SEGUNDO INFORME DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Isabel Argello Saldarriaga, Liceth Cristina Cifuentes Martnez,
Paola Andrea Muriel Araujo, Schneider Nieto Vargas.
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
Resumen Resultados: En las muestras de queso
se identific por medio de la coloracin
Introduccin: Para la identificacin de de Gram el microorganismo que se aisl
un microorganismo se requieren de fueron cocos Gram positivos, al igual que
varios pasos el primero de ellos es en las muestras de agua y jugo. En la
conocer los mtodos de siembra ya que identificacin bioqumica encontramos
dependiendo de las condiciones en las cuatro microorganismos analizados
que crezca el microorganismo y del fueron cuatro cocos gram positivos, una
objetivo que se busca existe el mtodo bacteria gram positiva y una bacteria
de siembra adecuado, posterior a esto se gram negativa, a cada microorganismo
debe realizar un examen microscpico se le identifico: a uno catalasa positiva y
utilizando coloraciones como la tincin de a otro negativa y a uno oxidasa positiva y
gram, esporas y capsula ya que ellas nos a otro negativa respectivamente. Al
ayudaran a la clasificacin, morfologa y identificar la especie se obtuvo S.
estructuras del microorganismo, ya aereus, Streptococos sp. y varios
conociendo esto procedemos finalmente microorganismos que no fueron posibles
a la identificacin bioqumica para definir identificar.
su gnero e identificar la especie.
Conclusin: Es importante para la
Objetivo: Identificar un microorganismo caracterizacin de un microorganismo
de una muestra desconocida aplicando conocer cada uno de los pasos desde el
los mtodos de siembra para aislar el mtodo de cultivo adecuado hasta la
microorganismo y de esta manera identificacin bioqumica ya que estas
continuar posteriormente la observacin pruebas son muy utilizadas en
de su estructura y clasificacin por medio laboratorios tanto clnicos como de
de tinciones finalizando con la control de calidad para la identificacin
caracterizacin por medio de las pruebas de microorganismos como apoyo para el
bioqumicas. diagnstico de enfermedades y para
Metodologa: Se tomaron dos muestras detectar contaminacin en productos de
una slida (queso), dos liquida (agua del consumo humanos, como alimentos y
jardn botnico y jugo) y de agua.
microorganismos dados en laboratorio, Palabras clave: Aislamiento e
se aislaron en cultivos PC, se incub a identificacin bacteriana, tinciones,
37C por 24 horas; se tom una colonia pruebas bioqumicas, recoleccin de
del cultivo aislado y se procedi a muestras.
realizar un montaje fijo para realizar la
coloracin de Gram e identificar su Introduccin
clasificacin, por ultimo con unas
Las bacterias, algas, hongos y protozoos
muestras suministradas por el docente
etc, que habitan en nuestro ecosistema
se realizaron pruebas bioqumicas para
necesitan de condiciones especficas
identificacin de bacterias.
tales como PH, temperatura, humedad,
disponibilidad de nutrientes etc, as de luego estudiarlos. La fijacin es el
esta manera asegurar su presencia en proceso por el cual se conservan y fijan
dichos ambientes y cumplir con en su posicin las estructuras internas y
funciones vitales como la oxidacin de externas de la clula de los
metales, la fijacin de nitrgeno, la microorganismos. Hay diferentes tipos de
fijacin de carbono o la degradacin de tincin, como lo son:
compuestos orgnicos e inorgnicos. Es
Tincin simple que se emplean para
entonces necesario aislar cepas para
determinar tamao, la forma y la
poder caracterizar dichos
organizacin de las bacterias.
microorganismos y utilizarlos segn las
necesidades en procesos ambientales e Tincin de estructuras para capsulas,
industriales. Al ser aislados en cultivos endoesporas, flagelos.
puros los microorganismos necesitan las
condiciones anteriormente descritas para Tincin diferencial clasifican a las
poder tener un buen desarrollo (Manual bacterias segn sus caractersticas de
prcticas de laboratorio microbiologa tincin (Altas de Bioqumica para la
general U de A). identificacin de bacterias, Universidad
Autnoma de Mxico).
En los requisitos generales para la toma
de una muestra de alimento o ambiental Para que una clula viva, crezca y se
se debe tener la dotacin bsica reproduzca, debe ser capaz de
(Guantes desechables,, tapabocas, incorporar y transformar (mediante el
gorro), envases estriles para la muestra metabolismo) los compuestos qumicos
rotulados antes de usar, implementos que necesita para obtener energa
esterilizados para su recoleccin, control (catabolismo), as como las molculas
de la temperatura, para leches y agua se que pasarn a formar parte de su
recomienda ser transportada en los material celular (anabolismo). Todas las
primeros 30 minutos de la recoleccin a reacciones qumicas que se llevan a
temperatura ambiente (Manual para la cabo son catalizadas por enzimas. Las
toma de muestras para anlisis pruebas bioqumicas se emplean para
microbiolgico, secretaria de salud de identificar de forma clara y precisa la
Bogot). presencia o ausencia de una o un grupo
de enzimas o de una va metablica
El aislamiento y reconocimiento de completa en uno o ms
diferentes tipos de microorganismos microorganismos. (Protocolo de prcticas
mediante su morfologa es de vital uso de laboratorio de microbiologa
en el mbito industrial y ambiental, as experimental. Universidad autnoma de
como en diferentes campos de la Mxico).
medicina, ya que as se puede
determinar la resistencia a los Materiales y mtodos
antibiticos, posibles medios en los
Aislamiento e identificacin de
cuales habiten y caractersticas como el
bacterias:
peptidoglicano que nos dice que tan
gruesa es la pared celular en las Materiales: Agua peptonada, agar PDA,
bacterias. agar Nutritivo, alcohol industrial, frascos
Los microorganismos se tienen que fijar y shot, tubos falcn, cajas de Petri, bolsas
teir para poder verlos de manera hermticas, esptulas metlicas
adecuada y conocer su morfologa para estriles, asas de vidrio, pipetas de
diferentes volmenes, vortex, balanza y slido AN (Klebsiella sp, E. coli,
mecheros. Las muestras utilizadas Pseudomonas y Bacillus sp.,
fueron: 10 g de queso comprado en el Streptococcus y Staphylococcus)
minorista, 10 ml de agua del jardn Procedimiento: Utilizando las muestras
botnico y 10 ml de jugo trado de la descritas anteriormente cada integrante
casa de uno de los integrantes, este del grupo realizo: preparaciones en
ltimo por sugerencia del docente a fresco con caldo de cultivo y se observ
cargo puesto que el agua tenia con los objetivos de 10x y 40x, tincin
demasiada carga microbiana y nos simple, tincin para cpsula a partir de
dificultara los laboratorios posteriores. un cultivo de klebsiella sp., tincin para
Se procedi a tamizar y homogenizar el endoesporas (mtodo de Schaeffer -
queso y el jugo respectivamente, en el Fulton) a partir de un cultivo de Bacillus
jugo se tom 10 ml y en el queso 10 g sp. y tincin de Gram tanto a unos
de este, luego con el mechero encendido microorganismos proporcionados por el
se adicionaron los 10 ml o 10 g de la laboratorio como al microorganismo
muestra a dos frascos cada una con 90 problema. Todas las tinciones a
mL de agua peptonada estril y se excepcin de la preparacin en fresco se
homogenizo durando 3 minutos. observaron con el objetivo de 100x.
Posteriormente se tom 1ml de la
Identificacin bioqumica
suspensin anterior y se adiciono a 9ml
Medios de cultivo para pruebas
de agua destilada estril y a partir de
bioqumicas (TSI, SIM, LIA, Citrato,
aqu se realizaron las diluciones seriadas
Urea), agar almidn, agar sangre,
que en el caso del jugo y el queso fueron
plasma sanguneo, agua destilada,
de 10-4, 10-3, 10-2 y 10-1, en cada una de
perxido de hidrgeno, lugol, reactivo de
estas la cantidad adicionada fue de 1ml
Kovac s, tubos de ensayo, cajas de Petri,
de la dilucin anterior. Las ltimas dos
lminas, asas de aro y de punta. A los
diluciones de 10-3 y 10-4 fueron
microorganismos problema (3,6,h,j)
seleccionadas para ser sembradas en el
proporcionados en el laboratorio se le
medio de cultivo, se tom entonces una
realizaron las siguientes pruebas:
alcuota 0,1 ml de dichas muestras y se
Catalasa, oxidasa, TSI (Agar de tres
extendi sobre el agar nutritivo con asa
azcares con hierro), LIA (prueba de la
de vidrio esterilizada, este procedimiento
lisina), prueba de citrato, prueba de la
se realiz por duplicado. Las cajas fueron
ureasa, prueba SIM y prueba de la
incubadas a 37o C durante 24 horas.
hidrlisis del almidn.
Caractersticas morfolgicas y Resultados
tintoriales
Tincin simple: S. aureus Se pudo
Materiales: solucin salina, azul de observar que son Cocos en racimos, es
metileno, cristal violeta, lugol, alcohol decir staphylococcos. El azul de metileno
acetona, safranina, nigrosina, verde de fue el usado para esta tincin y solo
malaquita, aceite de Inmersin, laminillas permite evidenciar forma y distinguir las
cubreobjetos, medio lquido, lminas bacterias ms fcilmente.
portaobjetos, asas bacteriolgicas,
cultivos, mechero de alcohol y
microscopios. Se usaron las siguientes
muestras: cultivo mixto de
microorganismos en un medio lquido,
cultivos de microorganismos en medio
Tincin diferencial:
Tincin Gram: [Link] se tio de color Luego del tiempo de incubacin se
rosado y en forma alargada, como unos evidencio que haba un mejor
bastones, lo que indica que es un Bacilo crecimiento en el agar con la dilucin
Gram (-) seriada 10-4, mientras que en las
diluciones seriadas de 10-1,10-2 y 10-3 no
Mixta: En la muestra de agua se se pueden observar bien las colonias,
evidenciaron bacilos Gram negativos, esto ocurri en los dos tipos de
gracias a que se tieron de color violeta muestras. De estos cultivos se
oscuro y algunos cocos seleccion una colonia y se procedi a
sembrar en un medio estril para obtener
un cultivo puro del microorganismo, en
dicho cultivo se evidencio buen
crecimiento.
Tinciones Estructurales:
Tincin de Cpsula: Se utiliz la
Klebsiella para identificar la capsula que
esta posee, usamos nigrosina y dio
positivo, ya que se evidenciaron puntos
blancos en forma de pequeas comas en
la muestra, estos puntos son las
capsulas del microorganismo, ya que la
nigrosina tie el medio, ms no el
microorganismo.
Tincin para endoesporas: Esta tincin
se usa especficamente para determinar
endoesporas, que se colorearan de color
verde gracias al verde de malaquita, sin
embargo todo microorganismo diferente
se tender a teir de color rojo-rosado.
En este caso usamos B. Cereus
evidenciando las endoesporas por su
color verdoso.
En las pruebas bioqumicas de los cocos
Gram positivos se realiza prueba de
catalasa a la muestra de queso, esta dio
negativa, la hemolisis no se realiz. En la
muestra de jugo dio positiva y en la
coagulasa positiva. En las cajas Petri h y
j ambas dieron positivos.
Anlisis de resultados
Las diluciones seriadas 10-1,10-2 y 10-3 en
las dos muestras presentan una
acumulacin en colonias es decir que
son incontables y se evidencia en el
aspecto del agar. Las diluciones seriadas
10-4 de las dos muestras presentan un
nmero de colonias distribuidas de
manera que pueden ser contadas y
manejables. Esto se debe a que las
diluciones en serie son utilizadas para
RESULTADOS DE LA OXIDASA
disminuir la concentracin de
microorganismos en las muestras de
Muestra 3 y B N.A (No aplica) y la N.S.H
inters, debido a que segn la literatura
(No se hizo)
el nmero de colonias de bacterias que
crecern en la caja de petri depende de
su concentracin.
De las diluciones seriadas 10-4 en las dos
muestras se deduce que son ptimas
para obtener un cultivo axnico o puro
debido a que no se encuentran saturadas
y por lo tanto es muy posible el
crecimiento de colonias. Es por esta
razn que en la colonia tomada de la
dilucin seriada 10-4 fue sembrada en un para as poder determinar que
agar nutritivo evidencindose un microorganismo era el que estbamos
crecimiento distribuido y manejable. Los analizando.
resultados reportados en el libro biologa
de los microorganismos (Brock) Edicin En la prueba TSI (agar de tres azucares
10 muestran que los experimentos con hierro) el medio est constituido por
siempre tienden a ser constantes, en tres azucares: lactosa, glucosa y
diluciones con concentraciones mayores sacarosa, de las cuales la lactosa y la
el crecimiento es turbio, en cambio en sacarosa se fermentan en medio aerobio
concentraciones menores si se y la glucosa en medio anaerobio. Al
evidencian colonias. inocular el microorganismo de la muestra
dos (Proteus mirabilis) se pudo
En las pruebas bioqumicas
observar luego de la incubacin de 24
encontramos: en el queso la prueba de
horas una reaccin K/A (alcalino
catalasa nos confirm la presencia de un
amarillo) lo que nos indica que es una
Streptococcus sp no se realiz prueba de
bacteria que no fermenta la lactosa por lo
hemolisis por descuido al sembrarse en
tanto el medio presento la zona inclinada
un tubo con TSI y no en agar sangre. En
roja y el fondo del agar permaneci
el jugo un Sthapylococcus sp y al dar la
amarillo debido al metabolismo
prueba de coagulasa podemos suponer
anaerobio de la glucosa durante la
que es S. aureus el ms comn
primera etapa. De igual manera se
encontrado en la comida. En las cajas
evidencio el precipitado negro de sulfato
petri h y j los resultados fueron dos cocos
ferroso que indica la produccin de
gram positivos, el cual se hizo prueba de
H2S.
coagulasa a la caja dio negativa. En el
anlisis de la caja 6 la tincin y la prueba
En la prueba citrato no se not ningn
de almidn evidencio un gram + t y la
cambio de coloracin para el
caja 3 un bacilo gram -.
bacilo gram negativo de la muestra
numero 3 (Proteus mirabilis), esto
Para el fundamento de oxidasa el
quiere decir que el microorganismo no ha
bacilo gram negativo de la caja B dio
sido capaz de utilizar el citrato en el
positivo, debido a que el disco
medio.
impregnado con el reactivo N,-tetrametil-
p-fenilendiamina, el cual es el sustrato de
la enzima oxidasa, se torn de un color
purpura lo que indica que este bacilo
En la prueba urea, el resultado fue
produce la enzima oxidasa. Porque en
positivo para Proteus mirabilis. La cual
presencia de oxigeno atmosfrico
pudo degradar la urea produciendo as
y citocromo C, se oxida el sustrato
amoniaco y a su vez hizo variar el color
cambiando su coloracin, al arrojar este
del indicador de amarillo a fucsia,
resultado no se realiz ninguna
ponindose as de manifiesto la actividad
serie. En cambio en el caso de la
ureasa.
muestra nmero tres, este disco pinto un
color amarillo que se podra decir que es
Por ultimo en la prueba SIM, el resultado
el de las colonias que se utilizaron para
dio negativo para la Proteus miribalis,
impregnarlo, este resultado quiere decir
esto se debe a que esta bacteria no es
que esta bacteria es fermentadora y se
capaz de producir la enzima triptofanasa,
procedi hacer la seria correspondiente,
por lo que no es capaz de hidrolizar y
desaminar el triptfano con produccin saturacin, mientras que muestras con
de indol, acido pirvico y amoniaco. Se menores concentraciones son ptimas
dice que dio negativo ya que no se para obtener cultivos puros.
observ ningn anillo color fucsia al
Es de suma importancia tener claro el
agregar el reactivo de kovacs.
procedimiento a seguir para no cometer
errores ni dejar de realizar pruebas por
no saberlas hacer.
Conclusiones Bibliografa
Encontramos todo tipo de Biologa de los microorganismos.
microorganismos a nuestro alrededor, de Brock Edicin 10.
aqu se deriva la importancia de tener Manual prcticas de laboratorio
buenas prcticas al momento de microbiologa general U de A
recolectar una muestra de inters 2016.
microbiolgico para no alterarla, en dicho Facultad Nacional del Rosario.
anlisis se evala presencia de Departamento de Ingeniera
microorganismos patgenos o que Qumica.2009. Universidad
puedan alterar el producto en caso de Tecnolgica Nacional.
ser alimentos. Alberto Rojas-Trivio. Conceptos
En la tincin de Gram, el color violeta o y prcticas de microbiologa
rosado depende de la capacidad de la general. Universidad Nacional de
pared celular de dejar pasar el colorante Colombia Sede Palmira 2011.
por la misma, entre ms gruesa sea la Pruebas Bioqumicas para la
capa de peptidoglicano, menos colorante identificacin de bacterias de
lograr pasar y se teir de color rosado; importancia clnica. McFaddin.
en el caso contrario se teir de color Edicin 3.
violeta oscuro indicando que la bacteria Protocolo de prcticas de
es del tipo Gram +. laboratorio de microbiologa
experimental. Universidad
Las diluciones seriadas mostraron ser autnoma de Mxico, versin web
efectivas en los tipos de procedimiento vista el 25/03/2017.
donde se requiere obtener cultivos Manual para la toma de muestras
axnicos, de acuerdo con la teora
para anlisis microbiolgico,
registrada los microorganismos
secretaria de salud de Bogot.
responden a la concentracin de la
muestra, una muestra ms concentrada
registra poco manejo y mucha
