ESTERILIZACION DE MATERIALES Y PREPARACIN DE
MEDIOS DE CULTIVO
1- OBJETIVOS:
Conocer los mtodos ms comunes de
esterilizacin de los materiales de uso ms
frecuente del laboratorio de microbiologa.
Comprender el fundamento del mtodo de
esterilizacin fsico.
Aprender a preparar los medios de cultivo ms
comunes que se utilizan para el cultivo de los
microorganismos.
Diferenciar los diversos tipos de medios y su
aplicacin adecuada de acuerdo al tipo de
microorganismo a cultivar.
2- FUNDAMENTO:
Esterilizacin
Se basa en eliminar toda forma de vida microbiana
tanto de bacterias como de hongos o de virus. Incluye
las formas vegetativas y las esporas que son las
formas de resistencia. Este proceso se aplica en
muchos campos como en la Industria alimenticia,
farmacutica y en los laboratorios para esterilizar
materiales de vidrio, guantes, etc.
Medios de cultivo
Las sustancias nutritivas que sirven para promover el
crecimiento de los microorganismos en el laboratorio
reciben el nombre de medios de cultivo.
Bsicamente la mayora de medios de cultivos
contienen en forma asimilable distintas sustancias
orgnicas e inorgnicas que proveen todos los
elementos necesarios para la sntesis biolgica de los
m.o.
3- MARCO TEORICO:
Mtodos de esterilizacin:
1- Esterilizacin a la llama: Los instrumentos tales
como las asas y alambres de siembra y varillas
secas se esterilizan calentndolas en la llama de un
mechero bunsen hasta que se ponen al rojo. Los
micros incineradores se recomiendan para
esterilizar asas de inoculacin contaminadas con
material muy infeccioso (espulos tuberculosos) para
evitar el riesgo de chisporrotear partculas
contaminadas sobre las zonas de alrededor.
2- Esterilizacin por aire caliente: Los hornos de aire
caliente, tambin llamados hornos de calor seco,
son dispositivos elctricos utilizados para
esterilizacin que forman parte del equipamiento de
laboratorio. El horno utiliza calor seco para
esterilizar los objetos que se introducen en l. En
general, pueden funcionar con temperaturas
comprendidas entre 50 y 300 C (de 122 a 572 F).
Posee un termostato que controla la temperatura
mediante un control digital. Su aislamiento trmico
es de doble pared para mantener el calor y ahorrar
energa: la capa interna posee una conductividad
trmica baja, y su capa exterior es metlica.
Tambin hay un espacio lleno de aire entre ambas
capas como refuerzo del aislamiento.
Ventajas del mtodo: Es un mtodo efectivo y
seguro para esterilizar metales y espejos, pues no oxida o
corroe y los bordes cortantes no pierden filo.
Desventajas del mtodo: Necesita de un ciclo largo,
de tener una penetracin pobre y de destruir los
elementos termolbiles.
3- Esterilizacin por vapor de agua a presin: El
calor hmedo destruye los microorganismos por
coagulacin de sus protenas celulares. El principal
mtodo de esterilizacin que emplea calor hmedo
es la esterilizacin por vapor a presin. Existen otros
mtodos de descontaminacin que emplean este
tipo de calor los cuales, aunque no permiten la
destruccin total de los microorganismos,
disminuyen la carga microbiana que posee un
material.
4- Esterilizacin por filtracin: La esterilizacin por
filtracin se logra por el paso de un lquido o un gas
a travs de un material capaz de retener los
microorganismos presentes. La esterilizacin por
filtracin se emplea para materiales sensibles al
calor, tales como ciertos medios de cultivo,
azcares, soluciones de antibiticos y otros
medicamentos, etc.
5- Esterilizacin por vapor de agua sin presin: El agua
hierve a 100C, este sistema ofrece todas las
garantas de esterilizacin siempre y cuando se
cumpla el tiempo en que el material debe
permanecer en ebullicin, para lograr la muerte de
las bacterias, no as las de las esporas que an
siguen resistentes. Aqu por supuesto no se puede
esterilizar gasas, artculos de papel (conos)
etc. Tiempo de ebullicin establecido: 20 minutos.
Ventajas del mtodo:
a. El ciclo necesario para la esterilizacin es corto
b. Se caracteriza por una buena penetracin
c. Da la posibilidad de esterilizar gasas algodn,
campos, gomas y otros materiales, as como de
esterilizar instrumental rotatorio.
Desventajas del mtodo:
a. Los instrumentos cortantes pierden filo
b. Produce corrosin del instrumental.
6- Otros mtodos de esterilizacin por agentes
qumicos:
1. xido de etileno: es un poderoso agente esterilizante
gaseoso de accin lenta, inflamable cuando aparece en
concentraciones iguales o superiores al 3 %, y altamente
txico cuando es ingerido o inhalado (mutgeno y
carcingeno). Se utiliza en la industria de productos
mdicos y odontolgicos para esterilizar productos
termolbiles como plstico, drogas, equipamiento
electrnico, etc. La razn de su uso es la capacidad que
tiene de esterilizar a temperatura ambiente.
Ventajas del xido de etileno:
* Alta capacidad de penetracin.
* No daa materiales sensibles al calor.
* Largo tiempo de validez de esterilizacin.
Desventajas del xido de etileno:
* Necesita de un largo ciclo
* Elevado poder txico e inflamable
* Es un mtodo muy costoso.
2. Plasma de perxido de hidrgeno. El plasma es
el cuarto estado de la materia no slido, no lquido, no
gaseoso. Consiste en un conjunto de iones, electrones y
partculas atmicas neutras que se produce mediante
temperaturas altsimas o fuertes campos
electromagnticos. Es un mtodo reciente de
esterilizacin rpida, a baja temperatura, baja humedad y
sin residuos txicos pues su residuos finales son oxgeno
y agua).
Con este mtodo es posible esterilizar instrumental
sensible a la humedad, equipos electrnicos, material
cortante, instrumentos delicados e incluso cargas con
diferentes productos (vidrio, metal, plsticos). El mayor
inconveniente es el costo del equipamiento.
3. Glutaraldehido: Una solucin acuosa al 2% presenta
una amplia actividad antimicrobiana. Es efectivo frente a
virus, clulas vegetativas y esporas de bacterias y
hongos. Se usa en medicina para esterilizar instrumentos
urolgicos y pticos.
Ventaja principal del mtodo:
* Tienen accin bactericida, virucida, fungicida y
esporicida.
* Permiten la esterilizacin de materiales termosensibles.
Desventajas del mtodo:
* Largo tiempo de exposicin a los agentes esterilizantes
* Corrosin de los instrumentos
* Toxicidad de las soluciones empleadas
* Costo elevado
* Dificultad operacional.
4. Radiacin ultravioleta: La radiacin ultravioleta
produce una disminucin exponencial en el nmero de
clulas vegetativas o de esporas vivas con el tiempo de
irradiacin. Por tanto se pueden calcular los valores D
para la irradiacin.
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de m.o. es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas
en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los m.o es el
medio de cultivo y el crecimiento de los m.o. es el cultivo. Se han
preparado hasta la fecha ms de 10 0000 medios de cultivo diferentes.
Las necesidades nutricionales de un grupo de microorganismos pueden ser
muy distintas en otros grupos, pero, en forma general, lo que se pretende de
un medio de cultivo es que se parezca al sutrato natural sobre el cual crecen
los microorganismos.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente de un medio de cultivo
artificial debe reunir una serie de condiciones como son: Temperatura,
grado de humedad y presin de oxigeno adecuados, asi como un grado
correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los
nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar excento de todo
microorganismo contaminante.
BIBLIOGRAFA
1. Colectivo de autores. Introduccin a la Salud Pblica. Editorial Ciencias Mdicas. Ciudad de la Habana
2004.
2. Colectivo de Autores. Manual de Bioseguridad Estomatolgica. Editorial Ciencias Mdicas. Ciudad de la
Habana 2008.
3. Direccin Provincial de Salud. Centro Provincial de Higiene y Epidemiologa. La Habana.
Recomendaciones para la Desinfeccin y Esterilizacin en Clnicas y Servicios de Estomatologa. 2000
