Informe de Laboratorio ANALISIS CLINICO II
TEST DE COOMBS
MARCO TERICO
Se cree que el principio de la prueba de Antiglobulina fue inicialmente descrito por
Moreschi en 1908. En medicina transfusional esta prueba solo fue introducida en
el ao 1945 cuando Coombs, Mourant y Race demostraron que por medio de esta
se poda detectar anticuerpos no aglutinantes anti Rh en el suero.
Posteriormente los mismos autores demostraron la utilidad de la prueba para
determinar la sensibilizacin In Vivo de los hemates por anticuerpos, en nios con
enfermedad hemoltica. En 1957 Dacie y colaboradores demostraron que la
prueba era igualmente buena para determinar la sensibilizacin de los hemates
por fracciones del complemento.
El suero antiglobulina Humana se obtiene inyectando conejos con purificados de
IgG humana y fracciones del complemento (C3d); el conejo as sensibilizado con
las globulinas humanas producir anticuerpos contra la IgG humana y contra el
componente C3d del complemento.
El suero antiglobulina puede ser adquirido comercialmente con diferentes
especificidades, el mas usado es el poliespecifico, es decir, que contiene tanto
actividad anti IgG como antiC3d; la actividad anti IgG del reactivo est dirigida
contra la porcin Fc de la IgG humana, de igual forma se puede conseguir el
reactivo con especificidad anti-IgG o anti-C3d por separado.
Por su parte si hemates humanos son sensibilizados IN VIVO o IN VITRO con
IgG o C3d y posteriormente son puestos a reaccionar con el suero antiglobulina,
estos sern aglutinados evidenciando la reaccin Ag-Ac.
FUNDAMENTOS DEL MTODO
En esta prueba se trata de investigar la presencia de Ac incompletos libres en el
suero del paciente. Los hemates que han de servir de reactivo para la prueba han
de ser de estructura antignica conocida (grupo O Rh+). La prueba se realiza en
dos fases:
En una primera fase, se incuba el suero del paciente con unos hemates
conocidos (tipo) O,Rh+, que no tienen adheridos a su superficie ningn tipo de Ig
ni ningn componente del complemento. La finalidad de esta incubacin consiste
en sensibilizar in vitro los hemates tipo, por parte de los Ac incompletos que
puedan estar contenidos en el suero problema.
En una segunda fase, se aade un suero antiglobulina humana, que producir
una aglutinacin de los eritrocitos, en el caso de que stos se hayan sensibilizado
en la fase anterior.
Se realiza en tubo y se utiliza para:
- En pruebas cruzadas, para detectar incompatibilidades
- Para la deteccin e identificacin de anticuerpos irregulares.
- En el laboratorio se utiliza para detectar anticuerpos anti-D, IgG incompletos,
libres, en el plasma de una embarazada Rh(-) con posible riesgo de
sensibilizacin.
MATERIALES
Pipeta automaticas
Muestra de sangre y suero de la px
Centrifugadora
Tubos de ensayo
Reactivos (anticuerpos anti-D)
Suero fisiolgico NaCl al 0,9%
Gradilla
suero de Coombs
PROCEDIMIENTO
La prueba de antiglobulina indirecta o coombs indirecto puede ser dividida en
cuatro fases:
Fase de sensibilizacin: En esta los hemates son incubados in vitro con el
suero, la sensibilizacin depende de variables como la temperatura, el medio
de reaccin, la proporcin clulas/suero y el tiempo de incubacin.
Fase de lavado: Tiene como propsito eliminar los anticuerpos y/o el
complemento no unido a los hemates. Las variables que la afectan son:
tiempo de lavado, volumen de la salina utilizada, residuo de salina entre lavado
y lavado, velocidad y tiempo de centrifugacin.
Fase de antiglobulina y lectura: en la cual se trata de evidenciar si los
hemates fueron sensibilizados in vitro con anticuerpos tipo IgG y/o
complemento C3d. Las variables que pueden afectar esta fase son el volumen
del suero antiglobulina, la velocidad y tiempo de centrifugacin y el modo de
realizar la lectura de la prueba.
Fase de contrl: Al igual que para la prueba de antiglobulina directa, cuando
no se observa aglutinacin de los hemates con el suero antiglobulina, debe
controlarse la prueba con clulas sensibilizadas (Contrl de coombs)
BIBLIOGRAFA
[Link] Association of Blood Bank. Manual Tcnico .[Link]. Buenos Aires:
Edigraf; 2001
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