UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE
GROHMANN
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE INGENIERA
EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
NOMBRE:
Brighitte Yomahira Mostacero Vargas
PROFESORA:
Amelia Castro Gamero
CODIGO:
2010 35214
AO:
5to ao
CURSO:
Laboratorio de Biotecnologa
Tacna Per
2014
I.
TITULO
Curva de crecimiento de bacterias (lcticas). Curva de sntesis del producto (cido
lctico)
II.
OBJETIVOS
Estudiar la curva de crecimiento de bacterias lcticas y al mismo tiempo
construir la curva de sntesis de cido lctico.
Comparar los resultados de una cepa con fecha de vencimiento vencida con una
de fecha no vencida.
III.
FUNDAMENTO TEORICO
Ciclo normal del crecimiento.
Las poblaciones microbianas raramente mantienen un crecimiento exponencial
prolongado. Si ello ocurriera en poco tiempo la tierra estara tapada de una masa
microbiana mayor que la de la tierra misma. El crecimiento est normalmente
limitado por el agotamiento de nutrientes o por la acumulacin de productos del
mismo metabolismo microbiano, que les son txicos a la poblacin. La consecuencia
es que el crecimiento al cabo de un cierto tiempo llega a disminuir hasta detenerse.
En la figura 4 se presenta la grfica de una curva tpica de crecimiento bacteriana.
Como se puede observar, en la grfica se ha relacionado el tiempo transcurrido con
el logaritmo del nmero de clulas bacterianas. Cuando se realiza este tipo de
grficas se obtiene una lnea recta, sin embargo en esta slo un sector (fase
exponencial) corresponde a una recta.
Es posible distinguir cuatro fases:
1) fase de latencia o de retardo
2) fase exponencial
3) fase estacionaria
4) fase de muerte
En la fase de latencia existe un aparente reposo en el que las clulas sintetizan las
enzimas necesarias para la actividad metablica que deben llevar adelante. Cuando
se hacen mediciones del nmero de clulas en distintos tiempos dentro de esta fase,
el valor no cambia sustancialmente. En cambio, interiormente las clulas trabajan
activamente adaptando el equipo enzimtico al medio de cultivo. La bacteria se
prepara para hacer uso de los nutrientes que este medio le aporta, por lo tanto es
la fase de adaptacin al medio, con aumento de la masa celular pero no del nmero
de clulas. La edad del inculo va a influir en el tiempo de latencia en el medio fresco
debido a la acumulacin de materiales txicos y a la falta de nutrientes esenciales
dentro de la clula durante el crecimiento anterior. En general, inculos viejos
alargan la fase de latencia.
Pasado este perodo, el cultivo entra en la denominada fase de crecimiento
exponencial, donde la velocidad de crecimiento es [Link] velocidad de
crecimiento que alcanza un cultivo, depende del tipo de microorganismoque se trate
y diversos factores ambientales como son la temperatura, el pH, oxigenacin,[Link]
velocidad de crecimiento comenzar a disminuir hasta hacerse nula cuando alcance
la fase estacionaria, ya que cambios en la composicin y concentracin de nutrientes
entreel cultivo del inculo y el medio fresco pueden desencadenar el control y la
regulacin dela actividad [Link] fase se presenta por agotamiento del
suministro de algn nutriente esencial o poracumulacin de productos metablicos
que sean txicos. Tambin puede ser por ladisminucin de la oxigenacin o cambios
en las condiciones de pH del medio de cultivo (acidificacin o alcalinizacin):En esta
fase se equilibran el nmero de clulas nuevas con el nmero de clulas
[Link] ltimo, el cultivo entra en la fase de muerte, en la que el nmero de
clulas quemueren se va haciendo mayor. La pendiente de esta fase puede ser ms
o menos pronunciada de acuerdo al tipo de microorganismo de que se trate. Suelen
presentarse pendientes menos bruscas cuando el microorganismo presenta alguna
forma de resistencia (esporas, glicocalix).
Factores fsicos y qumicos que influyen en el crecimiento bacteriano.
Temperatura: Cada microorganismo tiene una temperatura de crecimiento
adecuada. Si consideramos la variacin de la velocidad de crecimiento en funcin de
la temperatura de cultivo, podemos observar una temperatura mnima por debajo
de la cual no hay crecimiento; a temperaturas mayores se produce un incremento
lineal de la velocidad de crecimiento con la temperatura de cultivo hasta que se
alcanza la temperatura ptima a la que la velocidad es mxima. Por encima de esta
temperatura ptima, la velocidad de crecimiento decae bruscamente y se produce
la muerte celular. El aumento de la velocidad de crecimiento con la temperatura se
debe al incremento generalizado de la velocidad de las reacciones enzimticas con
la temperatura. Se denomina coeficiente de temperatura a la relacin entre el
incremento de la velocidad de reaccin y el de temperatura. En trminos generales,
la velocidad de las reacciones bioqumicas suele aumentar entre 1.5 y 2.5 veces al
aumentar 10C la temperatura a la que tienen lugar. La falta de crecimiento a
temperaturas bajas se debe a la reduccin de la velocidad de las reacciones
bioqumicas y al cambio de estado de los lpidos de la membrana celular que pasan
de ser fluidos a cristalinos impidiendo el funcionamiento de la membrana celular. La
muerte celular a altas temperaturas se debe a la desnaturalizacin de protenas y a
las alteraciones producidas en las membranas lipdicas a esas temperaturas.
Es importante tener en cuenta que a temperaturas bajas, el metabolismo celular es
lento y las clulas paran de crecer; aunque suelen morir. Sin embargo, cuando la
temperatura es superior a la ptima, se produce la muerte celular rpidamente y las
clulas no pueden recuperar su capacidad de divisin si baja posteriormente la
temperatura. Esto permite esterilizar por calor y no por fro. Hay varios tipos de
microorganismos en funcin de sus temperaturas de crecimiento mnima, mxima
y ptima.
Los microorganismos psicrtrofos son mesfilos que pueden crecer a temperaturas
bajas. Por tanto, se les puede considerar como psicrfilos facultativos. Esto es
importante desde el punto de vista aplicado porque cuando se encuentran
contaminando alimentos, son capaces de crecer en condiciones de refrigeracin (4
- 8C) y de producir infecciones en los consumidores del alimento (30 - 35 C).
Desde el punto de vista clnico, los microorganismos capaces de producir
infecciones en pacientes son los mesfilos y algunos psicrtrofos ya que sus
temperaturas ptimas de crecimiento coinciden con las corporales.
FORMULACIN DE MEDIOS DE FERMENTACIN
La preparacin de medios para el desarrollo de procesos de fermentacin es una
etapa fundamental para asegurar la productividad de los mismos. Donde los
componentes de los medios constituyen los efectores externos de naturaleza
qumica que desempean un rol esencial en los procesos ya que deben cumplir con
los requerimientos del crecimiento y de formacin de productos y adems
suministrar energa para la sntesis de metabolitos y para el mantenimiento celular.
No obstante que los microorganismos varan considerablemente respecto de los
nutrientes que pueden necesitar es posible efectuar la distincin de las siguientes
categoras de componentes:
a) Macronutrientes, agregados en cantidades de gramos por litro que estn
representados por las fuentes de C, N, S, P, K y Mg.
b) Micronutrientes o elementos trazas representados por las sales de Fe, Mn, Mo,
Ca, Zn y Co que se agregan a los medios en cantidades de miligramos o microgramos
por litro.
c) Factores de crecimiento, que estn constituidos generalmente por componentes
orgnicos suministrados en baja concentracin y que no son sintetizados ni
metabolizados por las clulas, sino incorporados a estructuras celulares y de funcin
metablica especfica, como vitaminas, algunos aminocidos, cidos grasos no
saturados, etc.
Los medios pueden clasificarse, considerando la naturaleza qumica de los
componentes, en:
Medios sintticos o medios qumicamente definidos.
Medios complejos, en cuya composicin intervienen sustancias de origen
animal o vegetal como peptonas, extracto de levadura, macerado de maz,
harina de soja, etc. que aportan las sustancias fundamentales ya
mencionadas, pero que son qumicamente indefinidas y de composicin
variable
CRECIMIENTO Y SNTESIS DEL PRODUCTO EN PROCESOS INDUSTRIALES.
Hay dos tipos fundamentales de productos metablicos: primarios y secundarios.
Un metabolito primario es el que se forma durante la fase primaria del crecimiento
del microorganismo, mientras que un metabolito secundario es el que se forma
cerca del final de la fase de crecimiento, frecuentemente cerca de, o en la fase
estacionaria del crecimiento. Las diferencias entre un metabolito primario y un
metabolito secundario se ilustran en la imagen de la izquierda.
Metabolitos primarios microbianos.
Un proceso microbiano tpico, en el que el producto se forma durante la fase
primaria del crecimiento, es el alcohol (etanol) obtenido por fermentacin. El etanol
es un producto del metabolismo anxico de la levadura y de algunas bacterias y se
forma como parte del metabolismo de la energa. Debido a que el crecimiento slo
puede tener lugar si puede producirse energa, la formacin de etanol tiene lugar en
paralelo con el crecimiento.
Metabolitos secundarios microbianos.
Un tipo ms complejo de productos industriales es aquel en el que el producto
deseado no se produce durante la fase primaria del crecimiento sino durante la fase
estacionaria. Los metabolitos producidos durante la fase estacionaria se denominan
metabolitos secundarios y son algunos de los metabolitos ms comunes y ms
importantes de inters industrial. Mientras que el metabolismo primario es
generalmente similar en todas las clulas, el metabolismo secundario presenta
claras diferencias entre un organismo y otro. Las caractersticas reconocidas del
metabolismo secundario son:
Cada metabolito secundario slo lo forman relativamente pocos organismos.
Los metabolitos secundarios, aparentemente no son esenciales para el
crecimiento y la reproduccin.
Con frecuencia, los metabolitos secundarios se producen como un grupo de
estructuras estrechamente relacionadas.
Con frecuencia es posible obtener una espectacular superproduccin de
metabolitos secundarios, en tanto que los metabolitos primarios, ligados como
estn al metabolismo primario, usualmente no se pueden supe producir de una
manera tan espectacular.
IV.
MATERIALES Y EQUIPOS
MATERIALES
01 vaso de precipitado de 1 lt estril.
Pipetas de 10, 5, 2 ,1 ml
Placas Petri
Tubos de ensayo
Cepas de lactobacillus
Agar rogosa
Equipo para incubacin anaerbica,
Equipo para determinacin de acidez titulable
V.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Sembrar la leche con lactobacillus.
2. Verter leche (aproximadamente 1Lt) en un vaso de precipitado de 1000ml.
3. Luego en un matraz con 50ml de leche inocular el cultivo lctico BIFLORA
(dcima parte), agitar y verter al vaso de precipitado con 1Lt de leche. Agitar
con una varilla de vidrio.
4. Preparar los tubos de ensayo para las diluciones.
5. En 36 tubos de ensayo previamente rotulados echar 9 ml de agua peptonada
(solo en el tubo 10-1 agregar 0.5ml de leche con el cultivo lctico). Realizar
las diluciones hasta 10-4 para cada tiempo.
6. Incubar a 43 C.
7. Controlar el proceso de fermentacin realizar las siembras y titulaciones
necesarias.
8. Utilizar una cepa con fecha de vencimiento
recientemente vencida.
Comparar con los resultados anteriores. Graficar los resultados vs. Tiempo.
VI.
RESULTADOS
TABLA N01: RESULTADOS DE CEPAS CON FECHA DE VENCIMIENTO NO VENCIDA
(2013)
Hora
anlisis
de
Tiempo min
D(acidez)
Recuento de Bacterias
lcticas
9:05
18
1 x 104
9:40
35
18.5
0 x 104
10:20
40
20
1 x 104
11:00
40
32
4 x 104
11:40
40
50
6 x 104
12:20
40
64
17 x 104
13:00
40
72
34 x 104
13:50
50
78
68 x 104
14:20
30
80
75 x 104
Ufc/ml
TABLA N02: RESULTADOS DE CEPAS CON FECHA DE VENCIMIENTO NO VENCIDA
(2013)
Hora de Tiempo
Tiempo
()
Bacterias lcticas
de
Log
anlisis
min
9:05
18
1 x 104
9:40
35
35
18.5
0 x 104
10:20
40
75
20
1 x 104
11:00
40
115
32
4 x 104
4.60
11:40
40
155
50
6 x 104
4.78
12:20
40
195
64
17 x 104
5.23
13:00
40
235
72
34 x 104
5.53
13:50
50
285
78
68 x 104
5.83
14:20
30
315
80
75 x 104
5.87
min
(acidez)
Recuento
Ufc/ml
- No se consideraran las placas N1 y N2 en los siguientes grficos debido a que
no se control la temperatura de fermentacin de 43C, bajando este a 38C.
- Placas N1 y N2: Poca produccin de cido lctico y mal desarrollo y
crecimiento de Bacterias lcticas.
GRAFICOS DE RESULTADOS
Recuento
de 1 x 104
Bacterias lcticas
Ufc/ml
4 x 104 6 x 104
17 x 104
34 x 104
68 x 104
75 x 104
Tiempo ()
min
115
195
235
285
315
75
155
x (Ufc/ml)
Variacin de Biomasa
800000
700000
600000
500000
400000
300000
200000
100000
0
75
115
155
195
235
285
315
(min)
D (acidez)
20
32
50
64
72
78
80
Tiempo ()min
75
115
155
195
235
285
315
Acidez (D)
Produccin de cido lctico
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
75
115
155
195
(min)
235
285
315
Log X
4.60
4.78
5.23
5.53
5.83
5.87
Tiempo ()
min
75
115
155
195
235
285
315
Nmero de Celulas
7
6
Log X
5
4
3
2
1
0
75
115
155
195
235
285
315
(min)
Para determinar el tiempo de vida de una cepa liofilizada es necesario comparar el
crecimiento de la biomasa con la velocidad de sntesis del producto final.
Recuento
de 1 x 104
Bacterias lcticas
Ufc/ml
D(acidez)
20
+ X
4 x 104
6 x 104
17 x 104
34 x 104
68 x 104
75 x 104
32
50
64
72
78
80
x (Ufc/ml
VS
D )
90
80
Acidez (D)
70
60
50
40
30
20
10
0
10000
40000
60000
170000
340000
680000
750000
x (Ufc/ml)
X = 10 000 Ufc/ml
VII.
CONCLUSIONES
La interaccin marca-tiempo de almacenamiento tiene un efecto significativo
sobre el nmero de bacterias cido lcticas, enterococos y la concentracin de
las aminas bigenas detectadas
La prctica realizada nos mostr de manera sencilla un mtodo de crecimiento
de bacterias lcticas; haciendo uso de la leche como sustrato; as se pudo
obtener a diferentes tiempos la reproduccin inmediata de estas bacterias,
entonces as se pudo hacer una curva de crecimiento de bacterias; teniendo en
los primeros minutos un crecimiento minsculos hasta que llega a los 315
minutos donde el nmero de ufc lleg a 75 x 104. Entonces se puede decir que
a ms tiempo las colonias aumentan hasta un punto tope donde estas bacterias
mueren y esta curva debera descender.
La fermentacin cido lctica es aquella que se lleva a cabo por las bacterias
cido lctica cuya actividad se desarrolla en ausencia de oxgeno (anaerobiosis).
VIII.
BIBLIOGRAFIA
[Link]
Mircoles 23 de julio de 2014, Tacna Per, 08:45 P.M.
[Link]
Mircoles 23 de julio de 2014, Tacna Per, 08:45 P.M.
