INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS
BIOQUMICA GENERAL
Alumnos: Orta Miranda Jorge Oswaldo / Tern Chvez Alondra Itzel Grupo: 4QV1 Seccin: 1
AISLAMIENTO DE DNA PLASMIDICO
INTRODUCCIN OBJETIVOS
Los plsmidos son molculas de DNA extracromosomal Aislar DNA plasmdico bacteriano, comprobando dicho
los cuales estn presentes en algunas clulas aislamiento mediante electroforesis en gel de agarosa
bacterianas, levaduras y hongos. Los mismos poseen
DNA de doble hebra, mayormente son circulares pero RESULTADOS
tambin se han encontrado plsmidos lineales. La
replicacin de los plsmidos es independiente de la
replicacin del cromosoma del husped ya que los
plsmidos poseen su propio origen de replicacin. El
nmero de copias de un plsmido en la clula es
variable, todo depende del origen de replicacin del
que posea el mismo y su regulacin. Los plsmidos no
son esenciales para el desarrollo o supervivencia de la
clula pero le proveen una ventaja competitiva a las
clulas que los poseen, dado a que los plsmidos
poseen genes que le confieren caractersticas selectivas
a su husped tales como resistencia a antibiticos,
nuevas habilidades metablicas como degradacin de
carbohidratos, factores de virulencia y produccin de
toxinas entre otros.
Figura 2. Electroferograma obtenido de la separacin
de un plsmido
Fig1. Esquema de plsmidos y DNA cromosomal en una bacteria
Los plsmidos son herramientas muy tiles en
ingeniera gentica para la transformacin gnica y la
manipulacin gentica de procariotas y eucariotas. Los
plsmidos empleados en ingeniera gentica se llaman
vectores. Son muy tiles para sintetizar en grandes
cantidades protenas de inters, como la insulina o los
antibiticos, mediante un procedimiento conocido
como transformacin. Figura 3. Electroferograma documentado de la
separacin de un plsmido
ANLISIS DE RESULTADOS travs del gel, y las encontramos ms lejos del punto de
origen, el pozo.
Al extraer el DNA plasmdico de las bacterias
(Escherichia coli) obtenemos la molcula purificada pero Las molculas circulares relajadas y las molculas
habitualmente habr molculas de plsmido en dos o Lineales avanzan ms lentamente que las sper
tres conformaciones, formas topolgicamente enrolladas. Habitualmente, las molculas lineales
diferentes. Conocidas como sper enrolladas, relajadas avanzan un poco ms rpido que las circulares
y lineales de longitud completa, corresponden a la relajadas.
misma molcula y todas tienen la misma longitud,
pero tienen diferente forma, por lo que ocupan un CONCLUSIN
volumen efectivo diferente y avanzan por el gel a
distinta velocidad. Se logr aislar el DNA plasmidico PUC-19 el confiere
resistencia a los antibiticos a Escherichia coli y
Los resultados que obtuvimos en nuestro caso fueron logramos ver parte del corrimiento a diferentes
muy lentos que pudo ser debido al grosor del gel de velocidades de las isoformas en la agarosa,
agarosa, al voltaje bajo que se utiliz pero este no comprobando este ltimo con imgenes
tiene ser tan alto ya que puede llegar a calentar y proporcionados por el profesor.
derretir la agarosa o al poco tiempo al cual estuvo
expuesto a 90V.
Bibliografa
La lectura con luz UV nos revelo los resultados
prestados en la Figura 2. En la imagen se puede 1. Nelson D. y Cox M. (2005) Lehninger. Principios
observar que las diferentes isoformas plasmdicas de bioqumica 4 Ed. Ed. Omega Pag. 241
corrieron de manera extraa a travs de la agarosa pero 2. Donald Voet, Judith G. Voet, Charlotte W. Pratt
poniendo un poco de atencin en especial cerca de los (2009) Fundamentos de Bioqumica. 2da edicin,
pozos y en la parte central del cuadro de agarosa, se Ed. Panamericana Pg. 482
observan algunas manchas que pueden ser las
isoformas circulares relajadas y lineales que estn
prximos a los pozos y sper enrolladas que pueden ser
las manchas es la parte central. Tambin podemos
notar que los pozos se ven muy marcados eso nos
indica que no se elimin todo el ADN cromosomal y este
al ser una molcula muy grande no corre por placa
quedndose estancado en los pozos.
La forma de la molcula afecta a su velocidad de
migracin o avance por el gel. Como se muestra en la
Figura 3, es posible ver las dos o tres formas de la
molcula, en el mismo carril del gel; todas ellas tienen
el mismo nmero de pares de bases.
Las tres formas, sper enrollada, relajada y lineal,
tienen la misma longitud y la misma masa molecular,
pero distinta conformacin y, as, distinto volumen
efectivo, distinto tamao tridimensional. Por ello,
avanzan a distinta velocidad por el gel. Debido a que las
molculas superenrolladas son ms compactas, su
volumen es menor, se mueven con ms facilidad a
