BETA ACU-COLOR
Principio
Gonadotropina corinica humana (hCG) es una
hormona secretada por la placenta en desarrollo poco
despus de la fecundacin. En un embarazo normal.
hCG se puede detectar en general, como a los 7 das
despus de la concepcin (1-4).
Se duplica cada 1,3 a 2 das. La primera vez que
perdieron el periodo menstrual, la concentracin de
hCG es de unos 100 mlU / ml, se ve al final del primer
trimestre. La aparicin de hCG despus de la
concepcin y su posterior aumento en la concentracin
durante el crecimiento gestacional temprano lo
convierten en un excelente marcador para la deteccin
temprana del embarazo. El siguiente grfico muestra
la curva normal de excrecin de hCG en el embarazo.
Los niveles elevados de hCGcomparables a los
observados al inicio del embarazo tambin puede
estar asociada con neoplasia trofoblstica o notrofoblsticas (6-7), como mola hidatidiforme,
coriocarcinoma, por lo tanto, la posibilidad de
enfermedad, se debe descartar antes de que un
resultado positivo de hCG es considerados para el
diagnstico de embarazo.
El
BETA ACU-COLOR-es
un
inmunoensayo
enzimtico sndwich (8-9) para la determinacin de la
gonadotropina corinica humana en la orina o el suero.
El mtodo emplea una combinacin nica de
anticuerpos monoclonales y policlonales para
identificar selectivamente hCG en orina / suero con un
alto grado de sensibilidad en menos de 8 minutos, los
niveles elevados de hCG tan poco como 25 mlU / ml
puede ser detectado. La especificidad inmunolgica de
la prueba prcticamente elimina la interferencia
cruzada de la relatividad de las hormonas
glicoprotena estructuralmente relacionados hFSH,
hLH y TSH a niveles fisiolgicos.
Muestra del paciente se le permite reaccionar con el
conjugado enzimtico de anticuerpos y los anticuerpos
en la fase slida de forma simultnea en la presencia
de hCG, un anticuerpo-anticuerpo-enzima compleja
que se forman en la superficie del pocillo de
microtitulacin. Despus de la enzima conjugado no
unido se elimina mediante lavado con chorro de agua
del grifo, el pozo se incubaron con el sustrato de los
reactivos. El desarrollo del color azul en el pozo indica
la presencia de hCG.
Comparando la intensidad del color de las muestras de
pacientes con la de la siempre sabe de referencia, la
cantidad de hCG puede ser visualmente estimado en
mayor o menor que 25mlU/ml.
Reactivos
1. Conjugado enzimtico contiene perxido de
hidrogeno anticuerpo monoclonal de ratnperoxidasa estabilizador de protenas y 0,02% de
timerosal.
2. Un reactivo de sustrato: Contiene perxido de
hidrogeno y el estabilizador.
3. Sustrato reactivo B: contiene cromgeno de
sustrato.
4. HCG estndar-25 mlU/ml: contiene 25 mUI/ml
hCG (2da IS) y 0,02% de timerosal. (Opcional).
5. HCG estndar-50 mlU/ml: Con el 50 mUI/ml hCG
(2da IS) y el 0,02% de timerosal (opcional).
6. De referencia positiva (HCG-100 estndar
mlU/ml): contiene 100 mUI/ml hCG (ES 2da) y
0,02% de timerosal.
7. Referencia negativa: Contiene perxido de
hidrogeno la orina negativo y el 0,02% de
timerosal.
8. Pocillos de microtitulacin: Contiene perxido de
hidrogeno anticuerpos policlonales (IgG) dirigidos
contra hCG.
Instrucciones para Conservacin
1. Almacenar los reactivos a la temperatura del
refrigerador (2 a 8C) cuando no se utiliza NO
CONGELAR.
2. Lleve los reactivos y muestras a temperatura
ambiente (20 a 25C) antes de la prueba.
Precauciones
1. No agregue Azida de Sodio a las muestras
como conservante, ya que inhibe la actividad
enzimtica.
2. No mezcle los reactivos de lotes diferentes y no
utilizar los componentes del kit despus de la
fecha de vencimiento.
3. No intercambie las tapas de botellas.
4. No exponga el reactivo sustrato B a la luz
fuerte durante el almacenamiento o blanco en
uso.
Recaudacin de Muestra
La muestra debe recogerse en un recipiente limpio y
seco, ya sea de plstico o de vidrio, sin conservantes
muestra recogida en cualquier momento se puede
utilizar. Sin embargo, la orina de la maana por lo
general contiene la mayor concentracin de la
hormona.
Todas las muestras pueden ser refrigeradas (2 a 8C)
y se almacena hasta 72 horas antes del ensayo. Si las
muestras son refrigeradas, deben alcanzar la
temperatura ambiente antes que los especmenes de
prueba presenten partculas visibles, se debe filtrar, se
centrifuga y se deja reposar y limpia obtenida para la
prueba.
No hay una preparacin especial de la muestra del
paciente se requiere. Aditivos tales como azida de
sodio se debe evitar estudios limitado de la muestra
indic que la muestra de plasma preparado a partir de
EDTA se puede utilizar en lugar de suero. Suero no se
vaya a analizar inmediatamente almacenados en un
refrigerador o un congelador llevar estas muestras a
temperatura ambiente antes de la prueba NO
congelar y descongelar repetidamente.
Material Previsto
1. Conjugado enzimtico
2. Reactivos sustrato A
3. Reactivos sustrato B
4. HCG I. Standard 25 mlU/ml (slo para cuatro
kit estndar)
5. HCG II Standard. 50 mUI/ml (slo para cuatro
kit estndar)
6. HCG Standard 100 mUI/ml (referencia
positiva)
7. referencia negativa
8. Micro ttulo de pozos
9. Las pipetas desechables
10. Micro ttulo titular Bueno
Material No Previsto
1. Contenedores de recoleccin de muestras
2. Temporizador
3. Agua corriente del grifo
4. Toallas de papel absorbente
Procedimiento de Prueba
Todos los reactivos y muestras deben estar a
temperatura ambiente y se mezcla a fondo antes de
comenzar la prueba.
A. Prueba de ELISA cualitativa
1. Lugar pocillos de microtitulacin para probar
en el soporte.
2. Depositar 1 gota (50ul) de muestra del
paciente y de una gota (50ul) de referencia
hCG estndar y negativo, que se desea, en el
etiquetado
adecuadamente
pocillos
de
microtitulacin.
Use una pipeta desechable por separado para
cada muestra.
3. Aadir 1 gota de conjugado enzimtico en
cada pocillo.
4. Incubar 3 minutos a temperatura ambiente.
5. Eliminar el contenido accionando el titular de
microtitulacin y en el fregadero, seguido de
un enjuague los pozos 5 veces con agua
corriente del grifo (o agua
destilada).
Nota: Evite tambin a la contaminacin y de
exceso de agua durante el primer enjuague.
La separacin de los pozos en el titular y sera
de ayuda.
6. Y 1 gota de reactivo de sustrato A y 1 gota de
reactivo sustrato B en cada pocillo y se
incuban a temperatura ambiente durante 2
minutos.
Comparar el color desarrollado en los pozos
de muestras con la de los pozos de referencia
positiva en contra de un tiempo de fondo.
Lea el resultado en 5 minutos.
Nota:
a. Dependiendo de la concentracin de hCG en la
muestra, el color puede aparecer de forma
instantnea
b. Incubacin del reactivo de sustrato ms all de
5 minutos puede provocar un leve matiz de azul
y mucho menos intenso que el de la referencia
positiva de los resultados negativos en 5
minutos.
Esto an debe ser considerado negativa.
Interpretacin de Resultados
1. Positivo: Los pozos mostrando color azul
indican la presencia de los resultados de hCG,
o positivo.
2. Negativo: Los pozos que no muestran el color
de 2 a 5 minutos (paso 7) indican que no
detectan cantidad de hCG en la muestra.
Un ligero tinte azulado, mucho ms ligero que
la referencia positiva as, puede resultar de
lavado insuficiente y debe ser considerado
negativo. Si la muestra del paciente muestra un
resultado negativo, pero se sospecha de
embarazo, la prueba debe repetirse con una
nueva muestra obtenida 2-3 das ms tarde.
B. Procedimiento de lectura cuantitativa
Para ejecutar una curva estndar, prueba de hCG
normas incluidas en el kit el mismo mtodo que el de
sus muestras.
Siguiendo el paso 6 en A. PRUEBAS DE ELISA
CUALITATIVA, si un lector de microtitulacin est
disponible para su lectura cuantitativa a 450 nm,
proceder de inmediato a los dos minutos de
incubacin.
1. Rpidamente agregar la solucin de 50ul
vaciar el recipiente (HCL 1N, no incluido) en
cada pozo incluyendo su muestra de la
prueba, todas las normas de hCG y de
referencia negativo.
2. Registrar las densidades pticas (DO) a una
longitud de onda de 450nm de cada pocillo
utilizando un lector de microtiter.
3. Calcular la concentracin de hCG de la curva
estndar.
Los hombres sanos y mujeres sanas no embarazadas
no tienen hCG detectan probado por BETA ACUCOLOR. El nivel de hCG de 25mlU/ml se puede llegar
en la primera falta del perodo menstrual. Los niveles
de GCH pico de aproximadamente 8 semanas
despus del ltimo perodo menstrual y el embarazo.
Tras el parto, los niveles de hCG decrecen
rpidamente y regresan a la normalidad en cuestin de
das despus del parto.
Sensibilidad y Especificidad
La sensibilidad de la BETA ACU-COLOR se ha fijado
en 12.5mlU/ml. La Norma 12.5mlU/ml hCG (calibrado
a la 2da norma internacional) fue diseado como el
punto de corte para la prueba ya que las
concentraciones de hCG en este rango de general,
logra la concepcin semana despus de la 2da.
Especificidad de la BETA ACU-COLOR se determin a
partir de estudios de reaccin cruzada con cantidades
conocidas de hormona luteinizante (hLH). Hormona
folculo estimulante (hFSH) y hormona estimulante del
tiroides (TSH) 500mlU/ml hLH, hFSH 1000mlU/ml y
hTSH 1000mlU/ml todas dan resultados negativos a la
prueba.
Lmites del procedimiento
1. Una serie de causas distintas del embarazo,
incluyendo enfermedad trofoblstica y ciertos
neoplasmas no trofoblsticos causan niveles
elevados de hCG. Estos resultados del
diagnstico se deben tomar en consideracin
en su caso a la evidencia clnica.
2. Cuando una muestra de orina es muy diluida
(es decir, la gravedad especfica baja), no
puede contener un nivel representativo de la
hCG. Si el embarazo se sigue sospechando
una orina de la maana debe ser obtenida
3. La exposicin directa de la luz solar
prolongada puede causar la activacin espuria
del cromgeno. Por esta razn, el temor no
debe realizarse ni leer con luz solar brillante.
4. Al igual que con todas las pruebas de
diagnstico, un diagnstico clnico definitivo no
debe basarse en los resultados de un ensayo,
sino que slo debe ser realizada por el mdico
despus de todo, los hallazgos clnicos y de
laboratorio han sido evaluadas.
Caractersticas del Procedimiento
Precisin
BETA ACU-color muestra el 99,4% de acuerdo con los
resultados obtenidos por el uso de otras pruebas
inmunolgicas en el embarazo calificado, las
condiciones reales de clnica.
Las muestras de orina de los cinco conocidos no
embarazadas que se enriquecieron con la hCG para la
concentracin de 0, 40,400 mlU / ml. Un total de 75 de
estas muestras fueron etiquetadas ciegos y probados
con BETA ACU-COLOR.
Prueba de interferencia
La sustancia se agregaron los siguientes en
12.5mlU/ml hCG orina negativas de pinchos. Ninguna
de las sustancias en una concentracin a prueba
interfiri en el ensayo.
La Oficina de Biologa ha pedido a todos los
fabricantes de productos de prueba de embarazo para
incluir la siguiente declaracin, para su informacin.
Falsos positivos y falsos embarazos biolgicos e
inmunolgicos han sido reportados en las pruebas o
muestras de las personas que toman una variedad de
drogas. Las reacciones falsas pueden estar
relacionados con el donante y las drogas, la medida de
lo posible, lo mejor es poner a prueba las muestras de
los donantes que no estn tomando medicamentos.
