UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA
ESCUELA DE QUMICA
PROGRAMA DE QUMICA INDUSTRIAL
LABORATORIO DE BIOQUMICA.
SESIN # 1:
FERMENTACIONES Y METANOGNESIS.
OBJETIVOS:
1. Realizar un proceso de fermentacin anaerobia a partir de sedimentos orgnicos, con el
fin de evidenciar la accin de algunas bacterias metanognicas.
2. Cuantificar la produccin de gas obtenido en el proceso de Metanognesis.
MARCO CONCEPTUAL:
En los procesos de fermentacin, la energa de los sustratos orgnicos es transferida a trifosfato de
adenosina (ATP) exclusivamente, a travs de fosforilaciones a nivel de sustrato. Como las
fermentaciones no requieren de oxgeno, pueden llevarse entonces a cabo en ausencia de aire y
dicho proceso recibe el nombre de anaerbico. Los productos finales de fermentaciones en
ecosistemas naturales varan dependiendo esencialmente de las capacidades metablicas de los
organismos presentes y a la naturaleza de la fuente de carbono inicial (Figura 1). Un ejemplo
clsico es la biodegradacin de materia orgnica en sedimentos anaerbicos, donde el primer
grupo de poblaciones bacterianas (aquellas que pueden utilizar directamente la materia orgnica
disponible) la hidrolizan hasta azcares y compuestos menos complejos. Los productos
metablicos de este grupo sirven como sustrato a un segundo grupo de fermentadores que
generan diferentes cidos orgnicos (Ej: butrico, actico, lctico, etc.), dixido de carbono e
hidrgeno. Finalmente,
CH3COO-, CO2 y H2 sirven como materia prima para que bacterias
metanognicas acten produciendo metano, que ser el producto final de la descomposicin
anaerbica.
Hbitats de bacterias metanognicas:
Las bacterias metanognicas abundan en ambientes donde limitan a los aceptores de electrones,
tales como O2, NO3-, Fe3+ y SO42-.
Ambientes como los digestores anaerobios, sedimentos anxicos, suelos de humedales y tractos
gastrointestinales, son algunos de los hbitats tpicos para encontrar este tipo de
microorganismos.
Figura 1. Cadena alimenticia microbiana en ambientes anaerobios.
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5.
Bacterias hidrolticas acidognicas.
Bacterias homoacetgenas.
Bacterias acetgenas.
Bacterias metangenas hidrogenfilas.
Bacterias metangenas acetocsticas.
Caractersticas generales de las bacterias metanognicas (ver tabla 1):
Producen grandes cantidades de metano como producto principal de su metabolismo
energtico.
Todos son anaerobios estrictos.
Son miembros del Grupo Arquea (arqueabacterias).
Tabla 1: Caractersticas generales de las principales familias de bacterias metanognicas.
Reacciones qumicas tpicas, generadas por bacterias metanognicas:
4 (H2) + CO2 CH4 + 2 H2O
4 (Formato) CH4 + 3 CO2 + 2 H2O
4 (2-Propanol) + CO2 CH4 + 4 acetona + 2 H2O
2 (Etanol) + CO2 CH4 + 2 acetato
Metanol + H2 CH4 + H2O
4 (Metanol) 3 CH4 + CO2 + 2 H2O
Acetato CH4 + CO2
MATERIALES:
Tubos de ensayo (25 x 150 mm).
Tapones de goma con agujero.
Beaker 500 mL.
Tubo de goma o manguera tipo catter.
Muestra de sedimentos.
KOH 0,1N.
H2SO4c.
Solucin A (0,1%NH4Cl, 0,04%K2HPO4, 0,01%MgCl2, 2% acetato de calcio, 1%
metanol, pH 7).
REACTIVOS:
PROCEDIMIENTO:
1. Ensamble un sistema tal cual como se ilustra a continuacin:
Sumerja el tubo II en una solucin de KOH 0,1N. Este tubo recoger el gas metano que se
produzca. El metano desplazar la solucin de KOH del tubo II.
2. Adicione de 1 a 2 cm de sedimento al tubo I (tubo de fermentacin).
3. Complete hasta 75% del volumen del tubo I con la Solucin A y cubra la superficie del
beaker con parafina (o en su defecto, tefln). Determine el pH del sobrenadante.
4. Prepare un segundo sistema de manera igual al anterior, PERO reemplazando la Solucin A
por 5 mL de H2SO4.
5. Marque el nivel de solucin en el tubo colector de gases (representando el tiempo cero).
6. Incube ambos sistemas a temperatura de laboratorio.
7. Registre semanalmente y durante 3 semanas, los cambios observados en trminos de
temperatura, pH, tipo y concentracin de sustrato, sales, etc.
8. Determine el pH del medio al finalizar la incubacin.
9. Grafique los resultados y aplique anlisis estadstico para aceptar o rechazar la hiptesis
nula.
DATOS Y ANLISIS:
a. Diligencie la siguiente tabla segn sus observaciones semanales:
pH inicial:_____________
pH inicial:_________
pH final:______________
pH final: __________
b. Grafique sus resultados con el fin de observar cmo flucta la cantidad de gas con
respecto al tiempo.
PREGUNTAS:
1. Por qu el acetato se adicion al tubo de fermentacin?
2. Explique la funcin e importancia del KOH.
3. Existen diferencias significativas en la produccin de gas entre los sistemas I y II?
Explique.
