Asignatura: ANLISIS QUMICO
Grado: Ciencia y Tecnologa de los Alimentos
Curso acadmico: 2012/13
2012/13
TEMA 17: CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN
1. Razone por qu es necesario trabajar a alta presin en HPLC.
2. Indique qu tipo de cromatografa lquida sera ms adecuada para la separacin de
mezclas de compuestos con las siguientes propiedades:
a. Masa molecular mayor de 2000, solubles en agua y con carcter no inico
(Sol. de Geles).
b. Masa molecular menor de 2000, solubles en agua y con carcter inico (Sol.
de intercambio inico).
c. Masa molecular igual a 340, soluble en agua y con carcter no inico (Sol.:
Reparto fase enlazada normal).
d. Masa molecular igual a 1000, soluble en acetonitrilo. (Sol. Reparto fase
enlazada normal)
3. Explique qu diferencia existe entre trabajar en modo de elucin isocrtica y en modo
gradiente.
4. Explique en qu se diferencia la LC de reparto en fase normal y en fase reversa.
Indique asimismo como aumentara la fuerza de la fase mvil en ambos modos de
trabajo.
5. Indique los componentes principales de la instrumentacin empleada en LC y la
funcin de cada uno de ellos.
6. La separacin de cuatro vitaminas del grupo de las cianocobalaminas se llev a cabo
mediante LC en fase reversa, de modo que fueron eluidas con tiempos de retencin
de 3,9; 5,1; 7,0 y 8,5 min que correspondan a hidroxocobalamina (Cbl-OH),
cianocobalamina (Cbl-CN), adenosilcobalamina (Cbl-Ade) y metilcobalamina (CblMe), respectivamente. Se quiere determinar la concentracin de estas cuatro
vitaminas en una muestra de hgado de pollo, para ello se toman 5 g de la misma de
los que se extraen las vitaminas, diluyendo el extracto obtenido hasta 25 mL,
inyectndose en el cromatgrafo un volumen de 20 L, que proporcion un
cromatograma cuyos datos en rea aparece en la tabla siguiente.
La tabla muestra asimismo los datos obtenidos para 5 disoluciones estndar
conteniendo los cuatro compuestos en concentraciones perfectamente conocidas.
Para la preparacin de dichas disoluciones se parti de una disolucin concentrada
que contena 10, 25, 20 y 12 ppm de Cbl-OH, Cbl-CN, Cbl-Ade, Cbl-Me,
respectivamente, de la que se tomaron 25, 50, 75, 100 y 125 L y se diluyeron hasta
25 mL, inyectndose en el cromatgrafo un volumen de 20 L de cada una de estas
disoluciones.
Especie
Cbl-OH
rea
Disolucin Disolucin Disolucin Disolucin Disolucin Muestra
1
2
3
4
5
problema
10,0
20,3
29,8
41,1
49,5
25,4
Cbl-CN
4,90
10,8
15,1
19,8
24,7
11,3
Cbl-Ade
15,4
29,8
45,8
60,7
75,9
50,4
Cbl-Me
3,90
8,10
11,9
16,1
20,5
15,9
Curso acadmico: 2012/13
Asignatura: ANLISIS QUMICO
Grado: Ciencia y Tecnologa de los Alimentos
(Sol.: [Cbl-OH]=0,126 g/g; [Cbl-CN]=0,278 g/g; [Cbl-Ade]=0,331 g/g; [CblOH]=0,24 g/g)
7. Para calcular la concentracin de las vitaminas en un preparado farmacutico
presentado como solucin oral, prescrito en casos de retraso en el crecimiento, se
inyectaron 20 L de la muestra que previamente haba sido diluida tomando 2 mL y
enrasando hasta 10 mL con agua. En el cromatograma obtenido aparecieron dos
picos cromatogrficos a los tiempos 3,9 y 7,0 min, de reas 43,2 y 60,9,
respectivamente. Calcule la concentracin de las vitaminas en la muestra.
(Sol.: [Cbl-OH]=0,215 g/mL; [Cbl-CN]<lmite de deteccin para Cbl-CN; [CblAde]=0,4 g/mL; [Cbl-Me]<lmite de deteccin correspondiente)
8. Los datos de la tabla siguiente se obtuvieron durante la determinacin de antraceno
en salmn, empleando LC en fase reversa y deteccin fluorimtrica. Se adicion un
compuesto como patrn interno a cada disolucin estndar y a la muestra.
Concentracin de
antraceno, ng/mL
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
Muestra
rea de pico
del analito
25,5
35,9
39,7
55,0
81,8
49,3
rea de pico del
patrn interno
32,1
31,8
28,4
32,3
40,9
39,4
Determine la concentracin de antraceno en la muestra para la obtencin del
correspondiente cromatograma se tomaron 2 g de salmn, que fueron sometidos a
digestin suave en microondas y la disolucin obtenida enrasada a tratndose 10
mL.
(Sol.: 1,24 ng/g).
