1 Caractersticas generales
1.
Los enzimas son p
protenas q
que catalizan reacciones
qumicas en los seres vivos.
Los enzimas son catalizadores, es decir, sustancias
que, sin consumirse en una reaccin, aumentan
notablemente su velocidad.
No hacen factibles las reacciones imposibles, sino
que solamente aceleran las que espontneamente
podran producirse.
Ello hace posible que en condiciones fisiolgicas
t
tengan
l
lugar
reacciones
i
que sin
i
catalizador
t li d
requeriran condiciones extremas de presin,
temperatura o pH.
2. Ca
Caractersticas
acte st cas de la
a enzima
e
a
Protenas
altamente
especializadas
p
como
catalizadores.
Macromolculas.
Son muy especficas respecto a sus sustratos.
sustratos
Funcionan en solucin acuosa en condiciones
limitadas de temperatura y pH.
Su actividad depende de la integridad de su
conformacin.
Hay enzimas que requieren de un grupo qumico
adicional llamado cofactor o coenzima.
Cofactores
Co
acto es y Coe
Coenzimas
as
Son sustancias no proteicas, requeridos a veces por
una enzima
i
para su funcin,
f
i puesto
t que colaboran
l b
en la catlisis.
Los cofactores pueden ser iones inorgnicos como
ell Fe++,
F ++ Mg++,
M ++ Mn++,
M ++ Zn++
Z ++ etc.
t Casi
C i un tercio
t
i de
d los
l
enzimas conocidas requieren cofactores.
Cuando se trata de una molcula orgnica se llama
coenzima Muchos de estas coenzimas se sintetizan
coenzima.
a partir de vitaminas.
Cuando los cofactores y las coenzimas se
encuentran unidos covalentemente a la enzima,
enzima se
llaman grupos prostticos.
cofactor
PROTENA
coenzima
apoenzima o
apoprotena
grupo prosttico
HOLOENZIMA
O
PROTEINA CONJUGADA
Molcula de hemoglobina
g
(protena q
(p
que transporta
p
oxgeno) y su coenzima (el grupo hemo).
3. Nomenclatura
3
o e c atu a de las
as enzimas
e
as
Hay varias formas mediante las cuales se asigna un
nombre a un enzima:
nombres particulares
Estos eran asignados por su descubridor. Al ir
aumentando
t d ell nmero
d enzimas
de
i
conocidos,
id
se
hizo necesaria una nomenclatura sistemtica que
informara sobre la accin especfica
p
de cada enzima
y los sustratos sobre los que actuaba.
nombre sistemtico
El nombre sistemtico de un enzima consta
actualmente de 3 partes:
1.- el sustrato preferente
2.- el tipo de reaccin realizado
3.- terminacin "asa"
Un ejemplo
U
j
l
sera
l
la
glucosa
l
f f
fosfato
isomerasa que cataliza la isomerizacin de la
glucosa-6-fosfato en fructosa-6-fosfato.
cdigo
g
de la comisin enzimtica ((enzyme
y
comission)
El nombre de cada enzima puede ser identificado
por un cdigo
di
numrico,
i
encabezado
b
d por las
l
l t
letras
EC (enzyme commission), seguidas de cuatro
nmeros separados por puntos. El primer nmero
indica a cual de las seis clases pertenece la enzima,
el segundo se refiere a distintas subclases dentro de
cada grupo,
grupo el tercero y el cuarto se refieren a los
grupos qumicos especficos que intervienen en la
reaccin.
4. Clasificacin de las enzimas
CLASIFICACION INTERNACIONAL DE LAS ENZIMAS
OXIDORREDUCTASAS
TRANSFERASAS
HIDROLASAS
LIASAS
ISOMERASAS
LIGASAS
TRANSFERENCIA DE ELECTRONES
( iones hidruro o tomos de hidrogeno
TRANSFERENCIA DE GRUPOS
REACCIONES DE HIDRLISIS
ADICION DE GRUPOS A DOBLES ENLACES
FORMACION DE DOBLES ENLACES
TRANSFERENCIA DE GRUPOS DENTRO DE UNA MOLECULA
FORMACION DE ENLACES ( C-C // C-S // C-O// C-N)
MEDIANTE REACCIONES ACOPLADAS DE ATP
5. S
5
Sitio
t o Activo
ct o
La reaccin catalizada enzimticamente tiene lugar
en una zona de
d la
l enzima
i
d
denominada
i d sitio
iti activo
ti
y
la molcula que es fijada en el sitio activo y sobre la
cual acta la enzima se denomina sustrato
El sitio activo comprende
(1) un sitio de unin formado por los aminocidos
que estn en contacto directo con el sustrato
q
(2) un sitio cataltico, formado por los aminocidos
directamente implicados en el mecanismo de la
reaccin
6. Mecanismo
6
eca s o de acc
accin
e
enzimtica
t ca
Para q
que una reaccin q
qumica tenga
g lugar,
g , las
molculas de los reactantes deben chocar con una
energa y una orientacin adecuada.
La actuacin de la enzima permite:
que los reactantes (sustratos) se unan a su sitio
activo con una orientacin ptima para que la
reaccin se produzca y
propiedades
p
qumicas del sustrato
q
modifica las p
unido a su sitio activo, debilitando los enlaces
existentes y facilitando la formacin de otros
ue os
nuevos.
Hay dos modelos sobre la forma en que el sustrato
se une al sitio activo de la enzima:
el modelo llave-cerradura
Este supone
p
que la estructura del sustrato y la del
q
sitio activo son complementarias, de la misma forma
que una llave encaja en una cerradura. Este modelo
es vlido en muchos casos,
casos pero no es siempre
correcto.
el modelo del ajuste inducido
En algunos casos, el sitio activo adopta la
conformacin idnea slo en presencia del sustrato.
La unin del sustrato al sitio activo de la enzima
desencadena un cambio conformacional que da
lugar a la formacin del producto.
7. Co
Comportamiento
po ta e to cintico
c t co de las
as e
enzimas
as
En las reacciones espontneas,
p
, los p
productos
finales tienen menos energa libre de Gibbs (G) que
los reactantes. Por tanto, en las reacciones
espontneas se libera energa de Gibbs (G<0).
(G<0)
Sin embargo, el comienzo de la reaccin requiere un
aporte inicial de energa. Esta energa inicial que hay
que suministrar a los reactantes para que la
reaccin transcurra se llama energa de activacin
(Ea) Cuanto menor es la Ea ms fcilmente
(Ea).
transcurre la reaccin.
La
accin
de
los
catalizadores
consiste,,
precisamente, en disminuir la Ea. Los enzimas son
catalizadores especialmente eficaces, ya que
disminuyen la Ea an ms que los catalizadores
inorgnicos.
Por ejemplo, la descomposicin del agua oxigenada
(H2O2) para dar H2O y O2 puede ocurrir sin
catalizador, con un catalizador inorgnico (platino),
o con un enzima especfica (catalasa).
(catalasa) Las
respectivas Ea para cada proceso son 18, 12 y 6
Kcal/mol.
LOS GRUPOS
CATLITICOS DE
UNA ENZIMA
( CADENAS LATERALES DE LOS
AMINOACIDOS, IONES, COENZIMAS)
Pueden interactuar de manera
transitoria con un sustrato activndolo
Disminuyen la energa de activacin
de una reaccin al proporcionar una
ruta alternativa de menor energa
g
La energa requerida para disminuir la
energa
de
activacin
proviene
generalmente de las interacciones dbiles
no covalentes entre sustrato y enzima
la
formacin
del
[ES] viene
acompaada de una pequea liberacin de
energa libre
ENERGA DE FIJACIN
Es la principal fuente de energa libre para
disminuir la energa de activacin de las
reacciones
Ejemplo:
8. Actividad enzimtica
La actividad de una enzima se determina midiendo la
cantidad producto formado (o de sustrato
consumido) por unidad de tiempo.
Una molcula de enzima no tiene por qu actuar
siempre a la misma velocidad. Su actividad puede
estar modulada por:
a) Concentracin de enzima
b) Concentracin sustrato
c)) Temperatura
T
t
d) pH
e) Inhibidores
a) Co
Concentracin
ce t ac de e
enzima
a
La
actividad
enzimtica
es
directamente
proporcional a la concentracin de la enzima,
cuando se mantienen los otros factores ambientales
constantes (temperatura y pH).
pH)
b) Concentracin de sustrato
Uno de los factores clave q
que afectan a la velocidad
de una reaccin catalizada por una enzima es la
cantidad de sustrato presente, [S].
La forma hiperblica
p
de esta curva se p
puede
expresar algebraicamente mediante la ecuacin de
Michaelis- Menten:
V
* [S]
V = max
o Km + [S]
donde
Vmax = Velocidad mxima
Vo = Velocidad inicial
[S] = Concentracin del sustrato
Km = Constante de Michaelis-Menten
Esta ecuacin se p
puede transformar a una forma
ms til de representar los datos experimentales, la
ecuacin denominada ecuacin de Lineweaver-Burk
1
Km
1
1
=
*
+
[S] Vmax
V
V
o
max
Para las enzimas que obedecen la relacin de
Michaelis-Menten la grfica de 1/Vo frente a 1/[S] da
una lnea recta
Km UN PARMETRO CINTICO IMPORTANTE
Para p
poder comparar
p
una enzima con otra en cuanto
a su poder cataltico debe estandarizarse al estado
estacionario
En el estado estacionario la velocidad de formacin
y desaparicin del complejo ES se igualan.
S + E [ES] E+P
k1
K2
k-1
Se establece que Km = (k-1+k2)/k1
Km es una relacin de constantes de velocidad para
p
una determinada reaccin.
Km es la concentracin de sustrato para la cual la
velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad
mxima. En efecto, si Km = [S], la ecuacin de
Michaelis-Menten se reduce a: v = Vmax/2.
El valor de Km da idea de la afinidad de la enzima
por el sustrato: A menor Km, mayor afinidad de la
enzima por el sustrato, y a mayor Km, menor
afinidad.
c) Temperatura
En las reacciones catalizadas p
por enzimas los
aumentos de temperatura aceleran las reacciones.
Sin embargo, al ser protenas, a partir de cierta
p
, se empiezan
p
a desnaturalizar p
por el
temperatura,
calor. La temperatura a la cual la actividad cataltica
es mxima se llama temperatura ptima.
d) pH
Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carboxilos -COOH;
amino -NH2; tiol -SH, etc.) en las cadenas laterales de sus
aminocidos. Segn el pH del medio, estos grupos pueden tener
carga elctrica positiva, negativa o neutra. Como la conformacin de
las protenas depende, en parte, de sus cargas elctricas, habr un pH
en el cual la conformacin ser la ms adecuada para la actividad
cataltica. Este es el llamado pH ptimo.
d) Inhibidores
1.- Inhibidores Irreversibles
Unin covalente entre un compuesto y la enzima.
Este se une de manera irreversible al sitio activo de
la enzima.
Casi todos los inhibidores son sustancias txicas
naturales
t
l o sintticas,
i tti
t l como:
tales
Cianuro
Sarn
Penicilina
2.- Inhibidores reversibles
Unin
U i no covalente
l t entre
t un compuesto
t y la
l enzima.
i
El compuesto inhibidor puede unirse al sitio activo
de la enzima o en otro sitio dejando libre el sitio
activo.
Este tipo de inhibidores pueden ser:
Competitivo
No competitivo
INHIBICION REVERSIBLE
Competitiva
No competitiva
El inhibidor compite con el El inhibidor se fija a un sitio distinto
sustrato por el sitio activo de la
al sitio activo
enzima
Impide la formacin del complejo No se bloquea la formacin del
enzima- sustrato
complejo enzima-sustrato
Competitiva
No competitiva
El inhibidor se parece al sustrato y El inhibidor no se parece al
puede formar el complejo
sustrato
enzima-inhibidor
Impide la formacin del complejo No se bloquea la formacin del
enzima- sustrato
complejo enzima-sustrato
La enzima no puede unirse al
sustrato
La enzima se inactiva al unirse al
inhibidor estando o no unido el
sustrato
Puede anularse el efecto del
inhibidor aumentando la
concentracin de enzima
No se puede anular el efecto con
el aumento del sustrato
Si aumenta la concentracin de
sustrato, se minimiza la
probabilidad que se forme el
complejo enzima-inhibidor
El inhibidor disminuye la
concentracin de enzima
La velocidad mxima de la
reaccin es norma
Por lo tanto disminuye la
velocidad mxima
Aumenta Km
No tiene efecto sobre Km
1/V
1/V
inhibidor
inhibidor
Sin inhibidor
1/ Vmax
Sin inhibidor
1/ Vmax
-1/ Km
1/S
-1/ Km
1/S
9. Regulacin de la actividad enzimtica
Dentro de las clulas se llevan a cabo infinidad de
procesos metablicos, todos ellos relacionados
entre s, de manera que deben estar controlados en
forma precisa.
precisa
Para lograr esta coordinacin metablica es preciso
disponer de mecanismos de control o regulacin
adecuados (enzimas reguladoras).
Existen
distintos
tipos
de
mecanismos
regulatorios de la actividad enzimtica:
a) Control a nivel de sustrato
b) Inhibicin por retroalimentacin
c)) Moduladores alostricos
d) Regulacin por modificacin covalente
e) Regulacin gentica
a) Control a nivel de sustrato
Parte de la regulacin
g
enzimtica se p
produce de una
forma sencilla, mediante la interaccin directa de los
sustratos y los productos de cada reaccin
catalizada enzimticamente con la propia enzima.
enzima
Sin embargo, el control a nivel de sustrato no es
suficiente para la regulacin de muchas rutas
metablicas.
b) Inhibicin por retroalimentacin
Las enzimas suelen estar dispuestas
p
en lneas de
ensamblaje para llevar a cabo los pasos
secuenciales necesarios en una ruta metablica.
Generalmente en estos casos el producto de la
ltima reaccin de la va metablica, acta
inhibiendo a las enzimas que intervienen en los
primeros pasos, retroalimentacin negativa.
El producto final es un
inhibidor de la enzima
reguladora,
la
cual
cataliza la primera etapa
comprometida.
c) Moduladores alostricos
Este tipo
p de regulacin
g
ocurre solo en las enzimas
alostricas, que son enzimas que por lo general
tienen estructura cuaternaria y adems del sitio
activo p
poseen otros capaces
p
de reconocer efectores
o moduladores, que se denomina sitios alostricos.
Las enzimas alostricas son protenas con mltiples
subunidades, con mltiples lugares activos (sitios
activos y sitios alostricos))
Presentan cooperatividad
p
de unin del sustrato
(homoaloterismo) y una regulacin de su actividad
por otras molculas efectoras (heteroalosterismo).
La principal ventaja del control alostrico se
encuentra en los efectores heteroalostricos, que
pueden ser inhibidores o activadores.
activadores
Los moduladores alostricos se fijan
j
de forma no
covalente a las enzimas que regulan.
d) Por modificacin covalente
Algunas
g
enzimas estn totalmente inactivas hasta
que la altera una modificacin covalente.
La enzima se une covalentemente a algn grupo
qumico y de esta forma se activa o se inactiva la
enzima.
El grupo que ms frecuentemente interviene en este
tipo
p
de regulacin
g
es el g
grupo
p
fosfato ((P))
(fosforilacin y desfosforilacin )
Otro tipo
p de activacin enzimtica covalente es la
ruptura proteoltica.
Pertenecen a este grupo la tripsina,
tripsina quimotripsina,
quimotripsina la
elastasa y la carboxipeptidasa.
Todas se sintetizan en el pncreas en su forma
inactiva, molculas ligeramente ms grandes,
cataliticamente inactivas,, denominadas zimgenos.
g
Los zimgenos deben romperse proteolticamente
en el intestino para producir las enzimas activas.
E
Estas
t enzimas
i
se degradan
d
d tras
t
h b cumplido
haber
lid sus
fines, por lo que no ponen en peligro el tejido
intestinal.
e) Regulacin gentica
Involucra el control a nivel del ADN.
El ADN es la molcula que almacena la informacin
para la sntesis de protenas de acuerdo al siguiente
flujo de informacin:
De manera que si podemos impedir el pasaje de ADN
a ARNm
ARN (transcripcin)
(t
i i ) impedimos
i
di
l sntesis
la
t i de
d la
l
enzima y por ende no se catalizar la reaccin en la
que dicha enzima interviene.
