carbono, Hidrgeno, Oxigeno

Son parte de todos los compuestos orgnicos.

l) Potasio
Funcin Probable: Regulacin osmtica, control pH, conformacin y estabilidad
ertica.

ll) Zinc
Funcin Probable: Enzimas, metabolismo de auxinas, estructura ribosomal.

m) Sodio
Funcin Probable: Activacin enzimtica, balance hdrico, enzimas.

n) Boro
Funcin Probable: Regulacin de la utilizacin de carbono, RNA metabolismo.

) Cobalto
Funcin Probable: Componentes de la vitamina B12, C4, fotosntesis.

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VI. ESTERILIZACIN, DESINFECCIN Y ASEPSIA

Los trminos desinfeccin y esterilizacin parecen sinnimos, sin embargo hay

diferencias fundamentales entre ellos (Alvarez 1994). Se han desarrollado una
serie de procesos de desinfeccin y esterilizacin para limitar su presencia o
eliminar microorganismos indeseables en los cultivos.

6.1. Esterilizacin
Es un proceso para establecer una condicin asptica en la que se eliminan
todos los microorganismos (Andersen 2005). Destruccin de todas las formas
de vida por calor, radiacin, gas o tratamiento qumico (Fernndez 2000).
Proceso en el cual se asegura la total inactivacin de todos los
microorganismos: bactericida (Alvarez 1994). Es un mtodo de eliminacin total
de todo tipo de organismo y que asegura la ausencia absoluta de cualquier
forma viviente (Aquiahuatil 2004).

a) Esterilizacin por filtracin

La esterilizacin se efecta pasando la muestra lquida a travs de un filtro con
un tamao de poro de 0.42 m (o menor). Las bacterias normales quedan
retenidas en el filtro y el lquido se esteriliza. Hay que tener presente que este
sistema no elimina los virus ya que estos son de menor tamao que el poro
(virus filtrables). Se utiliza para separar partculas orgnicas o microorganismos
en los medios de cultivo. Los filtros de membrana son steres de celulosa
constituidos por una matriz, acetato de celulosa, por ejemplo, con poros de un
determinado dimetro. Eligiendo un poro de 0.45 - 0.20 eliminamos las
bacterias que pueda haber en estas soluciones. Para esto necesitamos la
bomba de vaco (Torrentera y Tacon 1989)

b) Esterilizacin por calor

Los microorganismos mueren rpidamente cuando son sometidos a
temperaturas superiores a su ptima de crecimiento. Esto permite utilizar altas
temperaturas para eliminar microorganismos por termodestruccin. Se pueden
utilizar dos tipos de calor: seco y hmedo

Calor seco: Existen tres formas principales de esterilizacin por calor

seco: flambeado, incineracin y mediante la utilizacin del horno
Pasteur. Para nuestro caso, se emplea una estufa (horno elctrico)
donde se alcanzan temperaturas de 200C que garantiza la esterilidad
de cualquier objeto de vidrio que permanece entre 2 a 3 horas a 160.
Provoca desnaturalizacin de protenas, lesiones por oxidacin y efectos
txicos por niveles elevados de electrolitos. La accin letal es el
resultado del calor trasmitido desde el material con el cual los
microorganismos estn en contacto (Vignoli 2008).

Calor hmedo: Utiliza el calor del vapor de agua sometido a presin

mediante autoclaves. El autoclavado es el mtodo de esterilizacin ms
efectivo y popular, es usado generalmente para esterilizar lquidos
(Andersen 2005).
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c) Esterilizacin por radiacin Ultravioleta (UV)

La radiacin UV tiene efectos primarios letales a 260 nm y forma enlaces
covalentes entre tiaminas en el DNA; provocando errores en la replicacin del
DNA, consecuentemente mutaciones potenciales letales (Andersen 2005). Los
efectos de la irradiacin ultravioleta son bacteriostticos y fungiostticos en
longitudes de onda menores de 500 NM (Jerlov 1970 citado en Torrentera y
Tacon 1989). Se recomienda para estos fines las longitudes de onda de 240 a
280 NM las mximas eficiencias se obtienen cerca de los 254 NM (Kinne 1976
citado en Torrentera y Tacon 1989). Los rayos ultravioleta desinfectan el agua
(Torrentera y Tacon 1989)

6.2. Desinfeccin
Es definido como una operacin que produce la muerte o reduccin del nmero
de microorganismos patgenos en un ambiente o una superficie (Andersen
2005). Proceso que solamente elimina formas vegetativas de los
microorganismos (Aquiahuatil 2004). Desinfeccin significa la reduccin del
nmero de bacterias hasta un nivel aceptable: bacteriosttico (Alvarez 1994).

Jabn Neutro: Contiene lensioactivos aninicos y no aninicos,

fosfatos, sustancias auxiliares en pequea cantidad. Accin dura entre 2
4 horas, despus de extraer del bao se enjuaga permanentemente
con agua corriente de grifo, luego con agua destilada.

Cloro: Desinfectante (eliminan los agentes patgenos), se presenta

como leja comercial. Los desinfectantes que contienen hipoclorito
sdico (leja de uso domstico) son potentes agentes oxidantes que
liberan Cl2 (gas cloro). El valor lmite ambiental para exposicin corta
(VLA-EC) del cloro es 1 p.p.m. En las reas en las que se manipulen
estos productos deber existir una adecuada ventilacin y deben usarse
guantes resistentes, protectores oculares y ropa adecuada (batas)
(Fernndez 2000).

Yodo: Es el que tiene mayor capacidad germicida de todos. Se emplea

en forma de tintura de yodo en agua o alcohol. Tiene capacidad
antimicrobiana, antivrica. La excesiva exposicin a soluciones que
contienen yodo (VLA-EC 0,1 p.p.m) puede provocar irritacin de
mucosas y ojos o dificultades respiratorias. De nuevo, el uso de
protectores personales tales como gafas protectoras, mscaras y
guantes resistentes es muy recomendable (Fernndez 2000)

6.3. Asepsia
Proceso que por su baja toxicidad, se utiliza para la destruccin de
microorganismos presentes sobre la superficie cutneo-mucosa. Este trmino
tampoco implica la destruccin de todas las formas de vida (Vignoli 2008).
Se dice que un ambiente es asptico cuando se han eliminado todos los
microorganismos patgenos. Un ambiente asptico no tiene porqu ser estril.
La asepsia tambin se puede conseguir por procedimientos fsicos y qumicos.
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VII. INSTALACIONES Y EQUIPOS

Para el cultivo de microalgas desde la etapa inicial hasta el nivel masivo se

consideran caractersticas particulares en los ambientes y el empleo de los
siguientes equipos:

7.1. Sala de filtracin

Ambientes semi expuestos donde se distribuyen los filtros de arena y de tierra
diatomea; estn protegidos por un cobertizo de fibra para evitar ingreso
excesivo de polvo y lluvia espordica.
Los filtros de cuno, carbn activado y esterilizador se distribuyen en una sala
hmeda de concreto con transito regular del personal.

a) Filtros de arena: 02 equipos Rapad Sand Filtres, expulsan agua con

partculas menores a 50 a una velocidad de 270 GPM en cada filtro; con
distribucin en forma paralela y funcionamiento simultneo; cuyo objetivo es
remover las partculas slidas de desecho por remocin mecnica y adsorcin
fsica, produciendo separacin de impurezas suspendidas y coloidales del agua
a travs de una cama de material granular que consta de arena, logrando la
reduccin de casi el 100% de slidos totales.

b) Filtros de tierras diatomea: 01 equipo, gran velocidad y baja presin,

expulsando agua con partculas menores 50 .

c) Filtros de cuno
Constituido por tres filtros Cuno o de cartucho de 10, 5, 1 micra y un filtro de
carbn activado, dispuestos en serie. El agua filtrada procedente del tanque
elevado, luego de pasar por estos filtros, es distribuido a travs de tuberas de
PVC, a las salas de cepas (cultivo inicial de microalgas), cultivo intermedio y
masivo de microalgas, cultivo larvario y reproductores y juveniles.

d) Esterilizador ultravioleta
Conformado por 02 unidades de lmparas de luz ultravioleta (UV) dispuestos
en paralelo, cuyo flujo es de 64 gpm. El agua de mar es expuesta a
determinada intensidad de luz UV, es almacenada durante varios das antes de
su uso para permitir que el nivel de estas especies altamente reactivas pueda
declinar (Barsanti y Gualtieri 2006). Con respecto a la esterilizacin de grandes
volmenes de agua, se debe recordar que la luz UV no penetra el agua de
manera uniforme, y la eficacia disminuye con la distancia de la lmpara. La
mezcla continua del agua y el tiempo de exposicin suficiente, por lo general
evitan este problema para el agua; pero si los organismos se unen a la
superficie interna del contenedor, la esterilizacin puede ser ineficaz a menos
que las lmparas ms potentes se utilizan con ms tiempo de exposicin
(Andersen 2005).

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7.2. Sala de Lavado

Ambiente hmedo, compartido con sala de filtros de cuno, carbn activado y
esterilizador ultravioleta.

a) Lavatorio
Conformado por un juego de 02 lavatorios de fibra de vidrio, cuyas dimensiones
corresponden a 35 x 35 x 40 cm. Donde se lavan los materiales de vidrio y
utensilios de cultivo.

b) Destilador: vertical marca (Mono Dest 3000), calienta el agua hasta hervir
quedando esterilizada, pasa al enfriador y condensa finalmente en forma de
agua 100% qumicamente pura, ideal para usarla en la asepsia final (enjuague)
de cada recipiente empleado en las diferentes etapas de cultivo.

e) Autoclave: El autoclave es un aparato especializado que consiste en una

cmara cerrada con vlvulas de presin para soportar altas temperaturas
(121C) (bajo condiciones ideales) (Andersen 2005), con 20L de capacidad. La
duracin del autoclavado depende del volumen del lquido que ser
esterilziado; por ejemplo, 10 minutos de autoclavado a 121C es suficiente para
esterilizar tubos de prueba de 18 mm dimetro, mientras que 1 hora es
requerido para esterilizar 10 litros de lquido (Andersen 2005).

g) Bomba de vaco: impulsa el agua permitiendo su desplazamiento a travs

de un diafragma constituido por filtros de 0.45 0.20 y un tapn que sella el
sistema, generando un vaco para eliminar organismos de dimensiones
superiores a los filtros usados.

7.3. Sala de observaciones

Ambiente constituido por mesn de cermica blanca y repostera donde se
distribuyen material de vidrio y utensilios limpios, en lo posible seco para la
proteccin de los equipos:

a) Estufa: la estilizacin por medio del calor usando la estufa resulta bastante
eficaz ya que los microorganismos son susceptibles, en diferentes grados a la
accin del calor, que provoca desnaturalizacin de protenas, fusin usando
desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los
microorganismos; es fundamental considerar dos factores: uno el tiempo de
exposicin y la temperatura.

b) Microscopio: compuesto trinocular Carl Zeiss con cmara fotogrfica

incorporada; empleado para observar las clulas de microalgas con diferentes
aumentos y realizar los recuentos en forma diaria usando un hemacitmetro.

c) Balanza: Sartorious, analtica con 0.001 g de precisin, empleada para

pesar reactivos qumicos necesarios para la preparacin de los medios de
cultivo que servirn para enriquecer el agua esterilizada.

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7.4. Sala de cepas y cultivo inicial

Ambiente hermtico con temperatura ambiental 191C, el acceso es
restringido a 1 2 operarios como mximo, procurando mantener el ambiente
en condiciones de asepsia.

a) Cmara de siembra: constituida por una cmara artesanal cuya funcin es

aislar la preparacin de medios, inculos y siembras a nivel de placas, tubos,
matraces hasta 1 L del medio exterior y propiciar la asepsia de los cultivos.

b) Refrigerador:
Volumen de 400 L con peso neto 66 kg, refrigerante de 134 a 130 gramos, 675
mm ancho x 703 mm fondo x 1653 mm alto. Modelo GMT413QC. Donde se
distribuyen los medios nutritivos y reactivos mantenidos a bajas temperaturas.

c) Aire acondicionado:
Equipo de aire acondicionado con capacidad de fro de 12000 BTU, para
mantener la temperatura constante en la sala las 24 horas del da.

7.5. Sala de cultivo intermedio y masivo

a) Aire acondicionado:
Equipo de aire acondicionado con capacidad de fro de 24000 BTU, para
mantener la temperatura constante en la sala las 24 horas del da.

b) Estantera
Mdulos de ngulos ranurados con repisas de vidrio donde son distribuidos
matraces de cristal de 250 mL, 500 mL y 1L; as como botellas de 5L y
botellones de 20L.

c) Tanques de cultivo masivo

Tanques verticales de fibra de vidrio translucidos, con dimensiones 1,5 m altura
x 0,50 m dimetro.

7.6. Equipos complementarios

a) Blower: 02 equipos sopladores regenerativos, con una capacidad de 2.5 HP

cada uno, con encendido individual; que suministran oxigeno en cada sala del
LIM, regulando su distribucin mediante un manifold de salida y llaves de paso;
ingresa directamente a travs de un juego de vlvulas de paso y una tubera de
2 , con terminaciones de en diferentes puntos de las salas de cultivo
inicial y masivo. Su funcionamiento es permanente durante las 24 horas del
da.

b) Grupo Electrgeno
El sistema elctrico presenta un soporte en casos de corte de energa,
contando con un generador elctrico, que mantiene puntos crticos:
tomacorrientes, lmparas fluorescentes de salas de cultivo de microalgas, as
como de equipos de irradiacin y esterilizacin (filtrado por vaco y
autoclavado)
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VIII. TRATAMIENTO DE AGUA DE MAR Y MATERIALES

8.1. Sistema de tratamiento de agua de mar

El tratamiento que recibe el agua de mar para el cultivo de microalgas es
sumamente exigente, para lo cual se cuenta con un tanque de sedimentacin
(30 m3), agua que atraviesa un juego de filtros de arena (50) y filtro de tierra
de diatomea para almacenarse en un tanque elevado (14 m3); el agua es
filtrada por una batera de cunos hasta 1 e irradiada con el esterilizador
ultravioleta para ser filtrada por un sistema de vaco hasta 0.2 que finalmente
es autoclavada y enfriada para su posterior uso.

Tabla 2
Sistema de Tratamiento de agua para el cultivo de microalgas

Fase de Cultivo Mecanismo

Cepa 01 Tanque de sedimentacin
Tubo 10 mL 02 Filtros de arena
Inicial 01 Filtro de tierra diatomea
Matraz 250 mL Filtro cuno (10,5,1 )
Matraz 500 mL Lmpara de luz UV
Intermedio Sistema de filtracin por vaco
Matraz 1000 mL Autoclave
Intermedio 01 Tanque de sedimentacin
Botella 5 L 02 Filtros de arena
Masivo 01 Filtro de tierra diatomea
Botella 20 L Filtro cuno (10,5,1 )
Tanque 150 L Lmpara de luz UV

8.2. Tcnicas de asepsia y esterilizacin del material

a) Lavado del material

Se enjuaga el material de vidrio con abundante agua potable, (1) son

depositados en recipiente con jabn neutro y agua potable (1mL/1L); (2)se
remueve y retira la suciedad para su posterior enjuague con abundante agua
potable y agua destilada; (3) son secados en la estufa por 30 minutos a 150 C
y (4) son almacenados en gavetas limpias para su posterior uso.

1) 2) 3) 4)

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(5, 6, 7) Las botellas de 5 L, 20 L y tanques de 200 L son lavados con

detergente diluido y enjuagados con abundante agua potable.

5) 6) 7)

Las llaves tipo tee, cruceta, uniones, etc., los capilares y mangueras usados
para suministrar aire a los envases de diversos volmenes son lavados con
jabn neutro y agua potable (1mL/1L), posteriormente son enjuagados con
abundante agua potable y secados con aire a presin, para ser almacenados y
usados nuevamente.

Paralelamente, (8) los filtros cuno son extrados de sus carcasas diariamente
en forma ordenada (10, 5 y 1); (9) para ser enjuagados con abundante agua
potable a presin al finalizar el da de trabajo y remojados en agua potable con
hipoclorito de sodio al 0.1%(1mL/1L) por 24 hrs.; para luego ser enjuagados
con abundante agua potable para su reposicin ordenada y uso; (10)
procedimiento similar se aplica a las piedras difusoras.

8) 9) 10)

b) Preparacin de agua de mar estril

Se purga el agua contenida en el tanque elevado, luego se deja correr agua por
los filtros, teniendo en cuenta que no queden burbujas antes de encender el
equipo de lmparas UV. Se enciende el equipo UV y se deja correr agua por la
manguera que suministra agua irradiada por un perodo de 10 min.
aproximadamente; se procede al llenado de garrafones de 5 y 20 L, as como
de los tanques de 200 L.

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(11) Las botellas de 5L, 20L y tanques de 200L son cebadas tres veces con
agua de mar filtrada (1) e irradiada con luz Ultravioleta, (12) se llenan con
agua de mar filtrada envejecida (1) e irradiada (UV); se instala el capilar en el
caso de botellas y (13) el difusor en el caso de tanques para agitar el agua por
1 hora aproximadamente, previo a su enriquecimiento.

11) 12) 13)

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IX. MEDIOS DE CULTIVO

Los componentes qumicos de las microalgas no siempre son constantes,
refirindose a aquellas que se cultivan. Estos niveles dependern del tipo y
contenido de nutrientes usados en el medio enriquecido, de la condicin de la
cepa de alga cultivada, de las condiciones de iluminacin y temperatura, de la
fase de crecimiento en que las algas son cultivadas y de la calidad del agua de
mar empleada en el cultivo. Anormalidades en alguno(s) de estos factores
alterarn significativamente la composicin bioqumica de las microalgas
cultivadas (Alvarez 1994).

(14) El medio de cultivo utilizado en etapas de

14) cepario e intermedio en el criadero es el Medio F/2
modificado (Guillard 1975) para Microalgas Marinas;
ya que provee los requerimientos mnimos de las
especies en cultivo, tales como agua, sales
minerales (macro y micronutrientes) y factores de
crecimiento (vitaminas); mientras que en la etapa de
cultivo masivo, se utiliza Proline F/2 Algae Food Part
A y Part B y Metasilicato de sodio en el caso del
cultivo masivo de diatomeas.

Tabla N 3
Preparacin del medio F/2 modificado (Guillard 1975) para microalgas
marinas

Macronutrientes g/L
KNO3 75.00
NaH2PO4 . 2 H2O 5.65
Micronutrientes g/L
EDTA Na2 4.360
FeCl3 . 6 H2O 3.150
CuSO4 . 5 H2O 0.010
ZnSO4 . 7 H2O 0.022
CoCl2 . 6 H2O 0.010
MnCl2 . 4 H2O 0.180
Na2MoO4 . 2 H2O 0.006
Vitaminas g/L
Cyanocobalamina 0.002
Tamina HCl 0.100
Biotina 0.001
Reactivo 4 mL/L
Na2SiO3 . 5 H2O 10.00
H3ClO4 5.00
ajustar a pH 8.0 con 1 M Na OH or HCl
Preparacin del Medio En 1 Litro
Reactivo 1 1.00 mL
Reactivo 2 1.00 mL

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Reactivo 3 1.00 mL

a pH 3.0 a 4.0 con 1M HCl

Reactivo 4
a pH 8.0 con 1M Na OH o HCl

Para cultivo masivo controlado (mayor a 5L)

5 ml Solucin A + 5 ml Solucin B en 37,8 L de agua de mar
1 ml Solucin A + 1 ml Solucin B en 1 L de agua de mar
Cuando se trata de diatomeas, adems debe adicionarse 13 mg
de Na2SiO3 (Metasilicato de Sodio)

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X. SISTEMAS DE CULTIVO

Para llevar a cabo el cultivo de las especies microalgales es preciso realizar

una seleccin de las mismas, seleccin que ha de basarse en dos criterios
fundamentales, el valor nutritivo y la facilidad de su cultivo, adems habr que
tener en cuenta caractersticas tales como las dimensiones de las clulas, la
naturaleza de las paredes celulares y la composicin qumica (Corral et al.
2000). Los requerimientos variarn en funcin del tipo de especies a alimentar
o el estado de evolucin de las mismas, si bien, los grupos de microalgas que
suelen utilizarse son ricas en contenidos nutritivos (Robin 1982 citado en Corral
et al. 2000).

Tabla N 4
Composicin de contenidos nutritivos en porcentajes de materia seca
total de algas fitoplanctnicas

Lpidos Glcidos Protenas Cenizas

Clorofceas 5 23 55 15
Crysofceas 8 24 53 21
Bacilariofceas 5 14 33 32
Dynofceas 16 33 30 11
Myxofceas 13 31 36 11

Una vez que se han determinado las especies que sern objeto de cultivo, en
la sala de produccin dedicada a ello se sigue un proceso a partir de las cepas
madre que pasan por distintas fases y volmenes, segn el siguiente esquema:

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SISTEMA DE CULTIVO MICROALGAL

Laboratorio Investigacin de Moluscos

TUBOS 10 mL

250 mL

MATRACES
500 mL

1000 mL

5L

20 L

T
A
N
200 L
Q
U
E
S

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Las cepas se obtuvieron de diversos centros de investigacin (Banco de

Germoplasma del Laboratorio de Biotecnologa del IMARPE y laboratorios
especializados de otros pases) y aislndolas directamente a partir de muestras
de agua de mar. Asimismo, se han separado las especies endmicas de
fitoplancton, mediante tcnicas de aislamiento para establecer un cultivo
unialgal, clonal y axnico, tras conseguir la ausencia de cualquier germen,
principalmente de bacterias.

Se requiere una previa preparacin de recipientes y medios de cultivo lquidos

esterilizados (exposicin a diferentes mecanismos: autoclave, bajo radiaciones
UV, o mediante limpieza con jabn neutro). La coleccin de cepas es
mantenida en condiciones estriles de laboratorio como inculo inicial y
repetitivo, no slo como precaucin ante una posible prdida del cultivo usual
(por contaminacin o accidentes) sino como inculo rejuvenecedor del cultivo,
prctica que habitualmente se realiza en forma mensual.

Los cultivos de partida o cepas se mantienen en medios lquido y slido, en

tubos de 10 mililitros y en placas de 10 cm de dimetro, procurando
condiciones que limiten al mximo el metabolismo de la cepa, pero que la
mantengan sana y pura. Es habitual mantenerlas en una cmara de siembra a
baja temperatura (19C) a dbil iluminacin.

Los inculos procedentes de las cepas en reserva servirn para desarrollar una
secuencia de cultivos en medio lquido en recipientes de tamao
progresivamente mayor. Es habitual iniciar dicha secuencia con recipientes tipo
Erlenmeyer de cristal de 250 mL a los que se ha aadido el agua de mar y el
medio nutritivo adecuado, tratados previamente por mecanismos de
esterilizacin, asepsia y desinfeccin; mediante el autoclave, por filtracin,
tratamiento por UV, etc. Se introduce en el agua una siembra de cultivo
monoespecfico que va a utilizar la energa luminosa para fabricar su materia
orgnica a partir del carbono y de las sales nutritivas que hay en el agua. Cada
clula reproduce as su materia y se divide en dos clulas hijas idnticas que
van a continuar multiplicndose hasta el agotamiento de uno de los elementos
esenciales (Corral et al 2000). A los cuatro das, el cultivo desarrollado en estos
recipientes servir como inculo de volmenes mayores, generalmente
recipientes de cristal de 500 mL y posteriormente de 1L, con agua de mar
estril y enriquecida. A los cuatro das aproximadamente el cultivo desarrollado
en estos recipientes de volumen intermedio servirn de inculo a recipientes
mayores y de diversa tipologa, botellones de 5L y 20L, tanques de fibra de
vidrio de 200L dispuestos en ambientes menos protegidos.

En general, los recipientes dedicados al cultivo masivo, en medio y gran

volumen, van provistos de mecanismos de agitacin del medio lquido. Esta
agitacin tiene como fin prevenir la sedimentacin de las clulas en cultivo,
facilitar la dispersin y homogeneizacin de los nutrientes, acercar a las clulas
algales a la fuente de luz, superficie del recipiente o paredes transparentes,
disminuyendo el tiempo de ausencia de luz en el seno de cultivos cada vez
ms densos, evitando la fotoinhibicin y la estratificacin trmica o salina, etc.
Esta agitacin se provoca con el burbujeo de aire en el seno del cultivo, aire al
que puede aadirse gas carbnico en las dosis ms adecuadas. En casos de

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grandes tanques de cultivo en instalaciones de tipo industrial la agitacin puede

venir provocada por sistemas tan diversos como air-lifts, ruedas de paletas,
agitadores superficiales, etc. (Corral et al 2000).

El agua de mar es el medio empleado para el desarrollo de microalgas en

acuicultura, la misma que es enriquecida con nutrientes (macronutrientes y
micronutrientes) para favorecer las de elevadas densidades en cultivo masivo.

Las formulaciones de los medios nutritivos para estos cultivos estn

bsicamente formadas por agua destilada y sales minerales, nitratos, fosfatos,
silicatos; como macronutrientes y como micronutrientes trazas metlicas y
vitaminas. Se les debe proporcionar luz fra constante a intensidades
comprendidas entre 1.000 y 5.000 lux, la temperatura se controla entre los 19 y
21 C y el medio se mantiene con agitacin fuerte.

Para obtener buenos resultados las condiciones de cultivo deben de ser

rigurosas, prestando atencin a los siguientes procesos:

Las manipulaciones deben ser estriles para evitar la contaminacin por

organismos no deseados.
El agua de mar ser de buena calidad siempre que sea esterilizada por
diferentes mecanismos mencionados en tpicos anteriores (filtracin,
calor, etc.).
Se enriquecer con la ayuda de un medio que contenga los elementos
necesarios para el desarrollo de las algas, principalmente nitratos y
fosfatos, silicatos en el caso de diatomeas, pero tambin boro, hierro,
manganeso, diversos oligoelementos y vitaminas B1 y B12.
La intensidad lumnica ser suficiente (2.000 lux en promedio).
La temperatura constante y ptima, para la especie a cultivar (19-20 C).
Habr aporte de gas carbnico para reemplazar el utilizado por las algas
en el agua de mar, jugando adems un papel preponderante en el
equilibrio del pH.

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XI. METODOLOGA Y FASES DE CRECIMIENTO

El mtodo de cultivo de microalgas usado en el LIM, segn su naturaleza es

intensivo, por el tipo de cosecha es un cultivo batch semicontinuo y
monoespecfco de acuerdo a su pureza. El medio de cultivo empleado es el F/2
de Guillard modificado. Las condiciones de laboratorio son 20C 1C,
aireacin constante en sistemas cerrado, iluminacin constante con luz fra y
fluorescentes de 40 W.

El proceso de cultivo se inicia en medio lquido desde tubos con 10mL hasta
botellas con 20L y tanques de 200L.

Uribe (1992), Alvarez (1994) y Gonzales (2000) proponen que el cultivo de

microalgas del tipo batch (ciclo) distingue cinco fases de desarrollo en su
crecimiento, obedeciendo de modo general a la grfica de la figura 15.

3,0 c d
2,5 e
cel/mL

2,0

1,5 b
1,0

0,5
a
0,0
1 2 3 4 5 6
t 7 8 9 10

Figura 15: Fases de desarrollo del cultivo de microalgas

a) Fase de latencia o ajuste: En el inicio de la curva de crecimiento se puede

observar, una fase de ajuste donde la microalga se esta adaptando a las
condiciones ambientales del sistema de cultivo; esta fase es corta y no hay
incremento neto de la poblacin. Se produce cuando se realiza la inoculacin
del cultivo a un medio fresco.

b) Fase de desarrollo logartmico o exponencial: la divisin celular se

acelera, duplicndose la biomasa sucesivamente en funcin a intervalos
iguales de tiempo, durante este proceso el cultivo se hace exponencial, las
clulas asimilan los nutrientes suministrados en el cultivo y mantienen una
reproduccin asexual activa. En esta fase k es constante:

K = (log2 N2 - log2 N1) / (T2 - T1)

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donde K es la constante de reaccin o tasa especfica de crecimiento (1/das),

log es el logaritmo en base 2, N es la medida de la biomasa o nmero de
clulas y T es el tiempo.

c) Fase de retardo o declinacin: la velocidad de divisin celular se ralentiza

conforme se va limitando la disponibilidad de nutrientes o factores qumicos de
crecimiento (N, P, Fe, K, Mg, ), el tiempo para duplicar la poblacin aumenta,
reducindose la tasa de crecimiento y la actividad fotosinttica debido a la
escasa penetracin de la luz por el incremento de la densidad poblacional.

d) Fase estacionaria: Esta fase es de corta duracin y no hay un incremento

neto de la poblacin. La tasa de crecimiento se compensa con la de mortalidad
celular, de tal modo que = d, donde es la tasa de crecimiento y d es la tasa
de mortalidad.

e) Fase de declinacin o muerte: Aqu la tasa de mortalidad supera a la tasa

de multiplicacin celular, es decir que d > .
El crecimiento sostenido de una poblacin depende de la interaccin mutua de
factores fsicos, qumicos y biolgicos; dicho crecimiento se expresa
grficamente como el incremento en funcin del tiempo de la biomasa o
nmero de clulas dentro de un cultivo. El cambio diferencial se representa
como:
dN / dT = F ( N )

Donde F (N) expresa la tasa de cambio de la poblacin en el tiempo. Como

esta funcin depende de los factores fsicos y qumicos del medio externo, el
resultado cuando el espacio disponible y los nutrientes son limitados es una
curva sigmoidea. En condiciones constantes de crecimiento cuando la luz y los
nutrientes no cambian en el tiempo F (N) es proporcional al nmero de
organismos:
F(N)=NK=N(-d)

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XII. PROCEDIMIENTO PARA EL CULTIVO DE MICROALGAS

12.1. Cultivo de cepa

a) Mantenimiento de Cepario en Medio Lquido

Durante esta etapa las cepas de la coleccin son renovadas mensualmente. Se

emplean tubos de ensayo (15 cc) estriles, conteniendo 10 mL de medio de
cultivo. (16) La inoculacin se realiza en una cmara de siembra bajo
condiciones de asepsia, (17) usando una pipeta Pasteur para transferir una
alcuota (6 a 10 gotas) al nuevo tubo manteniendo el mechero encendido, (18)
previa observacin al microscopio. Las cepas se mantienen a 19C, luz
artificial constante y son agitadas en forma manual diariamente.

16) 17) 18)

b) Mantenimiento de Cepario en Medio Slido

El mantenimiento de las cepas de microalgas en medio slido, se realiza por

perodos ms extensos. (19) Se emplean placas con 20 ml de Agar Marino
preparado en agua de mar estril y enriquecida con el Medio F/2 modificado
(Guillard 1975) y metasilicato de sodio slo en el caso de tratarse de
diatomeas. El mechero Bunsen se mantiene encendido mientras se extrae una
porcin de la placa para diluirlo en el medio. (20) Se extiende el inoculo con
una asa de siembra Drigalski (asa de vidrio) en la placa para dispersar la
microalga. (21) La placa es sellada, (22) rotulada y almacenada en un ambiente
adecuado.

19) 20) 21) 22)

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12.2. Cultivo inicial

(23) Se desarrolla en matraces de 250 cc y 500 cc debidamente esterilizados,

conteniendo 150 mL y 300 mL de medio de cultivo, (24) donde son transferidos
5 mL de cepa y 10 mL de cultivo patrn flameando previamente el tubo y el
matraz en el mechero encendido. (25) Los envases se cubren con papel
aluminio y tapones de goma para ubicarlos en estantes bajo 19C y luz
constante.
(26) Los matraces de 250 cc deben ser agitados manualmente en forma diaria
para evitar la sedimentacin de las clulas microalgales, (27) mientras que los
envases de 500 cc reciben aeracin permanente (filtrado a 1 ) mediante un
soplador regenerativo de aire para dispersar los nutrientes. Se rotulan los
envases consignando la fecha y la especie de cultivo.

23) 24) 25)

26) 27)

12.3. Cultivo intermedio

Se desarrolla en matraces de 1000 cc a 5000 cc debidamente esterilizados,

conteniendo 800 mL y 4000 mL de medio de cultivo, (28) donde son
transferidos el 90% del inculo del cultivo anterior. (29) Los envases se cubren
con tapones de goma y papel aluminio para ubicarlos en estantes bajo 19C,
luz artificial y aeracin permanente (filtrado a 1 ) mediante un soplador
regenerativo de aire para dispersar los nutrientes y evitar la sedimentacin de
clulas. (30) Se rotulan los envases consignando la fecha y la especie de
cultivo.

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28) 29) 30)

30) 30)

12.4. Cultivo masivo

Se desarrolla en garrafones de 20 L a 200 L debidamente esterilizados, (31)

conteniendo 15 L y 170 L de medio de cultivo, donde son transferidos el 90%
del inculo del cultivo anterior que presente caractersticas apropiadas (cultivo
en fase exponencial, color adecuado, morfologa de microalgas y carga
bacteriana mnima). (32) Los garrafones y (33) los tanques se cubren con papel
aluminio y tapas mantenindolos en un ambiente hermtico bajo 19C, luz
artificial y aeracin permanente (filtrado a 1 ) mediante un soplador
regenerativo de aire para dispersar los nutrientes a travs de capilares y
difusores evitando la sedimentacin de clulas. (34) Se rotulan los envases
consignando la fecha y la especie de cultivo.

31) 32) 33) 34)

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XIII.- SUMINISTRO DE ALIMENTO VIVO

13.1. Cuantificacin celular

La produccin de los cultivos de microalgas se expresan rutinariamente en
trminos de clulas presentes en un mililitro de cultivo, que se evalua mediante
el conteo celular directo al microscopio (Figueroa 2001). Se utiliza la cmara de
Neubauer, que tiene una dimensin de 1 mm por lado; se encuentra dividida en
25 cuadrantes de 0,2 mm, sin embargo solo en 5 se hizo un recuento de
clulas, debido al registro de clulas muy similar en cada cuadrante; se obtiene
el promedio de los 5 cuadrantes muestreados, que es multiplicado por 25
(numero total de cuadrantes en que esta seccionada la cmara) y por 10000
(volumen de la cmara 1*10-4 mL), para obtener las concentraciones de
microalgas en clulas por mL (Villafae y Reid 1995)

Figura 35: Hemacitmetro

a) Suministro de alimento vivo

Para realizar la entrega de alimento vivo, se debe tener en cuenta la

concentracin de la microalga cultivada en cel/ml y el volumen a cosechar del
cilindro de cultivo estar dado por la frmula:

V1 x C1 = V2 x C2 (Lepez y Vega 2003)

Donde:
V1 Volumen de microalgas que se desea suministrar
C1 Concentracin de la microalga en el cilindro de cultivo
V2 Volumen de agua de mar donde estn los filtradores
C2 Concentracin que se debe dar a los filtradores y que depende del da
de cultivo en que se encuentren estas

El clculo de los volmenes de suministro de alimento para los diferentes

organismos y en sus diferentes etapas de cultivo, se realizan en forma diaria,
para lo cual se digitan los datos en una planilla en Microsoft Excel (Ver Anexo
1).

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XIV. AISLAMIENTO

Es necesario el aislamiento de una unidad algal y la colocacin de la misma en

un medio de cultivo adecuado para su multiplicacin, a fin de establecer un
cultivo unialgal (monoespecfico). Un cultivo unialgal establecido es necesario
para preparar un cultivo axnico (Alvarez 1994).

Andersen (2005) y Alvarez (1994) consideran que el mtodo ms sencillo y

comnmente usado es el aislamiento por micropipeta, empleando una pipeta
Pasteur o un capilar de vidrio, adems del rayado en agar (Alvarez 1994).

Para nuestro caso, el aislamiento de las

cepas se llev a cabo por la combinacin
de dos mtodos: diluciones sucesivas y
aislamiento en placas usando la pipeta
Pasteur (Almaguer et al 2004),
obteniendo cepas monoespecficas de
una muestra de agua y posteriormente
cultivos clonales (Trujillo 1997 citado en
Gonzales 2000).

Figura 36: Tcnica de aislamiento por

dilucin sucesiva

La tcnica consisti en aspirar una pequea gota y traspasarla a una nueva

gota diluyndola en medio estril hasta obtener una clula completamente
aislada para inocularla en un tubo de ensayo con medio lquido F/2 Guillard
modificado y colocarlo en un ambiente con condiciones favorables para el
cultivo.

Es recomendable inocular en placas con agar enriquecido, donde el tiempo de

incubacin variar de unos das a varios meses para especies marinas
(Andersen 2005); posteriormente pueden ser traspasadas a medios lquidos y
repetir el procedimiento descrito anteriormente.

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XV. PARMETROS POBLACIONALES

Los principales parmetros del crecimiento de un cultivo de clulas, segn

Paniagua (1986) se calculan de la siguiente forma:

Divisiones por da (k)

Se obtiene el valor del nmero de divisiones por da y se calcula de acuerdo a
Guillard (1973), citado en Paniagua (1986).

K = (3,322/T2-T1) * (logN2/N1)

Donde:

3,322 = Factor de conversin del logaritmo base 2 a base 10 (3,322 = log2 10)
N1 = Concentracin celular al tiempo T1
N2 = Concentracin celular al tiempo T2

Tasa de crecimiento especfico () o constante de crecimiento

Seala la velocidad de crecimiento del cultivo. Se determina segn
recomendaciones de Enviromental Protection Agency (1971), citado en
Paniagua (1986) y modificado por Guillard (1973) de la forma siguiente:

= log (N2/N1) da - 1
T2 T1

Tiempo medio de generacin (Tg)

El tiempo medio de generacin (Tg) se determina como lo recomienda Eppley y
Strickland (1968) citado en Paniagua (1986):

Tg= log2 (T2-T1) = log2

logN2 logN1 K

Produccin Diaria (PD)

Indica el incremento de clulas logrado en el cultivo por unidad de tiempo. Se
determina segn recomendaciones de De la Cruz y Alfonso (1975) citado en
Paniagua (1986):

P.D. = N2 N1
T2 T1

Tiempo de duplicacin (TD)

Es el tiempo necesario para crecer la poblacin al doble de la cantidad del
perodo precedente. Se determina segn recomendaciones de De la Cruz y
Alfonso (1975) citado en Prez (1995)

T.D. = (Iog102) (T2 T1) / (3.322) (Log10 (D2/D1))

Variacin Porcentual de la densidad (VP)

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Indica la variacin diaria en la densidad del cultivo dada en porcentaje. Se

determina segn recomendaciones de De la Cruz y Alfonso (1975) citado en
Prez (1995).

(V.P.) = (100) (D2-D1)/(T2 T1)

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XVI. RESULTADOS EN EL LABORATORIO DE INVESTIGACIN DE MOLUSCOS

16.1. Produccin de microalgas

El mtodo de cultivo de microalgas usado en el Laboratorio de Investigacin de

Moluscos del IMARPE sede Regional de Ilo, segn su naturaleza es intensivo,
por el tipo de cosecha es un cultivo batch semicontinuo y monoespecfco de
acuerdo a su pureza (Uribe 1992 y Avalos 2004).

Las especies mantenidas en la coleccin de nuestro stock cuenta con diez

cepas (dos especies nativas), de las que se han masificado tres especies:
Isochrysis galbana, Chaetoceros gracilis y Pavlova lutheri.

El proceso de esterilizacin es una prctica fundamental que se emplea con la

finalidad de eliminar por medios fsicos y qumicos, aquellos microorganismos
indeseables y residuos contenidos en el material de vidrio y plstico
empleando: a) jabn neutro, b) detergente industrial, c) temperaturas elevadas
mediante estufa; y agua de mar a travs de: a) filtros de arena, b) tierra
diatomea, filtros de cordoncillo de diferente abertura (10, 5 y 1 ), c) carbn
activado, d) rayos ultravioleta (Paniagua 1986), utilizados en las diferentes
etapas de cultivo, de manera que permita mejores condiciones de desarrollo de
las microalgas en lo posible libres de microorganismos contaminantes.

El medio de enriquecimiento utilizado para estos organismos auttrofos

marinos fue el F/2 modificado de Guillard (1975) (FAO 2006 y Costas 1988). Se
cuenta con cultivos a mayor escala para lo cual se emplearon matraces desde
250 mL hasta tanques de 200 L y aereacin proveniente de un generador de
aire o blower, para la homogenizacin de nutrientes y evitar la sedimentacin
de las microalgas (Torrentera y Tacon 1989). La densidad celular se determin
mediante el recuento microalgal, utilizando la cmara de Neubauer (dimensin:
1mm por lado).
El suministro de alimento vivo se realiz determinando la concentracin de la
microalga cultivada (cel/mL) y el volumen a entregar aplicando la frmula:

V1 x C1 = V2 x C2 (Lpez y Vega 2003)

Donde:
V1 Volumen de microalgas que se desea suministrar
C1 Concentracin de la microalga en el cilindro de cultivo
V2 Volumen de agua de mar donde estn los filtradores
C2 Concentracin que se debe dar a los filtradores y que depende del da
de cultivo en que se encuentren estas

El clculo de los volmenes de suministro de alimento vivo para los diferentes

organismos filtradores y en sus diferentes etapas de cultivo, se realizan en
forma diaria, para lo cual se registran y digitan los datos en una planilla en
Microsoft Excel.

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16.2. Densidad microalgal

La subsistencia de los laboratorios o criaderos de Acuicultura en condiciones

controladas dependen grandemente del aporte de alimento para el
mantenimiento de organismos (semejantes y/o larvas) en base a microalgas,
que actualmente se consideran como el mejor alimento para los
filtroalimentadores de importancia protica y comercial (Paniagua, 1986). Las
microalgas juegan un rol esencial en la acuicultura al constituir la base de la
alimentacin, en la dieta de moluscos, estados iniciales de larvas, algunos
crustceos (Ferreira et al. 2008 y Borowitzka 1997)

Los criaderos de bivalvos tienen que producir grandes volmenes de algas de

buena calidad y de alto valor nutritivo (FAO 2006); por lo que el desarrollo de
tcnicas de cultivo de microalgas para alimentacin de moluscos en el LIM
cuenta con una produccin continua y eficiente de alimento vivo para concha
de abanico Argopecten purpuratus y macha Mesodesma donacium.

Durante el 2009, la lnea de cultivo de microalgas ha obtenido resultados

importantes en trminos de densidad (cel/mL) a nivel masivo controlado (200L)
sobre todo en el cuarto trimestre, siendo Isochrysis galbana la especie que
obtuvo las mayores densidades con 4.4 x 106 cel/mL en promedio, seguida de
Pavlova lutheri que present 3.1 x 106 cel/mL y Chaetoceros gracilis con 3.0 x
106 cel/mL; es necesario resaltar que las densidades obtenidas prcticamente
duplican a la produccin del ao 2008 (2.1x106 para I. galbana, 1.51 x 106 para
P. lutheri y 1.55 x 106 para Ch. gracilis). (Fig. 1)

Produccin anual de microalgas 2009

1,20E+07

1,00E+07

8,00E+06
cel/mL

6,00E+06

4,00E+06

2,00E+06

0,00E+00
I II III IV

I. galbana Ch. gracilis P. lutherii

Figura 37: Produccin anual de alimento vivo

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Tabla 5: Fluctuacin de las concentraciones del alimento vivo

Trimestre I. galbana Ch. gracilis P. lutheri

I 1,24E+06 6,53E+05 7,61E+05

II 2,04E+06 1,71E+06 1,79E+06
III 3,55E+06 2,38E+06 2,72E+06
IV 4,44E+06 3,00E+06 3,15E+06

Este aumento de densidad se logr debido a la optimizacin del cultivo de

microalgas en el nivel masivo, mediante la modificacin de tanques de cultivo
(200L) que permiti el ingreso de luz con mayor intensidad y
consecuentemente favoreci la fotosntesis de las microalgas.
Por otro lado, el monitoreo del sistema de cultivo implementado a partir del
anlisis microbiolgico de posibles focos contaminantes, permiti tomar
medidas correctivas y preventivas de algunos procedimientos (sobre todo en el
tratamiento del material de cultivo: lavado), para asegurar la calidad del
alimento vivo durante su produccin, siendo vital contar con este criterio para
mantener la eficiencia del cultivo microalgal (Torrentero y Tacon 1989)
La produccin de microalgas para la alimentacin de las larvas de camarn en
los laboratorios comerciales del noroeste de Mxico est basada en un nmero
reducido de especies. Las ms importantes son las diatomeas cntricas
Chaetoceros spp., con una concentracin media cercana a 1 x 106 cl/ml y con
una produccin de biomasa orgnica altamente variable en cada laboratorio,
probablemente en relacin con las condiciones estacionales y con fuertes
diferencias entre laboratorios, que se explica principalmente por las diferencias
entre sistemas de cultivo y en las rutinas de produccin (Lopez et al 2004).

Concentraciones celulares en los cultivos masivos (Lopez et al 2004)

En una encuesta realizada en 14 laboratorios de Sonora y Sinaloa, adems de
uno en Chiapas y otro en Colima, se encontr que stos contabilizaron
densidades celulares entre 0.9 y 1.5 x 106 clml-1 para Chaetoceros muelleri,
para Isochrysis se reportaron desde 1.0 a 2.0 x 106 clml-1, mientras que las
concentraciones de las flageladas verdes (Tetraselmis suecica, Dunaliella
tertiolecta) variaron de 0.2 a 0.6 x 106 clml-1 (Lpez et al. 2004). Adems
debido a problemas de produccin de las otras especies y con el fin de
simplificar las rutinas, la mayora prefiere utilizar como nico alimento
Chaetoceros muelleri.
La concentracin inicial de los cultivos masivos, que se encontr mediante
visitas in situ vari desde 0.08 a 0.49 x 106 clml-1 en Sinaloa y entre 0.19 y
0.37 x 106 clml-1 en Sonora. Esto es una muestra de que la rutina de
produccin es poco efectiva, debido a que para el ltimo nivel se utiliza por
ejemplo una sola columna de 200 a 400 litros, independientemente del volumen
de la pila o tina. Adems nunca se verifica la concentracin del inculo del
cultivo masivo, lo cual trae como consecuencia que se desconozca el estado
de crecimiento real del cultivo y por lo tanto es ms difcil mantener estable la
calidad de la biomasa.

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La densidad celular alcanzada a la cosecha con la misma especie de microalga

vari en el estado de Sinaloa desde 0.80 a 1.83 x 106 clml-1 y en el estado de
Sonora fluctu entre 0.82 y 2.09 x 106 clml-1. Estas diferencias encontradas
en los diferentes laboratorios se deben a la cantidad de inculo, a la
variabilidad de las condiciones ambientales (luz y temperatura), al tipo de
medio, a la duracin del cultivo y al diseo de los recipientes.
En otro estudio realizado en un laboratorio ubicado en Baha Kino, Sonora, se
encontr que para Chaetoceros muelleri se obtuvieron densidades celulares en
invierno y primavera menores a 0.75 x 106 clml-1 en cultivos de 3000 litros
bajo condiciones de laboratorio (Lpez et al. 1993). Sin embargo, cuando los
cultivos se mantuvieron al exterior en el mismo tipo de recipientes en cuatro
situaciones estacionales, la densidad celular aument hasta 1.12 1.49 x 106
clml-1 (Gallegos et al. 2002). Figueroa (2001) report en promedio en el
mismo laboratorio una densidad celular de 0.97 x 106 clml-1 en cultivo al
exterior entre septiembre y diciembre, mientras que al interior las
concentraciones alcanzaron solamente 0.45 x 106 clml-1.
Es comn encontrar las densidades celulares ms bajas en la estacin de
invierno y en los recipientes ms profundos y que reciben una cantidad de
radiacin solar menor que los recipientes menos profundos y con mayor
exposicin al sol. Adems en primavera y verano se lograron concentraciones
celulares mayores. Por otro lado, las rutinas de produccin ms largas no
implican necesariamente densidades celulares mayores, debido a que los
cultivos son frecuentemente iniciados con altas concentraciones, lo cual
provoca que el cultivo decaiga ms rpidamente.

En cuanto a las flageladas verdes, las bajas concentraciones iniciales (0.045 -

0.063 x 106 clml-1), causaron tambin bajas concentraciones al momento de
la cosecha (0.077 0.36 x 106 clml-1), motivo por el cual la mayora de los
laboratorios prefiere no cultivarlas y usar los recipientes destinados a su
produccin para el cultivo de Chaetoceros.

16.3. Especies de microalgas en la dieta mixta de A. purpuratus y M.

donacium

Tratando de ofrecer un suministro constante de alimento vivo procedente de

fuentes locales, es que se aislaron dos especies de importancia acucola en la
zona sur del pas, las mismas que son objeto de estudio en la sede central para
su identificacin con apoyo de personal especializado, por lo pronto se conoce
que una de las especies corresponde a un flagelado desnudo perteneciente a
las Prymnesophyceae, Isochrysis galbana, a la cual se le asign el cdigo IMP-
LBA-011 como conformante del Banco de Germoplasma del IMARPE.

Se adaptaron tcnicas de cultivo para alimento vivo, logrando aumentar

progresivamente el volumen de las especies aisladas hasta el nivel masivo
controlado (200L), a travs de cuatro etapas de desarrollo (cepa, inicial,
intermedio y masivo), los cultivos se desarrollaron bajo condiciones controladas
detalladas en la metodologa.

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Los resultados obtenidos mediante la estimacin de parmetros poblacionales

durante el perodo de crecimiento (fase exponencial), mostraron una velocidad
de crecimiento de 0,19 (cel/fe) durante la etapa masiva (200L) para el caso del
flagelado desnudo, permaneciendo pendientes los resultados de la diatomea
aislada por encontrarse en la fase intermedia y de adaptacin a la tecnologa
de cultivo.

La utilizacin de las microalgas como cultivo auxiliar en los cultivos intensivos

de bivalvos ha llevado a un amplio monitoreo de las caractersticas nutritivas
que estas clulas fitoplanctnicas deben cumplir para satisfacer los
requerimientos nutritivos de reproductores, larvas o postlarvas. Los trabajos
pioneros de Chu & Webb (1984) citado en Farias y Uriarte (2002), mostraron la
importancia de los cidos grasos esenciales y las relaciones entre los cidos
grasos n-3 y n-6, que promueven un mayor crecimiento, generndose as un
indicador de la calidad de las microalgas (Farias y Uriarte 2002).

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XVII. PERSPECTIVAS

El IMARPE Ilo cuenta con la oferta del cultivo auxiliar para satisfacer la
alimentacin de diversos organismos acuticos filtradores, por lo que se
plantean una serie de medidas para potenciar y fortalecer la acuicultura en
trminos nutricionales.

Tan solo por mencionar tpicos que debieran ser considerados a nivel del sur
de acuerdo a nuestro contexto, sealamos algunas de mayor importancia:

Actualizacin de investigadores en materia de capacitacin y cursos de

especializacin (Diplomados, segunda especialidad, maestras,
doctorados, etc.); solo invirtiendo en el fortalecimiento de las
capacidades ser posible generar capital intelectual para el desarrollo de
la acuicultura de nuestra regin.
Implementacin de mecanismos para interactuar con la sede central, ya
sea con recursos humano capacitado, anlisis para determinacin del
perfil bioqumico de cepas nativas.
Formulacin de proyectos productivos en funcin a la capacidad
innovadora y temas relevantes segn la necesidad del sector acucola
considerando temas transversales como el cambio climtico.
Establecimiento de compromisos y firma de convenios con
universidades, gobiernos locales y regionales, entidades privadas a
travs de unidades o reas de responsabilidad social y cooperacin
internacional para financiar ejecucin de proyectos de innovacin
tecnolgica con proyeccin social y en beneficio del sector pesquero
acucola y productivo.

Por otro lado, los usos de las microalgas producidas a nivel masivo son
variados: produccin de sustancias, depuracin de aguas residuales, uso en
alimentacin animal y humana, uso como fertilizante (Alvarez 1989); siendo
indispensable potenciar la lnea de produccin de microalgas del LIM y revisar
la posibilidad de orientar esfuerzos hacia alguna de estas directrices.

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Anexo 1

CLCULO DE COSECHA DE ALIMENTO

Para realizar la cosecha se debe tener en cuenta la concentracin de la microalga cultivada en cel/ml y el volumen a cosechar del cilindro de cultivo estar dado por la frmula

V1 x C1 = V2 x C2
V1 Volumen de microalgas que se desea cosechar
C1 Concentracin de la microalga en el cilindro de cultivo
V2 Volumen de agua de mar donde estn las larvas
C2 Concentracin que se debe dar a las larvas y que depende del da de cultivo en que se encuentren estas Ir
CLCULO DE COSECHA DE ALIMENTO 01/04/2007
Ir Microscopio C1 V2 V1 V1 C2
Fecha Calidad Recuento Volumen Recuento Microalgas Volumen Recuento Microalgas
Concentracin Masivo 10 Organismos en Volumen N Conc. Cant.
Especie Microalga N KalWall S KW % Alimento Larvas Micro Micro Newbauer Da cultivo Lt Lt especifico para larvas
E 6 cultivo Estanque Lt Estanque Final Band.
alga alga (cel/ml)
0 0.0E+00 0.0E+00 0.0E+00 #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0!
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Elaboracin: S.A.Z.F.

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