4) CRECIMIENTO MICROBIANO Y CONTROL

4.1 CONDICIONES AMBIENTALES QUE DETERMINAN EL

CRECIMIENTO MICROBIANO:
1.- nutrientes
2.- agua
3.- presin osmtica

4.- temperatura

5.- pH

Crecimiento
del individuo

Ciclo celular

6.- oxgeno

Crecimiento
poblacional

Conteo de microorganismos (Mtodos de cuantificacin)

Cuantificacin
de viables

Cuantificacin
de totales
1

NUTRIENTES: Aportan los elementos constitutivos de las biomolculas de los

microorganismos, adems de proporcionar a muchos de ellos la energa para sus
procesos metablicos.
La disponibilidad de los nutrientes incide en la presencia de microorganismos,
quienes los usaran para alimentarse. Tambin depende de las enzimas que tengan
las clulas para que puedan aprovechar el alimento.

AGUA: Es un agente solvente de muchas biomolculas polares y de sustancias

inorgnicas. Permite funcionamiento de la membrana para el paso de solutos entre
el exterior-interior-exterior, adems es el ambiente en donde la mayora de las
enzimas realizan su actividad cataltica.
Disponibilidad del agua
Actividad del agua (aw): es la relacin entre la presin de vapor del aire en
equilibrio con una sustancia o solucin y la presin de vapor del agua, a la misma
temperatura tomando como referencia el agua pura. Sus valores pueden
encontrarse entre 0 y 1 y afecta la smosis celular.

aw

material

ejemplo de microorganismo

1.000

agua pura

Caulobacter sp,
Spirillum sp

0.995

sangre humana

Streptococcus sp, Escherichia

sp

0.980

agua marina

Pseudomonas sp,
Vibrio sp

0.950

pan

Bacilos Gram positivos

0.900

jarabe de arce
jamn

Cocos Gram positivos

0.850

chorizo

Levaduras

0.800

pasteles de frutas
mermeladas

Hongos filamentosos

0.750

pescado salado

Halobacterium sp, Halococcus

sp

0.700

cereales, caramelos, frutos secos

Hongos xerfilos
4

PRESIN OSMTICA: La actividad del agua (aw)

afecta directamente a la presin osmtica, en funcin
del movimiento del agua a travs de la membrana de
acuerdo a la concentracin de solutos adentro y
afuera de la clula.
Efecto isotnico: cuando la concentracin de solutos
es igual a ambos lados de la membrana.
Efecto hipotnico: cuando la concentracin de solutos
es menor que la concentracin celular, el resultado es
la entrada de agua para equilibrar la concentracin de
solutos a ambos lados de la membrana. La clula puede
aumentar de volumen hasta reventarse. Es la
plasmptisis.
Efecto hipertnico: cuando la concentracin de solutos
es mayor que la concentracin celular, dando como
resultado la salida de agua para nivelar la
concentracin de solutos entre el interior y el
exterior. La clula puede disminuir su volumen hasta
colapsarse. Se presenta la plasmlisis.
5

PRESIN OSMTICA (cont.) Los organismos pueden clasificarse de acuerdo a

sus requerimientos o resistencia a la concentracin de solutos.
Solutos en general

Osmotolerancia

Sales en particular

Osmfilo

Halotolerante

Halfilo

Halotolerante
Staphylococcus
aureus

La presin osmtica
afecta funcin de
membrana, actividad de
enzimas y funcionalidad
de protenas.

Halfilo
Vibrio
cholerae

Halfilo
extremo
Halobacterium
salanarium

Crecimiento

No halfilo ni
halotolerante
Escherichia coli

Concentracin de soluto
6

TEMPERATURA: Los procesos metablicos liberan energa en

forma de calor, aunque muchos microorganismos requieren una
temperatura ambiental para poder realizar su metabolismo.
Todos los microorganismos tienen una temperatura ptima de
crecimiento y temperaturas mnimas y mximas de desarrollo.
Bacteria

Temperaturas de desarrollo en oC
Mnimo

ptimo

Mximo

25-30

40

Staphyloccoccus aureus

6.5

30-37

46

Acidiothiobacillus thiooxidans

10

28-30

37

Micrococcus luteus

10

30

45

Lactobacillus plantarum

15

30-35

45

Corynebacterium diphteriae

15

37

40

Streptococcus thermophilus

20

40-45

50

Thermoactinomyces vulgaris

27-30

60

65-70

Neisseria gonorrhoeae

30

35-36

38.5

Thermus aquaticus

40

70-72

79

Pseudomonas fluorescens

Termfilo
Geobacillus
stearotermophilus

Hipertermfilo
Thermococcus
celer

Mesfilo
Escherichia
coli

Velocidad de
Crecimiento

Hipertermfilo
Pyrodictium
brockii

Psicrfilo
Flavobacterium
sp

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

110

120

Temperatura (oC)

TEMPERATURA: Tambin se pueden clasificar en grupos

fisiolgicos de acuerdo a la tolerancia o necesidad de
temperatura.
80

Temperatura en 0C

70
60
50
40

Termfilos
extremos
o hipertermfilos

30
20
Mesfilos

10

Termfilos
facultativos
(Termfilos)

0
-10

Psicrfilos

Grupos fisiolgicos
9

La temperatura puede acelerar o retrasar la actividad de enzimas, lo que incide

directamente en el metabolismo del microorganismo. Sin embargo si la
temperatura es excesiva puede afectar estructuras y molculas hasta su
desnaturalizacin irreversible o calcinacin.

Las reacciones enzimticas

tienen lugar a velocidades en
constante aumento

Las reacciones enzimticas

tienen lugar a la mxima
velocidad posible

ptimo

Velocidad de
crecimiento

Mnimo

Mximo
Temperatura (oC)

La membrana se gelifica, el
transporte a travs de ella es tan
lento que no hay crecimiento

Desnaturalizacin protica,
colapso de la membrana, lisis
trmica

10

pH: La acidez o alcalinidad del ambiente en donde desarrollan los

microorganismos es importante para la funcin celular, sobre
todo por la actividad enzimtica, que es muy sensible a las
variaciones de pH.
Los microorganismos que crecen en un intervalo de pH
determinado, han desarrollado protenas que funcionan en ese
intervalo.
Lmites de pH para el desarrollo
Bacteria

Lmite
inferior

ptimo

Lmite
superior

0.5

2.0-3.5

6.0

4.0-4.5

5.4-6.3

7.0-8.0

Staphyloccoccus aureus

4.2

7.0-7.5

9.3

Azotobacter sp

5.5

7.0-7.5

8.5

Chlorobium limicola

6.0

6.8

7.8

Thermus aquaticus

6.0

7.5-7.8

9.5

Acidiothiobacillus thiooxidans
Acetobacter aceti

11

Pueden afectar la velocidad de

reaccin hasta lograr la
desnaturalizacin reversible o
irreversible de las protenas.

acidfilos

pH
citoplasmtico

alcalfilos

aumenta
acidez

neutro

H+

OH-

10-14

Suelos y aguas volcnicas

Fludos gstricos,
jugo de limn

10-1

10-13

Drenaje de mina cida,

Vinagre

10-2

10-12

Ruibarbo
Melocotn

10-3

10-11

Suelo,
Tomates

10-4

10-10

Queso americano,
col

10-5

10-9

Guisantes,
Maz, salmn, gambas

10-6

10-8

agua pura

10-7

10-7

agua de mar

10-8

10-6

suelos naturales muy alcalinos

10-9

10-5

solucin de jabn

10-10

10-4

11

amoniaco casero

10-11

10-3

12

solucin saturada de lima

10-12

10-2

13

10-13

10-1

14

10-14

121

aumenta 10
alcalinidad

Oxgeno: La presencia de oxgeno es importante para los

microorganismos, ya sea porque muchos lo necesitan para su
respiracin o porque es txico para otros.

Para promover el crecimiento de los microorganismos en el

laboratorio es importante conocer sus requerimientos de oxgeno.
Grupo

Req.
de O2

Metabolismo

Ejemplo

Aerobios
Obligados
Facultativos
Microaerfilos

Si
aerbico
SI/NO facultativo (oxid/ferm)
Si, bajo aerbico

M. luteus
E. coli
S. volutans

Anaerobios
Aerotolerantes
Estrictos
Estrictos

No
Letal
Letal

Streptococcus pyogenes
Methanobacterium formicicum
Thermococcus acuaticus

fermentacin
fermentacin
anaerbico (S0 aceptor)

13

Segn el desarrollo se determinar

las condiciones del requerimiento
de oxgeno. El medio ideal evitara
la difusin del oxgeno.

Los organismos aerobios cuentan

con enzimas para degradar formas
txicas del oxgeno, procedentes
de su respiracin, como:
la catalasa (H2O2 + H2O2 2H2O + O2).
la peroxidasa (H2O2 + NADH + H+ 2H2O +NAD+)
la superxido dismutasa (O2- + O2- +2H+ H2O2 + O2)
Algunos microaerfilos usan Mn2+ y protenas
Los anaerobios no tienen estas enzimas, para algunos el oxgeno es letal ya que
es un agente oxidante que acta sobre su metabolismos. Los anaerobios
aerotolerantes poseen sistemas enzimticos que no son afectados por el oxgeno.
14

4.2 CRECIMIENTO CELULAR Y DE POBLACIONES EN MICROORGANISMOS

UNICELULARES Y FILAMENTOSOS.
CRECIMIENTO DEL INDIVIDUO:
Los
microorganismos se reproducen dando
origen a otros organismos. Es el ciclo que
comprende desde que nace la clula hasta
que da origen a otra.

CRECIMIENTO POBLACIONAL:
Para
facilitar el estudio de los microorganismos,
muchas veces se estudian como poblaciones.

MICROORGANISMOS
UNICELULARES:
Para las bacterias, levaduras, protozoarios y
algas unicelulares se puede determinar su
crecimiento individual y crecimiento como
poblaciones al tomar referencia datos como
la biomasa obtenida (la masa celular
producida
por
el
crecimiento
del
microorganismo)

MICROORGANISMOS PLURICELULARES:
En el caso de hongos filamentosos o mohos
slo es posible determinar su crecimiento
poblacionalmente,
debido
a
que
las
estructuras celulares se mezclan y es
imposible decir en que punto termina un
individuo y donde comienza otro.

En este caso el tiempo de generacin

poblacional se define como el tiempo en que
El tiempo que tarda una clula en completar una poblacin tarda en duplicarse.
su ciclo vital se llama tiempo de
reproduccin o generacin individual.

15

4.3
CURVA
DE
CRECIMIENTO
MICROBIANA:
FASES
Y
CARACTERSTICAS. CINTICA DE CRECIMIENTO. TIPOS DE CULTIVOS
IN VITRO.
La representacin grfica del crecimiento microbiano se denomina curva de
crecimiento. En ella se representa el desarrollo celular por etapas de las clulas
viables, puede representarse tambin las clulas totales.
Se estudian en cultivos estticos, en lote o batch (cultivos en los que no se
reponen los nutrientes ni se elimina el exceso de clulas formadas). Se
establecen cuatro etapas en las curvas de crecimiento:
a) fase lag, b) fase log, c) fase estacionaria, d) fase de muerte
En cultivos contnuos no se presentan las cuatro etapas.
Cultivos sincrnicos

Son aquellos en los que las clulas se encuentran en la misma etapa de

crecimiento y han sincronizado su desarrollo.

16

CULTIVO ESTTICO
algodn para paso
de aire estril

Medio de cultivo
Cultivo
microorganismos

Nutrientes
(disminuyen por
consumo)
y desechos
(aumentan por
metabolismo)

QUIMISTATO
Medio fresco
Aire estril

Vlvula de control

Lquido con clulas

y medio de cultivo

17

Log10 m.o.
viables

lag o
adaptacin

Fases de crecimiento (1 sola fuente de C en cultivo en lote)

logartmica

estacionaria

muerte o lisis

1.0

9.0

8.0

Densidad
ptica

Viables

Turbidez
(densidad ptica)

0.75
0.50

7.0
0.25
6.0

5.0

Tiempo

0.1
18

Log10 m.o.
viables

lag
1

Fases de crecimiento (2 fuentes de C en cultivo en lote)

log 1

es
t
1

lag
2

log 2

estacionaria
2

Densidad
ptica

muerto o lisis

1.0

9.0
Viables

8.0

Turbidez
(densidad ptica)

0.75
0.50

7.0
0.25
6.0

5.0

Tiempo

0.1
19

Log10 m.o.
viables

lag o
adaptacin

Fases de crecimiento (cultivo contnuo en quimistato)

logartmica

estacionaria

muerto o lisis

1.0

9.0

8.0

Densidad
ptica

Viables

Turbidez
(densidad ptica)

0.75
0.50

7.0
0.25
6.0

5.0

0.1

Tiempo

20

Diferentes condiciones que modifican las curvas de crecimiento

Crecimiento en cultivo Crecimiento en cultivo
esttico o en lote, con una esttico o en lote con dos
sola fuente de carbono.
o ms fuentes de carbono.
Curva normal
cuatro etapas.

con

sus Efecto diuxico. Curva con

dos fases lag, dos fase log,
casi
dos
fases
estacionarias y una fase
de muerte.

Crecimiento en cultivo continuo, generalmente con una

fuente de carbono.
La curva puede presentar una fase lag, y una fase log
tericamente infinita.

21

4.4 ESTRATEGIAS PARA LA MEDICIN DEL CRECIMIENTO

MICROBIANO.
CONTEO DE MICROORGANISMOS TOTALES
Determinacin del nmero de microorganismos presentes en un volumen de
muestra. En estas tcnicas no se distingue entre microorganismos vivos (viables)
o muertos, por lo que el resultado es un total de las clulas presentes.
De lo mtodos ms comnmente empleados tenemos:

Turbidimetra

Determinacin de protena producida

Cmara de Petroff-Hauser

Mtodo de Breed

Contadores electrnicos

22

Turbidimetra
Luz
Monocromtica

Fuente de luz
A

Filtro
Tubo con agua
destilada o medio no
inoculado

Instrumento ajustado
para leer 100% de
transmitancia
luminosa
Fotocelda

Luz
Monocromtica

Fuente de luz
B

Filtro

Fotocelda

Las lecturas en el
instrumento sern
menores que el 100%.
Cuanto ms turbia sea
la solucin, ms baja
ser la lectura

Suspensin de bacterias en
agua o cultivo de bacterias en
caldo, en lugar del tubo que
se ilustra en A
23

Escala de McFarlan
10
9

Unidades McFarlan

8
7
6
5
4

3
2
1
0
300

600

900

1200 1500 1800

x106 mo/mL

2100

2400

2700

3000
24

Determinacin de

protena producida
El
aparato
hace
la
determinacin y reporta
el resultado. En funcin
de la cantidad de protena
de la muestra se calcula el
total de microorganismos.
Este puede indicarse para
que sea por mL, dL u otra
medida.

25

Cmara de Petroff-Hauser

Los clculos se realizan tomando en cuenta

los cuadros que se contaron y el volumen de
0.02 mm3.
Contar
varios
cuadros
y
promediar:
Cuadro
mo
1
12
2
14
3
10 Prom = 12 mo
Contar varios cuadros y sumar:
Cuadro
mo
1
12
2
14
3
10 Suma = 36 mo

Calcular para el rea total:

1 cuadro
12 mo
25 cuadros - X
X= (12*25)/1= 300 mo

Calcular para el rea total:

3 cuadros 12 mo
25 cuadros - X
X= (36*25)/3 = 300 mo

Calcular por mL:

S hay 300 clulas en el rea y el
rea contiene 0.02 mm3 tenemos:
0.02 mm3 - 300 mo
1000 mm3 - Y
Y = (1000*300)/0.02
Y = 1.5X107 mo/mL
Recordar que:
1 mL = 1 cm3 = 1000 mm3

26

Mtodo de Breed

extendido de la
muestra a partir de un
volumen conocido
(ejemplo 10mL)

delimitacin del rea

calibracin del objetivo (establecer

el dimetro del campo)
(ejemplo 150mm de dimetro)
Conteo de microorganismos en diferentes lugares del rea.
Clculos (rea total, volumen de muestra, rea contada)

Dimetro del campo:

D campo = pr2
= 3.1416*(75 mm)2
= 17671.5 mm2
= 1.7672x10-4 cm2

Contar
varios
campos
y
promediar:
Campo
mo
1
20
2
22
3
18
4
20 Prom = 20 mo
Contar varios campos y sumar:
Suma de 4 campos = 80 mo

Calcular para el rea total:

1.7672x10-4 cm2 20 mo
2 cm2
- X
X= (20*2)/1.7672x10-4
X= 2.2635x105 mo/mL
Calcular para el rea total:
7.0688x10-4 cm2 80 mo
2 cm2
- X
X= (80*2)/7.0688x10-4
X= 2.2635x105 mo/mL

27

Contadores electrnicos
El aparato se ajusta y
programa para el conteo. El
resultado tambin puede
programarse.

1,258,976

Flujo

28

CONTEO DE MICROORGANISMOS VIABLES

Determinacin del nmero de microorganismos presentes en un volumen de
muestra que en ese momento se encuentran vivos o viables, es decir estn
llevando a cabo su metabolismo, por lo que las clulas muertas no se toman en
cuentan para los resultados.
De lo mtodos ms comnmente empleados tenemos:

Dilucin y vertido en placa

Mtodo de extensin superficial

Mtodo de la gota o Miles y Misra

Por filtro de membrana

Nmero ms probable

Mtodos de determinacin metablica

29

Dilucin y vertido en placa

Considerar que entre

25 y 250 UFC por placa
es el intervalo
aceptado para hacer el
clculo

10-3

10-4

10-5

10-6

650

60

800

550

680

1345

146

15

2600

248

26

30

Mtodo de extensin superficial

El clculo se hace en funcin del volumen agregado:

En el ejemplo tenemos 19UFC por 0.1 mL, por lo tanto tendramos 190 UFC/mL. Si se hace a partir
de una dilucin se deber tomar en cuenta para reportar el valor final.

31

Mtodo de la gota o Miles y Misra

0.02 mL de
lquido
a una altura
de 2.5 cm

Se ve cmo la gota se
esparce al chocar con el
medio
Incubar

Despus de incubar
se determina el
nmero de colonias que crecieron y se hace
el clculo para reportar las UFC por mL
Tomando el ejemplo tenemos que:
0.02 mL 3 UFC
1 mL
- X
X = (3 *1) /0.02
= 150 UFC/mL = 1.5x102 UFC/mL
S la muestra fue de una dilucin 1/100
tendramos:
150 UFC*100 UFC/mL
1.5x104 UFC/mL

32

Por filtro de
membrana
En este caso se contabilizan
las UFC y se reportan
directamente por el volumen
filtrado. Ejemplos:

Frasco de
muestra

Si se filtr 200 mL de
muestra y crecieron 15 UFC
se reporta:

Filtro de
membrana

15 UFC/200mL
Si se filtr 100 mL de
muestra y crecieron 8 UFC se
reporta:
8 UFC/100mL

tapa

Filtrado
estril
Trampa de
algodn en la
lnea de vaco
lnea de vacio
33

Retencin de Microorganismos por tamao de partcula y carga.

a) Nuceloporo

a) Membrana estril

b) Celulosa regenerada

b) Uso en embudo

c) Retencin

c) Acetato de celulosa

d) Membrana incubada
34

Tubos con medio nutritivo

(5 tubos por serie)

Nmero ms probable
Es importante verificar la tabla
y metodologa que se siguen, ya
que cada tabla est calculada y
ajustada a un determinado
proceso.

Nmero de tubos positivos

por serie

Ejemplos: la tabla de Cochran y

la de diluciones decimales.

Combinacin de
positivos

ndice de NMP/100
mL

Bajo

Alto

5-2-0
5-2-1
5-2-2
5-3-0
5-3-1
5-3-2

50
70
90
80
110
140

20
30
40
30
40
60

170
210
250
250
300
360

35

Mtodos de determinacin metablica

1 mlLde azul de metileno

+ 9 mL de la leche

Reduccin del azul de metileno

Este test se utiliza para determinar la calidad de la
leche a travs de la actividad reductora de las
bacterias. Mientras mayor sea el nmero de
bacterias presentes en la leche, mayor ser el
consumo
de
oxgeno
por
respiracin
y
consecuentemente mayor la decoloracin del azul de
metileno.
Sobre la base del tiempo de decoloracin, la leche
puede clasificarse en:

Incubar a 37C y
ver decoloracin

a) Excelente :

sin decolorar despus de 8 horas.

b) Buena :

se decolora entre 8 y 6 horas.

c) Regular :

se decolora entre 6 y 2 horas.

d) Pobre :

se decolora en menos de 2 horas.

e) Psima :

se decolora en menos de 1 hora.

36

4.5 ESTRATEGIAS FSICAS Y QUMICAS PARA EL CONTROL DEL

CRECIMIENTO MICROBIANO.
Esterilizacin: Es la eliminacin de
cualquier forma de vida de un objeto,
superficie o medio. Es un trmino
absoluto ya que la presencia de una o
millones de clulas en un ambiente acaba
con la esterilidad. Se pueden utilizar
diversos mtodos para lograrla.

Disminucin o reduccin de la carga

microbiana: Se baja la cantidad de
microorganismos y quedan algunos vivos.
Pasteurizacin: Proceso trmico que se aplica
a alimentos para disminuir la cantidad de
microorganismos.
Asepsia: Proceso de disminuir la carga
microbiana de una superficie corporal para
evitar que causen problemas al realizar un
procedimiento.
Desinfeccin: Proceso para disminuir la carga
microbiana de superficies inertes

37

Los microorganismos requieren de condiciones adecuadas para su crecimiento.

Cada especie tiene ciertos parmetros, fuera de los cuales su metabolismo se
hace ms lento o simplemente muere al cambiar alguna condicin.
Las formas ms comunes de limitar y eliminar a microorganismos son:
Temperatura: por debajo de la temperatura
mnima se inactivan o desnaturalizando las
biomolculas al superar la temperatura
mxima.
pH: que las variaciones inciden en la actividad
enzimtica.

Agentes qumicos: evitan el desarrollo de

microorganismos o los eliminan totalmente.

38

AGENTES FSICOS
Efecto General

Acta sobre

Desnaturalizacin
de protenas
(calor, pH)

Protenas estructurales y enzimas,

tambin puede afectar a otros polmeros
(carbohidratos, lpidos, cidos nucleicos)

Precipitacin y
desnaturalizacin
por concentracin
de solutos

Protenas estructurales y enzimas,

carbohidratos y cido nucleico

Radiaciones
Ultravioleta

Generalmente afecta cidos nucleicos,

aunque puede daar otras estructuras

Radiaciones
ionizantes
(rayos X y gamma)

Puede generar radicales libres que atacan

las biomolculas, puede causar mutaciones
o daos severos a la funcin celular
39

Aplicacin de agentes fsicos en el control de microorganismos

Mtodo

Uso recomendado

Limitaciones

Autoclave

Esterilizacin
de
instrumentos,
lienzos,
utensilios y bandejas de
tratamiento,
medios
y
otros
lquidos
termorresistentes

Sin
efecto
contra
organismos
dentro
de
materiales impermeables al
vapor, no se puede utilizar
en materiales sensibles al
calor

Vapor fluyente o agua

hirviendo

Destruccin de patgenos No
hay
garanta
de
no formadores de espora, esterilizacin en una sola
ropa, vajillas
exposicin

Horno

Para esterilizar materiales Destruye los materiales

impermeables o que se que no soportan altas
daan con la humedad
temperaturas
mucho
tiempo

Incineracin

Objetos
contaminados El incinerador debe poder
desechables
quemar cargas grandes de
manera rpida y efectiva

40

Aplicacin de agentes fsicos en el control de microorganismos

Mtodo

Uso recomendado

Limitaciones

Luz ultravioleta

Control
de
infecciones Debe ser absorbida para
transmitidas por el aire, ser efectiva
desinfeccin de superficies

Radiaciones
ionizantes

Esterilizacin de material Caro

y
requiere
quirrgico sensible al calor, instalaciones costosas y
otros materiales mdicos
especficas para su uso

Filtros de
membrana

Esterilizar
sensibles al calor

Filtros de fibra
de vidrio

Desinfeccin del aire

Lavado

Limpieza de manos, piel, Reduce la flora microbiana

objetos
por arrastre

lquidos Los lquidos deben estar

libres
de
partculas
suspendidas
Son costosos y requieren
ser
reemplazados
constantemente

41

CARACTERSTICAS DE LOS AGENTES QUMICOS

Aplicacin de cualquier agente qumico que elimine a los microorganismos, que
debe considerar los siguientes aspectos:
01.Actividad antimicrobiana
02.Solubilidad
03.Estabilidad
04.No ser txico al hombre u otras especies de inters
05.Homogeneidad
06.No reaccionar con materiales orgnicos
07.Debe ser txico en condiciones normales de temperatura
08.Capacidad de penetracin
09.No debe corroer ni teir
10.Propiedades desodorantes o no tener olor desagradable
11.Tener propiedades detergentes
12.Disponibilidad

42

AGENTES QUMICOS
Efecto General

Acta sobre

Agentes qumicos Oxidacin o reduccin

(NaClO)

Oxida o reduce molculas importantes de la

clula, daa membrana o pared celular.

Otros agentes qumicos

Evitan el paso de sustancias, afectan transporte

de electrones, etc.

ANTIBITICOS

01.Fenol y compuestos fenlicos

02.Alcoholes
03.Halgenos
04.Metales pesados y sus compuestos
05.Colorantes
06.Detergentes
07.Compuestos cuaternarios de amonio
08.cidos y lcalis
09.Glutaraldehdo
10.Quimioestabilizadores gaseosos
Accin sobre el metabolismo

Actan sobre sntesis de protenas al atacar

ribosomas, afecta actividad enzimtica, ser
seuelos falsos de otras sustancias.

Accin sobre estructuras ya

elaboradas

Daa la estructura de molculas como el

peptidoglucano en pared celular.
43

Agente Qumico

Uso

Limitaciones

01) Fenol y compuestos

Desinfeccin general

Accin microbiocida limitada,

irritante y corrosivo

02) Alcoholes

Antispticos

Solo antispticos

03) Yodo

Asepsia de piel y desinfeccin de agua

Irritante de membranas mucosas

04) Cloro

Desinfeccin de agua y superficies

Se inactivas con material orgnico,

acta a pH 1

05) Nitrato de plata

Tratamiento de Quemaduras

Posible irritacin

06) Violeta de genciana

Asepsia de mucosas

Limitada a la zona, colorea tejidos

07) Cuaternarios de amonio

Asepsia de piel, desinfeccin de mesas

No mata esporas

08) cido actico

Conservacin de alimentos

Materia inanimada

09) Glutaraldehdo

Esterilizacin de instrumentos, fumigacin

Estabilidad limitada

10) Formaldehdos

Esterilizacin de instrumentos, fumigacin

Penetracin pobre, corrosivo

10) b-propionolactona

Esterilizacin de instrumentos, fumigacin

No tiene gran poder de penetracin

10) xido de etileno

Esterilizacin de instrumentos y material

de plstico

Inflamable y potencialmente
44
explosivo

EJEMPLOS DE LOS MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE ANTIBITICO

Antibitico

Obtenido de

Espectro primario

Modo de accin

Ampicilina

Penicillium sp

G(+) y (-)

Inhibe sntesis de pared

celular

Anfotericina B

Streptomyces sp

Micosis

Interfiere con funcin de

membrana

Bacitracina

Bacillus sp

Gram (+)

Inhibe sntesis de pared

celular

Cloramfenicol

S venezuelae

Amplio espectro

Inhibe sntesis de
protenas

Clorotetraciclina

S. aureifaciens

Amplio espectro

Inhibe sntesis de
protenas

Kanamicina

S kanomyceticus

Mycobacterium

Induce sntesis de
protenas anormales

Novobiocina

S griseus

Gram (+)

Inhibe polimerizacin de
ADN

Polimixina B

B. polymixina

Gram (-)

Deterioro de pared
celular

Nistatina

S. noursei

Candida intestinal,
hongos

Dao a la membrana
celular
45

Lugares de accin de algunos agentes quimioteraputicos en clulas eucariotes

(antifngicos).
Sntesis de la
pared celular:
Polioxinas
Funciones de
la membrana:
Polienos

Sntesis de
cidos nucleicos:
5-Fluorocitosina

Sntesis de
ergosterol:
Azoles
Alilaminas

Formacin de
microtbulos:
Griseofulvina
Polienos

46

Lugares de accin de algunos agentes quimioteraputicos en clulas procariotes.

ADN girasa
cido nalidxico (quinolona)
Ciprofloxacina (quinolona)
Novobiocina

Pared celular
Cicloserina
Vancomicina
Bacitracina
Penicilinas
Cefalosporinas
Monobactamas
Carbapenemas

Elongacin del ARN

Actinomiocina

ARN polimerasa dependiente del ADN

Rifampicina
Estreptovaricinas
Sntesis de protenas
(inhibidores de la subunidad 50s)
Eritromicina (macrlidos)
Cloranfenicol
Estreptomicina
Gentamicina
Kanamicina
Amikacina
Nitrofuranos

ADN
THF
ARNm
DHF
Metabolismo del
cido flico
Trimetroprima
Sulfonamida

Ribosomas
50

50

50

30

30

30

PABA

Estructura y funcin de la
membrana citoplasmtica
Polimixinas
Daptomicina

Biosntesis de lpidos
Plantesimicina

Sntesis de protenas
(inhibidores de la subunidad 30s)
Tetraciclinas
Espectinomicina
Estreptomicina
Gentamicina
Kanamcina
Amikacina
Nitrofuranos

47

Agentes quimioteraputicos y su espectro de accin

microorganismos y otros agentes causantes de enfermedad
Eucariotas
Hongos

Bacterias

Micobacterias

Bacterias
Gram (-)

Tobramicina
Azoles
Alilaminas
Ciclohexi-mida
Polienos
Polioxinas
Anlogos de
cidos nucleicos
Equinocandinas

Bacterias parsitas estrictas

Bacterias
Gram (+)

Clamidias

Virus
ARN

ADN

Inhibidores de la
transcriptasa
reversa no
nucleosdicos
Inhibidores de
proteasas
Inhibidores de la
fusin

Estreptomicina

Tetraciclina

Polimixinas

los

Penicilinas

Sulfonamidas
Cefalosporinas
Quinolonas

Isoniacida

Rikettsias

sobre

Anlogos de
nuclesidos
Interferon

Vancomicina
Daptomicina

Plantensimina

48

Cloranfenicol

Estreptomicina

Penicilina

Ampicilina (Trihidratada)

Tetraciclina
Demeclociclina

Cefalosporina C

Cefalexina
49

Mecanismos de resistencia bacteriana a los antibiticos

Mecanismo

Ejemplo de
antibitico

Base gentica
de la
resistencia

Presente en :

Permeabilidad reducida

Penicilinas

Cromosmica

Pseudomonas aeruginosa,
Bacterias entricas

Inactivacin del
antibitico

Penicilina

Plasmdica,
cromosmica

Cloranfenicol

Plasmdica,
cromosmica

Staphylococcus aureus,
Bacterias entricas, Neisseria
gonorrhoeae

Aminoglicsidos

Plasmdica

Alteracin de la diana

Eritromicina,
Rifampicina,
Estreptomicina,
Norfloxacina

Cromosmica

Staphylococcus aureus
Bacterias entricas
Bacterias entricas
Bacterias entricas,
Staphylococcus aureus

Desarrollo de una va
bioqumica resistente

Sulfonamidas

Cromosmica

Bacterias entricas,
Staphylococcus aureus

Bombas de expulsin
(eflujo)

Tetraciclinas
Cloranfenicol

Plasmdica,
cromosmica

Bacterias entricas,
Staphylococcus aureus, Bacillus
subtilis

Staphylococcus aureus,
Bacterias entricas
Staphylococcus aureus

50

Resistencia a los antibiticos por

permeabilidad reducida

51

Resistencia a los antibiticos por

inactivacin

52

Resistencia a los antibiticos por

alteracin de diana

53

Resistencia a los antibiticos por

va bioqumica resistente

54

Resistencia a los antibiticos por

bomba de expulsin (eflujo)

55

TCNICAS DE ESTERILIZACIN A NIVEL INDUSTRIAL

Por los grandes volmenes de material y productos en la industria se

requieren sistemas especiales de esterilizacin.
Como ejemplos de algunos procesos de esterilizacin se encuentran los
siguientes:
a) Potabilizacin, desionizacin y esterilizacin de agua.
b) Autoclaves hospitalarios e industriales
c) Uso de gases (xido de etileno)
d) Radiaciones gamma

Como aplicacin de estos mtodos tenemos

a) Esterilizacin de fermentadores
b) Esterilizacin de conservas y alimentos

56

Plantas y equipo para la esterilizacin de

agua.
Potabilizacin. Ha recibido tratamiento para
ser utilizada en el consumo humano, la carga
microbiana es baja y se logra mediante
filtracin a travs de arenas y agregando
sustancias qumicas como cloro u ozono.

Desionizacin.
Usando
columnas
de
polmeros se eliminan las iones presentes en
el agua, y posteriormente seguir un proceso
de esterilizacin.
Esterilizacin. Muchas veces aunque el agua
puede esterilizarse en autoclave, puede
obtenerse estril mediante filtros, despus
de pasar por varios procesos para disminuir
la cantidad de materia que puede obstruir
los filtros.
57

AUTOCLAVES HOSPITALARIOS E INDUSTRIALES

El proceso de esterilizacin por calor hmedo en autoclave se aplica con las
mismas condiciones (1210C durante 15-20 minutos), aunque en ciertos casos
puede aumentarse el tiempo (1 hora o ms)

El diseo de este equipo toma en cuenta los grandes volmenes de material y

equipo.
58

Autoclaves Hospitalarios: pueden tener una altura de 2 o 2.5 m y cuentan la

mayora con doble compuerta, una de entrada y otra de salida del material.
Adems de estos se pueden tener autoclaves ms pequeos.

Por procedimiento los hospitales deben contar con dos aparatos, uno para
preparar material estril y otro para esterilizar el material contaminado que
se genera en los procedimientos mdicos.

59

Autoclaves industriales. Grandes unidades que pueden medir mas de tres

metros de dimetro y 15 metros de largo, en ellos se coloca el material que
se va a esterilizar, generalmente son de un solo uso ya que lo que se
esteriliza en ellos se termina de empacar y se distribuye.

60

USO DE GASES (XIDO DE ETILENO)

Los aparatos son de diversos tamaos de acuerdo a la cantidad de material a
esterilizar. En el aparto se coloca el material en la cmara y posteriormente se
somete al proceso de esterilizacin gaseosa. Por otro lugar se introduce el
recipiente con el gas o los reactivos para generarlo.
Se utiliza para material plstico termolbil como jeringas y agujas, cajas petri,
etctera.

61

RADIACIONES GAMA
Esterilizacin que requiere de instalaciones especiales por el blindaje de
concreto, acero y plomo que debe tener la cmara de esterilizacin. Se utiliza
Cobalto 60 como elemento radiactivo.
Los
materiales
se
colocan en recipientes y
contenedores que los
llevarn a la cmara de
irradiacin. El proceso
de
transporte
de
material
puede
ser
automtico
o
semiautomtico,
pero
slo el material entra a
la cmara por un sistema
sin fin introduce los
contenedores por un
lado y saca el material
ya estril por otro.
62

FERMENTADORES
Los fermentadores son contenedores en donde un microorganismo se utiliza
para la produccin de metabolitos (biosntesis)
Fermentadores pequeos (1L, 5L, 10L) utilizados para investigacin pueden
desmontarse y esterilizarse en autoclave, pero en el caso de fermentadores
de 500L y hasta 400,000L son unidades fijas, por lo que se esterilizan
mediante la inyeccin de vapor para dejar el sistema estril.

En este caso es necesario este tipo de esterilizacin debido a que el uso de

gases, por ejemplo, no garantizara su correcta eliminacin y afectara al
desarrollo del microorganismo.
63

Tamaos del
fermentador
(litros)

Producto

1, 000 a 20,000

Enzimas para
diagnstico,
sustancias para
biologa molecular.

40,000 a 80,000

Algunas enzimas,
antibiticos

100,000 a
150,000

Penicilina,
antibiticos
aminoglicsidos,
proteasas, amilasas,
transformacin de
esteroides,
aminocidos.

200,000 a
500,000

Aminocidos (ac.
glutmico).
64

4.6 FUENTES DE CONTAMINACIN MICROBIOLGICA EN DIVERSOS

AMBIENTES.
Como se ha definido con anterioridad, los microorganismos son seres ubicuos, que
se pueden encontrar en cualquier lugar. En muchas ocasiones las condiciones del
entorno pueden funcionar como barreras de contencin.
Sin embargo esta contencin puede fallar y permitir el paso de microorganismos
que no se encuentran normalmente en ese ambiente o de ese ambiente moverse a
otro lugar.

Microbiota normal
Son el conjunto de
microorganismos
presentes en un
ambiente y que
normalmente se
desarrollan en l.
65

CONTAMINACIN MICROBIOLGICA: La presencia de microorganismos no

deseados en ciertos ambientes se considera contaminacin microbiolgica.
Se puede presentar en ambientes estriles, donde
la presencia de cualquier microorganismos es
contaminacin, hasta la presencia de una especie
diferente de toda la microbiota de un lugar.

Por ejemplo en el intestino humano se encuentran muchos

microorganismos como Escherichia coli, Pseudomonas
aruginosa, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Bacteroides
fragilis, Fusobacterium sp, Bifidobacterium sp, Clostridium
perfringens entre otros, la presencia de especies de
Salmonella, Shigella, Vibrio se consideran contaminantes
del intestino y son agentes patgenos.

66

Otro ejemplo es la produccin de

quesos, donde la presencia de
Staphylococcus aureus
afecta al
producto.

Tambin el lugar habitual del microorganismo puede determinar si se considera

contaminante o no.
Cualquier microorganismo que penetre
Proteus vulgaris es parte de la flora
por una herida puede causar una
normal del intestino y contaminante en
infeccin.
el tracto urinario, causa infecciones en
vas urinarias.

67

TIPOS Y FUENTES DE CONTAMINACIN MICROBIOLGICA.

AREA

TIERRA Y SUELOS

LQUIDOS

POR ORGANISMOS

68

Area: Los microorganismos presentes en el polvo al ser llevados por

corrientes de aire pueden depositarse en cualquier superficie o medio.
Tolvaneras.
Movimiento de muebles y objetos.
Los residuos de animales y humanos
al secarse pueden ser llevados por
corrientes de aire.
El flush en el inodoro por la
fuerza del agua nebuliza
pequeas
gotas
con
microorganismos.

Tambin este efecto de flush

se presenta con las gripes,
cuando al estornudar o toser
la persona proyecta diminutas
gotas en las que van los
microorganismos.

69

Tierra y suelos: El polvo del suelo contiene muchos microorganismos que

pueden causar infecciones al contaminar a una persona o daar un
producto.
Por la diversidad de vida presente en los suelos, es posible que tengamos
contaminacin microbiolgica si se pone en contacto el suelo o tierra con
algn objeto limpio.

Tambin se puede potencializar la cantidad de microorganismos patgenos si

se tienen filtraciones de agua de drenaje en los suelos.
Otros entornos ecolgicos pueden verse afectados por ciertas condiciones
ambientales, cambiando la microbiota sana autctona por otros
microorganismos que pueden causar problemas en el entorno.
70

Lquidos: Aguas de drenaje pueden contaminar productos o alimentos,

adems de personas y animales.
Las descargas de drenaje en ros y mares alteran la flora normal, tambin
por mezclarse aguas de desecho con agua potable.

Aunque el agua pueda parecer pura o limpia, es posible que tenga

microorganismos que causen problemas, aunque no sean patgenos pueden
descomponer fcilmente los alimentos causando problemas diarricos (por
ejemplo la enterotoxina de Staphylococcus aureus) al ser consumidos o
simplemente su sabor y aspecto ya no es apetecible al consumidor.
71

Por organismos: Las especies de microorganismos presentes en plantas,

animales o personas pueden pasar a otros organismo o materiales
diversos.
Hay enfermedades que requieren un vector biolgico para cerrar su ciclo
infeccioso y causar enfermedad.

Mosquito Plasmodium vivax

Pulga Yersinia pestis

Chinche Besucona Tripanosoma cruzi

Mosca domstica patgenos de vas

digestivas
72

04.7) MONITOREO PARA CONTROL MICROBIOLGICO

Parte de las labores del microbilogo es el determinar la presencia y tipo de
microorganismos que se encuentran en un lugar o proceso, ya sea para verificar la
produccin del metabolito de inters o la presencia de contaminantes.

En muchas industrias es importante la rapidez con la que se pueda determinar el

crecimiento microbiano, usando tcnicas convencionales y tcnicas rpidas.
Para produccin de cerveza, es importante saber si la levadura est creciendo al ritmo de
produccin y si no se encuentra algn otro microorganismo contaminante que afecte el
proceso.
O la elaboracin de solucin salina isotnica estril, que por sus caractersticas el control y
monitoreo es severo, debido a que este producto ser introducido directamente al torrente
sanguneo, con lo que la presencia de cualquier tipo de microorganismo es indeseable.
Contaminacin a nivel industrial

Contaminacin en Hospitales

De insumos
Del proceso
Del producto
Durante el almacenamiento

Material no estril
Contaminacin cruzada por fomites
Contaminacin area

73

Mtodos convencionales

Los ms empleados son las tcnicas de cuantificacin de viables, su

inconvenientes radica en que las pruebas pueden llevarse uno o dos das para
tener resultados. La certeza sobre la identificacin del microorganismo
encontrado es muy alta.
Tcnica

Tiempo para el
resultado

Observaciones

Dilucin y vertido en placa

de 24 horas

Si la muestra est muy diluida

pueden no ser detectados,
adecuar el medio de cultivo al
microorganismo buscado.

Nmero ms probable

18 a 24 horas

Segn el mtodo se hacen

diluciones, adecuar el medio al
microorganismo buscado.

Filtracin

18-24 horas

Se requieren muestras diluidas,

adecuar
el
medio
al
microorganismo buscado.

18 a 24 horas

Verificar la toma de muestra y

los medios usados.

Muestreo
(cualitativo)

con

medios

74

Mtodos rpidos
Bsicamente tienen el mismo principio que muchos mtodos convencionales,
logran una ventaja la mayora porque son miniaturizados y no se requiere
mucho tiempo para tener resultados, algunos de ello pueden leerse a 8 horas
de realizada la prueba.
Tcnica

Tiempo para el
resultado

Petrifilm

Sistemas
similares)

API

(o

PCR (polimerase chain

of Reaction)

Observaciones

8 a 16 horas

Es un medio de cultivo, que al agregar una

suspensin del problema hidrata los
componentes y permite el desarrollo.

12 a 18 horas
34 a 48 horas desde
el aislamiento.

Sirve para identificar al microorganismo,

para realizar esta prueba es necesario un
asilamiento previo.

2 a 4 horas

Permite la identificacin de cadenas de

ADN de microorganismos, lo que permite
la identificacin rpida, en algunos casos
puede hacer la determinacin de mezclas
diferenciando a los microorganismos. Es un
mtodo caro.
75