Banco de Sangre

Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-01
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 16 ENERO de 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 1 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de identificacin de los
Procesos necesarios para el sistema de gestin de la calidad

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:
Guillermo Escamilla
Guerrero

Nombre:
M. Leticia Medina Macias

Nombre:
Dinora V. Aguilar
Escobar

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:
16 enero 2012

Fecha:
16 enero 2012

16 enero 2012

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
Pgina 1 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 2 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Ninguno

26/08/03

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 3 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

DESCRIPCION DEL PROCESO

Una vez que al donador se le toma la muestra (Ver procedimiento CAL-43) se
procede a caracterizarlo inmunohematolgicamente abarcando los siguientes
estudios:
1. Grupo sanguneo (Sistema ABO)
2. Subgrupo sanguneo (Sistema A)
3. Grupo sanguneo (Sistema Rho)
4. Determinacin del Du
5. Fenotipo Rho (EeCc)
6. Rastreo de Anticuerpos irregulares fuera de
Sistema ABO (semipanel o panel completo)
7. Hemolisinas
8. Chequeo de grupo sanguneo (Sistema ABO &
Rho)
Los mtodos para realizar estos ensayos (a excepcin de las Hemolisinas)
son:
Mtodo semiautomtico
Tubo
Gel
Mtodo automtico
Gel
Las pruebas de aglutinacin establecen:
HEMOLISIS: Indica una reaccin positiva para la
unin Antgeno anticuerpo.
AGLUTINACION: la presencia del par Antgeno y/o
Anticuerpo complementarios relevante.
NO AGLUTINACIN la ausencia de cualquiera de
ellos.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 4 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

INTERPRETACION Y PONDERACIN DE LAS AGLUTINACIONES

DESCRIPCION

GRADO

PONDERACION

Hemolsis total

Ht

Botn completo, sobrenadante claro

4+

12

Botn grande con algunos agregados, fondo claro

3+

10

Botn fragmentado en varios grumos grandes, fondo

2+

1+

+/-

negativo

turbio
Botn fragmentados en numerosos grumos regulares,
fondo turbio
Botn fragmentado mltiples grumos pequeos, fondo
muy turbio
Aglutinacin no visible

1.- DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

La prueba consiste de dos etapas:
Prueba directa o celular: eritrocitos estudiados
desafiados contra antisueros comerciales de
especificidad conocida
Prueba inversa o srica: suero estudiado desafiado
contra eritrocitos de fenotipo conocidos

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 5 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

PRUEBA DIRECTA
en tubo

Se realiza la centrifugacin del tubo de muestra (etiquetado con el nombre y # del donador) para separar el Paquete
eritrocitario y el plasma o suero. Una vez que se tiene la separacin del concentrado eritrocitario y el plasma, este ltimo se
transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador).

Se identifica otro tubo y se prepara en l la suspensin de eritrocitos del donador tomando 2.5 a 3.0 ml aproximadamente de
solucin que contiene solucin salina y solucin de pHix + dos gotas de concentrado eritrocitario del donador
(concentracin de eritrocitos aproximada: entre el 2-5%)
Se realiza la prueba directa y la prueba inversa

Para la prueba directa se requiere lo siguiente:

Se identifican 4 tubos

TUBO 1
Agregar una gota
de reactivo Anti-A
(suero de color
azul)

TUBO 2
Agregar una gota de
reactivo Anti-B
(suero de color
amarillo)

TUBO 3
Agregar una gota de
reactivo Anti-AB
(suero incoloro)

TUBO T
Agregar 2 gotas del
plasma o suero del
donador

Adicionar una gota de la suspensin de eritrocitos del donador

Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga a 3500RPM

Se realiza un ligera agitacin para resuspender los eritrocitos y se hace la lectura macroscpica para observar si existe o no
aglutinacin

Registrar resultados en el formato F-A-14-26

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 6 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

PRUEBA INVERSA
en tubo

Marcar 4 tubos con las letras A1, A2, B y O

Clulas de fenotipo conocido preparadas a una concentracin del 2-5%

TUBO A1
Agregar una gota de
celulas A1+ 2gotas del
plasma del donador

TUBO A2
Agregar una gota de
celulas A2 + 2gotas del
plasma del donador

TUBO B
Agregar una gota de
celulas B + 2gotas del
plasma del donador

TUBO O
Agregar una gota de
celulas O + 2gotas del
plasma del donador

Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga.

Se realiza un ligera agitacin para desprender el botn de celulas

Se realiza la lectura macroscpica para aglutinacin

Registrar resultados en el formato F-A-14-26

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 7 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

Formato F-A-14-26 que es llenado por el personal de rea de donadores:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 8 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

Tabla 1
Prueba Directa
GRUPO SANGUINEO

ANTIGENOS PRESENTES EN LOS

ERITROCITOS

ANTICUERPOS PRESENTES EN
SUERO O PLASMA

Anti - B

B
AB
O

GRUPO
A
B
AB
O

CAL-02-B

Anti-A
POST
NEGT
POST
NEGT

B
AyB
ni A ni B
INTERPRETACION
Prueba DIRECTA
Tubo con Antisuero
Anti-B
Anti-AB
Testigo
A1
NEGT
POST
NEGT
NEGT
POST
POST
POST
NEGT
POST
POST
NEGT
NEGT
NEGT
NEGT
POST
NEGT

Anti - A
----Anti A & Anti - B
Prueba INVERSA
Tubo con cluas:
A2
B
NEGAT
POST
POST
NEGT
NEGT
NEGT
POST
POST

O
NEGAT
NEGT
NEGT
NEGT

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 9 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

De forma Manual:
GRUPO SANGUIENO SABO
EN GEL
Se realiza la centrifugacin del tubo de muestra (etiquetado con el nombre y # del donador) para separar el Paquete
eritrocitario y el plasma o suero. Una vez que se tiene la separacin del concentrado eritrocitario y el plasma, este ltimo se
transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador). Y se puede introducir al equipo WADiana o realizarlo
de forma manual.

Se identifica otro tubo y se prepara en l la suspensin de eritrocitos del donador tomando 1.0 ml de solucin de DianaSol 1
con 25 l de concentrado eritrocitario del donador (concentracin de eritrocitos aproximada: entre el 2-3%)

Se realiza la prueba directa y la prueba inversa

Empleo de tira del DianaGel Donors/Donantes

ver imagen

INVERSA
MICROTUBOS
7y8
colocar 50 l de eritrocitos
reactivos (Serigrup Diana A1 y B)
con 50 l del suero o plasma del
donador

DIRECTA
MICROTUBOS
1, 2, 3, 4, 5, y 6
colocar 25 l de solucin de
eritrocitos del donante

Centrifugar en DianaFuge
(ver imagen)

Leer
La lectura puede ser visual o en el DianaScanner (equipo WADiana)
(ver imagen)

Interpretacin
(Acorde a la imagen presentada)

Registrar resultados en el formato F-A-14-26

o mandar impresin

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 10 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

A1

# donador:
Fecha:
Iniciales y clave de quien realiz:

[Link]

CAL-02-B

[Link]

AT

INVERSA

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 11 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

2. SUBGRUPOS SANGUINEOS (SISTEMA ABO)

Para realizar la prueba de Lectina A1 y H se requiere lo siguiente:

Marcar 1 tubo con la letra A1 (Anti-A1) y otro con la letra H (Anti- H)

TUBO A1
Agregar 1 gota del reactivo Anti-A1 Lectina

TUBO H
Agregar 1 gota del reactivo Anti-H

Agregar una gota de la suspensin de eritrocitos del donador

Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga.

Se realiza la lectura macroscpica para aglutinacin y se interpretan los resultados

Registrar resultados en el formato F-A-14-26

abla # 2 Subgrupo SABO

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 12 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

3.- DETERMINACION DEL FACTOR Rh

GRUPO SANGUIENO Rho

en tubo
Se realiza la centrifugacin del tubo de muestra (etiquetado con el nombre y # del donador) para separar el Paquete
eritrocitario y el plasma o suero. Una vez que se tiene la separacin del concentrado eritrocitario y el plasma, este ltimo se
transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador).
Se identifica otro tubo y se prepara en l la suspensin de eritrocitos del donador tomando 2.5 a 3.0 ml de solucin salina con
amortiguador de Phix con dos gotas de concentrado eritrocitario del donador
(concentracin de eritrocitos aproximada: entre el 2-5%)

Marcar un tubo con la letra Rh (anti D) y otro con la letra C (control)

TUBO D
agregar una gota del
antisuero comercial
Anti - D

TUBO C
Agregar una gota del reactivo
Control Rh
ALB 22%

Agregar una gota de suspensin al 2-5% de eritrocitos del donador

Centrifugar 45 segundos/3500RPM

Leer resuspendiendo con movimiento suave el botn. Interpretacin acorde a la aglutinacin presente

NO AGLUTINACION
Rh neg (D-)

AGLUTINACION
Rh post (D+)

Registrar resultados en el formato F-A-14-26

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 13 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

4. Determinacin del Du

SI la prueba Anti-D es NEGATIVA

Los tubos marcados con D y C (provenientes de la Prueba RH) se incuban 15-30 minutos a 37 C

Centrifugar e Interpretar
Positiva
Negativa

Se lavan las celulas 3 veces con salina fisiologica.

Se decanta la salina por completo en la ltima lavada

Agregar una gota de suero de Coombs poliespecfico (anti IgG-C3d)

Centrifugar e interpretar

Positiva

Negativa

El resultado
se considera
Rh+ ( D+)
El resultado
se considera
Rh- y Du+
( para fines de
transfusin se
considera :
donadores Rh+
receptores Rh-

Rh - (D-)

Registrar resultados en el formato F-A-14-26

La determinacin del grupo ABO en la tarjeta de Gel conlleva la

determinacin del anti D y el Du
Los resultados de Rh negativo en gel se confirman con el Anti D Totem
(anticuerpo policlonal dirigido contra las 6 fracciones del Antgeno D: I VI)

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 14 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

5. FENOTIPO Rho (EeCc) :

Marcar la tarjeta con el nmero del donador que le corresponde

Hacer un suspensin de los eritrocitos 2-3% (1ml de Diana-1 + 25 l de muestra)

Aadir 25 microlitros de la suspensin de eritrocitos 2-3% en los microtubos que indican C, c, E, e
(Ver imagen)
Centrifugar en DianaFuge y leer manual (Tabla 3A, 3B, 3C)

Registrar los resultados en el formato F-A-14-23

Interpretacin de fenotipo Rh

Registro del donador

Fecha:
Iniciales y clave de quien
realiz

Fenotipo: CcE

CAL-02-B

Registro del donador

Fecha:
Iniciales y clave de quien
realiz

Fenotipo: CEe

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 15 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

FORMATO F- A 14 23

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 16 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

Tabla 3B
Fenotipo Rh

REACCION SEROLOGICA ANTI

FENOTIPOS

GENOTIPO
D

WIENER

FISHER

DCe/dce

R1r

DCcee

DCe/DCe

R1R1

DCCee

DcE/dce

R2r

DccEe

DcE/DcE

R2R2

DccEE

DCe/DcE

R1R2

DCcEe

dce/dce

rr

ddccee

Dce/dce

R0r

Dccee

dCe/dce

r'r

ddccee

dCe/dCe

r'r'

ddccee

dcE/dce

r" r

ddccee

dce/dcE

r" r "

ddccEE

dCe/dcE

++

r' r"

ddCcEe

DCe/DCE

R1RZ

DCCEe

DcE/DCE

R2RZ

DCcEE

DCE/DCE

RZRZ

DCCEE

dCE/dCe

r y y'

ddCCEe

dCE/dcE

r y r"

ddCcEE

dCE/dCE

ryry

ddCCEE

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 17 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

Tabla 3C
Fenotipo Rh
ANTI-

CAL-02-B

FENOTIPO

GENOTIPO PROBABLE

WIENER

FISHER- RACE

WIENER

FISHER- RACE

Rh1rh

DCe

R1r

DC/dce

Rh1Rh1

DCe

R1R1

DC/dce

rhrh

ce

rr

Dce/dce

Rh1Rh2

DCcEe

R1R2

DC/DcE

Rh2rh

DcEe

R2r

DcE/dce

Rh2Rh2

DcE

R2R2

Dce/DcE

Rh rh

Dce

Ror

Dce/dce

rhrh

Cce

rr

dC/dce

rhrh

cEe

r"r

dce/dce

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 18 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

6.- DETERMINACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES

SISTEMA ABO (SEMIPANEL O PANEL COMPLETO)

FUERA

DEL

A todas las mujeres, personas politransfundidas y personas Rh negativos se les

realiza la siguiente prueba:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 19 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES FUERA DE SISTEMA ABO, EMPLEANDO PANEL TRIO

Se marcan los tubos con # del 1 al 3 con su respectivo duplicado y un tubo ms con una T (testigo) y con su duplicado

En cada tubo se coloca:

TUBO 1
1 gota de Gamma Trio #1 + 2
gotas de suero del donador

TUBO 2
1 gota de Gamma Trio #2 + 2
gota de suero del donador

TUBO 3
1 gota de Gamma Trio #3 + 2
gota de suero del donador

TUBO T
1 gota De suspensin de
eritrocitos del donador + 2
gota de suero del donador

TUBO 1
1 gota de Gamma Trio #1 + 2
gotas de suero del donador

TUBO 2
1 gota de Gamma Trio #2 + 2
gota de suero del donador

TUBO 3
1 gota de Gamma Trio #3 + 2
gota de suero del donador

TUBO T
1 gota De suspensin de
eritrocitos del donador + 2
gota de suero del donador

Se realiza una ligera agitacin a cada uno de los tubos y se introducen en la centrifuga durante 30 segundos.
Las rpm estan establecidas en la centriifuga.

Se realiza la lectura macroscpica en salina rapida y reportar si existe aglutinacin (Ver tabla 3A)

Registrar resultados en el formato F-A-14-23

Los tubos #1, 2, 3 y T se incuban 22 C durante 60 minutos

Los tubos # 1, 2, 3 y T se incuban a 37 C durante

30-60 minutos

Se realiza la lectura macroscpica en frio para observar

aglutinacin (Ver tabla 4) y se desechan las muestras

Centrifugar 30 seg. Antes de realizar la lectura macroscpica

para observar aglutinacin

NEGATIVO

Registrar
resultados como
Salina a 22 C
en el formato
F-A-14-23

POSITIVO

Registrar resultados como Salina a 37 C

en el formato F-A-14-23

Se lava con solucin salina con pHix y se centrifuga durante

1minuto se realiza este procedimiento 3 veces (al decantar
tener cuidado con el botn) en el ltimo lavado decantar la
salina por completo

Agregar 1 gota de Anti-IgG-C3d

Se realiza el panel
completo con las
diluciones de los
eritrocitos del IMSS
del Banco Central
de Sangre del
Centro Medico
Nacional Siglo XXI

Mezcle ligeramente, centrifuge y leer

Ademas de
POSITIVO
Registar
resultados como
Salina Coombs y/
o CAGH en el
formato
F-A-14-23

NEGATIVO

Se realiza la Prueba confirmatoria o CAGH (adicin de clulas

sensibilizadas con anti D)

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 20 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

Y la siguiente reaccin en tarjeta:

Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta en tcnica liss-gel se requiere lo siguiente:

Marcar la tarjeta DianaGel Coombs del # 1 al 3 y un T( testigo) Las clulas se preparan empleando 10 l de eritrocitos con 1
ml de solucin Diana 2

MICROTUBO 1
Anadir 50 l de
Gamma Trio 1

MICROTUBO 2
Anadir 50 l de
Gamma Trio 2

MICROTUBO 3
Anadir 50 l de
Gamma Trio 3

MICROTUBO T
Anadir 50 l de
eritrocitos del donador

MICROTUBO 1, 2, 3 y T
Anadir 25 l de plasma del donador

Incubar en Diana incubador durante 15min a 37 C

Centrifugar en Diana fuge y leer (Tabla 4)

Registrar resultados en el formato F-A-14-23

Si es positivo se debe realizar el panel completo (10 -11 clulas del panel siglo XXI o comercial)

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 21 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta con tcnica LISS-gel se requiere lo siguiente:

Marcar la tarjeta DianaGel Coombs del # 1 al 10 u 11 y un T( autotestigo)

10 l EN CADA UNO DE LOS MICROTUBOS DE CADA UNA DE LAS CELULAS Y DEL TESTIGO
Realizar una suspensin con 10 l de eritrocitos con 1 ml de DIANA 2 y adicionar a todos los microtubos 50microlitros

CEL 1

CEL 2

CEL 3

CEL 4

CEL 5

CEL 6

CEL 7

CEL 8

CEL 9

CEL
10

CEL
11

MICROTUBO 1 al AutoTestigo
Anadir 25 l de suero del donador

Incubar en Diana incubador durante 15min a 37 C

Centrifugar en Diana fuge y leer (Tabla 4)

Registrar resultados en el formato F-A-14-23

La interpretacin se realiza contra la CARTA PANEL

Tabla 4
Deteccin de Anticuerpos con reactivo Gamma TRIO 1, 2 y 3

Escanear imagen de carta panel del:

CARTA PANEL DEL TRIO
CARTA PANEL DE SIGLO XXI
CARTA PANEL DE PANEL DIANA
CAL-02-B

AT

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 22 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

7. HEMOLISINAS
A las personas con grupo O se les realiza la siguiente prueba:
Para realizar la prueba de Hemolisinas se requieren los tubos con clulas A1, A2, B y O de la prueba inversa y de el tubo
AutoTestigo de la prueba directa

Todos los tubos se incuban a 37 C/1hora y se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas
en la centriifuga.

Se realiza la lectura macroscpica para observar si existe o no hemolisis

La Prueba es negativa cuando el lquido sobrenadante es de color claro y positiva cuando es de color rojizo
Registrar resultados en el formato F-A-14-23

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 23 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

8.- Chequeo de Grupo sanguneo (Sistema ABO & Rho)

CONFIRMACION DEL GRUPO
SANGUIENO SABO EN GEL
Se realiza la centrifugacin del tubo PILOTO que se toma directamente de la bolsa de concentrado eritrocitario (etiquetado
con el nombre y # del donador) para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero. Una vez que se tiene la separacin
del concentrado eritrocitario y el plasma, este ltimo se transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador).

Se identifica otro tubo y se prepara en l la suspensin de eritrocitos del donador tomando 1.0 ml de solucin de DianaSol 1
con 25 l de concentrado eritrocitario del donador (concentracin de eritrocitos aproximada: entre el 2-3%)

Se realiza una prueba directa

Empleo de tira del DianaGel Confirm

(ver imagen)

MICROTUBOS
Ctrl
colocar 50 l
con 50 l del suero o plasma del
donador

DIRECTA
MICROTUBTOS
A, B, D, Ctrl
colocar 25 l de solucin de
eritrocitos del donante

Centrifugar en DianaFuge
(ver imagen)

Leer
La lectura puede ser visual
(ver imagen)

Interpretacin
(Acorde a la imagen presentada)

Registrar resultados en la libreta de RECHEQUEO DE GRUPOS CAL-25-A

y pegar la impresin

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 24 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

Registro del donador

Fecha:
Iniciales y clave de quien
realiz

Registro del donador

Fecha:
Iniciales y clave de quien
realiz

Libreta RECHEQUEO DE GRUPOS CAL-25-A

# REGISTRO

FECHA DE
REALIZACION

A B D

CAL-02-B

GRUPO
DETECTADO

IMAGEN

Ctrl

GPO REPORTADO

DISCREPANCIAS

REPORTA

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 25 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

El formato F-A-14-26 se muestra a continuacin:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 26 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos
El formato F-A-14-26 se llena de la siguiente manera:
Anti-A:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el nmero

que le corresponde del 1 al 4 (Segn lo indique la tabla 3A).

Anti-B:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el nmero

que le corresponde del 1 al 4 (Segn lo indique la tabla 3A).

Anti-AB:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el nmero

que le corresponde del 1 al 4 (Segn lo indique la tabla 3A).

Auto (Testigo):

Se anota + si es positivo o si es negativo y el nmero

que le corresponde del 1 al 4 (Segn lo indique la tabla 3A).

GR A1:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el nmero

que le corresponde del 1 al 4 (Segn lo indique la tabla 3A).

GR A2:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el nmero

que le corresponde del 1 al 4 (Segn lo indique la tabla 3A).

GR B:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el nmero

que le corresponde del 1 al 4 (Segn lo indique la tabla 3A).

GR O:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el nmero

que le corresponde del 1 al 4 (Segn lo indique la tabla 3A).

Lec. A1:

Esta prueba se realiza solo en personas de grupo

sanguneo A. Se anota + si es positivo o si es negativo y
el nmero que le corresponde del 1 al 4 (Segn lo indique
la tabla 3A).

Ant. H:

Esta prueba se realiza solo en personas de grupo

sanguneo A. Se anota + si es positivo o si es negativo y
el nmero que le corresponde del 1 al 4 (Segn lo indique
la tabla 3A).

Rh Anti-D:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el nmero

que le corresponde del 1 al 4 (Segn lo indique la tabla 3A).

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 27 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

T Auto:
Resultados
Grupo:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el nmero

que le corresponde del 1 al 4 (Segn lo indique la tabla 3A)
Escribir la letra del grupo donador.

El formato F-A-14-23 muestra a continuacin:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 28 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

El formato F-A-14-23 se llena de la siguiente manera:

Fecha:

Da, mes y ao en que se esta realizando el

anlisis de la muestra.

Registro:

Se escribe el anlisis que se esta realizando

en este caso es Anticuerpos irregulares.

# del donador:

# que le corresponde al donador segn la

bitcora de ingresos y egresos.

22 C:

Temperatura a la que se realizo la prueba.

37 C:

Temperatura a la que se realizo la prueba.

1:
.

# de microtubo que se esta analizando.

Se anota + si es positivo o si es negativo y
el nmero que le corresponde del 1 al 4
(Segn lo indique la tabla 3A)

2:
.

# de microtubo que se esta analizando.

Se anota + si es positivo o si es negativo y
el nmero que le corresponde del 1 al 4
(Segn lo indique la tabla 3A)

.
3:
.

# de microtubo que se esta analizando.

Se anota + si es positivo o si es negativo y
el nmero que le corresponde del 1 al 4
(Segn lo indique la tabla 3A)

T:

Conclusiones:

CAL-02-B

Testigo de la prueba.
Se anota + si es positivo o si es negativo y
el nmero que le corresponde del 1 al 4
(Segn lo indique la tabla 3A)
Escribir

las
observaciones
resultados obtenidos.

de

los

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-25
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 26 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 29 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Grupos sanguneos
y Anticuerpos

Soluciones requeridas
La solucin salina y pHix se compone de 1lt de solucin salina isotnica y 10 ml
de la solucin pHix.
La suspensin de eritrocitos se prepara con 2.5 3.0 ml aproximadamente de
solucin salina isotnica y pHix ms 2 gotas de eritrocitos del donador.
La solucin Diana-1 es una solucin salina para suspensiones de hemates para
tcnicas en gel, se utiliza para la determinacin de grupos sanguneos, pruebas
cruzadas y autocontrol , se debe conservar a 18-25 C.
La solucin Diana-2 Es una solucin de baja fuerza inica para suspensin de
hemates que facilita la unin de anticuerpo a los hemates por reducirse la
densidad de la nube de cationes alrededor de los mismos, favoreciendo la
sensibilizacin , se conserva a 2-8 C.

REGISTROS
El Formato F-A-14-26 se debe almacenar 1ao.
El Formato F-A-14-23 se debe almacenar 1ao.

LISTA DE DISTRIBUCION

Laboratorista:

____________________________________

Suplente:

____________________________________

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 30 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 31 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

.
CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Ninguno

26/08/03

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 32 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

DESCRIPCION DEL PROCESO

En este procedimiento de Serologa se pueden encontrar pruebas de Rutina,
Confirmatorias, seguimiento y para pacientes dentro del protocolo de Transplante de
medula sea.

Dentro de las pruebas que se realizan de rutina y/o

encuentran:

tamizaje en el laboratorio se

PRUEBAS DE TAMIZAJE
ENSAYO PARA DETECCION DE:

PRUEBA DE RUTINA

Anticuerpos contra Chagas

ELISA

Anticuerpos contra Chagas

HAI

Antgeno de Superficie de Hepatitis B

ELISA

Anticuerpos contra HCV

ELISA

Anticuerpos contra HIV 1+2

ELISA

Anticuerpos contra Sfilis

VDRL o RPR

Anticuerpos contra Brucela

Antgeno Rosa de bengala

En caso de salir reactivo la prueba de tamizaje, se procede con la realizacin de

la prueba confirmatoria o suplementaria:

PRUEBAS CONFIRMATORIAS
MARCADOR
CHAGAS
HBV
HCV
HIV
HIV
SIFILIS
SIFILIS
BRUCELA
CAL-02-B

CONFIRMATORIA
HAI 2 - MERCAPTO ETANOL
NEUTRALIZACIN
INMUNOBLOT RIBA HCV
WESTERN BLOT HIV-1
WESTERN BLOT HIV-2
TP-PA ELISA
TP-PA HAI
ANTIGENO BLANCO

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 33 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

PROPUESTA DE UN ALGORITMO DE
TRABAJO EN BANCO DE SANGRE
Reactivo

DESTINO
FINAL DEL
PRODUCTO

2a corrida
(tubo y piloto)

1er CORRIDA DE MUESTRAS

PARA MARCADORES
SEROLOGICOS

Negativo

Negativo

REPORTE A
DONADOR

Reactivo
PRUEBA
CONFIRMATORIA

Negativo

NEGATIVO
Reactivo
Solicitar 2a muestra
Se corre ELISA
(1er & 2a MUESTRA)

INDETERMINADO

POSITIVO

CAL-02-B

LIBERACION
Y
ASIGNACION

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 34 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

ANTICUERPOS CONTRA CHAGAS (ELISA)

La enfermedad de Chagas es una infeccin provocada por un parsito llamado
Tripanosoma cruzi. El diagnostico para esta enfermedad depende de la fase en que se
encuentra la cual puede ir de una fase aguda a una fase crnica. Para el diagnostico de
la fase crnica se utiliza entre otros mtodos el de ELISA y para la fase aguda el HAI
que sern los mtodos que se explicaran en este procedimiento.
El mtodo de Ensayo inmunoenzimtico (ELISA) para la determinacin de anticuerpos
contra el Tripanosoma cruzi se fundamenta en que la muestra del donador o paciente se
diluye en el soporte en el que se encuentra inmovilizado el antgeno, si contiene
anticuerpos especficos contra Tripanososma cruzi, se formara un complejo que se
mantiene unido al soporte. La fraccin que no se une se desecha por medio de lavados.
Se agrega anticuerpos anti inmunoglobulina humana conjugados con peroxidasa, si se
produjo la reaccin en la primera etapa del proceso, se unir el conjugado. Se realiza un
segundo lavado para eliminar en anticuerpo conjugado que no se une. Se agrega el
sustrato. Si existe unin con el conjugado aparece un color celeste y se detendr la
reaccin con cido sulfrico, con lo que el color celeste vira al amarillo. La concentracin
de anticuerpos especficos es directamente proporcional al color de la reaccin.
El reactivo que utilizaremos para realizar la prueba es el CHAGATEST ELISA:
Incluye una policubeta sensibilizada que contiene tiras
removibles con pocillos que contienen antgenos
citoplasmticos y de membrana de Tripanosoma cruzi
inmovilizados.
Diluyente de muestra
Buffer de lavado de placa
Controles positivo y negativo
Anti inmunoglobulina humana conjugado
Solucin de revelado
Solucin de paro

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 35 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

La muestra para esta prueba puede ser plasma o suero y de preferencia no se debe de
utilizarse muestras lipemicas, hemolizadas o cualquier otra causa en la que la muestra
se observe turbia.
Cuando el anlisis no se realiza el da de la extraccin de la muestra se puede conservar
la muestra durante 7 das a 2-10C o congelada a 20C, cuando la muestra se requiera
guardar y descongelar de nuevo.
Este procedimiento se lee a una longitud de onda primaria de 450nm (filtro de lectura),
una longitud de onda secundaria de 620-650nm (filtro de referencia).
Una vez que se inicia el anlisis no debe de existir interrupciones, es importante que la
muestra y los reactivos al ser colocados en los diferentes pocillos sean colocados en el
seno del pocillo y que al dispensar se enjuague la pipeta para asegurar la
homogenizacin. Los reactivos utilizados en esta prueba estn listos para usar y solo al
Buffer de lavado (5X) se le realiza una dilucin 1+ 4 (ejemplo para preparar 1l: 200ml de
buffer de lavado + 800ml de agua destilada). Ver el inserto al final del procedimiento).

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 36 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

DETECCION DE ANTICUERPOS CONTRA CHAGAS ELISA

Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s) si se requiere.
Se prende la Incubadora Abbott Commander y se pone a 37 C para cuando se necesite introducir la muestra.

Se escribe en la bitcora para anlisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras, bco, controles (los pocillos no se puden
marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificacin del anlisis (mapa de muestras).

Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el
anlisis ( la muestra puede ser plasma o suero)

A todos los pocillo previamente identificado en la bitacora CAL- 26-A se les adiciona una alicuota de 200microlitros de diluyente de muestra
incluyendo al blanco

A los pocillos que son de los pacientes, donador o repeticin de anlisis se les adiciona 10 microlitros del suero o plasma y se homogenizan
con la misma punta con que se esta colocando.

Al pocillo identificado como control internos positivo se le colocan 10 microlitros del tubo marcado como control interno positivo y al pocillo
marcado como control interno negativo se le adicionan 10 microlitros del tubo marcado como control interno negativo.

A los 2 pocillos identificados como control positivo se les colocan 10 microlitros a cada uno del reactivo marcado como control positivo y al los
3 pocillos marcados como control negativo se le adicionan 10 microlitros a cada uno del reactivo marcado como control negativo.

Se mezclan aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta y se tapa con una cubierta adhesiva toda la policubeta s (para evitar
evaporacin).

Se incuba la policubeta a 37 C durante 30 min. en la incubadora Abbott Commander, una vez que suena la alarma se saca la policubeta y se
realiza el lavado en el Equipo Sanofi Diagnostics Pasteur LP 35

Una vez terminado el lavado se decanta el remanente del lavado inviertiendo la policubeta y golpendola varias veces sobre papel
absorbente, posteriormente agregar a todos los pocillos 1 gota (60microlitros) de conjugado a todos incluyendo al blanco y mezclar aplicando
con suaves golpes en los laterales de la policubeta.

Se incuba la policubeta a 37 C durante 30 min. en la incubadora Abbott Commander, una vez que suena la alarma se saca la policubeta y se
realiza el lavado en el Equipo Sanofi Diagnostics Pasteur LP 35

Una vez terminado el lavado se decanta el remanente del lavado inviertiendo la policubeta y golpendola varias veces sobre papel
absorbente, posteriormente agregar a todos los pocillos 1 gota (50microlitros) de revelador A y una gota de revelador B y mezclar aplicando
con suaves golpes en los laterales de la policubeta durante 10 seg.

La policubeta se deja a Temperatura Ambiente durante 15-20MIN.

Se agrega 1 gota (50 microlitros) de solucin Stopper (para detener la reaccin) a todos incluyendo al blanco mezclar aplicando con suaves
golpes en los laterales de la policubeta durante 10 seg.

Leer a 450nm o bicromtica a 450/ 620-650nm (el color de la reaccin es estable durante 30min) o con el programa del equipo LP-400.

Se interpretan los resultados y se guarda el reporte impreso en el Folder de Serologia Chagas y el mes en que se esta realizando el anlisis y
tambien en la Bitcora de Serologia CAL-13-A.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 37 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

VALIDACIN DE LA CORRIDA
Si la corrida realizada no cumple con una o ambas de las siguientes condiciones se
repite la corrida:
Una lectura de al menos 2 de los 3 controles negativos que corregidas contra el
blanco de reactivos deben ser menores o iguales a 0,150 D.O.
Una lectura media de los controles positivos que corregida debe ser mayor o igual
a 0,600 D.O.

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Con instrumental ptico:
La presencia o ausencia de Ac. Anti-T. cruzi se determina relacionando la absorbancia
de la muestra respecto al valor Cut-off
Cut-off = CN + 0,200 D.O.
Donde CN: promedio de las lecturas del control negativo
Zona de indeterminacin: Cut-off +- 10%
Muestras no reactivas: se consideran aquellas con absorbancia menores que el
lmite inferior de la zona de indeterminacin.
Muestra reactiva: se consideran aquellas con absorbancia mayores que el lmite
superior de la zona de indeterminacin.
Muestras indeterminadas: se consideran aquellas con absorbancia que caen
dentro
de la zona de indeterminacin. Estas muestras deben ser ensayadas
nuevamente.
Interpretacin visual: Si se opta por esta interpretacin debe considerarse:
No reactiva: muestra que no presenta una coloracin mayor que los controles
negativos.
Reactiva: muestra que presenta una coloracin netamente amarilla.
Cuando se presentan colores tenues mayores que el control negativo se requiere de
interpretacin instrumental.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 38 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

ANTICUERPOS CONTRA CHAGAS (HAI)

La hemaglutinacin indirecta (HAI), tambin llamada hemaglutinacin reversa pasiva, se
basa en la propiedad que tienen los anticuerpos del Tripanosoma cruzi de producir
aglutinacin especfica en presencia de glbulos rojos sensibilizados con los
correspondientes antgenos.
En el suero existen anticuerpos inespecficos (heterfilos) que son capaces de aglutinar
glbulos rojos de distintas especies. Su presencia se investiga enfrentando el suero con
los GR
no sensibilizados. Los anticuerpos interferentes se eliminan mediante
tratamientos con 2-mercaptoetanol que se utiliza en la Prueba confirmatoria.
Para la realizacin de esta prueba solo se puede utilizar solo suero y se requiere que las
muestras no se encuentren de preferencia lipemicas o hemolizadas. Si la muestra se
resguardara antes de su anlisis se conservara a 2-10 C durante no ms de 72 Hrs.
contadas a partir de la extraccin o a 20 C para periodos mas largos de conservacin.
Los reactivos a utilizar en esta prueba no todos estn listos para usar y es muy
importante que sean preparados con las cantidades que indica el inserto CHAGATEST
HAI y el tiempo que se considera son estables. (Ver el inserto al final del
procedimiento).
Cuando se presenten resultados en todas las diluciones reactivas o todas con ausencia
de reactividad, puede ser indicio de autoaglutinacin por la presencia de Anticuerpos
heterofilos del antgeno HAI o deterioro de los reactivos.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 39 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s).
Se marca la placa con dividiones de 4 pocillos

Se escribe en la bitcora para anlisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras y controles, los datos que requiera la
bitacora para la correcta identificacin del anlisis.

Se marca la placa con el numero de toma de muestra que le corresponde

Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el
anlisis ( la muestra solo puede ser suero). A todos los pocillo se les adiciona una alicuota de 25microlitros de diluyente de suero (Buffer)
El diluyente del suero se prepara: 200 microlitros de solucin proteica por cada 10 ml del buffer

A los pocillos que son de los pacientes, donador o repeticin de anlisis se les adiciona 25microlitros del suero y se homogenizan con la
misma punta con que se esta colocando.

Se realizaran diluciones seriadas a partir del primer pocillo (, , 1/8, .. etc).

Se toma una alicuota de 25microlitros del primer pocillo del paciente y se pasa al segundo pocillo, se homogeniza y se toma una alicuota del
segundo pocillo de 25 microlitros y se pasa al tercer pocillo y lo mismo para el cuarto pocillo (en el cuarto pocillo se toma la alicuota de
25microlitros y se tira para que contenga el mismo volumen que los demas pocillos. Las diluciones seran de para el primer pocillo, para el
segundo pocillo y asi sucesivamente.

Al pocillo identificado como control positivo y control negativo se les realiza el mismo proceso de dilucion.

Una vez reconstituido y agitado el reactivo que contiene los GR no sensibilizados (control de heterofilia) se le adiciona 25microlitros a los
pocillo que contienen la dilucion y de todas las muestras y controles

Y a los pocillo que contienen las diluciones 1/8 y 1/16 muestras y controles se les adiciona 25microlitros de Antigeno HAI o GR sensibilizados

Se mezclan aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta y se tapa con una cubierta adhesiva toda la policubeta
(para evitar evaporacin).

Se deja en reposo durante 90min (en un lugar donde no exista vibracion)

Leer a partir de los 90min. Se puede aumentar la nitidez de lectura haciendolo sobre un espejo, ilumunando la placa desde arriba e
interponiendo un papel blanco y traslcido entre la policubeta y la fuente de luz.

Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitcora de Serologia CAL-13-A.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 40 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

No reactivo: presencia de un sedimento en forma de un botn o pequeo anillo de
bordes regulares.
Reactivo: formacin de una pelcula o manto que cubre el 50% o ms del fondo de los
pocillos. Si no se usan microdilutores la imagen del manto puede ser ms pequea.
Cuando se observan resultados positivos y adems se presenta manto en los pocillos
de control de heterofilia (diluciones y ), debe realizarse otra titulacin con los sueros
correspondientes pero previamente tratados con 2-ME o adsorbidos con GR no
sensibilizados (el tratamiento elimina la reaccin inespecfica).

ANTIGENO DE SUPERFICIE DE HEPATITIS B (ELISA)

Ensayo inmunoabsorbente enzimtico para la deteccin del antgeno de superficie de la
hepatitis B en suero o plasma humano.
La prueba de anticuerpos frente al HBs Ag ELISA es un ensayo inmunoabsorbente
enzimtico de tercera generacin para la deteccin del antgeno de superficie de la
hepatitis B (HBs Ag). Es una prueba de preseleccin de muestras y herramienta
diagnstica ante una posible infeccin por hepatitis B.
Se utilizan pocillos recubiertos con anticuerpos frente al HBs Ag como fase slida. El
tcnica ELISA es de que los antgenos o anticuerpos que se fijan a la fase slida
pueden detectarse mediante un antgeno o anticuerpo complementario marcado con una
enzima capaz de actuar como substrato cromegnico. Al aplicar el substrato, la
presencia de un antgeno o anticuerpo puede detectarse por el desarrollo de un producto
final coloreado, el ELISA es utilizado para enfermedades infecciosas.
El procedimiento se divide en dos etapas y se lleva a cabo en un micropocillo recubierto
con anticuerpos frente al HBs Ag. El control de omisin de muestra (COM) es una
caracterstica de la prueba basada en la medicin del cambio de densidad ptica ( DO) a
405nm que se produce en los pocillos al aadir la muestra. Cambio que se observa
tambin visualmente, cuando el diluyente de conjugado pasa de color azul a verde
azulado al aadir la muestra.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 41 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Etapas de la prueba:
En la primera
Se aade al pocillo de ensayo el conjugado de trabajo, constituido por anticuerpos
conjugados con HPR y diluidos en diluyente de conjugado de color azul. La microplaca
se incuba y si la muestra contiene HBs Ag, ste se fija al pocillo recubierto de
anticuerpos, y simultneamente al conjugado para formar complejos inmovilizados,
constituidos por anticuerpos- HBs Ag-conjugado. Las protenas sricas o plasmticas se
eliminan en el siguiente paso de lavado.

En la segunda etapa
Se aade al pocillo un sistema de deteccin de enzimas compuesto por OPD y perxido
de hidrgeno. Si el conjugado se ha fijado a la muestra, el OPD se oxida bivalentemente
la peroxidasa para formar un compuesto intermedio que, a su vez, se reduce, donante
de iones hidrgeno. La forma oxidada de OPD resultante es de color naranja. Por ltimo
se aade cido sulfrico para detener la reaccin. La intensidad de color depende de la
cantidad de conjugado fijado que haya en el pocillo. La intensidad de color sta en
funcin de la concentracin de HBs Ag que contenga la muestra, se mide con un lector
de microplaca a 490 0 492nm.

Precauciones
Los reactivos se puede almacenar entre 2-8 C.
No mezclar reactivos de lotes diferentes.
Dejar reactivos a temperatura ambiente 30 min. antes de su empleo.
Utilizar guantes y lavarse las manos al terminar.

La preparacin de los reactivos se observa en el inserto de la prueba anexada al final del

procedimiento.
Es importante que si utiliza plasma este recolectado con anticoagulante adecuado
(heparina no) y que contenga la cantidad que se requiere para la muestra. Se puede
utilizar suero. El suero o plasma se puede almacenar a 2 y 8 C durante un mximo de 7
das, en congelacin a 18 C o menos y no descongelar y congelar consecutivamente.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 42 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL SUBSTRATO EN BLANCO

Se considera que una placa es vlida con respecto al substrato en blanco si el valor de
la absorbancia del pocillo correspondiente al substrato en blanco (pocillo 1A) es igual o
mayor que 0,001 e igual o menor que 0,050.

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CALIBRADOR NEGATIVO

Se considera que una placa es vlida si al menos dos de los tres calibradores negativos
cumplen con los siguientes criterios.

Si uno de los tres valores control est fuera de estos lmites, deber
volver a calcularse la media de los controles negativos (NCalx) en base
a los dos valores de absorbancia aceptables de los calibradores.

Los valores que estn entre 0,006 y 0,012, ambos incluidos, son
vlidas y deben redondearse a 0,000 para efectuar el clculo.

Determine la media de los valores de absorbancia del calibrador

negativo (NCalx).

La placa no ser vlida y deber repetirse la prueba si dos o ms de los

tres valores control est fuera de los lmites.

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL POSITIVO

Los controles positivos son utilizados para verificar que los componentes del kit de la
prueba tienen capacidad para detectar una muestra reactiva, siempre que el
procedimiento de la prueba se haya seguido estrictamente.
Se considera que una placa es vlida nicamente cuando los valores de absorbancia
respectivos a 490nm 492nm son iguales o mayores que el valor de corte, y cumple
adems los siguientes criterios:
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 43 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

El valor de absorbancia del control positivo es igual o mayor que 0,225 e igual o
menor de 2,500.
El valor de absorbancia del control positivo no difieren entre s ms de 0,230.
Si uno cualquiera de estos valores controles est fuera de estos lmites, el ensayo
no se considera vlido y deber repetirse.
CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL NEGATIVO
El calibrador negativo y el control positivo deben cumplir los criterios de aceptacin de
control de calidad para que la microplaca se pueda considerar vlida.
CALCULO DE LOS VALORES DE CORTE (cut-off)
Valor de corte = NCalx + 0,030
Ejemplo:
Control negativo
1
0,001
2
0,000
3
0,002

Absorbancia

Absorbancia total=

0,003

NCalx = Absorbancia total/ 3 =

0,001

Valor de corte= 0,001 + 0,030 = 0,031

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 44 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C aproximadamente los reactivos, los controles y la muestra(s) que se van a
utilizar para esta prueba.

Se enciende la incubadora Abbott Commander a 37 C

Se escribe en la bitcora para anlisis manual CAL-26-A el orden en que se colocan el blanco, muestras y controles (los circulos no se
pueden marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificacin del anlisis.

Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el
anlisis ( la muestra que se utiliza puede ser suero o plasma )

La forma de colocarlos es asi:

Blanco

Colocar 3 pocillos
con Controles
negativos

Colocar 2 pocillos
con controles
positivos

Colocar las
muestras

Colocar el Control
interno negativo

Colocar el Control
interno positivo

Adicionar 50microlitros de Conjugado de Hepatitis B a todos los pocillos menos al blanco (7ml de diluyente de conjugado + 20microlitros de
concentrado de conjugado)
Adicionar a los pocillos con la siguiente secuencia y homogenizar con la punta que se adiciona.

Colocar 150microlitros de
cada muestra

Colocar 150microlitros en el
pocillo del Control interno
negativo

Colocar 150microlitros en el
pocillo del Control interno
positivo

Colocar en los 3 pocillos de

Controles negativos
150microlitros del control

Colocar en 2 pocillos de
Controles positivos
150microlitros del control

Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 90min.
Realizar los respectivos lavados (solucin de lavado con 950ml de agua destilada+ 50ml de solucin de lavado 20X) con el LP 35 SANOFI
Diagnostico Pasteur (Programa 1 con 6 ciclos) La forma de operar del equipo se describe al final del procedimiento. Quitar exceso de lavado
con golpes sobre un papel. Se prepara la Solucin Buffer-sustrato-OPD
(1 pastilla de OPD + 6ml de Buffer)

Adicionar 200microlitros deSolucin Buffer-sustrato-OPD a todos los pocillos (incluyendo al blanco). Tapar la placa con una cubierta de metal
si se tiene o en oscuridad e incubar a temperatura ambiente durante 30min. Al termino de la incubacin se adicionan a todos 50microlitros de
acido sulfurico 4N (para parar la reaccin)

Se realiza la lectura y se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitcora de Serologia CAL-13-A. y se guarda el registro impreso
en el folder del mes y con el nombre de la prueba.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 45 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Las muestras con valores de absorbancia menores que 0,014 deben volver a
ensayar una vez. Se considera que son no reactivas, aunque en la repeticin se
obtenga el mismo valor.
Las muestras con valores de absorbancia menor que el valor de corte e igual o
mayor de 0,014 debern considerarse no reactivas. No es necesario repetir la prueba.

Las muestras cuyo valor de absorbancia sea igual o mayor que el valor de corte
se consideran inicialmente reactivas y deben volver a ensayarse por duplicado antes de
proceder a su interpretacin definitiva.
Al volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, sta se considera
repetidamente reactiva al HBs Ag si una cualquiera de las determinaciones por
duplicado, o ambas, son reactivas, es decir, igual o mayor que el valor de corte.

Despus de volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, sta se considera

reactiva y el resultado es confirmado por neutralizacin con anti- HBs Humano, se
considera la muestra como positiva al HBs Ag.
Despus de volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, sta se considera
no reactiva al HBs Ag si ambas determinaciones duplicadas son no reactivas y menor
que el valor de corte e igual o mayor de 0,014.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 46 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

ANTICUERPOS CONTRA HCV (ELISA)

Este es un Inmunoensayo enzimtico cualitativo para la deteccin de Anticuerpos frente

al Virus de la Hepatitis C (anti- HCV) en suero o plasma humanos.
En el Inmunoensayo enzimtico (ELISA) se utiliza como fase slida pocillos con un
revestimiento de una combinacin de antgenos recombinantes configurados del virus de
la hepatitis C. El principio de la ELISA es de que los antgenos o anticuerpos que se
fijan a la fase slida pueden detectarse mediante un antgeno o anticuerpo
complementario marcado con una enzima capaz de actuar como substrato cromognico.
Al aplicar el substrato enzimtico, la presencia sobre el antgeno o anticuerpo puede
detectarse por el desarrollo de u producto final coloreado. El ELISA es utilizado para
enfermedades infecciosas.
El virus de la Hepatitis C es el agente causal de la mayora si no es de todas, las
hepatitis transmitidas por sangre y que no son del tipo A ni del tipo B.
Etapas de la prueba:
En la primera
Se incuba una muestra diluida en el pocillo de pruebas durante un periodo determinado
de tiempo. Si en la muestra existe anticuerpo reactivo frente a cualquiera de los tres
antgenos, se formarn complejos de antgeno-anticuerpo en la superficie del
micropocillo. Si no existe anti-HCV, no formarn dichos complejos. La etapa de lavado
elimina las protenas del suero o plasma que no se hayan unido.
En la segunda etapa
Se aade al micropocillo un anticuerpo monoclonal de rata conjugado con peroxidasa de
rbano. El conjugado se une especficamente a la porcin de la IgG humana de los
complejos antgeno-anticuerpo. Si estos complejos antgeno-anticuerpo no se hallan
presentes, el conjugado que no se ha unido se eliminar en la fase de lavado que ha de
realizarse a continuacin.
En la tercera etapa
Se aade al pocillo un sistema de deteccin de enzima compuesto de o-fenilendiamina
(cromognico) y perxido de hidrgeno (sustrato). Si existe conjugado unido, el OPD se
oxidar y dar lugar a un producto final coloreado. En esta reaccin, la peroxidasa se
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 47 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

oxida de forma divalente mediante el perxido de hidrgeno y forma un compuesto

intermedio que, a su vez, se reduce a su estado inicial mediante interaccin subsiguiente
con el OPD donador de in hidrgeno. Entonces, se aade cido sulfrico para paralizar
la reaccin.
La intensidad de color depende de la cantidad de conjugado unido, est en funcin de la
concentracin de anti-HCV presente en la muestra. La intensidad de color se mide con
un lector de micropocillos diseado para cuantificar la absorbancia de la luz en un
micropocillo.
La preparacin de los reactivos para este procedimiento se encuentra en el inserto al
final del procedimiento.
Se puede utilizar suero o plasma para realizar la prueba, se puede utilizar suero, incluido
el recogido en tubos separadores de suero, o plasma recogido en EDTA, ACD, CPDA,
CP2D, CPD y citrato de sodio al 4% y heparina.
La muestra se puede almacenar entre 2-8 C hasta 7 das y si se requiere un
almacenamiento prolongado, la muestra se congela a menos 18 C. Los pocillo que no se
van a utilizar se almacenan entre 2-8 C en la bolsa de aluminio que se suministra, con
desecante, sellada firmemente y se debe utilizar dentro de los 42 das siguientes a la
apertura de la bolsa de aluminio.

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL SUBSTRATO EN BLANCO

Se considera que una placa es vlida con respecto al substrato en blanco si el valor de
la absorbancia del pocillo correspondiente al substrato en blanco (pocillo 1A) es igual o
mayor que 0,020 e igual o menor que 0,050.

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL NEGATIVO

Los valores individuales de control negativo deben ser iguales o menores que
0,0120 y mayores o iguales que 0,005. Si uno de los tres valores control se encuentra
fuera de alguno de estos lmites, recalcule el valor medio del control negativo en base a
los dos valores controles aceptables. La placa no ser vlida y deber repetirse la
prueba si dos o ms de los tres valores control estn fuera de los lmites.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 48 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Determinar la media de los valores control negativo.

Ejemplo:

1
2
3

Control negativo
0,005
0,015
0,010

Absorbancia

Absorbancia total=

0,030

NCx = Absorbancia total/ 3 =

0,010

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL POSITIVO

Los controles positivos son utilizados para verificar que los componentes del kit de la
prueba tienen capacidad para detectar una muestra reactiva, siempre que el
procedimiento de la prueba se haya seguido estrictamente.
Se considera que una placa es vlida, si ambos controles positivos, si el valor de
ambos controles positivos es mayor o igual al valor de corte cutoff dentro de la lectura
del lector de placas
Nota: los valores por encima del lmite superior del rango soportado del lector de
microplacas puede aparecer como OVER o *** .

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 49 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Adicionar 20 microlitros de Solucin buf er- sustrato-OPD (1 pastil a de OPD en 6ml de Buf er sustrato) a todos los pocil os (incluyendo al
blanco). Tapar la placa con una cubierta de metal o /y oscuridad se incuba a temperatura ambiente durante 30min. Y se adicionan a todos
50microlitros de acido sulfurico 4N (para parar la reac in)

Se realiza la lectura, se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitcora de Serologia CAL-13-A y a guarda el registro dentro del
folder del mes y prueba cor espondiente

CALCULO DE LOS VALORES DE CORTE (cut-off)

Valor de corte = NCx + 0,330
Ejemplo:
Control negativo
1
0,005
2
0,015
3
0,010
CAL-02-B

Absorbancia

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 50 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Absorbancia total=
0,030
NCx = Absorbancia total/ 3 =
0,010
Valor de la lnea de corte = 0,010 + 0,330 = 0,340
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
Las muestras con valores de absorbancia menores que 0,025 deben volver a
ensayar en un pocillo nico. Se considera que son no reactivas, aunque en la repeticin
se obtenga el mismo valor o inferior a 0,025.
Las muestras con valores de absorbancia menor que el valor de corte se
consideran no reactivas. No es necesario repetir la prueba.
Las muestras cuyo valor de absorbancia sea igual o mayor que el valor de corte
se consideran inicialmente reactivas y deben volver a ensayarse por duplicado antes de
proceder a su interpretacin definitiva.
Al volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, sta se considera
repetidamente reactiva para anticuerpos a HCV si una cualquiera de las determinaciones
por duplicado, o ambas, son reactivas, es decir, igual o mayor que el valor de corte.
Despus de volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, sta se considera
no reactiva para anticuerpos HCV, si ambas determinaciones por duplicado son no
reactivos, es decir menores que el valor de corte.

ANTICUERPOS CONTRA HIV 1 + 2 (ELISA)

Este es un Inmunoensayo enzimtico cualitativo para la deteccin de Anticuerpos frente
al Virus de Inmunodeficiencia humana de Tipos 1 y/o 2 (HIV-1 y HIV-2) en suero o
plasma humanos.
En el Inmunoensayo enzimtico (ELISA) se utiliza como fase slida pocillos con un
revestimiento de una combinacin de antgenos recombinantes HIV-1 y HIV-2. El
principio de la ELISA es de que los antgenos o anticuerpos que se fijan a la fase slida
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 51 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

pueden detectarse mediante un antgeno o anticuerpo complementario marcado con una

enzima capaz de actuar como substrato cromognico. Al aplicar
el substrato
enzimtico, la presencia de un antgeno o anticuerpo puede detectarse por el desarrollo
de un producto final coloreado. El ELISA es utilizado para enfermedades infecciosas.
El sndrome de Inmunodeficiencia adquirida (SIDA) como el complejo relacionado con el
(CRS) estn causados por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y tipo 2.
HIV-1 y HIV-2 son similares pero distintos.
Morfologa y linfotropismo similar
Modos de transmisin parecen ser idnticos.
Los genomas de los virus exhiben aproximadamente un 60% de homologa en
genes conservados tales como gag y pol y un 30-40% de homologa en genes menos
conservados.
Este mtodo puede ser utilizado tanto para el estudio de donadores de sangre como
para fines de diagnstico. El ensayo utiliza una combinacin de dos protenas de
envoltura recombinantes de HIV-1 y una protena core recombinante de HIV-2.

Etapas de la prueba:
En la primera Etapa del procedimiento se diluye en diluyente de la muestra (color
verde). La dispersin de la muestra o el control provoca un cambio de color evidente que
puede monitorearse visualmente o mediante lecturas fotomtricas a 610nm. A
continuacin la muestra o control diluidos se incuban en el pocillo del equipo durante un
periodo de tiempo establecido. Si la muestra contiene un anticuerpo reactivo a alguno de
los 4 antgenos, se formaran complejos antgeno-anticuerpo en la superficie del pocillo.
Si no hay anti HIV-1 y/o anti-HIV-2, nose formarn los complejos. Las protenas sricas o
plasmticas no fijadas se eliminarn en la siguiente fase de lavado.
En la segunda etapa se aade al pocillo una mezcla de los 4 antgenos HIV-1 y
HIV-2 recombinantes conjugados a peroxidasa de rbano. El conjugado se fija
especficamente la porcin inmunoglobulina anti-HIV-1 y/o anti-HIV-2 (IgG e IgM) de los
complejos antgeno-anticuerpo. Si no existen complejos antgeno-anticuerpo, el
conjugado no fijado se eliminar en el siguiente lavado.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 52 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

En la tercera etapa, se aade un sistema de deteccin de enzimas consistente en

o-fenilenediamina y peroxido de hidrgeno. Si hay conjugado fijado, el OPD se oxidar
produciendo una reaccin de color anaranjado. Entonces se aade cido sulfrico para
detener la reaccin.
La intencidada del color resultante depende de la cantidad de conjugado fjado y
es, por lo tanto, una funcin de la concentracin de anti- HIV-1 y/o anti-HIV-2 presente
en la muestra. La intensidad del color se mide con un lector de microplacas diseado
para medir la absorbancia de luz de un pocillo.
La preparacin de los reactivos para este procedimiento se encuentra en el inserto al
final del procedimiento.
Se puede utilizar suero o plasma para realizar la prueba, se puede utilizar suero, incluido
el recogido en tubos separadores de suero, o plasma recogido en EDTA, ACD, CPDA,
CP2D, CPD y citrato de sdio al 4% y heparina.
La muestra se puede almacenar entre 2-8 C hasta 7 das y si se requiere un
almacenamiento prolongado, la muestra se congela a menos 18 C.
Los pocillos que no se utilizan se deben de cerrar bien y darles 60 das de caducidad a
2-8 C con desecante.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 53 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C aproximadamente los reactivos, los controles y la muestra(s) que se van a
utilizar para esta prueba. Los reactivos se agitan sin formar burbujas.
Se enciende la incubadora Abbott Commander a 37 C

Se escribe en la bitcora para anlisis manual CAL-26-A el orden en que se colocan el blanco, muestras y controles (los circulos no se
pueden marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificacin del anlisis.

Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el
anlisis ( la muestra que se utiliza puede ser suero o plasma )

La forma de colocarlos en la placa es asi:

Blanco

Colocar 3 pocillos
con Controles
negativos

Colocar 1 pocillos
con controles
positivos HIV1 y
otro + HIV2

Colocar las
muestras

Colocar el Control
interno negativo

Colocar el Control
interno positivo

Adicionar 50microlitros de diluyente de muestra a todos los pocillos menos al blanco

Adicionar a los pocillos con la siguiente secuencia y homogenizar con la punta que se adiciona.

Colocar 150microlitros de
cada muestra

Colocar en los 3 pocillos de

Controles negativos
150microlitros del control

Colocar en 1 de los pocillos

de Controles positivos
150microlitros del control
+HIV1 y en otro +HIV2

Colocar 150microlitros en el
pocillo del Control interno
negativo

Colocar 150microlitros en el
pocillo del Control interno
positivo

Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 30min.

Realizar los respectivos lavados con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur (Programa 1 con 5 ciclos) La forma de operar del equipo se
describe al final del procedimiento. Quitar exceso del lavado con golpes sobre un papel.

Adicionar 200microlitros de Conjugado a todos los pocillos (excepto al blanco). Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C
durante 30min. Realizar los respectivos lavados con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur

Adicionar 200microlitros de Solucin buffer- sustrato-OPD (1 pastilla de OPD en 6ml de Buffer sustrato) a todos los pocillos (incluyendo al
blanco). Tapar la placa con una cubierta metalica o poner a oscuridad e incubar a temperatura ambiente durante 30min. Y se adicionan a
todos 50microlitros de acido sulfurico 4N (para parar la reaccin) incluyendo al blanco.

Se realiza la lectura, se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitcora de Serologia CAL-13-A y se guarda el registro en el
folder del mes y la Prueba correspondiente.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 54 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL SUBSTRATO EN BLANCO

Se considera que una placa es vlida con respecto al substrato en blanco si el valor de
la absorbancia del pocillo correspondiente al substrato en blanco (pocillo 1A) es igual o
mayor que 0,020 e igual o menor que 0,050.
CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL NEGATIVO
Los valores individuales de control negativo deben ser iguales o menores que
0,070 e iguales que 0,010. Las cifras entre 0,000 y 0,010, ambas inclusive, son
vlidas y deben redondearse a 0,000. Si uno de los tres valores control est fuera de
estos lmites, deber volver a calcularse la media de los controles negativos (NCx) en
base a los dos valores aceptables. La placa no ser vlida y deber repetirse la prueba
si dos o ms de los tres valores control estn fuera de los lmites.

Determinar la media de los valores control negativo (NCx).

Ejemplo:
Control negativo
0,005
0,010
0,015

Absorbancia

Absorbancia total=

0,030

NCx = Absorbancia total/ 3 =

0,010

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL POSITIVO

Los controles positivos son utilizados para verificar que los componentes del kit de la
prueba tienen capacidad para detectar una muestra reactiva, siempre que el
procedimiento de la prueba se haya seguido estrictamente.
Se considera que una placa es vlida, si ambos controles positivos (HIV-1 y HIV-2)
satisfacen los siguientes criterios:
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 55 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

El valor de absorbancia del control positivo HIV-1 es igual o mayor que 0,200 y
est dentro del rango soportado por el lector de microplacas.
El valor de absorbancia del control positivo HIV-2 es igual o mayor el corte del
ensayo y est dentro del rango soportado por el lector de microplacas.
Si uno cualquiera de estos valores controles est fuera de estos lmites, el ensayo
no se considera vlido y deber repetirse.
Nota: los valores por encima del lmite superior del rango soportado del lector de
microplacas puede aparecer como MAS DE o *** .
CALCULO DE LOS VALORES DE CORTE (cut-off)
Valor de corte = NCx + 0,125
Ejemplo:
Control negativo
1
0,005
2
0,010
3
0,015

Absorbancia

Absorbancia total=

0,030

NCx = Absorbancia total/ 3 =

0,010

Valor de corte= 0,010 + 0,125 = 0,135

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Las muestras con valores de absorbancia menores que 0,025 deben volver a
ensayar en un pocillo nico. Se considera que son no reactivas, aunque en la repeticin
se obtenga el mismo valor.
Las muestras con valores de absorbancia menor que el valor de corte e igual o
mayor de 0,025 debern considerarse no reactivas. No es necesario repetir la prueba.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 56 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Las muestras cuyo valor de absorbancia sea igual o mayor que el valor de corte
se consideran inicialmente reactivas y deben volver a ensayarse por duplicado antes de
proceder a su interpretacin definitiva para posteriormente realizar la Prueba
confirmatoria para definir si es positiva, indeterminada o negativa.
Al volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, sta se considera
repetidamente reactiva para anticuerpos a HIV-1 y/o HIV-2 si una cualquiera de las
determinaciones por duplicado, o ambas, son reactivas, es decir, igual o mayor que el
valor de corte.
Despus de volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, sta se considera
no reactiva para anticuerpos a HIV-1 y/o HIV-2, si ambas determinaciones por duplicado
son negativas, es decir menores que el valor de corte.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 57 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

ANTICUERPOS CONTRA SIFILIS (VDRL o RPR)

Esta prueba es utilizada para detectar sfilis a travs de una tcnica aglutinacin cuando
existe presencia de Treponema pallidum, por medio de una reaccin inmunolgica color
azul.
El reactivo SYPAL-CB es una suspensin coloidal de cardilipina, colesterol y lecitina. La
cardiolipina es extrada del corazn de la res y la lecitina del pollo. Para su conservacin
el almacenaje se realiza a una temperatura de 2 - 8 C y cuidando que el recipiente se
encuentre bien cerrados y alejados de luz.
Las tarjetas que contiene el kit no se introduce al refrigerador para evitar que se
humedezcan. Se requiere atemperar los reactivos antes de utilizarlos (15-30C)

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 58 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

El Tcnico de Serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C el SYPAL-CB, los controles y la muestra(s).
Se escribe en la bitcora para anlisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras y controles, los datos que requiera la
bitacora para la correcta identificacin del anlisis (si se considera necesario) si no se pueden marcar a un lado de la placa con el # de toma
de muestra.

Se centrifuga la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el anlisis (
la muestra puede ser suero o plasma)

En esta prueba se utiliza una placa de prueba SYPAL-CB a todos los circulos se les adiciona una alicuota de 50microlitros o 1 gota con
pipeta desecha del suero del paciente, donador, etc.y se extiende con la misma pipeta desechable o punta.

De igual forma se aplican los controles positivo y negativo

A todos los circulos se les adiciona 1 gota de SYPAL-CB
(con la punta especial que incluye el kit para la aplicacion de este reactivo) y se agita la placa en el agitador BAXTER ROTATOR V durante
6 min. Leer a partir de los 6min. /100 RPM
Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitcora de Serologia CAL-26-B

Cuando el Resultado es Negativo se reporta como Negativo,

cuando el Resultado es Positivo se realizan diluciones seriadas para determinar el titulo y se realiza la confirmatoria

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Para realizar la lectura de la placa se agita manualmente por unos segundos (lo que
aumenta el tamao de los aglutinados) y se observa con luz fuerte y se continua
agitando suavemente durante la lectura para distinguir cualquier microaglutinado.
Una prueba se considera positivas si se obtiene grandes aglutinados (lo que
depende de la cantidad presente de anticuerpos en el suero).
Una prueba se considera negativa cuando la mezcla permanece homognea.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 59 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

ANTICUERPOS CONTRA BRUCELA (ANTIGENO ROSA DE BENGALA)

Para determinar la presencia de anticuerpos en el diagnostico de la Brucela de forma
rutinaria en el laboratorio se realiza la siguiente prueba:
Esta prueba es utilizada para el diagnostico de Brucelosis es de aglutinacin rpida en
placa es empleada para la deteccin temprana de aglutininas especificas de Brucilla
( B. melitensis, B. abortus y suis).
Para la realizacin de esta prueba solo se puede utilizar solo suero y se requiere que las
muestras no se encuentren lipemicas o bemolizadas. Si la muestra se resguardara
antes de su anlisis se conservara a 2-8 C.
El Tcnico de Serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s).

Se escribe en la bitcora para anlisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras y controles (los circulos no se puden
marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificacin del anlisis.

Se centrifuga la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el anlisis (
la muestra solo puede ser suero)

En esta prueba se utiliza una placa de prueba, la cual debe ser identificada, en donde a todos los circulos se les adiciona una alicuota de 3040microlitros o una gota con pipeta desecha del suero del paciente, donador, etc. y a los controles positivo y negativo de reactivos internos.
Se homogenizan dentro del circulo con la parte plana de la pipeta desechable una vez que se colocan.
Se les adiciona a todos (incluyendo controles) 30microlitros o 1 gota del Antigeno Rosa de Bengala previamente homogenizado.

Agitar la placa en el agitador BAXTER ROTATOR V durante 4 min.

Leer a partir de los 4min.

Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitcora de Serologia CAL-26-B.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 60 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

RESULTADOS
La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se
comenz a mezclar.
No aglutinacin: cuando se presenta un suero negativo.
Cualquier cantidad de aglutinacin: presencia de anticuerpos especficos. Cuando se
presenta un suero positivo.
Como esta prueba es cualitativa cuando se tiene un resultado positivo debe ser confirma
mediante una prueba cuantitativa para brucelosis como: aglutinacin lenta estndar o
aglutinacin lenta en presencia de 2-mercaptoetanol.

CONFIRMATORIA y/o SUPLEMENTARIAS

CHAGAS ( HAI 2- BETA MERCAPTO ETANOL)
La hemaglutinacin indirecta (HAI), tambin llamada hemaglutinacin reversa pasiva, se
basa en la propiedad que tienen los anticuerpos del Tripanosoma cruzi de producir
aglutinacin especifica en presencia de glbulos rojos sensibilizados con los
correspondientes antgenos.
Y de esta manera eliminar los anticuerpos inespecficos (heterfilos) que son capaces de
aglutinar glbulos rojos de distintas especies (y dar falsos positivos). Su presencia se
investiga enfrentando el suero con los Glbulos Rojos no sensibilizados. Esta prueba se
realiza para eliminar los anticuerpos heterfilos de las muestras con el tratamientos con
2-mercaptoetanol.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 61 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

El Tcnico de Serlogia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s).

Se escribe en la bitcora para anlisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras y controles, los datos se pueden anotar en
la placa o en la bitacora para la correcta identificacin del anlisis. Se realiza por duplicado en la misma placa.

Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el
anlisis ( la muestra solo puede ser suero)

Se realiza una dilucin 1:100 con 25ml de solucin fisiologica + 25microlitros de 2- mercaptoetanol

Se toma una alicuota de 25 microlitros de la muestra del donador, paciente, etc y de los respectivos controles + 25 microlitros de la dilucin
anterior, se homogenizan con la misma punta con que se esta colocando y se tapa con la cubierta adhesiva.

Se incuba a 37 C durante 1 hr.

Se les adiciona una alicuota de 25microlitros de diluyente de suero (Buffer)

Se realizaran diluciones seriadas a partir del primer pocillo.

Se toma una alicuota de 25microlitros del primer pocillo del paciente y se pasa al segundo pocillo, se homogeniza y se toma una alicuota del
segundo pocillo de 25 microlitros y se pasa al tercer pocillo y lo mismo para el cuarto pocillo (en el cuarto pocillo se toma la alicuota de
25microlitros y se tira para que contenga la misma cantidad que los demas pocillos. Las diluciones seran de para el primer pocillo, para el
segundo pocillo y asi sucesivamente.

Al pocillo identificado como control positivo y control negativo se les realiza el mismo proceso de dilucion.

Una vez reconstituido y agitado el reactivo que contiene los GR no sensibilizados (control de heterofilia) se le adiciona 25microlitros a los
pocillo que contienen la dilucion y de todas las muestras y controles

Y a los pocillo que contienen las diluciones 1/8 y 1/16 muestras y controles se les adiciona 25microlitros de Antigeno HAI

Se mezclan aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta y se tapa con una cubierta adhesiva toda la policubeta s (para evitar
evaporacin).

Se incuba durante 60min en ABBOTT COMMANDER/ Se deja en reposo durante 90min (en un lugar donde no exista vibracion)

Leer a partir de los 90min. Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitcora de Serologia CAL-13-A.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 62 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

HbsAg ELISA (NEUTRALIZACION)

Es una Prueba confirmatoria que detecta anticuerpos para la Hepatitis B en muestras
reactivas en la ELISA para Antigenos de Hepatitis B.
Es una tcnica de neutralizacin en conjunto con mtodos estndares en ELISA
ORTHO-ANTICUERPOS.
El Tcnico del rea de serologia enciende la incubadora ABBOTT COMMANDER para tenerla a la temperatura que se requiere al introducir las placas.

Se divide la placa en dos partes que contienen cada una lo siguiente:

TIRA CONTROL
TIRA PRUEBA
BLANCO
3 CONTROLES NEGATIVOS
2 CONTROLES POSITIVOS
LA MUESTRA POR DUPLICADO

2 CONTROLES POSITIVOS
MUESTRAS POR DUPLICADO

Una vez que se tienen vien identificados el contenido de cada pocillo se adiciona 50 microlitros de conjugado (conjugate diluent y antibody to hep. B
sudpase antigen) EXCEPTO AL BLANCO

TIRA CONTROL
Se le adiciona 20 microlitros de Confirmatory control

TIRA PRUEBA
Se le adiciona 20 microlitros de Antibody hep. B surface antigen

TIRA CONTROL
A los 3 pocillos marcados para CONTROL NEGATIVO se le adiciona
200microlitros de calibardor negativo a cada uno.
A los 2 pocillos marcados para CONTROL POSITIVO se le adiciona
200microlitros de calibardor positivo a cada uno.
A los 2 pocillos marcados para MUESTRA Y MUESTRA DUPLICADO
se le adiciona 200microlitros de la muestra.

TIRA PRUEBA
A los 2 pocillos marcados para CONTROL POSITIVO se le adiciona
200microlitros de calibardor positivo a cada uno.
A los 2 pocillos marcados para MUESTRA Y MUESTRA DUPLICADO
se le adiciona 200microlitros de la muestra.

Se tapa la placa con el papel adherible y se incuba a 37 C durante 180 min.

Se lava 6 veces con solucin lavado en el SANOFI DIAGNOSTIC PASTEUR LP35.

Se adiciona 200microlitros del sustrato OPD (12ml de Buffer con 1 pastilla de OPD) a todos los pocillos y se incuba a temperatura ambiente en oscuridad
durante 30 min.

Se adiciona 50 microlitros de H2SO4 4N a todos los pocillos

Leer a 492 con referencia de 620 en el equipo SANOFI DIAGNOSTIC PASTEUR LP 400

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 63 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

La absorbancia promedio de la muestra diluida o sin diluir es mayor o igual al valor
Cutoff y la adicin de anticuerpos al antgeno de Hepatitis B reduce la reactividad de la
muestra en un 50% o ms la Prueba se considera positiva.
Cuando la absorbancia promedio de la muestra diluida o sin diluir es mayor o igual al
valor Cutoff y la adicin de anticuerpos al antgeno de Hepatitis B no reduce la
reactividad de la muestra al menos un 50% la muestra es no neutralizable y se debe
diluir al menos 1 a 10 y reinspeccionarse.
Si la absorbancia de la muestra duplicada es menor al Cutoff de la muestra diluida y sin
diluir se considera NO NEUTRALIZABLE.
Para calcular el Cutoff se requiere sumar los valores resultantes de absorbancia de los
3 controles negativos y dividirlos entre 3. Una vez que se tiene el valor promedio de los
controles negativos se suma a un valor 0.050 y se obtiene el Cutoff.

HCV (INMUNOBLOT RIBA HCV)

La prueba CHIRON* RIBA* HCV 3.0 SIA es un inmunoensayo cualitativo in vitro para la
deteccin de anticuerpos frente a protenas individuales codificadas por el virus de la
hepatitis C (anti- HCV) en suero o plasma humano donado por la transfusin o
manufactura posterior. Los antgenos recombinantes utilizados son c33c y NS5 y dos de
los pptidos sintticos son c100p y 5-1-1p que proceden de regiones putativas de la
nucleocpside viral.
Esta prueba tiene 3 etapas:
Primera etapa
La muestra o el control del ensayo se diluye e incuba con la tira. Si muestra contiene
anticuerpos especficos frente a HCV, stos se fijarn a las correspondientes bandas de
antgeno recombinante y/o pptido sinttico de la tira. Los componentes sricos o
plasmticos no fijados se eliminarn por aspiracin y lavado.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 64 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Segunda etapa
La tira se incuba en presencia de un conjugado de anti- IgG humana de cabra, marcada
con peroxidasa. El conjugado se fija a la porcin de anti- IgG humana del complejo
antgeno-anticuerpo. El componentes no fijados se eliminarn por decantacin y
posteriores pasos de lavado.
Tercera etapa
Se aade un sistema colorimtrico de deteccin enzimtica compuesto por agua
oxigenada y 4-cloro-1-naftol. Si el conjugado se fijo a la muestra, la reaccin enzimtica
origina un producto de reaccin de color azul-negro insoluble en cada banda especfica
de antgeno, pptido o control HCV. La reactividad de la muestra ante cada banda de
antgeno se determina comparando visualmente la intensidad de la banda antignica
individual con la de las bandas de control interno de IgG humano alta y baja absorbidas
en cada tira.
Los reactivos se debe almacenar a 2 y 8 C.
Leer en el inserto de la prueba anexado al final del procedimiento para conocer sobre las
precauciones que se debe tener con los reactivos que incluye la prueba al igual que la
preparacin de los reactivos y soluciones
CONTROL DE CALIDAD
Los controles positivo y negativo se deben incluir en cada serie , independientemente el
nmero de muestras o nmero de tiras utilizadas.
Como controles internos en cada tira se incluyen dos niveles de IgG humana (nivel I,
control bajo y nivel II, control alto). La reactividad de las bandas individuales de HCV se
determina comparando la intensidad de cada banda con los controles internos de la tira
IgG humana de nivel I y nivel II.
Los resultados previstos de los controles positivo y negativo que incluye la prueba son:
Las bandas del control interno IgG de nivel I y nivel II deben ser claramente
distinguibles a simple vista en las tiras de control positivo y negativo, y el control
IgG de nivel I debe ser evidentemente ms claro que el control IgG de nivel II.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 65 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

La tira de control positivo debe mostrar una respuesta de 2+ o mayor para todas
las bandas de antgeno y pptido del HCV. La respuesta en la banda SODh debe
ser visible inferior al control IgG humano de nivel I.
La tira de control negativo debe mostrar una respuesta a cada una de las bandas
de antgeno del HCV y SODh que sea visiblemente inferior al control IgG humano
de nivel I.
Si los controles de la prueba incluidos no cumplen los criterios anteriores, la serie queda
invalidada y debe repetirse.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 66 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

El Tcnico de Serologia escribe en la bitcora para anlisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras, bco, controles (los
tubos no se puden marcar y contienen una tira dentro de ellos que contiene un nmero) y los datos que requiera la bitacora para la correcta
identificacin del anlisis.

Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el
anlisis ( la muestra puede ser plasma o suero)

A todos los tubos previamente identificado en la bitacora CAL- 26-A se les adiciona una alicuota de 1ml de diluyente ( specimen diluent)

A los tubos que son de los pacientes, donador o repeticin de anlisis se les adiciona 20 microlitros del suero o plasma y se homogenizan con
la misma punta con que se esta colocando.

Al tubo identificado como control negativo se le colocan 20 microlitros y al tubo marcado como control positivo se le adicionan 20 microlitros y
se homogenizan con la misma punta con que se esta colocando.

Se tapan y se colocan en agitacin vertical a temperatura ambiente durante 4 horas.

Se tira el liquido excedente teniendo cuidado con la tira que contiene y se adiciona 1ml del diluyente y se pone en agitacin vertical durante
30min a temperatura ambiente

Preparo una solucin de lavado WASH BUFFER CONCENTRATE (50X) con 450ml de agua destilada + 25ml de WASH BUFFER
CONCENTRATE

Decanto y pongo las tiras en la bandeja de reaccin con 30ml aproximadamente de la solucin de lavado que prepare en el paso anterior,
este proceso de decantacin y lavado lo realizo 3 veces

Observo en el incerto cuanto conjugado debo agregar con respecto al nmero de tiras que tengo.
El incerto indica por ejemplo que para una tira requiero 1ml de conjugado pero
que cuando son menos de 10 tiras debo tomar a un as 10ml de conjugado

Una vez adicionado en la bandeja de reaccin el conjugado pongo en agitacin durante 10- 12 min. y realizo lavados y decantaciones 3 veces
como en lo hice anteriormente.

Preparo una solucin substrato de trabajo en la que depende el nmero de tiras que tengo. Ejemplo: cuando tengo de 3-10 tiras preparo 1.7ml
de volumen de solucin substrato con 8.5ml solucin buffer del subtrato

Es muy importante que no sepeguen las tiras.

Agitar de 15 a 20 min a temperatura ambiente y decantar.

Lavar con 60ml de agua destilada dos veces.

Con pinzas colocar las tiras en un papel absorbente y retiro el exceso de agua.

Dejar secar las tiras durante 30min en la oscuridad y a temperatura ambiente

Leer resultdos antes de 3 hrs.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 67 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

La reactividad anti-HCV en una muestra se determina comparando la intensidad de cada
banda de HCV con la intensidad de las bandas del control interno de IgG humana (nivel I
y nivel II) de cada tira. La identidad de los anticuerpos se define por la ubicacin
especificada de la banda de HCV.
La intensidad de las bandas de HCV se clasifica en funcin en funcin de la intensidad
de los controles de IgG internos de la siguiente forma:
Intensidad de la banda
Ausente
Menor que la intensidad de la banda control IgG de nivel I

Puntuacin
NEGATIVO
POSITIVO / NEGATIVO

Igual a la intensidad de la banda control IgG de nivel I

1+

Mayor que la intensidad de la banda control IgG de nivel I y

menor que la intensidad de la banda control IgG de nivel II

2+

Igual a la intensidad de la banda control IgG de nivel II

3+

Mayor que la intensidad de la banda control IgG de nivel II

4+

La interpretacin NEGATIVA, INDETERMINADA o POSITIVA se basa en el patrn de

reaccin presente en la tira. Para interpretar las series como vlidas deben utilizarse los
siguientes criterios:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 68 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Patrn de la banda de antgeno

Ninguna banda de HCV presenta
reactividad 1+ o mayor.
O
Slo la banda de SODh
presenta
reactividad 1+ o mayor.
Una nica banda de HCV presenta
reactividad 1+ o mayor.
O
La banda de SODh presenta reactividad
1+ o mayor conjugadamente con una o
ms banda de HCV presenta reactividad
1+ o mayor.
Al menos dos banda de HCV presenta
reactividad 1+ o mayor.

Interpretacin

NEGATIVO

INDETERMINADO

POSITIVO

Una intensidad de banda menor que el control IgG nivel I (es decir +/-) est por
debajo del valor lmite parta la reactividad en el ensayo.
Solamente se puede hacer una interpretacin POSITIVA de la tira en ausencia
de reactividad de la banda de SODh (es decir +/-).
Un resultado de la prueba POSITIVO indica la presencia de anti-HCV e infeccin
previa o actual con HCV. Un resultado de la prueba INDETERMINADO indica que
el anti-HCV puede no estar presente y que no se puede llegar a una conclusin
sobre si existe infeccin por HCV. Dado que una reactividad de +1 o mayor con
cualquiera de los antgenos codificados del virus HCV de la tira es una posible
evidencia de infeccin previa o actual con HCV, todos los individuos clasificados
INDETERMINADOS deben volver a someterse a la prueba durante un perodo de
6 a 12 meses para verificar si se ha producido un aumento de la reactividad. Se
recomienda que los INDETERMINADOS se vuelvan a someter a una prueba al
cabo de 6 meses, usando una muestra obtenida en ese momento.
Un resultado NEGATIVO que es REACTIVO por un procedimiento aprobado de
escrutinio de anti-HCV, no excluye la posibilidad de infeccin con HCV. Las
concentraciones de anti-HCV pueden no ser detectables en la infeccin inicial.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 69 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

HIV (WESTERN BLOT HIV 1 + HIV 2

Es una deteccin por electroinmunotransferencia de los anticuerpos anti-HIV 1 en suero
o plasma humano para la confirmacin de una respuesta anti-HIV 1y anti-HIV 2 positiva
y para precisar la especificidad antignica en el cuadro diagnstico del SIDA.
La calidad de los antgemos utilizados en estos test no permite eliminar absolutamente
determinadas respuestas inespecficas.
En el cuadro diagnstico del SIDA, es necesario para la caracterizacin de la infeccin
por los virus HIV-1 HIV-2.
Este test se basa en el principio del ELISA indirecto sobre una tira de nitrocelulosa que
contiene todas las protenas constituyentes del virus HIV-1, HIV 2 y un control interno
anti-IgG. La banda del control interno se halla situada junto al extremo no numerado de
la tira antes de la reaccin p18 o p16 y permite validar la adicin de la muestra y de los
reactivos as como el buen desarrollo del mtodo.
El procedimiento de ensayo comprende las siguientes etapas:
Rehidratacin de las tiras de nitrocelulosa
Incubacin de las muestras a confirmar y sueros de control.
Si estn presentes los anticuerpos anti-HIV 1 o HIV 2 se unirn a las protenas virales
presentes sobre la tira de nitrocelulosa.
Despus del lavado, se incuban las tiras con anticuerpos anti IgG humanos
marcados con fosfatasa alcalina. El conjugado se une a los anticuerpos anti-HIV 1 o
HIV 2 fijados al soporte slido.
Despus del lavado y eliminacin del conjugado en exceso, la adicin de solucin de
revelado permite evidenciar la actividad enzimtica de los complejos ligados a la
nitrocelulosa.
La aparicin de bandas coloreadas especficas permite reconocer la presencia de
anticuerpos anti-HIV 1 o HIV 2 en el suero.
IMPORTANTE
No mezclar en un mismo ensayo diferentes lotes.
Reactivos no caducos.
Reactivos a temperatura ambiente antes de ser utilizados.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 70 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

No tocar las tiras con las manos, utilizar pinzas.

Utilizar los sueros de control en cada ensayo

REACTIVO PARA RECONSTITUIR

R2 Solucin de lavado / diluyente
Homogenizar la solucin, diluir (1/5) en agua destilada (ejemplo: 30ml de solucin de
lavado + 120ml de agua destilada). Homogenizar cuidadosamente.
Una vez reconstituido permanece estable durante un mes a +2 - 8 C.

El equipo

contiene 3 botes :

Desechos con tapn rojo

H20 destilada con tapn azul
Solucin de lavado (1/5) con tapn amarillo.

VALIDACIN DE LOS RESULTADOS

La banda del control interno anti-IgG debe ser de coloracin fuerte. Permite validar la
adicin de la muestra y de los reactivos as como el buen desarrollo del mtodo. La
ausencia o la escasa intensidad de coloracin de la banda del control interno anti-IgG
indica ya sea la ausencia de depsito de la muestra o de los reactivos, o ya sea un
incumplimiento del mtodo.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 71 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa
El Qumico del rea de serologia enciende el equipo SANOFI DIAGNISTIC PASTEUR LS 12 con el interruptor que se encuentra en la parte de atras del
lado derecho.

En la pantalla se observa lo siguiente:

L-S.12 - Version 6.07.2ySelection Mode RUN = START

EDIT=1 CONFIG=2 SERV=3

Presionar START

RUN: Select. Test: New LAV BLOT

=1 =2 Valid= START Return= STOP

Presionar START

Run= Check botte contents-Rack on 1

Prime=3 Valid= START Return= STOP

Verificar que la linea amarilla este endentro del bote del

agua

Presionar el # 3

Una vez que termina se cambia la linea amarilla a el bote

de solucin de lavado

Presionar el # 3 , apretar 3 veces el 3 para realizar 3

lavados)

Como los virus de HIV son similares son tratados igual

Se acomodan las tiras en cada unos de los Rack de la

siguiente forma:

RACK 1
RACK 2
RACK 3

HIV 2 Control negativo

HIV 2 Control positivo
Muestra

RACK 4
RACK 5
RACK 6

HIV 1 Control negativo

HIV 1 Control positivo
Muestra

Presionar START

RUN: Number of strips 1st Rack:5

=1 =2 Valid= START Return= STOP

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 72 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Presionar el # 2

Cambiar a 1 st Rack= 6

Presionar el # 2

RUN: Number of strips 2nd Rack:6

=1 =2 Valid= START Return= STOP

Presionar el # 1 hasta llegar al 0 para que quede

2nd Rack=0

Presionar START

RUN: Put the rack (s) on the tray

Valid= START Return= STOP

Presionar START

=1

RUN: New Lav Blot / Pha: 1:

=2 Valid= START Return= STOP

Presionar START

RUN: New Lav Blot

Phase 1: Soaking strip

Se agitan durante 5 min.

RUN: New Lav Blot Valid= START

Phase 2: Dispense 20microlitros of sample

Abrir la tapa del equipo

Adicionar 20 microlitros del control negativo WB1y 2

y 20 microlitros del control positivo WB1 y 2.
Adicionar 20 microlitros de la muestra
Homogenizar con la punta de la pipeta cada una despues
de adicionar

RUN: New Lav Blot

R3
Negative Control serum
Positive Control serum R4

Presionar START

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 73 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

RUN: New Lav Blot R3

Negative Control serum
Positive Control serum R4

Presionar START

RUN: New Lav Blot

2Hrs.
Phase 3: Incubation of samples

Se incuba 2 hrs con agitacin.

RUN: New Lav Blot

Phase 5:2nd wash of sample
(3 veces)

RUN: New Lav Blot Valid=START

Phase 6: Dsipense 2.0ml de Conjugate
2.0ml de conjugate

RS

Presionar START

RUN: New Lav Blot 60min.

Phase 7: Incubation Conjugate R5

RUN: New Lav Blot

Phase 8: 1st wash conjugate R5

RUN: New Lav Blot

Phase 9: 2nd wash conjugate R5

RUN: New Lav Blot Valid:START

Phase 10: Dispense 2.0ml Substrate R6
2ml de Colour developent solution R6

Presionar START

RUN: New Lav Blot Reaction stop STOP

Phase 11: Incubation substrate R6 Oh. Mn. S
5min. Aprox.

Presionar STOP

RUN: New Lav Blot

Phase 12: 1st. Rinse Subtrate R6

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 74 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

RUN: New Lav Blot

Phase 12: 2st. Rinse Subtrate R6

RUN: New Lav Blot

Phase 12: 3st. Rinse Subtrate R6

RUN: New Lav Blot Valid:START

Phase 13: End of test

Presionar START

RUN: Begin a new test

YES= START NO=STOP

Presionar STOP

RUN: Instrument [Link] a Rack

(1st pos.) Valid=START
Return= STOP

Presionar START

RUN: Conect R2 and H20

Tubing to the H2O bottle
Valid=START Return= STOP

Presionar START

RUN: Instrument cleaning.

0H mn-s

RUN: Disconnect the R2

and H2O tubing
Valid=START Return= STOP

Presionar START

RUN: Dring instrument

0H mn-s

RUN: Descontamination
Valid=START Return= STOP

Presionar START

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 75 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Colocar en un vaso de precipitado una solucin de etanol

al 30% e introducir al vaso las lineas amarilla y azul

RUN: Inmerse both tube ends in 30% ethanol

Valid=START Return= STOP

Presionar START

RUN: Descontaminating tubing

-mn-s

RUN: 30% ethanol contact

OH--mn--s

RUN: Connect R2 and H2O tubing to

the H2O bottle
Valid=START Return= STOP

Presionar START

RUN: Cleaning instrument

3mn

RUN: Disconnect the R2 and H2O

tubing
Valid=START Return= STOP

Presionar START

RUN: Drying instrument

3mn

RUN: End of decontamination

Turn off the instrument

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 76 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

La presencia de anticuerpos anti-protenas constitutivas del virus HIV 1 y HIV 2 en las
muestras, se traduce por la aparicin de bandas especficas coloreadas (azul-violeta).
Su posicin corresponde a las masas molares de las protenas virales representadas en
la tabla siguiente:
HIV 1
DETERMINA GEN
NATURALEZA
CIN
GP 160
ENV Glicoprotena precursora de
la GP 110/120 y de la GP 41
GP 110/ 120 ENV Glicoprotena de la envoltura
P 68
POL Transcriptasa inversa
P 55
GAG Precursora de protenas
internas
P 52
POL Transcriptasa inversa
GP 41
ENV Glicoprotena
transmembranal
P 40
GAG Precursora de protenas
internas
P 34
POL Endonucleasa
P 24/ 25
GAG Protena interna
P 18
GAG Protena interna

CAL-02-B

ASPECTO EN WESTERN
BLOT
Banda ntida
Banda de bordes difusos
Banda ntida
Banda doble
Banda ntida
Banda difusa
Banda ntida
Banda ntida
Banda ntida
A veces banda doble

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 77 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

INTERPRETACIN NEW LAV BLOT 1

Utilizar el control positivo para identificar los anticuerpos revelados y verificar la
presencia de la banda del control interno en cada tira.
INTERPRETACIN
Positivo

PERFIL
2ENV +/- GAG +/- POL
1ENV GAG POL
GAG + POL
GAG
POL
Ninguna banda Bandas no
significativas

Indeterminado

Negativo

La calificacin de indeterminado puede ser por alguna de las alternativas siguientes:

Seroconversin
HIV-2
Reaccin cruzada con otros retrovirus.
HIV 2
DETERMINACIN

GEN

GP 140
GP 105
P 68
P 56

ENV
ENV
POL
GAG

GP 36

ENV

P34
P 26
P 16

POL
GAG
GAG

CAL-02-B

NATURALEZA

ASPECTO EN
WESTERN BLOT
Precursor de GP 105 y GP 36 Banda + -difusa
Glicoprotena de la envoltura Banda difusa
Transcriptasa inversa
Banda ntida
Precursora de protenas
Banda ntida
internas
Glicoprotena
Banda difusa
transmembranal
Endonucleasa
Banda ntida
Protena interna
Banda ntida
Protena interna
Banda ntida

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 78 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

INTERPRETACIN NEW LAV BLOT II

Utilizar el control positivo para identificar los anticuerpos revelados y verificar la
presencia de la banda del control interno en cada tira.
INTERPRETACIN
Positivo

Indeterminado

Negativo

HIV

PERFIL
ENV + GAG + POL
ENV + GAG
ENV + POL
GAG + POL
GAG
POL
ENV
Ninguna banda Bandas no significativas

(Ag P24 ELISA)

VIRONOSTIKA HIV-I ANTIGEN

El sistema microelisa VIRONOSTIKA HIV-I ANTIGEN es un enzimoinmunoensayo para

deteccin cualitativa y cuantitativa del antgeno de la nucleocpside p24 del virus de la
inmunodeficiencia humana del tipo 1 en suero, plasma o sobrenadante de cultivo celular
humano.
Es un inmunoensayo que se basa en el principio del sndwich. El anti-HIV-1 (humano)
acoplado a la peroxidasa de rbano (HRP) sirve como conjugado, usando como sustrato
a la tetrametilbencidina (TMB). Al concluir la prueba, el desarrollo de color sugiere la
presencia del antgeno del HIV-1.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 79 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

TAMPON FOSFATO DILUIDO

Verificar la ausencia de cristales de sales en el tampn fosfato concentrado. Si se han
formado cristales en la solucin, volver a solubilizarlos calentando a 37 C hasta la
disolucin de los mismos.
Diluir el tampn fosfato concentrado 1:25 con agua destilada o desionizada. Preparar
50ml de tampn fosfato diluido, como mnimo, para cada tira microelisa empleada.
El tampn fosfato diluido es estable durante dos semanas si se almacena a 28 C.
SUSTRATO TMB
Preparacin del substrato TMB
Nmero de pocillos
1-16
17-32
33-48

Solucin TMB
1ml
2ml
3ml

Solucin de perxido de urea

1ml
2ml
3ml

49-64

4ml

4ml

65-80
81-96

5ml
6ml

5ml
6ml

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 80 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

El Qumico de serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C aproximadamente los reactivos, los controles y la
muestra(s) que se van a utilizar para esta prueba. Los reactivos se agitan sin formar burbujas.
Se enciende la incubadora Abbott Commander a 37 C

Se escribe en la bitcora para anlisis manual CAL-26-A el orden en que se colocan las muestras y controles (los circulos no se pueden
marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificacin del anlisis.

Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el
anlisis ( la muestra que se utiliza puede ser suero o plasma )

La forma de colocarlos en la placa es asi:

Colocar 3 pocillos con Controles

negativos

Colocar 1 pocillos con controles

positivos

Colocar las muestras

Adicionar 25microlitros de disruptor a todos los pocillos

Adicionar a los pocillos con la siguiente secuencia:

Colocar 100microlitros de
cada muestra

Colocar en los 3 pocillos de

Controles negativos
100microlitros del control

Colocar en 1 de los pocillos

de Controles positivos
100microlitros del control

Agitar ligeramente la placa y taparla con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 60min.

Realizar los respectivos lavados con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur (Programa 1 con 4 ciclos) La forma de operar del equipo se
describe al final del procedimiento. Lavar con tampn fosfato diluido. Quitar exceso del lavado con golpes sobre un papel.

Adicionar 100microlitros de Conjugado a todos los pocillos. Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 60min. Realizar
los respectivos lavados con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur (Programa 1 con 4 ciclos, lavar con tampn fosfato diluido)

Adicionar 100microlitros de sustrato-TMB preparado a todos los pocillos. Incubar a temperatura ambiente durante 30min. Y se adicionan a
todos 100microlitros de cido sulfrico 1mol/l (para parar la reaccin)

Se realiza la lectura a 450nm con referencia de 620nm, se interpretan los resultados y guarda el registro en el folder del mes de la Prueba
correspondiente.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 81 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

RESULTADOS
Calificacin de los valores de control negativo (CN)
La absorbancia de cada pocillo de CN debe ser menor que o igual a 0,090 (longitud de
onda doble) o 0,130 (longitud de onda nica) y mayor que o igual a 0,000 (longitud de
onda doble) o 0,040 (longitud de onda nica).
Eliminar los valores fuera de rango y determinar el valor de control negativo medio
(CNx). Eliminar todo CN que no satisfaga los criterios siguientes, y volver a calcular el
valor medio:
Longitud de onda doble
CN mayo o igual a 0,5x (CNx)
CN menor o igual a 1,5x (CNx)
Longitud de onda nica
CN mayo o igual a 0,8x (CNx)
CN menor o igual a 1,2x (CNx)
Si dos o ms valores estn fuera del intervalo, el ensayo no es vlido y debe repetirse.
Calificacin de los valores de control positivo (CP)
La absorbancia de cada pocillo de CP debe ser mayor que o igual a 0,960 (longitud de
onda doble) o 1,000 (longitud de onda nica).
Valor cutoff
Si el ensayo de prueba es vlido, calcular el valor cutoff como sigue:
Cutoff para suero y plasma = CNx + 0,070

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 82 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

VIDAS HIV DUO (HIV4)

Es una prueba de screening para la infeccin por HIV automatizado en el sistema
VIDAS, basado en la deteccin combinada del antgeno p24 de VIH-1 y las
inmunoglobulinas G anti-VIH1 y anti-VIH2 en suero o plasma humano por una tcnica
ELFA.
Los virus de inmunodeficiencia humana (VIH) son retrovirus ARN transmitidos
principalmente por vas sexual, parenteral, perinatal y transplacentaria. Desde el
aislamiento del VIH 1 en 1993 Y del VIH 2 en 1995, han sido caracterizadas numerosas
variantes genticas.
El diagnstico de una infeccin por VIH, se basa en la prctica normal en la
deteccin de anticuerpos sricos anti-VIH por una tcnica ELISA.
Existe un periodo de 3 semanas y media entre la contaminacin y la aparicin de
los primeros anticuerpos.
Durante este periodo, el antgeno p24 esta presente en la mayora de los
pacientes infectados por VIH-1, sea cual sea su origen.
La deteccin simultnea de la antigenmia p24 y de los anticuerpos anti-VIH-1 y
anti-VIH-2 permite reducir el retraso existente entre la contaminacin y el diagnstico de
la infeccin. Objetivo de VIDAS HIV DUO.
Todas las etapas de la reaccin estn controladas por el sistema. El cono de uso nico,
sirve a la vez de fase slida y de sistema de pipeteo El resto de los reactivos estn
listos para su uso y distribucin en el cartucho.

Primera reaccin
La deteccin de inmunoglobulinas G anti-VIH1 (tambin las del subtipo (grupo) O) y antiVIH2, se realiza en la parte baja del cono, donde despus de la etapa de dilucin, la
muestra es aspirada y expulsada varias veces de la parte inferior del cono. Esta
operacin permite a las IgG anti-VIH de la muestra unirse a los pptidos de sntesis gp
41y/o subtipo (grupo) O y/o gp 36 fijados en el cono. Los componentes no ligados se
eliminan en los lavados.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 83 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

El conjugado anti-IgG humana marcado con fosfatasa alcalina se incuba ahora en el

cono, en el cual se fija a las IgG anti-VIH. Los componentes no ligados se eliminan en
los lavados.
Segunda reaccin
Es la deteccin del antgeno p24 y se realiza en la parte alta. La muestra previamente
diluida y los anticuerpos de conejo anti-p24 biotinilados son aspirados y expelidos en el
cono. Durante la incubacin del virus es lisado y los antgenos p24 liberados se unen
por un lado los anticuerpos anti-p24 monoclonales de ratn fijados en la parte superior
del cono, u por otro lado a los anticuerpos anti-p24 biotinilados. Los componentes no
fijados son eliminados mediante estreptavidina conjugada con fosfatasa alcalina, cuyo
exceso se elimina mediante lavados.

Etapa final
La etapa final de revelado se realiza simultneamente en las dos partes y el substrato
(4-metil-umbeliferil fosfato) se aspira y expele en el cono. La enzima presente en el
conjugado cataliza la reaccin de este substrato en un producto (4-metil umbeliferota)
midiendo la fluorescencia emitida a 450nm. Esta es proporcional a la presencia de IgG
anti-VIH y/o antgeno p24 presentes en la muestra.
Al final de la prueba, los resultados son calculados automticamente por el VIDAS en
relacin a un estndar, y posteriormente impresos.
El cono es sensibilizado en el momento de la fabricacin con 3 pptidos sintticos
( 1pptido env VIH-1, gp 41 + 1pptido env VIH-2, gp 36 + 1pptido especfico VIH-1
grupo O) y 3 anticuerpos monoclonales anti-p24. Los pptidos permiten la captura de
las IgG anti-VIH 1 o anti-VIH 2 y los anticuerpos monoclonales el antgeno p24.
La identificacin de la prueba, el nmero de lote y la fecha de caducidad estn indicadas
sobre el cartucho en un cdigo de barras y est compuesto de 10 pocillos. El primer
pocillo tiene una parte precortada para facilitar la introduccin de la muestra. El ltimo
pocillo es una cubeta que permite la lectura por fluorimetra. Los 8 pocillos intermedios
contienen los diferentes reactivos necesarios para el anlisis.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 84 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Precauciones:
No utilizar reactivos despus de la fecha de caducidad.
No mezclar reactivos o consumibles de equipos diferentes.
Utilizar guantes de ltex de uso nico sin talco (puede provocar falsos).
Los reactivos y productos de se recomienda manipular con precaucin.
Los reactivos se conservan a 2-8 C.
MUESTRA:
Suero o plasma (EDTA, citrato, trombina, heparina de litio, gel de heparina de litio,
oxalato)
Las muestras que contienen partculas debern centrifugarse.
Se conservan a 2-8 C, 48 horas como mximo, sino congelar a 25 C. No congelar y
descongelar. No descomplementar las muestras.
CALIBRACION
Se efecta mediante el estndar incluido en el equipo, se efecta a la llegada de cada
nuevo lote, despus de introducir las especificaciones del lote y se realiza cada 14 das.
El estndar identificado como S1, ser analizado dos veces y el valor debe encontrarse
entre los lmites de RFV fijados. Si no la media no ser memorizada y se tendr que
repetir la calibracin.
CONTROL DE CALIDAD
Se incluye un control positivo y un control negativo en cada equipo, estos controles se
debe utilizar cada vez que se utiliza un nuevo equipo con el fin de verificar la ausencia
de alteraciones de los reactivos. Cada recalibracin debe ser verificada con la ayuda de
estos controles.
Para que el aparato pueda verificar el valor de los controles, es necesario identificarlos
mediante C1 y C2.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 85 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Si los valores obtenidos del control positivo se desvan del intervalo de confianza
indicado en la etiqueta del frasco. Si el valor se desva de los valores esperados, los
resultados no pueden validarse.
La tcnica se observa al final del procedimiento.

RESULTADOS
Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automticamente.
El equipo efecta dos medidas de fluorescencia en la cubeta de lectura para cada
prueba:
La primera tiene en cuenta el ruido de fondo debido a la cubeta substrato antes
de ponerse en contacto el substrato con el cono.
La segunda se efecta despus de la incubacin del substrato con la enzima
presente en el cono.
El clculo del RFV es el resultado de la diferencia de las dos lecturas, apareciendo en la
hoja de resultados.
El RFV se interpreta por el sistema VIDAS de la siguiente forma:
Valor del test = RFV paciente/ RFV calibrador
El valor de la prueba y la interpretacin se imprimen en la hoja de resultados.
La interpretacin en funcin del valor de la prueba es la siguiente:

Valor del test

Cuando el valor es menor a 0,25
Cuando el valor es menor o igual a 0,25 pero menor a 0,35
Cuando el valor es mayor o igual a 0,35

Resultados
Negativo
Positivo lmite
Positivo

INTERPRETACION
Las muestras cuyo valor sea inferior a 0,25 se consideran negativas dentro de los
lmites de las caractersticas del reactivo. En caso de sospecha de una primo-infeccin,
los valores prximos a 0,25 debern ser interpretados con prudencia.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 86 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Las muestras con valor superior o igual a 0,25 debe repetirse.

Deben ser analizadas con una prueba ELISA en donde se detecta el Ag P24.
Si resulta positivo se realiza una ELISA donde solo se detecta Ag P24.

BRUCELA (ANTIGENO BLANCO)

PRUEBA DE AGLUTINACIN LENTA EN PRESENCIA DE 2-MERCATOETANOL

Esta es una tcnica cuantitativa para la determinacin de anticuerpos anti-Brucella de la

clase IgG e IgA (Marcadores de infeccin activa).
El antigeno que se utiliza es la cepa de B. Abortus. Al ponerse en contacto con los
anticuerpos, estos van unindose entre si a las bacterias suspendidas desarrollando la
reaccin de aglutinacin, de esta manera se van depositando en el fondo formando una
malla visible.
La molcula de 2-mercaptoetanol acta sobre la cadena J de la molcula de IgM
liberando las subunidades, mismas que pierden la capacidad de aglutinar, por lo que la
reaccin visible se debe fundamentalmente a la presencia de IgG e IgA.
Para observar mejor la reaccin se realiza la lectura frente a una fuente de luz. El titulo
de cada muestra se determina tomando en cuenta la dilucin ms alta en donde se
observa una reaccin positiva.
Reaccin positiva: Formacin de una malla de aglutinacin en el fondo del pozo con
clarificacin del medio.
Reaccin negativa: Permanece la turbidez del medio y el fondo se aprecia un acumulo
de clulas sedimentadas en forma de botn.
INTERPRETACION
Los resultados en esta prueba se consideran significativos desde ttulos de 1/20,
reflejando as una etapa activa de la infeccin.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 87 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

El Qumico de serologiamarca la placa a utilizar con los # del 1 al 12 y en el otro extremo con las
letras A a la H.

Diluir el diluyente para suero (2-Me) con SSI ( dilucin 1:10)

-Adicionar 180microlitros de esta solucin en los pozos marcados como H
-Adicionar 100microlitros en el resto de los pozos

Adicionar 20microlitros de cada muestra de la siguiente manera:

En los pozos 1H al 10H colocar la muestra problema

En el pozo 11 H El Control positivo
En el pozo 12 H Control negativo

Para realizar las diluiciones se requiere:

-Subir y bajar 3 veces con la pipeta para mezclar el suero
-Tomar 100microlitros del pozo H y pasarlos al pozo G
-Mezclar y pasar 100microlitros al pozo F se continua de la misma forma hasta llegar al pozo A.
Despus de mezclar se descartan 100microlitros de este ltimo para igualar el volumen.
PUNTA DIFERENTE PARA CADA MUESTRA

Agitar el antgeno y diluir con SSI (diluir 1:10)

Mezclar y colocar 100microlitros de esta suspensin a todos los pozos
Cubrir la placa para evitar desecacin e incubar a 37 C de 20-24 hrs.

Leer la placa y anotar el resultado en la Bitcora de serologia CAL-13-A

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 88 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

TRANSPLANTE DE MEDULA OSEA

CITOMEGALOVIRUS
VIDAS CMV IgG (CMVG)
Diagnostico in vitro
Determinacin inmunoenzimtica de IgG anticitomegalovirus (CMVG) en suero humano
por tcnica ELFA (enzima LINKED flourecente validacin)
El citomegalovirus forma parte de la familia de los herpes virus.
Causa patologas graves tanto en nios como en adultos.
Puede persistir durante aos en la persona infectada
Es causante de infecciones recurrentes
Se puede transmitir a otros individuos.
Existen casos de entre un 60 85% de la poblacin infectada, la mayora se tratan de
casos asintomticos.
Entre el 1 -3% de los casos se da en mujeres embarazadas y en 1 caso de cada 2 la
infeccin se transmite al feto, siendo una infeccin asintomtico.
En 5% de los casos puede tener consecuencias graves como:
Hepato especnomeglia
Hidrocefalia
Micromegalia
Partos prematuros.
La muerte del feto es frecuente.
En infecciones asintomticas el 10% de los nios presentan secuelas neurosensoriales
tales como:
Sordera
Ceguera parcial o total.
Pude causar infecciones severas en personas inmunodeprimidas (infectadas por VIH o
transplantados).
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 89 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

VIDAS CMV IgG es una tecnica automatizada que permite medir cuantitativamente las
IgG anti CMV en suero humano. El principio de determinacin asocia el mtodo
inmunoenzimtico a una lectura final en fluorescencia (ELFA).
Todas las etapas de la reaccin estn controladas por el sistema. El cono de uso nico,
sirve a la vez de fase slida y de sistema de pipeteo El resto de los reactivos estn
listos para su uso y distribucin en el cartucho.

La identificacin del la prueba, el nmero de lote y la fecha de caducidad estn indicadas

sobre el cartucho en un cdigo de barras.
La identificacin de la prueba, el nmero de lote, los parmetros de calibracin y el ttulo
del calibrador, estn indicados claramente y contenidos en un cdigo de barras de la
ficha de especificaciones adjuntas al equipo.
Precauciones:
No mezclar reactivos de lotes diferentes.
Dejar reactivos a temperatura ambiente 30 min. antes de su empleo.
Comprobar que el deshidratante contenido en la bolsa de los conos no cambia de color
(pasa de azul al rosa).
Homogenizar el cartucho con los calibradores, controles y muestras para una mejor
reproducibilidad de los resultados.
Utilizar guantes de ltex de uso nico sin talco.
MUESTRA:
Suero:
No descomplementados
No hemolizados
No contaminados
Se conservan 5 das a 2-8C, congelar a -20C. No congelar y descongelar
sucesivamente.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 90 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

CALIBRACION
Se efectua mediante el estndar incluido en el equipo , se efecta a la llegada de cada
nuevo lote, despus de introducir las especificaciones del lote y se realiza cada 14 das.
El estndar identificado como S1, ser analizado dos veces y el valor debe encontrarse
entre los lmites de RFV fijados. Si no la media no ser memorizada y se tendr que
repetir la calibracin.
CONTROL DE CALIDAD
Se incluye un control positivo y un control negativo en cada equipo, estos controles se
debe utilizar cada vez que se utiliza un nuevo equipo con el fin de verificar la ausencia
de alteraciones de los reactivos. Cada recalibracin debe ser verificada con la ayuda de
estos controles. Si los valores obtenidos de los controles se desvan de los valores
esperados, los resultados no pueden validarse.
La tcnica se puede observar al final del procedimiento.

RESULTADOS
Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automticamente y las
concentraciones en IgG anti CMV del suero o controles son calculados por el equipo.
Los resultados son expresados en Ua/ml respecto a una curva de calibracin
memorizada en el equipo.
Umbral e interpretacin de los resultados
Valor (Ua/ml)
Interpretacin
Menor a 4
Negativo
Mayor o igual a 4 pero menor a
6
Dudoso
Mayor o igual a 6
Positivo

Para valores entre 4 y 6, repetir la prueba.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 91 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

RESULTADOS FUERA DE LA CURVA

Las muestras con resultado mayor de 400 Ua/ml pueden ser diluidas al en suero
fisiolgico. Multiplicar el resultado por el factor de dilucin para obtener el ttulo de la
muestra. Solo diluir las muestras cuyo ttulo puro sea mayor a 400 Ua/ml.

VALOR CRITICO
Determina un aumento significativo del nivel de anticuerpos, equivalente a un aumento
de 4 veces el ttulo de anticuerpos. Este aumento indica que existe una infeccin activa,
y se calcula como sigue:
Valor crtico: Muestra convaleciente Ua/ml / muestra aguda Ua/ml

Valor Crtico
Menor a 2

De 2 a 4

Mayor a 4

Interpertacin
Sin cambio significativo del nivel de
anticuerpos.
Valor crtico evocador de un aumento de
anticuerpos. Una muestra suplementaria
deber ser extrada y analizada entre 7 y 14
das, y reestudiado con la primera para
recalcular el valor crtico.
Aumento del nivel de anticuerpos muy
significativo.

Se recomienda repetir las muestras agudas y convalecientes en la misma lista de trabajo

del VIDAS.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 92 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

VIDAS CMV IgM (CMVM)

Diagnostico in vitro
Pra esta prueba no es recomendable utilizar plasma.
Determinacin cualitativa inmunoenzimtica de IgM anti-citomegalovirus (CMVM) en
suero humano por tcnica ELFA (enzima LINKED flourecente validacin)
El citomegalovirus forma parte de la familia de los herpes virus.
Causa patologas graves tanto en nios como en adultos.
Puede persistir durante aos en la persona infectada
Es causante de infecciones recurrentes
Se puede transmitir a otros individuos.
Existen casos de entre un 60 85% de la poblacin infectada, la mayora se tratan de
casos asintomticos.
Entre el 1 -3% de los casos se da en mujeres embarazadas y en 1 caso de cada 2 la
infeccin se transmite al feto, siendo una infeccin asintomtico.
En 5% de los casos puede tener consecuencias graves como:
Hepato-esplenomegalia
Hidrocefalia
Micromegalia
Partos prematuros.
La muerte del feto es frecuente.
En infecciones asintomticas el 10% de los nios presentan secuelas neurosensoriales
tales como:
Sordera o ceguera parcial o total.
Pude causar infecciones severas en personas inmunodeprimidas ( infectados por VIH o
transplantados).
La deteccin de las I g M anti- CMV puede ser til en el diagnstico de las infecciones
primarias recientes, particularmente en mujeres embarazadas.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 93 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

La deteccin de las IgM puede presentar resultados falsamente positivos debido al factor
reumatoide, y resultados falsamente negativos debido a la presencia de IgG. Problemas
que se evitan con la adsorcin.
El principio de determinacin asocia el mtodo inmunoenzimtico a una lectura final en
fluorescencia (ELFA).
Todas las etapas de la reaccin estn controladas por el sistema. El cono de uso nico,
sirve a la vez de fase slida y de sistema de pipeteo El resto de los reactivos estn
listos para su uso y distribucin en el cartucho.
Una vez adsorbidas las IgG y el factor reumatoide, la muestra es aspirada y expulsada
del interior del cono durante un tiempo determinado. Los anticuerpos IgM anti- CMV
presentes en la muestra van a fijarse en el antgeno CMV fijado en la pared interne del
cono. Las etapas de lavado eliminan los componentes no fijados.
Un anticuerpo monoclonal anti-IgM humano marcado con fosfatasa alcalina es aspirado
y expulsado dentro del cono y se va a fijar en las IgM anti- CMV humanas fijados en la
pared del cono. La etapa de lasvado elimina los componentes no fijados.
La etapa final de revelado, el substrato (4-metil-umbeliferil fosfato) es aspirado y
despus expulsado en el cono; la enzima del conjugado cataliza la reaccin de hidrlisis
de este substrato en un producto (4-metil-umbeliferona) cuya fluorescencia emitida es
medida a 450nm.
La identificacin del la prueba, el nmero de lote y la fecha de caducidad estn indicadas
sobre el cartucho en un cdigo de barras, el primer pocillo tiene una parte precortada
para facilitar la introduccin de la muestra.

Precauciones:
No utilizar reactivos despus de la fecha de caducidad.
No mezclar reactivos o consumibles de equipos diferentes.
Utilizar guantes de ltex de uso nico sin talco (puede provocar falsos).

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 94 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

MUESTRA:
Suero:
No descomplementados
No hemolizados
No contaminados
Se conservan 5 das a 2-8C, congelar a -20C. No congelar y descongelar
sucesivamente.
No sueros lipmicos, bemolizados o contaminados.
CALIBRACION
Se efecta mediante el estndar incluido en el equipo , se efecta a la llegada de cada
nuevo lote, despus de introducir las especificaciones del lote y se realiza cada 14 das.
El estndar identificado como S1, ser analizado dos veces y el valor debe encontrarse
entre los lmites de RFV fijados. Si no la media no ser memorizada y se tendr que
repetir la calibracin.
CONTROL DE CALIDAD
Se incluye un control positivo y un control negativo en cada equipo, estos controles se
debe utilizar cada vez que se utiliza un nuevo equipo con el fin de verificar la ausencia
de alteraciones de los reactivos. Cada recalibracin debe ser verificada con la ayuda de
estos controles.
Para que el aparato pueda verificar el valor de los controles, es necesario identificarlos
mediante C1 y C2.
Si los valores obtenidos del control positivo se desvan del intervalo de confianza
indicado en la etiqueta del frasco. Si el valor se desva de los valores esperados, los
resultados no pueden validarse.
La tcnica se puede observar al final del procedimiento.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 95 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

RESULTADOS
Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automticamente.
El equipo efecta dos medidas de fluorescencia en la cubeta de lectura para cada
prueba:
La primera tiene en cuenta el ruido de fondo debido a la cubeta substrato antes
de ponerse en contacto el substrato con el cono.
La segunda se efecta despus de la incubacin del substrato con la enzima
presente en el cono.
El clculo del RFV es el resultado de la diferencia de las dos medidas. Aparece en la
hoja de resultados.
El ndice i de la prueba es calculado por el instrumento (es la relacin entre la seal
fluorescente encontrada para el suero a analizar con respecto a la seal memorizada del
estndar).
Umbral e interpretacin de los resultados
Indice
Una i menor a 0,70
Cuando i es menor o igual a 0,70 y pero menor a 0,90
Cuando i es mayor o igual a 0,90

Interpretacin
Negativo
Dudoso
Positivo

Para ndices entre 0,70 y 0,90, repetir la prueba.

Si la verificacin vuelve a dar dudosa, se repite el anlisis sobre un nuevo suero tomado
entre 10 y 15 das ms tarde.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 96 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

TOXOPLASMA

VIDAS TOXO IgG II (TXG)

Diagnostico in vitro
Determinacin cuantitativa inmunoenzimtica de las IgG anti-toxoplsmaticas en suero
o plasma humano (anticoagulante permitido EDTA, heparina) por tcnica ELFA (enzima
LINKED flourecente validacin)
Ayuda a conocer el estado inmunitario.
El Toxoplasma gondii, es un protozoario, parsito intracelular obligatorio, es un patgeno
muy extendido en el hombre. Parsito cuyo husped definitivo es el gato, se disemina en
la naturaleza e infecta a numerosos mamferos.
Las afecciones en personas inmunocompetentes es discreto, pero las afecciones fetales
as como en inmunocomprometidos puede ser muy severa.
Mujeres O positivo antes de quedar embarazada, no transmiten el parsito usualmente
el parsito a su hijo.
Mujeres O negativo, son susceptibles de ser infectadas en el curso del embarazo.
La transmisin al feto ocurre durante la fase aguda de la enfermedad.
La gravedad y frecuencia de la afectacin fetal depende de:
Fecha de la infeccin materna
Virulencia de la cepa infectante
Importancia del inculo
Calidad de la respuesta inmune de la madre.
El diagnstico de la infeccin se basa en la exploracin biolgica: bsqueda de
inmunoglobulinas especficas (IgM e IgG).
El diagnstico de una infeccin aguda adquirida durante el embarazo se realiza
poniendo de manifiesto una seroconversin, o por un aumento significativo del ttulo de
anticuerpos detectados en dos muestras secunciales testadas en paralelo.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 97 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

El principio de determinacin asocia el mtodo inmunoenzimtico sndwich

etapas con una lectura final en fluorescencia (ELFA).

en dos

Todas las etapas de la reaccin estn controladas por el sistema. El cono de uso nico,
sirve a la vez de fase slida y de sistema de pipeteo El resto de los reactivos estn
listos para su uso y distribucin en el cartucho.
Todas las etapas de la reaccin estn controladas y son realizadas por el sistema.
En a primera etapa la muestra se diluye, se aspira y expulsa del interior del cono
durante un tiempo determinado. Los anticuerpos anti-T. gondii IgG presentes en la
muestra van a fijarse en los antgenos de T. gondii fijado en el interior del cono. Las
etapas de lavado eliminan los componentes no fijados.
Las IgG de ratn monoclonales anti-IgG humanas conjugadas con fosfatasa alcalina son
expulsadas y aspiradoas del interior del cono y se van a fijar en las IgG humanas fijados
en la pared interna del cono.
La etapa final de revelado, el substrato (4-metil-umbeliferil fosfato) es aspirado y
despus expulsado en el cono; la enzima del conjugado cataliza la reaccin de hidrlisis
de este substrato en un producto (4-metil-umbeliferona) cuya fluorescencia emitida es
medida a 450nm. Proporcional a la concentracin de anticuerpos presentes en la
muestra.
El cono esta sensibilizado con antgeno toxoplsmatico de membrana y citoplsmico,
cada cono est identificado por el cdigo TXG. Se utilizan solo los conos necesarios y
se deje el resto en la bolsa.
La identificacin del la prueba, el nmero de lote y la fecha de caducidad estn indicadas
sobre el cartucho en un cdigo de barras, el primer pocillo tiene una parte precortada
para facilitar la introduccin de la muestra. El ltimo pocillo es una cubeta que permite la
lectura por fluorimetra. Los pocillos intermedios contienen los diferentes reactivos
necesarios para el anlisis.

Precauciones:
No usar reactivos despus de la fecha de caducidad.
No mezclar reactivos o consumibles de lotes diferentes.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 98 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Utilizar guantes de ltex de uso nico sin talco.

Manejar cada reactivo con sumo cuidado.
Homogenizar el cartucho con los calibradores, controles y muestras para una mejor
reproducibilidad de los resultados.
MUESTRA:
Suero o plasma (EDTA, heparina)
No hemolizados
No contaminados

Se conservan 5 das a 2-8C, congelar a -25C. No congelar y descongelar

sucesivamente.
CALIBRACION
Se efecta mediante el estndar incluido en el equipo, se efecta a la llegada de cada
nuevo lote, despus de introducir las especificaciones del lote y se realiza cada 14 das.
El estndar identificado como S1, ser analizado dos veces y el valor debe encontrarse
entre los lmites de RFV fijados. Si no la media no ser memorizada y se tendr que
repetir la calibracin.
CONTROL DE CALIDAD
Se incluye un control positivo y un control negativo en cada equipo, estos controles se
debe utilizar cada vez que se utiliza un nuevo equipo con el fin de verificar la ausencia
de alteraciones de los reactivos. Cada recalibracin debe ser verificada con la ayuda de
estos controles. Si los valores obtenidos de los controles se desvan de los valores
esperados, los resultados no pueden validarse.
La tcnica se puede observar al final del procedimiento.

RESULTADOS
Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automticamente. El equipo
realiza dos lecturas de fluorescencia en la cubeta ptica para cada prueba. La primera
toma en cuenta el ruido de fondo debido a la cubeta y al substrato. La segunda lectura
se realiza despus de la incubacin del substrato en el cono. El clculo de RFV es el
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 99 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

resultado de la diferencia entre ambas lecturas y aparece en la hoja de resultados, se

interpretan en Ul / ml.
Umbral e interpretacin de los resultados
Ttulo (Ul/ml)
Menor a 4
Mayor o igual a 4 pero menor a 8
Mayor o igual a 8

Interpretacin
Negativo
Dudoso
Positivo

RESULTADOS FUERA DE LA CURVA

Las muestras con resultado mayor de 300 Ul/ml pueden ser diluidas al en el control
negativo.
Si el factor de dilucin no se ha indicado en la lista de trabajo, multiplicar el resultado por
el factor de dilucin para obtener la concentracin de la muestra.

VIDAS TOXO IgM (TXM)

Diagnostico in vitro
Determinacin inmunoenzimtica de las IgM anti-toxoplsmaticas en suero humano por
tcnica ELFA (enzima LINKED flourecente validacin). Tras la inmunocaptura de las
IgM del suero, las IgM antitoxoplsmaticas se detectan especficamente gracias a un
inmunocomplejo marcado con fosfatasa alcalina.
Ayuda a conocer el estado inmunitario.
Los reactivos se conservan a 2-8 C y su fecha de caducidad esta indicada en el envase.
Todas las etapas de la reaccin estn controladas por el sistema. El cono de uso nico,
sirve a la vez de fase slida y de sistema de pipeteo El resto de los reactivos estn
listos para su uso y distribucin en el cartucho.
Precauciones:
No usar reactivos despus de la fecha de caducidad.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 100 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

No mezclar reactivos de lotes diferentes.

Los reactivos despus de ser utilizados deben ser correctamente eliminados.
Utilizar guantes de ltex de uso nico sin talco.
Manejar cada reactivo con sumo cuidado y desecharlos adecuadamente.
MUESTRA:
Suero
No hemolizados
No contaminados
Se conservan 5 das a 2-8C, congelar a -20C. No congelar y descongelar
sucesivamente.
CALIBRACION
Se efecta mediante el estndar incluido en el equipo , se efecta a la llegada de cada
nuevo lote, despus de introducir las especificaciones del lote y se realiza cada 14 das.
El estndar identificado como S1, ser analizado dos veces y el valor debe encontrarse
entre los lmites de RFV fijados. Si no la media no ser memorizada y se tendr que
repetir la calibracin.
CONTROL DE CALIDAD
Se incluye un control positivo y un control negativo en cada equipo, estos controles se
debe utilizar cada vez que se utiliza un nuevo equipo con el fin de verificar la ausencia
de alteraciones de los reactivos. Cada recalibracin debe ser verificada con la ayuda de
estos controles. Si los valores obtenidos de los controles se desvan de los valores
esperados, los resultados no pueden validarse.
La tcnica se puede observar al final del procedimiento.

RESULTADOS

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 101 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automticamente y el l ndice i

de la prueba es calculado por el instrumento (es la relacin entre la seal fluorescente
encontrada para el suero a analizar con respecto a la seal memorizada del estndar).

Umbral e interpretacin de los resultados

Indice
Una i menor a 0,55
Cuando i es menor o igual a 0,55 pero menor a 0,65
Cuando i es mayor o igual a 0,65

Interpretacin
Negativo
Dudoso
Positivo

Para ndices entre 0,55 y 0,65, repetir la prueba.

Si la verificacin vuelve a dar dudosa, se repite el anlisis sobre un nuevo suero tomado.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 102 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

El equipo Mini VIDAS se enciende con el interruptor que se encuentra en la parte de abajo en la zona de en medio a un lado del cable de
conexin

Mini VIDAS BOOT R1.13

MES DIA AO HORA: MINUTOS: SEG
1992 bioMerieox Vitek, Inc.
All Rights Reserved
Booting ..

Initializing
Please wait ..

Se puede introducir el cartucho en cualquiera

de los RAP de muestra A y B

Se introduce el cartucho para que la zona con

el punto verde se siga viendo.

Inicializar seccin .
Pantalla de estado
Men de calibracin ..
Men de resultados ..
Men de utilidades

Error codigo de barras: #

Hora:
da/mes/ao
Atencin: Estandar de Prueba
# caducidad

Reporta cada estandar caducado

Inicializar seccin .
Pantalla de estado
Men de calibracin ..
Men de resultados ..
Men de utilidades

Cuando se introduce un kit nuevo en la

charola

Dar click en Men de calibracin...

Lectura del lote .

Introd. Manual del lote patrn
Introd. Hoja manual TOS ....
Lista de standares memorizado.
Lista de lote patrn ,

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 103 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Seleccionar
Lista de standards memorizados..

Se observa en la pantalla la prueba a realizar

TXG
TXM ..
HIV4 .

Buscando estandares

Nombre de la Prueba
Lote: #
HR.: MIN.: SEG
DIA/MES/AO
Caducidad : HR:MIN:SEG
DIA/MES/AO
# : #
BORRAR...

Como es un Kit nuevo se introduce la

informacin

Lectura del lote .

Introd. Manual del lote patrn
Introd. Hoja manual TOS ....
Lista de standares memorizado.
Lista de lote patrn ,

Seleccionar Lectura del lote ...

Seccin A ..
Seccin B ..

Se pone la tarjeta de codigo de barras en la

charola y se introduce en A o en B

Por favor, espere .

Si algun codigo de barras esta daado manda

el siguiente mensaje

Error codigo de barras: #

Hora: HR: MIN: SEG DIA/MES/AO
Datos tarjeta MLE
incorrectos

Seleccionar
Introd. Manual del lote patrn...

Lectura automtica
1/16|
BORRAR.
DEFECTUOSO O # DE CODIGO DE
BARRAS

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 104 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

A B C ..Z +

Se debe verificar todos para ver cual es que

esta mal

Cuando llego al 16 / 16 se da un regreso de

pantalla

Datos de lote incorrectos

Editar de nuevo?
SI .
NO .
Seleccionar

SI .

Se observa la siguiente pantalla

Lectura del lote .

Introd. Manual del lote patrn
Introd. Hoja manual TOS ....
Lista de standares memorizado.
Lista de lote patrn ,

Dar un regreso de pantalla a la principal

Inicializar seccin .
Pantalla de estado
Men de calibracin ..
Men de resultados ..
Men de utilidades

Seleccionar Pantalla de estado ..

A
B

Disponible ..
Disponible ..
Visualizar

temp.

Seleccionar
Visualizar temp.

Temperatura
Bandeja
A: #
B: #

Conos
#
#
Imprimir .

Dar un regreso de pantalla a la principal

A
B

Disponible ..
Disponible ..
Visualizar

A o B

CAL-02-B

temp.

en la charola que se desea trabajar

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 105 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Seccin A
1
2
3
# de cartuchos que puedes utilizar
COMENZANDO .

Selecciono el # 1

Posicin

A1
S .
C..
Test .
Dilucin ..
ID Muestra ....

Se S

Se tienen 2 standares

Introducir el nmero de estndar (1-4)

Seleccionar el # 1

Posicin

A1

S1

S .
C..
Test .
Dilucin ..
ID Muestra ....

Seleccionar Test ...

Programas a utilizar
CH2
CHB
CDA2
CDB
Para seleccionarla moverte con las fechas

Seleccionar el que se va a utilizar

Por favor, esperar

Dar un regreso de pantalla a la principal

Posicin
S1

Programa utilizado

A1
S......
C..
Test .
Dilucin ..
ID Muestra ....

Paso a la siguiente posicin

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 106 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Seleccionar C ..
e introducir # controles

Selecciono ID Muestra .

Posicin
Nombre
A

# ID

completo

Borrar .
..
M1 .
M2....

Moverse con las flechas

No da espacios

Cuando ya no se desea colocar otra muestra

se busca el simbolo de pantalla siguiente

Por favor, esperar

Seleccionar Test ...
Seleccionar Borrar ...

Borar configuracin de la posicin

Borar configuracin de la seccin...

Seleccionar
Borar configuracin de la posicin...

Posicin
S1

Programa utilizado

A #
S......
C..
Test .
Dilucin ..
ID Muestra ....

Se observa lo que se programo:

1
2
3
4
Nombre

Seccin A
Nombre de la Prueba S1
Nombre de la Prueba S2
Control
C1
Control
C2
completo del donador o paciente
COMENZANDO ...

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 107 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Los frascos de los reactivos

VIDAS HIV DUO
C1 Control +
VIDAS HIV DUO
C2 Control VIDAS HIV DUO
S1 Estandar

Agitar en el vortex

Adicionar 100microlitros del reactivo

correspondiente y colocar el cartucho en el
orificio que tiene suero o plasma, cerrar la
puerta A o B. Presionar
COMENZANDO.
Aparece en la pantalla lo siguiente:
ID Tcnico
1:
2:
3:

Seleccionar el # corresspondiente al nombre

del Qumico que esta realizando la prueba

Cdigo de barras
Disponible ..
Visualizar temperatura ...

Comenzando

Disponible ..
Visualizar temperatura ...

RUN

Disponible ..
Visualizar temperatura ...

INICIAR EL PROCESO

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 108 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

VIRUS DE EPSTEIN BAAR

VIRONOSTIKA EBV VCA IgM e IgG
Es un enzimoinmunoensayo ELISA para la determinacin cualitativa y semicuantitativa
de anticuerpos IgM o IgG frente al Antgeno de la Cpside del Virus Epstein Barr en
suero o plasma humano. Esta indicado como ayuda en el diagnstico de infeccin por
EBV primaria o reactivada.
El virus Epstein Barr es el agente etiolgico de la mononucleosis infecciosa (MI) e
interviene en el linfoma de Burkitt y en el carcinoma nasofarngeo.
El pptido p18 VCA, una protena marcadora especfica del VCA recin definida nica
del EBV, se utiliza en el Vironostika EBV VCA IgM junto con un anticuerpo monoclonal
especfico de p18 VCA como conjugado. Pptido formado po 56 aminocidos
codificados por la secuencia de inicio de lectura BRRF3. Para IgG se utiliza anti-IgG
humana de cabra como conjugado. Pptido, bien caracterizado, est formado por 56
amonocidos codificados por la secuencia de inicio de lectura BRRF3.
En IgM la tcnica se fundamenta en el principio de captura de anticuerpos, los pocillos
se hallan recubiertos de anticuerpo monoclonal contra IgM humano que constituye la
fase slida. En IgG la tcnica se fundamenta en el principio de sndwich, los pocillos se
hallan recubiertos con pptidos sintticos p18 EBV VCA que constituye la fase slida.

RESULTADOS CUALITATIVOS
IgM
Los clculos deben efectuarse por separado para cada soporte de tiras.
Validez de la prueba
Abreviaturas:
Cal I: Absorbancia del calibrador I
Cal II: Absorbancia del calibrador II
Cal IV: Absorbancia del calibrador IV
1. Cal I debe ser menor a 0,300
2. Determinar el valor medio de Cal II (Cal IIx)
Cal II debe ser mayor o igual a 0,75 Cal IIx menor o igual y 1,25 Cal IIx
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 109 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Si un (mximo de un ) replicado de Cal II no cumple esta condicin, eliminar el

ms externo, y volver a calcular Cal IIx para la calificacin de los replicados Cal II
restantes.
3. Cal IV - Cal IIx debe ser mayor a 0,600.
Un ensayo es vlido si se cumplen los criterio indicados anteriormente.
Valor cutoff
Si el ensayo es vlido, el valor del cuoff= Cal IIx.
RESULTADOS
Una muestra es reactiva para anticuerpos IgM contra EBV VCA si la absorbancia de
la muestra es mayor o igual del valor del cutoff.
Una muestra es no reactiva para anticuerpos IgM contra EBV VCA si la absorbancia
es menor del valor del cutoff.
IgG
Los clculos deben efectuarse por separado para cada soporte de tiras.
Validez de la prueba
Abreviaturas:
Cal I: Absorbancia del calibrador I
Cal II: Absorbancia del calibrador II
Cal IV: Absorbancia del calibrador IV
1. Cal II debe ser menor a 0,250
2. Determinar el valor medio de Cal II (Cal IIx)
Cal II debe ser mayor o igual a 0,75 Cal IIx menor o igual y 1,25 Cal IIx
Si un (mximo de un ) replicado de Cal II no cumple esta condicin, eliminar el
ms externo, y volver a calcular Cal IIx para la calificacin de los replicados Cal II
restantes.
3. Cal IV - Cal IIx debe ser mayor a 0,750.
Un ensayo es vlido si se cumplen los criterio indicados anteriormente.
Valor cutoff
Si el ensayo es vlido, el valor del cuoff= Cal IIx.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 110 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

RESULTADOS
Una muestra es reactiva para anticuerpos IgG contra EBV VCA si la absorbancia de
la muestra es mayor o igual del valor del cutoff.
Una muestra es no reactiva para anticuerpos IgG contra EBV VCA si la absorbancia
es menor del valor del cutoff.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 111 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

El Tcnico de Serologia escribe en la bitcora para anlisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras, calibradores (los
pocillos no se pueden marcar ) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificacin del anlisis.

Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el
anlisis ( la muestra puede ser plasma o suero). Se realiza una dilucin 1:101 en un tubo previamente marcado (1ml del diluyente de
muestras +10microlitros de la muestra) se homogeniza con la misma punta y la deja la punta dentro del tubo

De la placa e deja la primera tira para puros controles y empezando con la segunda tira se coloca 100microlitros simultaneamente en la placa
para IgM y en la de IgG de la dilucin de la muestra.

Se corrobora que los reactivos para las IgG e IgM estan bien identificados y se procede a colocarlos en los respectivos pocillos

Coloco en los pocillo 100microlitros de cada CALIBRADOR

para IgM que contienen:

Coloco en los pocillo 100microlitros de cada CALIBRADOR

para IgG que contienen:

CALIBRADOR 1: 5 U
CALIBRADOR 2: 20 U
CALIBRADOR 3: 80U
CALIBRADOR 4: 140U

CALIBRADOR 1: 10 U
CALIBRADOR 2: 20 U
CALIBRADOR 3: 110U
CALIBRADOR 4: 170U

POR DUPLICADO CADA CALIBRADOR

POR DUPLICADO CADA CALIBRADOR

EJEMPLO:
POCILLO 1 y 2 CALIBRADOR 1
POCILLO 3 y 4 CALIBRADOR 2
POCILLO 5 y 6 CALIBRADOR 3
POCILLO 7 y 8 CALIBRADOR 4
(por eso se deja una linea para calibradores)

Tapo las placas con cinta ahesiva y se pone a incubar durante 1 hr. a 37 C

Prepara una solucin Buffer de fostatos 1:25 (480ml de agua destilada + 20ml de Buffer de fostatos) y con ella realizo el lavado.

Lavo con el LP 35 SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR (Programa 5 con 4 cliclos)

CONJUGADO PARA IgM

El conjugado que se va aprepar a continuacin requiere como minimo
10 min para su preparacin por lo que se debe prepara con
anterioridad para que se encusntre homogenizado a la hora de
colocar en los pocillos.
PREPARACION DEL CONJUGADO:
En el frasco que contiene la solucin de reconstituyente de conjugado
adiciono 5ml de la solucin reconstituyente de conjugado y pongo a
agitar hasta que se encuentra homogeo. Cuando se encuentra
totalmente resuspendido se agregan 100microlitros de conjugado.

CONJUGADO PARA IgG

PREPARACION DEL CONJUGADO:
Para dos tiras aproximadamente
Se toman 2.5ml de diluyente de conjugado y se mezcla con
50microlitros de conjugado, y se homegeniza y se agregan
100microlitros de conjugado

Tapo las placas con cinta ahesiva y se pone a incubar durante 1 hr. a 37 C

Lavo con el LP 35 SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR (Programa 5 con 4 cliclos)

Se adicionan 100microlitros de TMB y se deja a temperatura de entre 18-.22 C durante 30 min. y se para la reaccin con 200microlitros de
solucin de acido sulfurico 1N

Una hora despues se realiza la lectura aen el LP 400 SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR a 450nm

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 112 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

EQUIPO MINI VIDAS

Se utiliza para realizar las siguientes pruebas:
Elisa de 4ta Generacin, detecta Ag p24 y Ac HIV-1/2
En paciente con T.M.O. para Citomegalovirus y Toxoplasmosis.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 113 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

SANOFI DIAGNOSTICS PATEUR LP 35

El equipo SANOFI DIAGNOSTICS PATEUR LP 35 se enciende con el interruptor que se encuentra en la

El equipo tiene 3 botes: 1. Solucin de lavado, 2. Agua destilada y 3. Desechos

Primero se realiza el mantenimiento:

En la pantalla se observa los siguiente:

WASH?
N/
WASH PARM?
RIUSE?
Y/

WASH?
W/TEST NUM:01?
Y/

WASH?
W/CYCLES NUM: 04?
Y/

WASH?
W/STRIPS NUM:04?
Y/

WO1/ CYC:4/ST:04?
Y/

Se cambian las mangueras a la solucin de lavado

Lavado de la muestra

WASH?
W/TEST NUM:01?
Y/

WASH?
W/CYCLES NUM: 05?
Y/

WASH?
W/STRIPS NUM:04?
Y/

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 114 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

ESPECTROFOTOMETRO SANOFI PASTEUR LP 400

El Equipo SANOFI PASTEUR LP 400 se enciende con el interruptor que se encuentra en la parte del frente del
equipo e inmediatamente checa los filtros.

En la pantalla se observa los siguiente:

SELF TEST REPORT

ENTER

LP 400
(FAST) (START) (DATA) (ASSAY) (SETUP)

Colocar la placa y presionar (DATA)

DATA: SELECT DATA MANIP. FUNTION

(IDENT) (LIST) (RECALC) ( DIR) (CLEAR)

Presinar (IDENT)

DATA/IDENT: ENTER ID KEYS/BARCODE

PLATE ID:

Se escribe la fecha como identificacin y se presiona

(ENTER)

DATA/IDENT: SELECT ASSAY (NUM/CURSOS)

ASSAY NR:

Presionar el # asignado a la prueba que desea realizar

que va del 1 al 7

Se observa en la pantalla # - Prueba seleccionada

presionar (ENTER)

DATA/IDENT: ENTER ID KEYS/BARCODE

FIRST SAMPLE ID:

Seleccionar el # 1 y presionar (ENTER)

DATA/IDENT: TOTAL NUMBER OF SAMPLES

n:

Seleccionar el # de pocillos que desea que se lean

(sin contar blanco, controles internos y externos),
Teclear el # y dar un (ENTER)

DATA/IDENT: INCREMENT FOR SAMPLE ID

I=
# DE

Seleccionar el # 1 y presionar (ENTER)

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 115 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

IDENTIFICACION
# SAMPLES PUT ON 1 PLATE (S)

Presionar (ENTER)

LP 400
(FAST) (START) (DATA) (ASSAY) (SETUP)

Presionar (START)

START: SELECT PLATE W/ CURSOR

Nr. 1-ID: Fecha que puse como identificacin identified

Presionar (ENTER)

START: PRINTOUT INMEDIATELY?

(YES) (NO)

Presionar (YES)

MEASURING
450
620

PRINTING
ASSAY # (# de prueba)

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 116 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Incubadora ABBOTT COMMANDER

La incubadora ABBOTT COMMANDER se enciende con el interruptor que se encuentra en la
parte de atras del equipo

Se presiona el botn que indica la temperatura que se desea y se observa que aparece en la pantalla

Se indica en cual carril se pondra el soporte que contiene la prueba y se presiona el #

La pantalla se pone en ceros para que se especifique el tiempo a los que desea suene la alarma

Una vez que se introduce la prueba se presiona el # de carril donde se metio y empieza a correr el tiempo

Una vez que pasa el tiempo especificado suena la alarma y se puede sacar la placa introducida

La bitcora de Resultados de Serologia CAL-13-A debido a su tamao no se muestra

dentro de este procedimiento.
La bitcora de Resultados de Serologia CAL-13-A se llena de la siguiente manera:
Fecha:
No.:
Disponente:

Da, mes y ao en que se realiz la toma de

muestra.
Nmero asignado en toma de muestra.
Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s) del
donador.

Para la valoracin de los siguientes datos se toma en cuenta las especificaciones

que se encuentran en la NOM-003-SSA2-1993.
Hematologa
Hto:
Hb:
Leu:
Plq:
Prot:
CAL-02-B

Hematocrito el valor es obtenido del equipo Sysmex.

Hemoglobina el valor es obtenido del equipo
Sysmex.
Leucocitos el valor es obtenido del equipo Sysmex.
Plaquetas el valor es obtenido del equipo Sysmex.
Se deja el espacio vaci.

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 117 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Sistema ABO
Se especifica en el recuadro correspondiente la letra(s) del grupo sanguneo o se
palomea.
A, B, AB, O:
A1, H:

Tipos de Grupo sanguneo del Sistema A,B,O del

donador .
Subgrupos sanguneos de A cuando el donador
es del grupo sanguneo A.
(Ver procedimiento CAL- 25)

Se especifica en el recuadro correspondiente la palabra del factor sanguneo o se

palomea.
Pos.
Neg.

Factor sanguneo positivo.

Factor sanguneo negativo. Cuando el Rh es negativo
se realiza la confirmacin en el sistema DianaGel antiD (Ver procedimiento CAL- 25)
Se especifica si es negativo (-) o positivo (+) .

Los siguientes datos se toman del formato F-A-14-23:

D, C, E, e, c:

SRr

Se realizan por medio del sistema DianaGel anti-D

(Ver procedimiento CAL-25), los resultados de la
lectura del fenotipo se reportan como positivo(+) o
negativo (-) en el cuadro correspondiente.
La resultados de la lectura del fenotipo se lee en
CAL-13-B.

RASTREO DE Abi FSABO

Este anlisis se realiza a:
Todas las mujeres donadoras.
Personas politransfundidas.
Como rutina el anlisis se realiza con el REAGENT RED BLOOD CELLS FOR
ANTIBODY DETECTION
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 118 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Post.

Negt.

Ab

Cuando el anlisis de rutina es positivo se debe de

realizar una prueba ms especifica con los reactivos
que son surtidos por el Banco de Sangre del Instituto
Mexicano del Seguro Social (presenta fecha de
caducidad). Para resultados positivos se palomea el
cuadro o se escribe la palabra positivo y se
establece la especie del mismo
(Ver procedimiento CAL- 25)
Cuando el anlisis de rutina es negativo se palomea
el cuadro o se escribe la palabra negativo
(Ver procedimiento CAL- 25).
Se deja el espacio vaci.

HEMOLISINAS

Este anlisis se realiza solo a Personas con grupo sanguneo O (Ver Procedimiento
CAL- 25)
Negt.
Post.

Se palomea el cuadro cuando es negativo.

Se palomea el cuadro cuando es positivo.

SEROLOGIA BASICA
Las Pruebas serlogicas siguientes son realizadas a todas las muestras de los
donadores y son reportan como:
Reactiva Se sella con esta leyenda cuando se considera que el anlisis de la
muestra presenta una probable infeccin. Se realiza la Prueba confirmatoria con
la 1era muestra y una ELISA con la segunda muestra
(Ver procedimiento CAL- 26).
Negativo Se sella con esta leyenda cuando no presenta la enfermedad (Ver
procedimiento CAL- 26).

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 119 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Serologia bsica:
VIH Detecta la presencia de anticuerpos contra el virus de Sndrome de
Inmunodeficiencia Adquirida.
AgsHB
Detecta la presencia del Antgeno de superficie de la
Hepatitis B.
HCV
Detecta el anticuerpo para la Hepatitis C.
BRUCELLA
Detecta el anticuerpo para la Brucella.
V.D.R.L.
Detecta el anticuerpo contra el Treponema pallidum.

CHAGAS

Detecta el anticuerpo contra el Tripanosoma cruzi.

Diferentes tcnicas para realizar la deteccin:

HAI
ELISA
Los siguientes anlisis se realizan en los siguientes casos:
Pacientes en tratamiento de medula sea.
Pacientes o donadores con solicitud de Mdica.
CMV
IgM
IgG

Citomegalovirus
Inmunoglobulina M
Inmunoglobulina G

IgG
IgM

Toxoplasma
Inmunoglobulina G
Inmunoglobulina M

IgM
IgG

Virus Eimtein Barr

Inmunoglobulina M
Inmunoglobulina G

TOXO

EVB

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 120 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

Pruebas confirmatorias:
WB I
WB II
RIB

Para detectar anticuerpos para H.I.V.1

Para detectar anticuerpos para H.I.V.2
Para detectar anticuerpos para H.C.V.

CONFIRMATORIAS
NEUTRALIZACIN
Ag BLANCO
MERCAP
TP/PA

PBS. ESPECIALES
Citometra
CD34
Carga viral

Prueba confirmatoria para Hepatitis B.

Prueba confirmatoria para Brucella
Prueba confirmatoria para Chagas
Prueba confirmatoria para Sifilis

Pruebas especificas de Control de calidad.

Pruebas especificas de Control de calidad
Pruebas especificas de Control de calidad.
(Ver procedimiento CAL- 47).

OBSERVACIONES: Para escribir ms informacin sobre el anlisis de la muestra.

REALIZO: Escribir la rubrica o poner el sello de las personas que llena la bitcora.
Al finalizar el llenado de la bitcora el personal de Serologa debe incluir el siguiente
sello con la informacin que se le solicita para cada Enfermedad que fue analizada.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-26
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 121 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Tcnicas de Serologa

REGISTROS
La Bitcora de resultados de Serologia CAL-13-A se guarda durante 1 ao en
archivo activo y 1 ao en archivo muerto.

LISTA DE DISTRIBUCION

Laboratorista:

____________________________________

Laboratorista:

____________________________________

Laboratorista:

____________________________________

Suplentes:

____________________________________

Suplentes:

____________________________________

Suplentes:

____________________________________

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-27
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 15 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 122 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de almacenamiento de los
productos obtenidos de la Sangre Total

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-27
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 15 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 123 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de almacenamiento de los
productos obtenidos de la Sangre Total

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Ninguno

15/08/03

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-27
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 15 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 124 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de almacenamiento de los
productos obtenidos de la Sangre Total

DESCRIPCION DEL PROCESO

Una vez que se ha llevado a cabo el fraccionamiento de la muestra (Ver
procedimiento CAL-21) y etiquetado se requiere guardar cada uno de los
productos de la siguiente manera para su adecuada conservacin:

PRODUCTO

Concentrado de Eritrocitos
Concentrado de Eritrocitos leucorreducido prealmacenamiento
Concentrado de Eritrocitos lavados (con solucin salina al 0.9%)
Concentrado de Plaquetas
Plasma fresco
Plasma envejecido
Crioprecipitado

TEMPERATURA
DE
CONSERVACION
+1 a +6 C
+1 a +6 C
+1 a +6 C
+20 a +24 C*
-18 C o menor **
-18 C o menor **
-18 C o menor **

Es recomendable irradiar las unidades de sangre y componentes sanguneos

celulares, con una dosis mnima de 1,500 cGy (1,500 rads) para reducir el riesgo
de enfermedades injerto contra husped, en los receptores que se encuentren en
los casos siguientes:
a) Fetos receptores de transfusiones intrauterinas;
b) Exsanguineotransfusin en prematuros y en recin nacidos de peso
corporal inferior a 1,000g;
c) Pacientes seleccionados inmunocomprometidos;
d) Receptores que han sido sometidos a trasplante de mdula sea;
e) Receptores de unidades provenientes de familiares consanguneos de
primer grado.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-27
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 15 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 125 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de almacenamiento de los
productos obtenidos de la Sangre Total

La sangre o componentes celulares irradiados puede ser aplicados a receptores

inmunolgicamente normales. Los CE irradiados despus de 5 das se deben de
lavar.
La temperatura de los refrigeradores, congeladores e incubadoras que almacenan
sangre, componentes sanguneos, muestras o reactivos, se debern registrar
cuando menos cada ocho horas, aunque tengan graficador automtico y un
sistema de alarma audible. Los equipos sin indicador de temperatura, debern
tener en su interior un termmetro, en caso de refrigeradores y de utilizarse
termmetros de laboratorio, el bulbo de ste deber estar sumergido en glicerina
al 10% y, tratndose de congeladores, en glicerina al 50%.
La vigencia mxima del Concentrado de Eritrocitos y Concentrado de Eritrocitos
pobre en leucocitos a partir de la recoleccin depende del sistema y del
anticoagulante:
Para sistemas cerrados son:
ANTICOAGULANTE
Heparina
ACD
CPD
CPDA-1
ACD-SAGMANITOL
CPDA-MANITOL

VIGENCIA MAXIMA
2 das
21 das
21 das
35 das
42 das
45 das

Para sistemas abiertos, bajo condiciones de esterilidad (dentro de la campana

de flujo laminar), la vigencia mxima ser de 24 hrs conservndose entre +1 y
+6 C y de 4hrs. si se conserva entre +20 y +24 C (Las unidades que se
conservan en congelacin mantienen el periodo de vigencia segn el
producto):
La vigencia mxima del Concentrado de Eritrocitos lavados a partir de la
recoleccin es de 4 hrs, a partir de su preparacin.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-27
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 15 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 126 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de almacenamiento de los
productos obtenidos de la Sangre Total

Las plaquetas por fraccionamiento y por Afresis podrn conservarse durante 5

das a +20 y +24 C y agitacin constante.
El Plasma Fresco Congelado, el Plasma sin Factor tiene una duracin de 1 ao
a 35 C
El Plasma envejecido tiene una duracin de 1 aos a 18 C y entre +1 y +6 C
de 26 das (con ACD o con CPD); 40 das (con CPDA ) 12 meses.
El Plasma fresco tiene una duracin de 12 hrs, una vez descongelado.
El Crioprecipitado a 18 C o menor tiene una duracin de 1 ao y de 6 hrs,
una vez descongelado.
**El factor VIII de la coagulacin que contiene el crioprecipitado se preserva
mejor cuando el plasma fresco y crioprecipitado se conservan a temperatura de
30 C o menores.

Los productos se acomodan por grupo, y orden numrico, del menor al mayor, de
derecha a izquierda y del frente hacia atrs

REGISTROS
Los Registro de temperaturas se guardan durante 5 aos en archivo activo y 5
aos en archivo muerto.
LISTA DE DISTRIBUCION
Qumico:

__________________________

Qumico:

__________________________

Qumico:

__________________________

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-27
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 15 de Agosto 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 127 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de almacenamiento de los
productos obtenidos de la Sangre Total

Laboratorista:

__________________________

Laboratorista:

__________________________

Laboratorista:

__________________________

Laboratorista:

__________________________

Laboratorista:

__________________________

Laboratorista:

__________________________

Laboratorista:

__________________________

Tcnico laboratorista:

__________________________

Tcnico laboratorista:

__________________________

Auxiliar laboratorista:

__________________________

Auxiliar laboratorista:

__________________________

Suplentes:

__________________________

Suplentes:

__________________________

Suplentes:

__________________________

Suplentes:

__________________________

Suplentes:

__________________________

Suplentes:

__________________________

CAL-02-B

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-28
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 26 JULIO 2006
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 129 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recepcin y entrega
de los productos en el laboratorio

CAMBIO

1.

CAL-02-B

Se modifica titulo del

procedimiento.
2.

REVISIN

FECHA

15/08/03

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-28
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 26 JULIO 2006
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 130 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recepcin y entrega
de los productos en el laboratorio

DESCRIPCION DEL PROCESO

La solicitud y la entrega de los diferentes productos se realiza de la siguiente
manera:

El formato A-13-14-07 es llenado por el Mdico tratante que solicita el producto y

se muestra a continuacin:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-28
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 26 JULIO 2006
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 131 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recepcin y entrega
de los productos en el laboratorio

El formato A-13-14-07 es llenado por el Qumico, Laboratorista, Tcnico del

Laboratorio, (ocasionalmente el Mdico) del Banco de Sangre que recibe, procesa
y asigna el producto solicitado:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-28
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 26 JULIO 2006
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 132 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recepcin y entrega
de los productos en el laboratorio

El formato M-3-0-21 es llenado por el Mdico tratante que solicita el producto y se

muestra a continuacin:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-28
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 26 JULIO 2006
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 133 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recepcin y entrega
de los productos en el laboratorio
La bitcora CAL-28-A es llenada por el Mdico tratante, enfermera, solicitante o
mensajero que pide el producto, por su tamao no se muestra.
La bitcora CAL-28-B se llena de la siguiente manera:
Fecha:

Da, mes y ao en que se realiza lo solicitado

Registro de la unidad:

# que se indica como Unidad en el paquete o # de

frascos que se entregan.

Nombre del donador:

Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del

donador.

Producto:

Tipo de producto que se solicito (CP, CE, PFC,

Albmina, Factor VIII y IX.

Grupo sanguneo:

Tipo de sangre del donador (A, B, AB u O) y

Factor Rh.

Volumen que contiene

la bolsa del producto:
Quien realiza el estudio:
Compatibilidad:
# de entrada:

Cantidad en unidades o mililitros que contiene

la bolsa
Personal del rea de Inmunohematologia que
realiza el estudio o la separacin del producto, etc.
El resultado que dio la prueba de compatibilidad
# consecutivo solicitud el producto.

Registro del paciente:

# que fue designado por la institucin en su

credencial de afiliado.

Nombre del paciente:

Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del

paciente

Grupo sanguneo:

CAL-02-B

Tipo de sangre del donador (A, B, AB u O) y Factor

Rh.

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-28
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 26 JULIO 2006
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 134 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recepcin y entrega
de los productos en el laboratorio
Servicio al que pertenece:
Cama:

Fecha:
Hora:
Volumen:

Nombre:

Nombre:

# de egreso:

rea o servicio que solicito el producto.

# de cama donde se encuentra el paciente.

Da, mes y ao en que se egresa el producto.

Hora de egreso del producto.
Cantidad que se le entrega de producto.
Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s),
clave o sello personal de la enfermera o mensajero
que recibe el producto.
Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s),
clave o sello personal del Laboratorista, Qumico,
Tcnico que entrega el producto.
# consecutivo de entrega el producto (con la letra
asignada segn el turno).

REGISTROS
La bitcora CAL-28-A se almacena 5 aos en el archivo activo y 5 aos en el
archivo muerto.
La bitcora CAL-28-B se almacena 5 aos en el archivo activo y 5 aos en el
archivo muerto.
El formato A-13-14-07 se almacena 5 aos en el archivo activo y 5 aos en el
archivo muerto.
El formato M-3-0-21 se almacena 5 aos en el archivo activo y 5 aos en el
archivo muerto.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-28
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 26 JULIO 2006
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 135 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recepcin y entrega
de los productos en el laboratorio

LISTA DE DISTRIBUCION
Qumico:

__________________________

Qumico:

__________________________

Qumico:

__________________________

Laboratorista:

__________________________

Laboratorista:

__________________________

Laboratorista:

__________________________

Tcnico laboratorista:

__________________________

Tcnico laboratorista:

__________________________

Tcnico laboratorista:

__________________________

Suplentes:

__________________________

Suplentes:

__________________________

Suplentes:

__________________________

Suplentes:

__________________________

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-30
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 10 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 136 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin de venas y somatometra

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre: IRMA GUTIERREZ Nombre: DRA. MARGARITA Nombre: DRA. DINORA

LETICIA MEDINA MACIAS
AGUILAR ESCOBAR
Firma:

Firma:

Firma:

Fecha: 27 JUNIO 2011

Fecha: 27 JUNIO 2011

Fecha: 10 JUNIO 2011

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-30
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 10 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 137 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin de venas y somatometra

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Se agrega el sistema informtico de

banco de sangre y el sistema Kanban

10/06/2011

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-30
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 10 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 138 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin de venas y somatometra

DESCRIPCION DEL PROCESO

Una vez que el donador ha sido registrado (Ver procedimiento CAL-20) se procede
de la siguiente manera
La Enfermera toma del Kanban ubicado en el rea de recepcin la
ficha de identificacin del donador M-3-0-23 M-3-0-10-a (Historia
clnica en proceso manual) con nmero de control interno de
ingreso a recepcin
De la ficha de identificacin del donador M-3-0-23 observa el
nombre completo del candidato a donador, lo llama y le indica que
pase a la sala donde se le realizar la valoracin de sus venas y
somatrometra

La enfermera solicita al candidato a donador se suba a la bscula

para tener su peso, pregunta su estatura o lo mide y los registra en
la parte inferior del formato M-3-0-23 M-3-0-10-a si es manual

Pide descubra y extienda ambos brazos para valorar sus venas e

indicar con una M el sitio de toma de muestra

si
El donador tiene mala
calidad de venas?
no
Pregunta y revisa si tiene algn dibujo, herida o tatuaje (menos de 1 ao de
realizado) NOM 003-SSA2-1993

si
El donador presenta alguna
herida o tatuaje
no
Se toma temperatura tensin Arterial (TA), Frecuencia Respiratoria
(FR), Frecuencia Cardiaca (FC)

Se registran los resultados en la parte inferior de el formato M-3-0-10-a en la

Historia clnica M-3-0-10-b inciso L, cuando es proceso manual y firma de
responsable.
Observa si los valores se encuentran dentro de los lmites establecidos
por la especificaciones indicada en la norma NOM-003-SSA2-1993,
ingresa estos datos al sistema informtico de banco de sangre
no
Valores OK?

si

Deja en el Kanban del rea de toma de muestras la ficha de

identificacin con formato M-3-0-23, y la historia Clnica con
formato M-3-0-10 slo en proceso manual, para continuar con la
Valoracin mdica (Ver Procedimiento CAL-40)

CAL-02-B

Se descarta al
candidato como
donador
y se avisa a Trabajo
social y al Mdico
para que le indique
la causa del
rechazo, el mdico
la anota en ficha de
Identificacin con
formato M-3-0-23.

Mdico pasa a
Trabajo social la
ficha de
Identificacin con
formato M-3-0-23.
para que haga
evaluacin social y/
o reprogramacin
de cita

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-30
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 10 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 139 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin de venas y somatometra

La Ficha de Identificacin del donante (M-0-3-0-23) en donde se registran los

datos de enfermera se encuentra en la parte inferior en donde dice uso exclusivo
de enfermera y se muestra a continuacin:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-30
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 10 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 140 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin de venas y somatometra

La ficha de identificacin del donador (M-3-0-23) cuando el sistema es manual se

muestra a continuacin:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-30
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 10 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 141 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin de venas y somatometra

Cuando el procedimiento es manual se registra en La Historia clnica de

candidatos a donacin M-3-0-10-b inciso L) EXPLORACION FISICA y se muestra
a continuacin.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-30
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 10 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 142 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin de venas y somatometra

En el formato electrnico de historia clnica, se registran los datos de

somatometra por el personal de enfermera y se muestra a continuacin:

El formato M-3-0-10-b se inciso L) EXPLORACION FISICA y el formato M-3-0-23

se llenan de la siguiente manera:
Peso:
Talla:
FC:

CAL-02-B

Cantidad en Kg que pesa el candidato a donar.

La estatura que indica el candidato.
Frecuencia Cardiaca (Latidos por minuto) que presenta el
candidato.

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-30
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 10 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 143 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin de venas y somatometra

FR:

T/A:
Temperatura:

Frecuencia Respiratoria (Respiraciones por minuto) que

presenta el candidato (puede tomar la mitad del tiempo y
calcularlo).
Tensin Arterial que presenta el candidato.
Temperatura que indica el termmetro colocado debajo del
brazo izquierdo del candidato

Nota: El formato M-3-0-23 debe estar lleno previamente por la recepcionista con
los datos generales y el consentimiento informado firmado por el donador
(Ver procedimiento CAL-20). En caso manual los candidatos a donar
llenarn la ficha de identificacin y la recepcionista revisar que los datos
estn completos.

REGISTROS
M-3-0-23 Ficha de identificacin del donante apto se debe almacenar en el archivo
activo durante 5 aos y en el archivo muerto 5 aos. (NOM-003-SSA2-1993).
Cuando es rechazado se almacena su registro por 3 meses (NOM-003-SSA21993).
Sistema informtico de banco de sangre.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-01
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 16 ENERO de 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 2 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de identificacin de los
Procesos necesarios para el sistema de gestin de la calidad

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Se modifica el flujo grama del proceso

que se lleva a cabo en el Banco de
Sangre

03

16 ENERO 2012

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-01
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 16 ENERO de 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 3 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de identificacin de los
Procesos necesarios para el sistema de gestin de la calidad

DESCRIPCION DEL PROCESO

El Banco de sangre del Instituto Nacional de Pediatra lleva a cabo, la seleccin
de los candidatos a donacin, y posteriormente el procesamiento de la sangre bajo los
estndares de calidad aplicables.
El flujo grama de la operacin que se lleva a cabo es el siguiente:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-01
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 16 ENERO de 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 4 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de identificacin de los
Procesos necesarios para el sistema de gestin de la calidad

CITA PARA DONACIN (CAL-11)

REGISTRO de los donadores (CAL20)

VALORACIN DE VENAS Y
SOMATOMETRA ( CAL-30)

TOMA MUESTRA ( CAL-43)

VALORACIN MDICA (CAL-40)

EXTRACCIN DE
SANGRE,
(Flebotoma CAL-46)

EXTRACCIN DE
SANGRE,
(Afresis CAL-50)

EXTRACCIN DE
SANGRE,
(RCSP CAL-52)

LIBERACION:
DETERMINACION DE
GRUPO SANGUINEO Y
ANTICUERPOS (CAL-25)
SEROLOGIA (CAL-26)
NAT (CAL-71)

LIBERACION:
DETERMINACION DE
GRUPO SANGUINEO Y
ANTICUERPOS (CAL-25)
SEROLOGIA (CAL-26)
NAT (CAL-71)

LIBERACION:
DETERMINACION DE GRUPO
SANGUINEO Y ANTICUERPOS
(CAL-25)
SEROLOGIA (CAL-26)

ALMACENAMIENTO
(CAL-27)

ALMACENAMIENTO
(CAL-27)

ENTREGA DE
COMPROBA
NTE
(CAL-31)
FRACCIONAMIENTO
(CAL-21)

CRIOPRESERVACION
(CAL-77)

PRUEBAS DE
COMPATIBILIDAD (CAL-31)

ENTREGA DE PRODUCTOS
(CAL-28 )

CAL-02-B

CUANTIFICACION Y
VIABILIDAD CELULAR
(CAL-66)

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-01
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 16 ENERO de 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 5 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de identificacin de los
Procesos necesarios para el sistema de gestin de la calidad

Para cada proceso del diagrama anterior, existen procedimientos documentados que
describen la forma de llevarlos a cabo (Ver lista maestra de documentos CAL-02-A)
REGISTROS
No existen registros asociados a este procedimiento

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-04
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 3 de Nov de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 6 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de control de sangre recibida
de otros hospitales

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-04
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 3 de Nov de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 7 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de control de sangre recibida
de otros hospitales

CAMBIO
ninguno

CAL-02-B

REVISIN

00

FECHA
03/11/03

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-04
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 3 de Nov de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 8 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de control de sangre recibida
de otros hospitales

DESCRIPCION DEL PROCESO

La trabajadora social el personal del laboratorio del Banco de Sangre del INP,
solicita va telefnica a otro banco de sangre los hemocomponentes que se
necesiten de acuerdo a la valoracin por el mdico adscrito o el jefe del servicio.
Una vez que se consigue el apoyo de alguna institucin, se elabora el formato
F-A-14-29 (original y 2 copias), y se solicita al Servicio de Ambulancias que traiga
los hemocomponentes.
El personal del Banco del INP (Inmunohematologa) entrega un recipiente
adecuado para traslado de los hemocomponentes, as como el formato F-A-14-29
al personal de ambulancias.
El personal de ambulancias recoge los hemocomponentes en el banco de sangre
de la institucin otorgante, entregando el original y copia del formato F-A-14-29,
el banco de sangre externo sella el acuse y entrega relacin del producto o
productos solicitados con el certificado de serologa negativa.
El personal del Banco de Sangre del INP recibe los hemocomponentes junto con
una copia del formato F-A-14-29 revisa que los hemocomponentes traigan todos
los datos requeridos como son:

Nombre del donador

Registro
Grupo Rh
Fecha de extraccin
Fecha de caducidad
Volumen
Evidencia de serologa negativa

El personal del laboratorio verifica el estado fsico del producto recibido para
determinar si ste se acepta o no (rechazando productos que no estn con una
temperatura adecuada de transportacin, hemolizados, lipmicos, el volumen
debe corresponder al indicado en la etiqueta de la bolsa y debe traer una muestra
piloto para realizar las pruebas serolgicas aplicables).
Si el producto cumple con los requisitos, se acepta, en caso contrario se regresa.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-04
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 3 de Nov de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 9 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de control de sangre recibida
de otros hospitales

En caso de aceptacin se da ingreso en la Libreta de Ingresos y Egresos del

Banco de Sangre del INP registrando la serologia y se toma la muestra piloto para
realizar pruebas serolgicas.
El formato F-A-14-29 se muestra a continuacin, (La copia se entrega al personal
administrativo para que lo archive).

Instituto Nacional de Pediatra

Insurgentes Sur 3700-C

BANCO DE SANGRE
Solicitud de: PRODUCTOS SANGUINEOS
Mxico, D.F., a ____de ______________ de ______.
Folio:____________
C. Dr. (a) __________________________.
Director o Jefe del Banco de Sangre Del
__________________________________
P R E S E N T E ,
Por este medio me permito solicitar a ustedes los siguientes productos:
O
SANGRE TOTAL
PAQUETE GLOBULAR
PLASMA FRESCO CONGELADO
PLASMA RICO EN PLAQUETAS
CONCENTRADOS PLAQUETARIOS
GLOBULINA ANTIHEMOFLICA

AB

POSITIVO
NEGATIVO
POSITIVO
NEGATIVO
POSITIVO
NEGATIVO
POSITIVO
NEGATIVO
POSITIVO
NEGATIVO
POSITIVO
NEGATIVO

OTRAS SOLICITUDES:

Agradeciendo de antemano su atencin, aprovecho este para enviarle un cordial

saludo.
A T E N T A M E N T E

JEFE DEL BANCO DE SANGRE

c.c.p. Banco de Sangre

F-A-14-29

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-04
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 3 de Nov de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 10 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de control de sangre recibida
de otros hospitales

REGISTROS
El formato F-A-14-29 se almacena por cinco aos pasados los cuales se puede
desechar.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-11
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 12 enero 2012
Pgina 11 de 10
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de citas para donacin

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre: LIC. TS ANA

MARA DORANTES CEH

Nombre: DRA. MARGARITA

LETICIA MEDINA MACAS

Dra. DINORA AGUILAR

ESCOBAR

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha: 12 Enero 2012

Fecha: 12 Enero 2012

Fecha: 12 Enero 2012

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-11
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 12 enero 2012
Pgina 12 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de citas para donacin

CAMBIO

1.- Se puntualizan los 3 tipos de cita.

2.- Se modifica el tiempo de tolerancia
en las citas para donar sangre en
concordancia con el folleto.
[Link]
puntualizan
algunas
excepciones de las personas que no
pueden donar que no incluye el folleto

CAL-02-B

REVISIN

FECHA

05

12 Enero 2012

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-11
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 12 enero 2012
Pgina 13 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de citas para donacin

DESCRIPCION DEL PROCESO

El Personal de Trabajo Social del Banco de sangre del Instituto Nacional de
Pediatra lleva a cabo el siguiente proceso para proporcionar una cita para
DONACION a las personas que lo soliciten en base a los siguientes lineamientos:
1.- Horarios para programacin de cita para donacin: Se programaran las citas a
los familiares de los pacientes que acuden al Banco de Sangre en los siguientes
horarios: 11:30 am y 12:30 pm.
2.- Se otorgaran 200 minutos de tolerancia para recibir familiares de pacientes a
programacin de citas.
3.- A su ingreso al Banco de Sangre el vigilante otorgar una ficha numerada para
establecer el orden de ingreso.
4.- La trabajadora social asignada al rea de seleccin de disponentes atender a
los familiares por grupos segn el horario de ingreso al Banco de Sangre y les
impartir una pltica de orientacin y sensibilizacin para la donacin de sangre.
5.- El contenido de la pltica impartida por la trabajadora social es el siguiente:
5.1 Presentacin
5.2 Documentos necesarios para solicitar cita.
5.3 Importancia de la donacin de sangre segura.
5.4 Promocin de la donacin altruista
5.5 Documentos que necesita tener el donador el da de su cita.
5.6 Caractersticas fsicas y de salud que debe reunir el candidato a donador.
Se exceptan a las personas sordomudas o que hablen un dialecto ya que implica
dificultad para la comunicacin con el personal que presta la atencin y esto afecta
la confiabilidad de los resultados.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-11
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 12 enero 2012
Pgina 14 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de citas para donacin

5.7 Beneficios de donar sangre (estudios de laboratorio como grupo sanguneo y

serologa, un examen mdico).
5.8 Donacin de sangre y/o afresis
5.9 Programacin de citas

La Trabajadora social solicita la Hoja de Hospitalizacin u orden de

ciruga (Ver tabla A )

Llena el folleto Cmo solicitar una cita para donar sangre ? Con los
datos de la solicitud de donacin
y anota en la bitcora de citas CAL-11-A los datos solicitados
ocupando el # de espacios de citas de donadores que les corresponda
cubrir.

En base a la situacin social del paciente asigna el da de la cita ,

considerando diagnstico y servicio donde se atiende al paciente . En
el Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatra se manejan
tres tipos de citas: CITA ABIERTA, CITA PROGRAMADA y CITA
PROGRAMADA DE URGENCIA (Ver abajo descripcin de cada tipo
de cita.
Verifica con el solicitante los datos del paciente registrados en el
folleto Cmo solicitar una cita para donar sangre ? , confirma la cita
para la donacin y le indica leer el folleto Informacin importante para
la donacin sangunea (Ver procedimiento
CAL-20) para conocer los requisitos para ser donador .

Le recuerda que debe traer los folletos el da de la donacin , adems

de su identificacin personal con fotografa y vigente .

FIN
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-11
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 12 enero 2012
Pgina 15 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de citas para donacin

TIPOS DE CITAS
En el Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatra se manejan tres
tipos de citas:
CITA ABIERTA. Trabajo Social asigna a familiares de pacientes con base en
los siguientes criterios:
a. Pacientes forneos
b. Diferimiento o rechazo en ms de una ocasin de donadores
c. Sin redes de apoyo
El plazo para traer a sus donadores no ser mayor a dos semanas.
CITA PROGRAMADA (Cita que Trabajo Social asigna con una fecha y hora
determinada).
CITA PROGRAMADA URGENTE. Se solicitan ms donaciones de acuerdo a
los requerimientos del paciente, a pesar de haber cumplido con las dos
donaciones. Debern acudir a la brevedad posible (plazo no mayor a una
semana) ya que se requieren de forma inmediata para cubrir las necesidades
transfusionales del paciente.

MANEJO DE PRRROGAS
Trabajo Social del Departamento de Banco de Sangre proporciona prrrogas a los
familiares de los pacientes cuando:
1. Se adelanta fecha de ciruga.
2. Se da a los familiares fecha inmediata para la ciruga del paciente (en las
siguientes 24 hrs.)
MANEJO DE CONDONACIONES
Ver procedimiento CAL-63 para manejo de condonaciones por el Banco de
Sangre

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-11
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 12 enero 2012
Pgina 16 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de citas para donacin

IMGENES DE FORMATOS RELACIONADOS CON ESTE PROCEDIMIENTO

El Folleto Cmo solicitar una cita para donar sangre?

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-11
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 12 enero 2012
Pgina 17 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de citas para donacin

Informacin importante para la donacin sangunea Tambin es entregada al

donador, y se muestra a continuacin:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-11
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 12 enero 2012
Pgina 18 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de citas para donacin

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-11
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 12 enero 2012
Pgina 19 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de citas para donacin

Tabla A. Donadores solicitados.

SERVICIO EN QUE SE ATIENDE
AL PACIENTE
Ciruga ambulatoria
Cateterismo cardiaco
Ciruga cardiovascular
Estancia en reas crticas
Ciruga programada
Hospitalizacin
Transplante de Clulas
Progenitoras Hematopoyticas

NO DE DONADORES
SOLICITADOS
1
1
4 ms
2 ms
2
2
10 ms

Ciruga ambulatoria y cateterismo cardiaco: Se solicita una donacin de

sangre, esta se debe de realizar antes de la ciruga o el mismo da dependiendo
el caso. SOLO EN ESTE CASO TRABAJO SOCIAL DEL BANCO DE SANGRE
DA PRORROGAS PARA QUE SE CUBRA POSTERIORMENTE LA DONACIN,
en caso de que la ciruga o cateterismo se haya realizado de manera urgente y se
solicita realizar la donacin un tiempo no mayor a una semana.
Ciruga cardiovascular: Ciruga cardiovascular requiere 3 donadores de sangre 1
de plaquetas el da de la ciruga, en caso necesario se solicita un mayor nmero
de donadores segn los requerimientos del paciente.
Estancia en reas crticas (Urgencias, Terapia Intensiva), Ciruga
programada, Hospitalizacin: Se solicitan dos donaciones de sangre, con
variaciones de acuerdo a los requerimientos del paciente.

Trasplante de clulas progenitoras hematopoyticas: Se solicitan 10

donadores de plaquetas aptos quienes iniciarn el proceso de donacin antes del
trasplante y se programan de acuerdo a las necesidades del paciente y puede
haber modificaciones de acuerdo a los requerimientos transfusionales del
paciente.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-11
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 12 enero 2012
Pgina 20 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de citas para donacin

El folleto Cmo solicitar una cita para donar sangre? se debe llenar de la
siguiente manera:

DATOS DEL PACIENTE PROPORCIONADOS POR EL

DONADOR:
Nombre del paciente:
Nmero de expediente:

Servicio:

Nombre completo del paciente para el que va a

realizar la donacin
Nmero de Expediente asignado por el INP
(equivale al # de registro).
Especialidad en la que se esta tratando el
paciente.
# de cama en que se encuentra el paciente
hospitalizado para quien se solicita la donacin

Cama:

PARA USO EXCLUSIVO DEL BANCO DE SANGRE:

Nmero de donadores:
Fecha de la donacin:
Hora de la cita:

Nmero de donadores que se solicitan segn sea

el caso (Ver tabla A)
Fecha de la cita para asistir a la donacin
Hora de la cita para la donacin

La Bitcora de citas CAL-11-A contiene lo siguiente:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-11
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 12 enero 2012
Pgina 21 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de citas para donacin

BITCORA DE CITAS
CAL-11-A

Fecha:
No./Hora

Nombre

Registro Servicio

#de
Fecha
donadores

Observaciones

La Bitcora de citas CAL-11-A se llena de la siguiente manera:

Fecha:
No. / Hora:
Nombre:
Registro:
Servicio:
# De donadores:
Fecha:
Observaciones:

CAL-02-B

Da, mes y ao en que est citado el candidato a donador.

# consecutivo del da y hora de su cita.
Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del paciente.
# de registro del paciente asignado por el INP.
Especialidad donde se encuentra el paciente.
# de donadores solicitados.
Da y mes en que se da la cita.
Cualquier observacin que se considere relevante.

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-11
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 12 enero 2012
Pgina 22 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de citas para donacin

REGISTROS
Bitcora CAL-11-A (Libreta programacin de citas) se almacena en el archivo del
rea de recepcin durante 1 ao.
Bitcora CAL-20-A (Registro de donadores) se almacena 3 meses despus de que
completa el llenado de todas sus hojas.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-13
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 23 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Entrega de resultados

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:
Dr. Ismael Hernndez
Montiel
T.S. Ana Mara Dorantes
Ceh

Nombre:
Dra. Margarita Leticia
Medina Macas

Nombre:
Dra. Dinora V. Aguilar
Escobar

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha: 10 Enero 2012

Fecha: 10 Enero 2012

Fecha: 10 Enero 2012

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-13
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 24 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Entrega de resultados

CAMBIO
Se establece el mismo tiempo de
entrega de resultados despus de la
donacin de sangre y de afresis
Se actualiza el formato electrnico de
entrega de resultados
Se cambia plazo de almacenamiento
en archivo activo y muerto de la
Bitcora CAL-13-A

CAL-02-B

REVISIN

FECHA

10/01/2012

10/01/2012

10/01/2012

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-13
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 25 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Entrega de resultados
DESCRIPCION DEL PROCESO
Una vez que al donador se le ha realizado el Sangrado o el Procedimiento de
Afresis (Ver Procedimiento CAL-46 o CAL-50) se le informa que podr recoger
los resultados del anlisis de la muestra personalmente a los 8 das posteriores a
la donacin. El da de entrega de resultados se procede de la siguiente manera:
La recepcionisa solicita identificacin y fecha en que realiz donacin de sangre (verifica que
coincida la fotografa de la identificacin , con la persona presente) y le pide que se registre en
la bitacora de entrega de resultados CAL -13-A
En el sistema de cmputo, la recepcionista ingresa apellidos para localizar Resultados de
Serologa (siempre que sean negativos), imprime los resultados, y sube con el qumico para
que los avale con su firma.
De manera manual, La recepcionista, sube al laboratorio para copiar los datos de la libreta de
Serologa (siempre que sean negativos) al formato F-A-14-07; Procede a transcribirlos a
mquina para que el qumico los avale con su firma .

SI

La serologa es
positiva?

La recepcionista detecta serologa positiva en

el sistema de cmputo o en la libreta de
Serologa, e informa al mdico responsible y
al qumico de laboratorio

NO

La recepcionista entrega resultados por escrito al donador .

El donador firma de recibido en la bitacora de resultados

CAL-13-A

FIN
Qumico informa al mdico
responsible de SeroPositivos
Mdico le solicita a Trabajo Social que localice al donador
Trabajo social trata de localizar va telefnica al donador para
informarle la necesidad de una 2da. muestra para completar
estudios (se realizan 3 llamadas en un lapso de 1 mes para
tratar de localizar al donador en caso de no ser posible se
canaliza el caso al Servicio de Epidemiologa )

Cuando el donador acude a 2da. Muestra por haber

obtenido un resultado REACTIVO de su muestra
El mdico habla con el donador para comentar que se requiere
otra muestra de su sangre para completar estudios , se toma
2da, muestra y se da Cita en una semana para entregar
Resultados
En laboratorio se realiza la prueba de ELISA

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-13
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 26 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Entrega de resultados

REACTIVO

El resultado
puede ser

NEGATIVO

Se realiza prueba confirmatoria

de la cual podemos obtener los
siguientes resultados

Resultado
INDETERMINADO

Resultado
NEGATIVO

Resultado
POSITIVO

Mdico reporta como

indeterminado, da cita en
tres meses para otra
muestra, se da seguimiento
durante un ao

Brucella, chagas,
VHC, VDRL, VHB

VIH

Mdico notifica y explica

posibles causas

Mdico entrega resultados y

refiere al donador a
Epidemiologa para que lo
canalice a donde reciba
atencin.

Mdico refiere al donador a

psicologa para que sea
sensibilizado, y el psicolgo
informa al mdico cuando
considera que el donador
puede recibir la noticia.

FIN

El mdico en
compaa del
psicologo notifica el
diagnstico

FIN

Positivo:
Cuando el anlisis de la Prueba de rutina o tamizaje realizada a la 2da muestra
es REACTIVA y la Prueba confirmatoria se encuentra dentro de los rangos
considerados como POSITIVO, la muestra se determina como POSITIVA.
Negativa:
Cuando el anlisis de la Prueba de rutina o tamizaje realizada a la 1era muestra
es NEGATIVA dentro de los rangos considerados, la muestra se determina como
NEGATIVA.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-13
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 27 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Entrega de resultados
Indeterminada:
Es cuando el resultado de la prueba No cumple con el 100% los criterios de
interpretacin.
Opciones:
PRIMERA MUESTRA SEGUNDA MUESTRA CONFIRMATORIA
1era. Corrida: reactivo
2da Corrida: reactivo
(se corre tubo
primario y tubo piloto)
1era. Corrida: reactivo
2da Corrida: negativo

Reactiva

Positiva
Negativa
Indeterminada

RESULTADO DE LA
PRUEBA
Positiva
Negativo
Indeterminado (seguimiento
del donador)
Negativa

1era. Corrida:
negativo

Negativa

El formato de Entrega de Resultados F-A-14-07 se llena en la maquina de

escribir de la siguiente manera:
INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRA
BANCO DE SANGRE
Resultado de los exmenes practicados al DONADOR:
Nombre:

Apellido paterno, Apellido materno, Nombre(s)

Nmero de Registro:

Nmero de la bitcora de egresos e ingresos.

Grupo (ABO):

Resultados obtenidos por medio del anlisis de la

muestra
Resultados obtenidos por medio del anlisis de la
muestra
Resultados obtenidos en serologa.

FACTOR RH (D):
V.D.R.L.,
HUDDLESSON,
ANTIGENO
AUSTRALIA,
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-13
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 28 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Entrega de resultados
HEMOGLOBINA g.%
y HEMATOCRITO:

Resultados obtenidos del equipo automatizado de

biometra hemtica.

OTROS:

Resultados de H.I.V.,CHAGAS
obtenidos en serologa

Mxico, D,F., a:

Fecha en que se solicita el comprobante de donacin.

Clave,
Firma:

Nombre

HEPATITIS

y Del Jefe del Laboratorio o del qumico responsable

La Hoja de entrega de resultados F-A-14-07 que se obtiene del sistema

informtico de Banco de Sangre contiene lo siguiente:
INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRA
BANCO DE SANGRE
Donante:
Donacin:
Fenotipos:
Anticuerpos:

Hemoglobina
Hematocrito
Grupo
Rh
Hepatitis B

Nombre del donador

No. De Unidad, Fecha
Resultado obtenidos por medio de anlisis de la muestra
Resultado obtenidos por medio de anlisis de la muestra
RESULTADOS ANALTICOS
Resultados obtenidos en el equipo automatizado de
biometra hemtica
Resultados obtenidos en el equipo automatizado de
biometra hemtica
Resultados obtenido por medio del anlisis de la
muestra del donador
Resultados obtenido por medio del anlisis de la
muestra del donador
Resultados obtenidos en serologa

Hepatitis C

Resultados obtenidos en serologa

HIV 1-2

Resultados obtenidos en serologa

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-13
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 29 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Entrega de resultados
Sfilis

Resultados obtenidos en serologa

Chagas

Resultados obtenidos en serologa

Brucella

Resultados obtenidos en serologa

NAT Hepatitis B

Resultados obtenidos en Biologa Molecular

NAT Hepatitis C

Resultados obtenidos en Biologa Molecular

NAT HIV

Resultados obtenidos en Biologa Molecular

Protenas Totales

Resultados obtenido por medio del anlisis de la

muestra del donador
Nombre y firma del Jefe del Laboratorio o del qumico
responsable

Nombre y firma del

personal de laboratorio

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-13
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 30 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Entrega de resultados

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-13
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 31 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Entrega de resultados

BITCORA DE ENTREGA DE RESULTADOS CAL-13-A

Fecha de
solicitud de
Resultados

Nombre del
Donador

Fecha de
Donacin

NMERO
UNIDAD

Tipo de
Resultados

Se entregaron
Resultados

Firma de
Recibido

Persona que
entrega

OBSERVACIONES

Si:_____ No:____
Escritos

Causa: _________

Si:____ No:____
Verbales

Causa:_________
___

FORMA DE LLENAR LA BITCORA CAL-13-A:

Se anota la fecha en que acude el donador a
solicitar resultados

Fecha de solicitud
de Resultados
Nombre del
Donador

Nombre del donador

Fecha de
Donacin

Fecha en que se realiz la donacin

Se anota el nmero de unidad que se le asign

NMERO UNIDAD

Escritos
Se entregaron
Resultados

Firma de Recibido
Persona que
entrega

OBSERVACIONES

Tipo de
resultados

Verbales

Si:____ No:___
Causa _______

Si __ No: ____
Causa:____

Se tacha el lugar que indique el tipo de resultados

entregados y la causa de este tipo de entrega de
resultados
Firma del donador de que recibi resultados
Nombre de quien integra resultados
Cualquier comentario acerca de si es reactivo,
acude a segunda muestra, o dato importante del
donador

Nota: La Recepcionista entrega los resultados al donador en caso de que todas

las pruebas serolgicas sean negativas, de lo contrario el mdico proporciona la
informacin y plan a seguir al donador.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-13
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 32 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Entrega de resultados

REGISTROS
La Bitcora de Resultados CAL-13-A se guarda durante 1 ao en archivo activo y
5 aos en archivo muerto.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-14
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 7 Octubre 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 33 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Calibracin del CELLDYN RUBY

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre: Q.F.B. MARA

TERESA FLORES
CAMACHO

Nombre: M en C GUILLERMO Nombre: Dra. DINORA

ESCAMILLA GUERRERO
V. AGUILAR ESCOBAR

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:07 Octubre 2009

Fecha:14 Octubre 2009

Fecha:
14 Octubre 2009

CAL-02-B

anco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-14
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 7 Octubre de 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 34 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Calibracin del CELLDYN RUBY

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Se actualiza procedimiento porque se

cambi el equipo automatizado de
Biometra Hemtica

7 Octubre de 2009

CAL-02-B

anco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-14
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 7 Octubre de 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 35 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Calibracin del CELLDYN RUBY

DESCRIPCION DEL PROCESO

Para poder realizar los anlisis de la toma de muestra (Ver Procedimiento CAL16) se requiere haber realizado una calibracin previa del equipo CELLDYN
RUBY para la que se procede de la siguiente manera:

CAL-02-B

anco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-14
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 7 Octubre de 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 36 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Calibracin del CELLDYN RUBY

FLUJOGRAMA PARA PROCESO DE CONTROLES

CHECAR
NUMERO DE
LOTE Y
FECHA DE
CADUSIDAD

PONER LOS
TUBOS 15
MIN A
TEMPERATU
RA
AMBIENBTE

VERIFICAR
VALORES Y
CURVA DE LJ

INICIAR
ASPIRA
DO

ROTAR LOS
CONTROLE
S CON LA
MANO POR
20
SEGUNDOS

PONER
CONTROLES EN
EQUIPO EN
SISTEMA
ABIERTO
SELECSIONAN
DO EL NIVEL
DE CONTROL

SI
NO

PROC
ESAR
MUES

TRA
S

CAL-02-B

CHECAR
CONTROLES Y
REACTIVOS

INVERTIR
EL
CONTROL
Y ROTAR
POR 20
SEGUNDOS

INVERTIR
LOS
CONTROL
ES A LA
DERECHA
Y A LA
IZQUIERD
E CON LA

MABNO
POR 10
SEG

anco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-14
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 7 Octubre de 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 37 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Calibracin del CELLDYN RUBY

Las hojas de los resultados de la calibracin se guardan en la carpeta CAL-14-A

La carpeta CAL-14-A se llena de la siguiente forma:

Fecha de calibracin:

Da, mes y ao en que se realizo la

calibracin. (Impresa en la hoja de
resultados.

Control patrn de calibracin usado: Indicar el lote y fecha de caducidad del

control patrn de calibracin.
Persona que realiza la calibracin:

Nombre completo o sello de la persona

que realiza la calibracin.

Nota 1: La Calibracin se debe realizar todos los das antes de analizar las
muestras.
Nota 2: La bitcora se debe encontrar en el rea de toma de muestra para su
llenado.
Nota 3: El control patrn de calibracin tiene una fecha de caducidad pasada la
cual se desecha y se cambia de control.

REGISTROS
La carpeta CAL-14-A se debe guardar durante al menos 1 ao.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-15
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 38 de 3

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de identificacin de muestras

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 1 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 2 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Se asigna el nmero de bitcoras de

registro

7 de octubre 2003

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 3 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

DESCRIPCION DEL PROCESO

El Banco de sangre del Instituto Nacional de Pediatra lleva a cabo los siguientes
procesos para proveer de sangre segura a los pacientes que la requieran:

CAL-02-B

RECEPCION DE MUESTRAS
GRUPO SANGUINEO (Sistema ABO & Rh)
LECTINAS
FENOTIPO (Rh & FSABO)
COOMBS DIRECTO
RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES
(COOMBS INDIRECTO)
PRUEBA CRUZADA
o OPCIONES DE TRANSFUSION
RN
TABLA DE NOM
ALTGORITMOS:
o PRUEBA CRUZADA INCOMPATIBLE
o PRUEBA CRUZADA INCOMPLETA
o REACCION TRANSFUSIONAL
RPR / VDRL
DESPLASMATIZAR PLAQUETAS
LAVADO DE PAQUETES GLOBULARES
SANGRE RECONSTITUIDA
FILTRACION
CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS Y
CELULAS
ELUSION
o ELU KIT
o EGA KIT
ADSORCION
AGLUTININAS ANTI A & ANTI B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 4 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

Los mtodos para realizar ensayos de aglutinacin son:

Mtodo semiautomtico
Tubo
Gel
Mtodo automtico
Gel
Las pruebas de aglutinacin establecen:
HEMOLISIS: Indica una reaccin positiva para la
unin Antgeno anticuerpo.
AGLUTINACION: la presencia del par Antgeno y/o
Anticuerpo complementarios relevante.
NO AGLUTINACIN la ausencia de cualquiera de
ellos.

INTERPRETACION Y PUNTUACION DE LAS AGLUTINACIONES

DESCRIPCION
GRADO PUNTUACION
Hemolsis total

Ht

Botn completo, sobrenadante claro

4+

12

Botn grande con algunos agregados, fondo claro

3+

10

Botn fragmentado en varios grumos grandes, fondo turbio

2+

Botn fragmentados en numerosos grumos regulares, fondo turbio

1+

Botn fragmentado mltiples grumos pequeos, fondo muy turbio

+/-

negativo

Aglutinacin no visible

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 5 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

INTERPRETACION Y PONDERACIN DE LAS AGLUTINACIONES EN GEL

NEGATIVO

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 6 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

RECEPCION DE MUESTRAS

Una vez que el Mdico, enfermera o mensajero lleva la muestra a la ventanilla del laboratorio, el PERSONAL DE BANCO DE SANGRE, revisa que las
muestras esten bien identificadas con el Nombre completo del paciente, registro, fecha y hora de toma de la misma; que la muestra sea la indicada
para el analisis solicitado y que la solicitud tenga todos los datos requeridos.

Discrepancia entre
membrete de tubo
con requisicin

NO

Se retiene la muestra
y la solicitud se rotula
MUESTRA MAL
ETIQUETADA

Se solicita nueva
muestra

SI
NO

Menor cantidad de
la indicada

Se le indica al Mdico, enfermera o mensajero que lleva la

muestra anote en la Bitcora de Registro CAL-031-A los datos
solicitados en el nmero consecutivo correspondiente. El
PERSONAL DE BANCO DE SANGRE, asigna el nmero
correspondiente a la entrada tomado de la Bitcora CAL-031-A
en el formato de solicitud del anlisis A-13-14-07 (original y copia)

El PERSONAL DE BANCO DE
SANGRE procede a centrifugar la
muestra para trasvasar en tubos
membretados con los datos del
paciente, fecha y nmero de
requisicin, el plasma o suero y el
paquete eritrocitario, para su
distribucin, almacenamiento o
trabajo.

1.- DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

La prueba consiste de dos etapas:
Prueba directa o celular: eritrocitos problema
desafiados contra antisueros comerciales de
especificidad conocida
Prueba inversa o srica: suero problema desafiado
contra eritrocitos de fenotipo conocidos

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 7 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

PRUEBA DIRECTA
en tubo

Se realiza la centrifugacin del tubo de muestra para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero.
Se rotula 2 tubos para la transferencia de suero y suspensin de eritrocitos (2-5%) con solucion salina amortiguada

Se realiza una prueba directa y una prueba complementaria llamada inversa

Para la prueba directa se requiere lo siguiente:

Marcar 4 tubos con los # del 1 al 3 y el cuarto con una T (testigo)

TUBO 1
Agregar una gota
de reactivo Anti-A
(suero de color
azul)

TUBO 2
Agregar una gota de
reactivo Anti-AB
(suero incoloro)

TUBO 3
Agregar una gota de
reactivo Anti-B
(suero de color
amarillo)

TUBO T
Agregar 2 gotas del
plasma o suero del
paciente

Agregar una gota de la suspensin de eritrocitos del paciente a los cuatro tubos

Se introducen en la centrifuga durante 15 a 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga. Esta prueba se realiza
a temperatura ambiente

Se realiza un ligera agitacin para resuspender los eritrocitos y se hace la lectura macroscpica para aglutinacin (Ver tabla 1)

Registrar resultados en el / los formato A-13-14-07; F-A-14-23; F-A-14-27

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 8 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

PRUEBA INVERSA en tubo

Marcar 4 tubos con las letras A1, A2, B y O

Clulas de fenotipo conocido preparadas a una concentracin del 2-5%

TUBO A1
Agregar una gota de
celulas A1+ 2gotas del
plasma del paciente

TUBO A2
Agregar una gota de
celulas A2 + 2gotas del
plasma del paciente

TUBO B
Agregar una gota de
celulas B + 2gotas del
plasma del paciente

TUBO O
Agregar una gota de
celulas O + 2gotas del
plasma del paciente

Se introducen en la centrifuga durante 15-30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga.

Se realiza una ligera agitacin para resuspender las celulas

Se realiza la lectura macroscpica para aglutinacin (ver tabla 1)

Registrar resultados en los formatos A-13-14-07; FA-14-23; F-A-14-27

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 9 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

Tabla 1
Prueba Directa
GRUPO SANGUINEO

ANTIGENOS PRESENTES EN LOS

ERITROCITOS

ANTICUERPOS PRESENTES EN
SUERO O PLASMA

Anti - B

B
AB
O

B
AyB
ni A ni B

Anti - A
----Anti A & Anti - B

INTERPRETACION

GRUPO

A
B
AB
O

CAL-02-B

Prueba DIRECTA

Prueba INVERSA

Tubo con Antisuero

Tubo con cluas:

Anti-A

Anti-B

Anti-AB

POST
NEGT
POST
NEGT

NEGT
POST
POST
NEGT

POST
POST
POST
NEGT

Testigo
NEGT
NEGT
NEGT
NEGT

A1

A2

NEGT
POST
NEGT
POST

NEGAT
POST
NEGT
POST

POST
NEGT
NEGT
POST

NEGAT
NEGT
NEGT
NEGT

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 10 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

GRUPO SANGUINEO Sitema ABO/Rh EN GEL

Se realiza la centrifugacin del tubo de muestra para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero.

Se identifica otro tubo y se prepara en l la suspensin de eritrocitos del donador tomando 1.0 ml de solucin de DianaSol 1
con 25 l de concentrado eritrocitario del paciente (concentracin de eritrocitos aproximada: entre el 2-3%)

Se realiza una prueba directa y una prueba complementaria llamada inversa

Empleo de tira del DianaGel Donors/Donantes

ver imagen

DIRECTA
MICROTUBOS
A, B, AB, D,D`
colocar 25 l de solucin de
eritrocitos del PACIENTE

AUTOTESTIGO
TUBO Ctrl
colocar 25 l de eritrocitos del
donador y 50 l del suero o
plasma del PACIENTE

INVERSA
MICROTUBOS
A1; B
colocar 50 l de eritrocitos
reactivos (Serigrup Diana A1 y B)
con 50 l del suero o plasma del
PACIENTE

Centrifugar en DianaFuge
(ver imagen)

Leer
La lectura puede ser visual o en el DianaScanner
(ver imagen)

Interpretacin
(Acorde a la imagen presentada)

Registrar resultados en el formato F-A-14-26; F-A-13-14-07; F-A-14-23; F-A-114-27

o mandar impresin

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 11 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

A1

REGISTRO:
# REQUISICION:
Fecha:
Clave de quien realiz:

[Link]

CAL-02-B

[Link]

AT

INVERSA

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 12 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

SUBGRUPOS DE A

Marcar 1 tubo con la letra A1 (Anti-A1) y otro con la letra H (Anti- H)

TUBO A1
Agregar 1 o 2 gotas del reactivo Anti-A1 Lectina

TUBO H
Agregar 2 gotas del reactivo Anti-H

Agregar una gota de la suspensin de eritrocitos (2-5%) del PACIENTE A CADA TUBO

Se realiza una ligera agitacin a cada uno de los tubos

Se realiza una ligera agitacin a cada uno de los tubos

y se incuban durante 5 minutos aproximadamente a
temperatura ambiente.

Se introducen en la centrifuga durante 15-30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga.

Se realiza un ligera agitacin para resuspender los eritrocitos.

Se realiza la lectura macroscpica para aglutinacin

Registrar resultados en los formatos FA13-14-07; FA-14-23; F-A-14-27

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 13 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

Tabla # 2 Subgrupo A

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 14 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

GRUPO SANGUIENO Rho en tubo

Se realiza la centrifugacin del tubo de muestra para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero.

Se identifica otro tubo y se prepara en l la suspensin de eritrocitos del donador tomando 2.5 a 3.0 ml de solucin salina con
amortiguador con dos gotas de concentrado eritrocitario del PACIENTE
(concentracin de eritrocitos aproximada: entre el 2-5%)

Marcar un tubo con la letra Rh (anti D) y otro con la letra C (control)

TUBO D
agregar una gota del
antisuero comercial
Anti - D

TUBO C
Agregar una gota del reactivo
Control Rh
ALB 22%

Agregar una gota de suspensin al 2-5% de eritrocitos del donador

Centrifugar 15-30 segundos, la revolucin esta predeterminada

Leer resuspendiendo con movimiento suave el botn. Interpretacin acorde a la aglutinacin presente

NO AGLUTINACION
Rh neg (D-)

AGLUTINACION
Rh post (D+)

NO
AGLUTINACION

Registrar resultados en los formatos F-A-14-26; F-Q-13-14-07; F-A-14-23; F-A-14-27

o mandar impresin

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 15 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

SI la prueba Anti-D es NEGATIVA

Los tubos marcados con D y C (provenientes de la Prueba RH) se incuban 15-30 minutos a 37 C

Centrifugar e Interpretar
Positiva
Negativa

Se lavan las celulas 3 veces con salina fisiologica, teniendo cuidado para resuspender las celulas por completo
Se decanta la salina por completo en la ltima lavada

Agregar una gota de suero de Coombs poliespecfico (anti IgG-C3d)

Centrifugar e interpretar

Positiva

VALIDAR TECNICA CON CELULAS

SENSIBILIZADAS

Negativa

El resultado
se considera
Rh+ ( D+)

El resultado
se considera
Rh- y Du+
( para fines de
transfusin se
considera :
donadores Rh+
receptores Rh-

Rh - (D-)

Registrar resultados en los formatos: F-A-13-14-07; F-A14-23; F-A-14-27

La determinacin del grupo ABO en la

tarjeta de Gel conlleva la determinacin del anti D y su especie el Du
Los resultados de Rh negativo en gel se confirman al desafiarlos con el Anti
D Totem (anticuerpo policlonal dirigido contra las 6 fracciones del Antgeno
D: I VI)

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 16 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

FENOTIPOS Rh
Hacer un suspensin de los eritrocitos 2-3% (1ml de Diana-1 + 25 l de muestra)
Aadir 25 microlitros de la suspensin de eritrocitos 2-3% en los microtubos que indican C, c, E, e
(Ver imagen)
Centrifugar en DianaFuge y leer manual o en el Diana scanner (Tabla 3A, 3B, 3C)

Registrar los resultados en los formatos F-A-13-14-07; F-A-14-23; F-A-14-27

Interpretacin de fenotipo Rh

Registro del donador

Fecha:
Iniciales y clave de quien
realiz

Fenotipo: CcE

CAL-02-B

Registro del donador

Fecha:
Iniciales y clave de quien
realiz

Fenotipo: CEe

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 17 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

FORMATO F- A 14 23

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 18 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

Tabla 2
Fenotipo Rh

REACCION SEROLOGICA ANTI

FENOTIPOS

GENOTIPO
D

WIENER

FISHER

DCe/dce

R1r

DCcee

DCe/DCe

R1R1

DCCee

DcE/dce

R2r

DccEe

DcE/DcE

R2R2

DccEE

DCe/DcE

R1R2

DCcEe

dce/dce

rr

ddccee

Dce/dce

R0r

Dccee

dCe/dce

r'r

ddccee

dCe/dCe

r'r'

ddccee

dcE/dce

r" r

ddccee

dce/dcE

r" r "

ddccEE

dCe/dcE

++

r' r"

ddCcEe

DCe/DCE

R1RZ

DCCEe

DcE/DCE

R2RZ

DCcEE

DCE/DCE

RZRZ

DCCEE

dCE/dCe

r y y'

ddCCEe

dCE/dcE

r y r"

ddCcEE

dCE/dCE

ryry

ddCCEE

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 19 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

COOMBS INDIRECTO O RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES

PANEL CASERO se les adiciona 5 microlitros de las clulas panel + 500 microlitros de la solucin Diana sol 2
(suspensin al 1%) y se homogenizan. EL PANEL COMERCIAL SE ADICIONA DIRECTAMENTE

Se le realizan de 3 a 5 lavados al tubo que contiene los eritrocitos de la muestra problema.

Se identifica la tarjeta de Diana Gel Coombs con los # del 1 al 10 y el AT (testigo) y se toma una alicuota de 50
microlitros de cada tubo y se depositan en su respectivo microtubo + 25 microlitros del suero de la muestra problema

Al microtubo marcado con la letra AT se le adiciona 50microlitros de la suspensin de eritrocitos problema

previamente lavadas + 25 microlitros del suero problema.

Se incuba en el equipo Diana Incubador a 37C / 15min., transcurrido el tiempo se centrifuga en Diana Fuge y se
interpretan los resultados con la CARTA PANEL CORRESPONDIENTE.

RESULTADO es NEGATIVO: Se indica al reportar que los Anticuerpos irregulares FSABO.

RESULTADO es POSITIVO: Se reporta como POSITIVO & ANTICUERPO DETECTADO CON PROBABLE
ESPECIFICIDAD:..

Se anotan los datos y resultados de la prueba en la Bitcota de Estudios especiales CAL-31-B y se conserva el
formato F-A-14-23 junto con el original del formato A-13-14-07. La copia del formato A-13-14-07 se le entrega al
Mdico residente o a la enfermera que lo solicite y se le pide que ponga los datos que se le solicitan y firme de
recibido en la Bitcora de Entrega de resultados de estudios especiales CAL-31-C.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 20 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

Y la siguiente reaccin en tarjeta con el PANEL TRIO:

Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta en tcnica liss-gel se requiere lo siguiente:

Marcar la tarjeta DianaGel Coombs del # 1 al 3 y un T( testigo) Las clulas se preparan empleando 5 l de eritrocitos con 0.5 ml de solucin Diana 2

MICROTUBO 1
Anadir 50 l de
Gamma Trio 1

MICROTUBO 2
Anadir 50 l de
Gamma Trio 2

MICROTUBO 3
Anadir 50 l de
Gamma Trio 3

MICROTUBO 1
Anadir 25 l de plasma del PACIENTE

Incubar en Diana incubador durante 15min a 37 C

Centrifugar en Diana fuge y leer (Tabla 4)

Registrar resultados en el formato F-A-14-23
Si es positivo se debe realizar el panel completo

CAL-02-B

MICROTUBO T
Anadir 50 l de
eritrocitos del
PACIENTE

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 21 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

Tabla 3
CARTA PANEL TRIO

Escanear imagen de carta panel del:

TABLA 4
CARTA PANEL DIANA

CARTA PANEL DE SIGLO XXI

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 22 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

COOMBS DIRECTO EN TUBO

El concentrado eritrocitario se toma una alicuota y se realiza una suspensin al 2-5%, a la cual se le realizan 3
lavados minimo con solucin de cloruro de sodio al 0.9% (SSI), en cada lavado se centrifuga. se decanta y se repite el
proceso de lavado.

Una vez que se realizarn los lavados se decanta el exceso de solucin y se adiciona SSI para obtener una solucin
al 5%.

AGREGAR 1 GOTA DE LA DILUCION DE ERITROCITOS DEL PACIENTE Y 2 GOTAS DE SUERO DE COOMBS

Se centrifugan los tubos y se leen anotando el resultado en el formato F-A-14-27 donde indica 22 C en su respectiva
dilucin,

Si el RESULTADO es POSITIVO se titula (diluyendo el suero de Coombs en forma doble seriada,)se reporta en los
formatos A-13-14-07 y F-A-14-27 POSITIVO y la dilucin
Si el RESULTADO es NEGATIVO si la tcnica fue realizada en tubo se continua con el llamado CAGHs (consumo de
antiglobulina humana) es la prueba que se realiza para corroborar que se haya realizado bien la tcnica anterior.

Para realizar el CAGHs se adiciona una gota de clulas sensibilizadas a todos los tubos, se mezclan y centrifugan a
SI ES POSITIVO SE VALIDA EL ENSAYO, SI ES NEGATIVO SE REPITE DESDE SU INICIO

Se anotan los datos y resultados de la prueba en la Bitcota de Estudios especiales CAL-31-B y se conserva el
formato F-A-14-27 junto con el original del formato A-13-14-07. La copia del formato A-13-14-07 se le entrega al
Mdico residente o a la enfermera que lo solicite y se le pide que ponga los datos que se le solicitan y firme de
recibido en la Bitcora de Entrega de resultados de estudios especiales CAL-31-C.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 23 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

RPR o VDRL

El Qumico de Inmunohematologia antes de iniciar la prueba lleva a temperatura de entre 15-30 C el REACTIVO Y
SUS CONTROLES

Procede a centrifugar la muestra para continuar con la separacin del plasma y el concentrado eritrocitario.

Se realiza la identificacin de la placa: controles y muestra

A los circulos que se van a ocupar se les adiciona una alicuota 1 A 2 gota del suero del paciente.y se extiende con la
misma pipeta desechable o punta.

De igual forma se aplica en los circulos correspondientes los controles positivo y negativo

A todos los circulos se les adiciona 1 gota del REACTIVO

Se homogeniza y se lleva a agitar la placa en el equipo BAXTER ROTATOR V durante 6 - 8 min. A 100 rpm.
Realizar lectura macroscopica e interpretar, ausencia de aglutinacin resultado negativo, presencia de aglutinacin
resultado positivo

Se anota el resultado en la Bitcora de Estudios especiales de Inmunohematologia

CAL-31-B y en el formato de solicitud A-13-14-07 original y copia, se entrega al personal que venga por los resultados
la copia de la forma A-13-14-07 y se le pide que ponga los datos que se le solicitan y firme de recibido en la Bitcora
de Entrega de resultados de estudios especiales CAL-31-C.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 24 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

COOMBS DIRECTO EN GEL

El concentrado eritrocitario se toma una alicuota y se realiza una suspensin al 2-5%, a la cual se le realizan 3
lavados minimo con solucin de cloruro de sodio al 0.9% (SSI), en cada lavado se centrifuga. se decanta y se repite el
proceso de lavado.

Una vez que se realizarn los lavados se decanta el exceso de solucin y se adiciona SSI para obtener una solucin
al 5%.

AGREGAR 1 GOTA DE LA DILUCION DE ERITROCITOS DEL PACIENTE Y 2 GOTAS DE SUERO DE COOMBS

Se centrifugan los tubos y se leen anotando el resultado en el formato F-A-14-27 donde indica 22 C en su respectiva
dilucin,

Si el RESULTADO es POSITIVO se titula (diluyendo el suero de Coombs en forma doble seriada,)se reporta en los
formatos A-13-14-07 y F-A-14-27 POSITIVO y la dilucin
Si el RESULTADO es NEGATIVO si la tcnica fue realizada en tubo se continua con el llamado CAGHs (consumo de
antiglobulina humana) es la prueba que se realiza para corroborar que se haya realizado bien la tcnica anterior.

Para realizar el CAGHs se adiciona una gota de clulas sensibilizadas a todos los tubos, se mezclan y centrifugan a
SI ES POSITIVO SE VALIDA EL ENSAYO, SI ES NEGATIVO SE REPITE DESDE SU INICIO

Se anotan los datos y resultados de la prueba en la Bitcota de Estudios especiales CAL-31-B y se conserva el
formato F-A-14-27 junto con el original del formato A-13-14-07. La copia del formato A-13-14-07 se le entrega al
Mdico residente o a la enfermera que lo solicite y se le pide que ponga los datos que se le solicitan y firme de
recibido en la Bitcora de Entrega de resultados de estudios especiales CAL-31-C.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 25 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

ANTIGENOS ERITROCITARIOS

Se rotulan 2 tubos con los datos del paciente, una vez que la muestra se centrifuga y se separa el suero o plasma del
tubo y en el otro se realiza una suspensin al 2-5% de globulos rojos.

Se identifican 20 tubos con la sigla de cada uno de los antigenos a determinar

Se coloca en cada tubo una gota de la suspensin de eritrocitos al 2-5% de la muestra problema + 1 gota del
antisuero correspondiente (VER TABLA ANEXA 5)

Se incuban de 15-20 min

Cuando obtengo en Salina rpida un negativo se continua con una incubacin de 15-30min. en la temperatura a la
cual reacciona optimamente con su respectivo anticuerpo (MNSU 22 C, el resto a 37 C) al termino de la incubacin se
sacan los tubos se centrifugan a 3500RPM / 20-30 segundos y se toma tubo por tubo observando algun tipo de
aglutinacin. Se reporta todos los resultados obtenidos en el formato F-A-14-23.

Se anotan los datos y resultados de la prueba en la Bitcota de Estudios especiales CAL-31-B y se conserva el
formato F-A-14-23 junto con el original del formato A-13-14-07. La copia del formato A-13-14-07 se le entrega al
Mdico residente o a la enfermera que lo solicite y se le pide que ponga los datos que se le solicitan y firme de
recibido en la Bitcora de Entrega de resultados de estudios especiales CAL-31-C.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 26 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

TABLA 5: ANTIGENOS ERITROCITARIOS

M N S s P Fya Fyb K k Jka Jkb Lea Leb Dia
S/4C
S/22C
S/37C
S/SC
CAGH

CAL-02-B

TIEMPO DE
INCUBACION

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 27 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

Una vez que el Mdico residente o la enfermera lleva la muestra a la ventanilla del laboratirio el Qumico revisa que la
muestra este bien identificada (Nombre completo del paciente o familiar, hr. de toma de muestra y fecha de la toma,
que la muestra sea la adecuada para el analisis que solicita y que la solicitud tenga todos los datos que se requieren.

Una vez que el Qumico verifica lo anterior le pide al Mdico residente se anote en la Bitcora de Registro CAL-31-A y
el Qumico anota el # consecutivo en el formato de solicitud del anlisis A-13-14-07 (original) y M-3-0-21 (original y
copia) y el turno que le corresponde. Este procedimiento se realiza si el Mdico del Banco de sangre lo considera
adecuado por el diagnostico del paciente o por que no se tengan en existencia concetrados plaquetarios del grupo
sanguineo del paciente.

El procedimiento se realiza de igual manera para Pool de plaquetas, Feresis o Concentrado plaquetario

La centrifuga se pone a temperatura de 22 a 24 C

El producto a desplasmatizar se centrifuga a 1400rpm/10min a una temperatura de entre 22-24 C, una vez que
concluye la centrifugacin por medio del Conector esteril o puncionanado la bolsa con la espiga de la bolsa transfer,
sosteniendo en la palma de la mano la bolsa que contiene el plasma y las plaquetas, se trasvaza el plasma en su
totalidad a la nueva bolsa.

A la bolsa que contienen las plaquetas se le deja una linea de aprox. 15 cm sellandola y desechando la bolsa que
contiene el plasma

A la bolsa que contiene las plaquetas por medio del conector esteril se le conecta un equipo de venoclicis para que
por medio de el puncione una bolsa o frasco de solucin salina fisiologica y se trasvasa la cantidad de solucin
adecuada o solicitada.

Se sella la bolsa para separa la solucin salina, se resuspenden las plaquetas y se coloca en agitacin durante
30min./100RPM/T.A. Con el formato M-3-0-21 copia y en la etiqueta indica que el producto fue desplamatizado.

Se anotan los datos del donador y paciente en la Bitcota de Control de asignacin de sangre CAL-31-D y se
conserva el formato A-13-14-07 junto con el original del formato M-3-0-21. La copia del formato M-3-0-21 se le entrega
al Mdico residente o a la enfermera que solicite el producto junto con el producto. Una vez que el Qumico completa
los datos de la bitcora CAL-31-D se le solicita que la firme de recibido en la Bitcora CAL-31-D y en el original del
formato M-3-0-21.

Una que el Qumico entrega el producto sella en la parte del formato M-3-0-21 de ENTREGADO, incluyendo la fecha
y hora en que se entrego el producto.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 28 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

DESPLAZMATIZACIN
Una vez que el Mdico residente o la enfermera lleva la muestra a la ventanilla del laboratirio el Qumico revisa que la
muestra este bien identificada (Nombre completo del paciente o familiar, hr. de toma de muestra y fecha de la toma,
que la muestra sea la adecuada para el analisis que solicita y que la solicitud tenga todos los datos que se requieren.

Una vez que el Qumico verifica lo anterior le pide al Mdico residente se anote en la Bitcora de Registro CAL-31-A y
el Qumico anota el # consecutivo en el formato de solicitud del anlisis A-13-14-07 (original) y M-3-0-21 (original y
copia) y el turno que le [Link] procedimeinto se realiza cuando el Mdico solicita por medio del formato A13-14-07 un paquete eritrocitario lavado o que el paquete a transfundir haya sido radiado 5 das antes o por que la
patologia del paciente asi lo requiera. (Verificar si el paquete fue filtrado cuando fue fraccionado)

Al Concentrado eritrocitariose le conecta por medio del Conector esteril la parte contraria a la espiga del equipo de
venoclisis y la parte sobrante se desecha. La parte que queda libre que es donde se encuentra la espiga se une a la
bolsa o frasco de solucin salina y se deja de 100 a 150ml.

Se sella la bolsa dejando aprox. de 5-10cm de linea en la bolsa del concentrado eritrocitario, homogeniza por medio
de inversin.

Se centrifuga colocando el paquete con los puertos de entrada hacia abajo a 3500RPM durante 10min.

Una vez que finaliza la centrifugacin se retira con sumo cuidado los vasos de la centrifuga y posteriormente el
Concentrado eritrocitario lavado el que se cuelga en un tripie.

Se identifica la bolsa transfer con los datos de la bolsa que contiene el CE a lavar y se prepara con 50-100ml de SSI la
cual se une a CE lavado y se deja pasar el CE LAVADO a la bolsa transfer deteniendo la transferencia de CE antes
de que la linea que divide el CE y el sobrenadante quede antes de 3cm de la base de los puertos.

Una vez que se detiene la transferencia se sella la linea y se separa la bolsa que contiene el sobrenadante para
desecharla

Se homogeniza el CE y se refrigera hasta su solicitud

Se anotan los datos del donador y paciente en la Bitcota de Control de asignacin de sangre CAL-31-D y se
conserva el formato A-13-14-07 junto con el original del formato M-3-0-21. La copia del formato M-3-0-21 se le entrega
al Mdico residente o a la enfermera que solicite el producto junto con el producto. Una vez que el Qumico completa
los datos de la bitcora CAL-31-D se le solicita que la firme de recibido en la Bitcora CAL-31-D y en el original del
formato M-3-0-21.

Una que el Qumico entrega el producto sella en la parte del formato M-3-0-21 de ENTREGADO, incluyendo la fecha
y hora en que se entrego el producto.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 29 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

LAVADO DE PAQUETES
ELUSION
FILTRACION
Una vez que el Mdico residente o la enfermera lleva la muestra a la ventanilla del laboratirio el Qumico revisa que la
muestra este bien identificada (Nombre completo del paciente o familiar, hr. de toma de muestra y fecha de la toma,
que la muestra sea la adecuada para el analisis que solicita y que la solicitud tenga todos los datos que se requieren.

Una vez que el Qumico verifica lo anterior le pide al Mdico residente se anote en la Bitcora de Registro CAL-31-A y
el Qumico anota el # consecutivo en el formato de solicitud del anlisis A-13-14-07 (original y copia) y el turno que le
corresponde. Este procedimiento se realiza cuando el Mdico lo solicita o cuando el Mdico del Banco de sangre lo
considera necesario se realiza para pacientes que se cree tiene aloanticuerpo o autoanticuerpo.

Se rotulan 2 tubos con los datos del paciente, una vez que la muestra se centrifuga a 3500RPM/8min. Se separa el
plasma y se toma aprox. 1ml (varia segn la cantidad de muestra extrada) del paquete de celulas

LAVADO CON SSI

Al tubo que contiene el paquete de celulas se le adiciona partes de SSI del tubo
Centrifugar a 3500rpm/2min, decantar (3 lavados minimo).

LAVADO CON SOLUCION DE LAVADO

Solucin de lavado dilucin 1/10 (1ml de solucin de lavado concentrado + 9ml de solucin salina fisiologica)
Al tubo que contiene el paquete de celulas lavadas con SSI se le adiciona partes de Sol. de lavado del tubo
Centrifugar a 3500rpm/2min, decantar (4 lavados minimo).

Despus del ltimo lavado se decanta totalmente la solucin de lavado.

Del paquete previamente lavado se toma una alicuota y se coloca en un tubo identificado y se adiciona la misma
cantidad de sol. de elucin

Se realizan dos movimientos de inversin al tubo y se introduce a la centrifuga a 3500rpm/1min. se decantar

(3 lavados minimo).

Despus del ltimo lavado se decanta totalmente la solucin de lavado y se adicionan 20 gotas de amortiguador
(color azul) pH 7
ELUIDO

TARJETA

TUBO

Realizar una solucin al 1% del panel de clulas del

del SIGLO XXI

Identificar 10 tubos

Tomar una alicuota de 50microlitros de las solucin

anterior + 50 microlitros del ELUIDO

Adicionar 1 gota de clulas panel del SIGLO XXI

+
2 gotas del ELUIDO
Incubar durante 15min.

Incubar durante 15min. en Diana Incubador

Lavadar con solucin de lavado 1 vez
Interpretar los resultados con la carta del panel
Agregar 2 gotas de suero de Coombs a cada tubo

Mezclar y centrifugar a 3500rpm/15-30seg

Interpretar los resultados con la carta del panel

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 30 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

Una vez que el Mdico residente o la enfermera lleva la muestra a la ventanilla del laboratirio el Qumico revisa que la
muestra este bien identificada (Nombre completo del paciente o familiar, hr. de toma de muestra y fecha de la toma,
que la muestra sea la adecuada para el analisis que solicita y que la solicitud tenga todos los datos que se requieren.

Una vez que el Qumico verifica lo anterior le pide al Mdico residente se anote en la Bitcora de Registro CAL-31-A y
el Qumico anota el # consecutivo en el formato de solicitud del anlisis A-13-14-07 (original) y M-3-0-21 (original y
copia) y el turno que le corresponde. Este procedimiento se realiza si el Mdico en la solicitud indica que se le realice
filtracin al producto solicitado

Una vez que se le realizarn las pruebas de compatibilidad al producto y esta listo para ser filtrado

Se selecciona el filtro por su capacidad y producto a filtrar y se identifica la etiqueta que trae la bolsa del equipo para
filtrar con el nombre del donador, tipo de sangre, # de registro, volumen, fecha de extraccin, fecha de caducidad y
fecha en que se esta realizando la filtracin.

Se realiza la unin de la bolsa y el equipo de filtracin con el TSCD SC-201A

Se corta la parte sobrante y se abre la parte de la linea que se sello para dejar pasar el producto y el piloto de la bolsa.

Se cuelga la bolsa en un tripie y se espera a que termine de pasar todo el producto

Si no se va a requerir el total de la bolsa, se coloca la bolsa ( a donde se encuntra el producto filtrado) en la balanza y
tomo solo la cantidad que requiero, procedo a sacar el aire de la bolsa y sello. Si se requiere todo el producto se
espera a que se filtre todo, se saca el aire, se sella y se pesa para conocer el peso final.

Se anotan los datos del donador y paciente en la Bitcota de Control de asignacin de sangre CAL-31-D y se
conserva el formato A-13-14-07 junto con el original del formato M-3-0-21(se especifica la cantidad que entrega). La
copia del formato M-3-0-21 se le entrega al Mdico residente o a la enfermera que solicite el producto junto con el
producto. Una vez que el Qumico completa los datos de la bitcora CAL-31-D se le solicita que la firme de recibido
en la Bitcora CAL-31-D y en el original del formato M-3-0-21.

Una vez que el Qumico entrega el producto sella en la parte del formato M-3-0-21 de ENTREGADO, incluyendo la
fecha y hora en que se entrego el producto.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 31 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS Y CELULAS

El Qumico del rea de grupos realiza el Control de calidad de los hemoclasificadores y clulas reactivo que son las siguientes:

Los hemoreactivos a utilizar son:

-Anti-A
-Anti-B
-Anti-AB
-Anti-A1
-Anti-H
-Anti-D
-Albumina 22% o Control de Rh

Las Clulas que se van a ocupar:

-Globulos rojos A1
-Globulos rojos A2
-Globulos rojos B
-Globulos rojos O
-Eritrocitos sensibilizados
-Eritrocitos no sensibilizados
-Globulos rojos de fenotipo conocido
(panel1-10)

El Control de calidad se realiza con las clulas del C.M. Siglo XXI a las que se les realizan tres lavados previos a su uso con SSI (1 L. de
solucin CS + 10ml pHix) hasta partes del tubo, centrifugar a 3500/ 2min, decantar, agitar para resuspender las clulas En el ltimo lavado
decantar sin resuspender. De cada una de las clulas realizar una suspensin al 5%. Durante los lavados determinar la existencia de
hemolisis y turbidez.
Identificar 4 tubos con los # del 1 al 4 y con la letra A,
4 tubos con la letra AB, 4 tubos con la letra B, 2 tubos con la letra A1 y 2 tubos con la letra H

Adicionar 2 gotas de su respectivo reactivo a los 4 o 2 tubos

Una vez que se adicionarn los reactivos se realiza lo siguiente:

A los TUBOS 1
Adicionar 1 gota de globulos
rojos A1(lavados)

A los TUBOS 2
Adicionar 1 gota de globulos
rojos A2(lavados)

A los TUBOS 3
Adicionar 1 gota de globulos
rojos B(lavados)

A los TUBOS 4
Adicionar 1 gota de globulos
rojos O (lavados)

Centrifugar 3500rpm / 15-30seg. Leer Aglutinacin y anotar en la bitcora de Control de Calidad

Identificar 2 tubos como D Rh+ y D Rh- :

A los 2 tubos adicionarle 2 gotas de Hemoclasificador D y al #1 adicionar 1 gota de globulos rojos R1r (clulas del panel C.M. Siglo XXI Rh
positivas) y al # 2 adicionar 1 gota de globulos rojos rr (clulas del panel C.M. Siglo XXI Rh negativas)

Identificar 2 tubos como albumina o control Rh:

CAL-02-B
A los 2 tubos adicionarle 2 gotas de reactivo ALBUMINA o el Control Rh y al #1 adicionar 1 gota de globulos rojos R1r (clulas del panel C.M.
Siglo XXI Rh positivas) y al # 2 adicionar 1 gota de globulos rojos rr (clulas del panel C.M. Siglo XXI Rh negativas)

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 32 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

Centrifugar 3500rpm / 15-30 seg. Leer Aglutinacin y anotar en la bitcora de Control de Calidad

Obsevar las especificaciones en la NOM- 017-SSA1-1993

Observar Avidez en placa de as clulas del C.M. Siglo XXI A1, A2, B, de la siguiente manera:
Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-A
+
1gota de clulas A1
Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitcora
Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-A
+
1gota de clulas A2
Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitcora

Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-B

+
1gota de clulas B
Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitcora

Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-AB

+
1gota de clulas A1
Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitcora
Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-AB
+
1gota de clulas A2
Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitcora
Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-AB
+
1gota de clulas B
Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitcora

Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-D

+
1gota de clulas con fenotipo R1r
Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitcora

Obsevar las especificaciones de Avidez de la NOM- 017-SSA1-1993

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 33 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-C3d-IgG

+
1gota de clulas sensibilizadas
Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitcora

Obsevar las especificaciones de Avidez de la NOM- 017-SSA1-1993

Para realizar el Control de calidad del suero de Coombs se identifican 1 serie de 8 tubos cada una con las siguientes diluciones: 1/1 o sin diluir
, , , 1/8, 1/16, 1/32, 1/64 y 1/ 128

Adicionar al tubo # 1
1 ml de Anti-IgG,-C3d

Adicionar al tubo #2 1ml de de Anti-IgG,-C3d + 1ml de SSI

Homogenizar

Al tubo #3 se le adiciona una alicuota de 1ml del tubo #2 y se homogeniza ,

Al tubo #4 se le adiciona una alicuota de 1ml del tubo #3 y se homogeniza
Asi se continua hasta la dilucin 1/128
en la ltima dilucin se desecha 1ml para que todos los tubos tengan la misma cantidad.
Montar 2 SERIES de 8 tubos identificada con cada una de las diluciones. Se toma una alicuota de 0.1ml de la ltima dilucin y se coloca en el
ltimos tubos de la SERIE I y IIy asi en todas las diluciones.
A las SERIE I y II adicionarles lo siguiente:

SERIE I
Adicionar 1 gota de eritrocitos sensibilizados lavados

SERIE II
Adicionar 1 gota de eritrocitos NO sensibilizados lavados

Se centrifugan 30seg / 3500rpm .

Leer Aglutinacin y anotar en la bitcora de Control de Calidad

En caso de obtener resultados negativos en cualquiera de las 2 series realizar consumo de antiglobulina humana para control de la tcnica y
reportar en la bitcora.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 34 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

ACTIVIDADES DE RUTINA
Anotar la temperatura de los refrigeradores
Ordenar refrigeradores
Sacar la lista de CE existente por # de registro, Fecha de caducidad y grupo.
Sacar la lista para Centro Nacional
Acomodar las plaquetas segn lo siguiente:
radiadas, cruzadas, prximas a caducar, disponibles.
Sacar la lista de plaquetas cruzadas
Tener el producto solicitado para cirugas e indicar la fecha en que se requiere
Se ordenan las requisiciones A-13-14-07 por # y turno
Se anota en egresos M-3-0-21
Cotejar en entrega de guardia
Lista de egresos y cancelados

Verificar que el producto solicitado a las 24 hrs se encuentra todava se

reincorpora al stock

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 35 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

CAL-31- A BITACORA DE ESTUDIOS ESPECIALES DE

INMUNOHEMATOLOGIA

Fecha: Da, mes y ao en que se esta realizando el estudio.

Registro: #de registro del paciente.
Nombre: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del paciente.
Edad: Aos que tiene en ese momento el paciente (opcional)
Sexo: M (hombre) y F (mujer).
Depto. y/o Servicio: Servicio de donde se solicita el estudio.
Cama: # de cama donde se encuentra el paciente.
Diagnostico: Diagnostico que da el medico.
G: Gesta
P: Partos
A: Abortos
Rhogam: Vacuna de Rh
Transfusin: Si ha sido transfundido si o no
Fecha: Fecha en fue transfundido
EST. LAB.
Bilis: Bilirrubinas
HTO: Hematocrito
HB: Hemoglobina
RETIS: Reticulositos
TP: Tiempo de protombina
P/G: Peso (g)
SABO
Grupo: Grupo Sanguneo del paciente.
Subgrupo: Cuando el paciente es del grupo A se determina su subgrupo A1 o A2
SRh
D, DU, Rh Salino, C, c, E, e: Determinacin de fenotipo de Rh

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 36 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

COOMBS
IgG-C3d, IgG, C3, IgM, Titulo, Potencia: Determinacin con el reactivo de
Coombs Positivo o Negativo, su titulo y potencia.
RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES FSABO
Suero: Tipo de muestra utilizada (suero)
Eluido Adsorcin: Tipo de muestra utilizada (eritrocitos)

Positivo: Cuando se encuentra positivo

Negativo: Cuando se encuentra negativo
Especificidad: Probable Anticuerpo
Titulo: Respuesta (en cruces)
Potencia: Potencia encontrada.

FENOTIPO
P, M, N, S, s, Fya, Fyb, Jka, Jkb, Lea, Leb, K, k: Antgenos eritrocitarios con
anticuerpos especficos.
Da: Da en se realiza el estudio.
RPR
Positivo: Se marca con una X si es positivo
Negativo: Se marca con una X si es negativo
Titulo: Titulo encontrado en la prueba.
Ab INMUNES
Anti-A, Anti-B: Prueba de aglutininas o Sello, firma, rubrica del Qumico que
realizo el estudio.

CAL- 31-E CONTROL DE CALIDAD

Fecha: Da, mes y ano en que se realiza el control de calidad.
Turno: Turno que esta realizando el control de calidad (M matutino, V vespertino,
N nocturno, E especial)
Reactivo: Hemoclasificado al que se le va a realizar el control de calidad..
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 37 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

Lote: de lote del hemoclasificado.

Caducidad: Fecha en que caduca el hemnoclasificado.
Marca: Nombre comercial que tiene el hemoclasificado
Registro: # que tiene como registro el hemoclasificado.
Color: Color que presenta el hemoclasificado.
Aspecto: Aspecto transparente o turbio del hemoclasificado.
A1, A2, B, O, R1r, rr, A1, A2, B, Rr: Resultados al realizar el control de calidad.
Hemolisis: Negativa o positiva.
Turbidez: Negativa o positiva

Cel. Sensib.: Con dilucioneas del 1/1 al 1/128 y clulas sensibilizadas.

Cel. no sensib: Con dilucioneas del 1/1 al 1/128 y clulas no sensibilizadas.
CAGH: Consumo de antiglobulina humana.
31-F ENTREGA DE GUARDIA

Fecha: Da, mes y ano de entrega de turno.

Req. Inicial: # de requisicin inicial
Req. Final: # de requisicin final
Turno: Turno que esta realizando el control de calidad (M matutino, V vespertino,
N nocturno, E especial)
Egreso: Numero de egreso inicial con que se recibe el turno.
Ingreso: Numero de egreso final con que se recibe el turno.

Ciruga con clulas: Nombre completo del paciente y registro.

Productos liberados: Numero, tipo de producto y estado en que se encuentra
(pendiente, liberados)
Pacientes: Nombre del paciente y registro
Refrigeradores: Si estn en orden o no.
Entrega: Firma o/y sello, rubrica del Qumico(a) que entrega el turno.
Recibe: Firma o/y sello, rubrica del Qumico(a) que recibe el turno.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 38 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

CAL-31-D CONTROL DE ASIGNACION DE SANGRE

Fecha: Da, mes y ano en que asigna la sangre
Registro: Numero de registro del donador (paquete).
Nombre del donador: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del
donador.
Producto: Tipo de producto solicitado (CE, CP, etc )
GPR. Y Rh: Grupo sanguneo y Rh del donador.
Volumen: Volumen que contiene el paquete.
Realizo Prueba: Qumico que realiza la asignacin del producto.
Resultados: Compatible o no compatible.
No. Solic.: Numero y turno de la solicitud.
Proced.: ------------------Observaciones: Cuando existe alguna especificacin.
Registro: Numero de registro del paciente.

Nombre del receptor: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del

paciente.
GPO Y Rh: Grupo sanguneo y Rh del paciente.
Departamento y/o Servicio: Servicio que solicita el producto.
Cama: Numero de cama en que se encuentra el paciente.
Fecha ent.: Da, mes y ano en que se entrega el producto solicitados
Hora entr.: Hora en que se entrega el producto solicitado.
Volumen: Volumen real que se entrega.
Recibi: Personal que recibe el producto.
Entrego: Qumico que entrega el producto.
No. Salida: Numero que se le asigna de salida y turno.

CAL -31-C ENTREGA DE RESULTADOS DE ESTUDIOS ESPECIALES

Fecha: Da, mes y ano en que se realiza el estudio.
Registro: Numero de registro del paciente.
Servicio: Departamento que solicita el estudio.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 39 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

Nombre del paciente: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del

paciente.
Estudios solicitados: Prueba Que se solicita se realice
Medico, Nombre, firma, clave: Rubrica o/y firma y clave del personal que recoge
los resultados del estudio.
CAL 31- G RELACION DE PRODUCTOS ENVIADOS A RADIOTERAPIA
Fecha: Da, mes y ano en que se lleva a radiologa.
Tipo de producto: Tipo de producto a radiar (CE, CP)
Grupo: Grupo sanguneo y Rh del producto a radiar.
Registro: Numero de registro de los productos a radiar.
Hora de entrega: Hora en que se entrega el producto a radiologa.
Hora de recoger: Hora en que se puede pasar a recogerlo.
GRUPOS EN EL TURNO VESPERTINO
Fecha: Da, mes y ao en que se determino el grupo sanguneo y Rh al donador.
Muestra: # de registro del donador.
Grupo: Grupo sanguneo del donador.
Rh: Fenotipo del donador.
Observaciones: --------------------------CAL- 31-I PRODUCTOS REGRESADOS
Fecha: Da, mes y ao en que se regresa el producto.
Hora: Hora en que se regresa el producto
Registro del producto: # del registro del producto que se regreso.
Grupo: Grupo sanguneo del producto devuelto.
Nombre del paciente: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del
paciente.
Registro del paciente: # de registro del paciente.
Servicio: Departamento donde se devuelve el producto.
Regresa: Personal que regresa el producto.
Recibe: Qumico que recibe el producto.
Causa: Motivos por que el producto es devuelto.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 40 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

CAL-31-J BITACORA DE ESTADISTICAS INMUNOHEMATOLOGICAS

Fecha: Da, mes y ao en que se realiza la estadstica.
M: Turno Matutino.
V: Turno Vespertino.
N: Turno Nocturno
# REQ.: # de requisiciones.
S ABO: # de Pruebas de grupos sanguneos en el sistema ABO realizadas.
SUB GRUPO: # de subgrupos realizados.
S Rh: # de anlisis para conocer el Rh
Fenotipo: # de pruebas para conocer el fenotipo.
Fenotipo otros: # de otras pruebas que se realizaron para conocer el fenotipo.
C.D.: # de Coombs directo realizados.
C.D. ESP.: # de Coombs directo especial realizados.
Rastreo de Ab: # de Rastreo de Anticuerpos que se realizaron.
Titulo de Ab: # de titulaciones de anticuerpos se realizaron
Eluido: # de eluidos realizados.
Adsorciones: # de adsorciones realizadas.
Aglutininas A: # de aglutininas A se realizaron.
Aglutininas B: # de aglutininas B se realizaron.
RPR: # de Pruebas RPR se realizaron.
C.E.: # de Concentrados Eritrocitarios entregados.
C.P.: # de Concentrados plaquetarios entregados
P.F.: # de Plasmas Frescos entregados.
G.A.H.:

F VIII: # de Factor VIII

F IX: Factor IX
ALB. HUMANA: Albmina humana
C.E. FRACC.: # de Concentrado Eritrocitario que se fraccionaron.
C.P. FRACC.: # de Concentrado plaquetario que se fraccionaron.
C.E. LAVADO: # de Concentrado Eritrocitario que se lavaron.
C.E. FILTRADO: # de Concentrado Eritrocitario que se filtraron.
C.E. REGRESADO: # de Concentrado Eritrocitario devueltos.
P.F. REGRESADO: # de Plasma Fresco devuelto.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-31
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 41 de 131

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas

C.P. REGRESADO: # de Concentrados plaquetarios revueltos.

VALORACIONES: Valoraciones realizadas.
RESPONSABLE: Qumicos responsables del turno.

CAL-31-K PACIENTES CON PROBLEMAS DE TRANSFUSION

Fecha: Da, mes y ao en que se suscita el problema de transfusin.
Reg. pte. : # del registro del paciente.
Nombre pte.: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del paciente.
Gpo: Grupo sanguneo del paciente.
Dx: Diagnostico especificado por el Mdico.
Gpo a trans: Grupo sanguneo a transfundir.
Observaciones: Cualquier observacin que sea importante en cuanto a la
transfusin realizada.
CAL-31- L BITACORA DE SALIDA DE PRODUCTOS A OTROS BANCOS
La libreta debe incluir el # de registro del producto a salir, el tipo de producto, el
nombre completo del disponente, el volumen del paquete, el grupo sanguneo y
Rh y la fecha de extraccin del producto junto con la de caducidad.
Una vez que el Qumico saca la relacin le entrega una copia a la Secretaria para
que llene el formato A-14-01 o F-A-14-01.

REGISTROS
Todas las Bitcora de este procedimiento se resguardan en archivo activo durante
1 ao y en archivo muerto 5 aos.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 3 Febrero-2010
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 42 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre: Dr. Carlos E. Cob

Sosa

Nombre: Dra. Margarita L.

Medina Macas

Nombre: Dra. Dinora V

Aguilar Escobar

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha: 3-Febrero-2010

Fecha: 3-Febrero-2010

Fecha: 3-Febrero 2010

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 3 Febrero 2010
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 43 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Se cambia formato de Historia Clnica

y programa de cmputo

03

03/02/10

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 3 Febrero 2010
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 44 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

DESCRIPCION DEL PROCESO

Una vez que al donador se le toman los datos de identificacin, se imprime la
Historia Clnica, el candidato a donador firma la carta de consentimiento
informado, se registra en la Bitcora CAL-20 B, se valoran las venas,
somatometra, signos vitales y toma de muestra (Ver procedimiento CAL-20, CAL
20-B, CAL-30 y CAL-43) se procede de la siguiente manera:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 3 Febrero 2010
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 45 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica
El Medico toma del rea de recepcin la ficha de
identificacin del donador M-3-0-23 (y la Historia Clinca M3-0-10-a; slo en caso de procedimiento manual)

De la ficha de identificacin del donador M-3-0-23 observa el nombre

completo del donador, lo llama y le indica que pase al consultorio donde
se le realizar la valoracin medica

El mdico, supervisa que los parmetros de signos vitales

registrados, por el enfermera, en la ficha de Identificacin, esten
dentro de las especificaciones marcadas por la NOM-003-1993, As
como tambin que los resultados de la biometra hemtica que se
realiz en el rea de toma de muestras est acorde con los
parmetros que establece la NOM-003-1993. Posteriormente
interroga, explora y elabora Historia Clnica (cuando el procedimiento
es manual llena formato de Historia Clnica M-3-0-10-a), ingresa
datos en el sistema de cmputo (Programa Winlab)

Mdico verifica datos de somatometra, signos vitales e ingresa, los

parmetros emitidos de toma de muestra de la biometra hemtica en el
apartado del sistema de cmputo (Datos del Donante) y determina si el
candidato cumple con los requerimientos para donar sangre.

No Apto

El mdico determina que el

candidato no es apto para donar
sangre y anota causa de rechazo
en la Historia Clnica as como en
el sistema de cmputo busca y
graba la (s) causa (s) por la (s)
cual(es)el donador NO ES APTO

Si es Apto

En el sistema de cmputo (en Datos del Donante) determina que el donador

es aceptado para donar sangre y lo graba. Deposita en el buzn del rea de
Recepcin la Histotia Clnica con la Biometra Hemtica para que sea
tomado por la recepcionista para asignar nmero de unidad, imprimir
etiquetas y entregar todos estos documentos a la enfermera para continuar
con el procedimiento de extraccin de sangre total o de componentes
sanguneos por afresis. (Ver Procedimiento CAL-43).

Mdico informa causa(s)

de la exclusin para donar
sangre

El Mdico informa al
personal de Recepcin y
Trabajo social para
evaluacin social y
reprogramacin de cita.
Les entrega la Historia
Clnica

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 3 Febrero 2010
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 46 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

FICHA DE IDENTIFICACION DEL DONADOR

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 3 Febrero 2010
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 47 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

HISTORIA CLINICA DE CANDIDATO A DONADOR

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 3 Febrero 2010
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 48 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 03
Fecha: 3 Febrero 2010
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 49 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

REGISTROS
Bitcora de entrega y recepcin de Historias Clnicas del donador de sangre y
componentes sanguneos.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 12-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 50 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

NOMBRE: DR. ISMAEL

HERNNDEZ MONTIEL

NOMBRE: DRA. MARGARITA NOMBRE: DRA. DINORA

L. MEDINA MACAS
V. AGUILAR ESCOBAR

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha: 12-Juulio-2011

Fecha: 13-Juliol-2011

Fecha: 13-Julio- 2011

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 12 Julio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 51 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

CAMBIO

REVISIN

FECHA

04

08/04/11

Se integra el sistema Kanban.

Se anexa firma de la evaluacin de la
biometra hemtica as como la
impresin del formato de historia
clnica electrnica M-3-0-10 a y b por
el mdico responsable.
Se integra el CAL-64 Procedimiento
de manejo de candidatos a donacin
No Aptos del rea de seleccin de
disponentes en este procedimiento,
as mismo se da de baja en la lista
maestra.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 12 Julio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 52 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

DESCRIPCION DEL PROCESO

El mdico toma la hoja de Ficha de identificacin del Kanban ubicado en el rea
de recepcin y procede de la siguiente manera:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 12 Julio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 53 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica
El Medico toma del Kanban ubicado en el rea de valoracin mdica la ficha
de identificacin del donador M-3-0-10-(a y b) y el resultado de la biometra
hemtica (BH) en caso de procedimiento manual tambin se incluye la
Historia Clinca M-3-0-10-(a y b)

De la ficha de identificacin del donador M-3-0-10a el mdico observa el

nombre completo del donador, lo llama y le indica que pase al
consultorio donde se le realizar la valoracin medica. En caso de
sistema manual los datos los toma de la Historia Clnica

El mdico, verifica que los parmetros de signos vitales registrados,

por la enfermera, en la ficha de Identificacin, estn dentro de las
especificaciones marcadas por la NOM-003-1993, As como tambin
que los resultados de la biometra hemtica que se realizaron en el
rea de toma de muestras estn acordes con los parmetros que
establece la NOM-003-1993, y anota su nombre, clave y firma.
Posteriormente interroga, explora y elabora la Historia Clnica,
ingresa los datos en el sistema informtico de banco de sangre
cuando el procedimiento es manual llena formato de Historia Clnica
M-3-0-10-(a y b).

El mdico emite el diagnstico y determina si el candidato cumple con

los requerimientos normativos para realizar la donacin de sangre o de
afresis.
Si el disponente es APTO NO APTO lo registra en el sistema
informtico de banco de sangre, si es Apto imprime la historia clnica;
anota su nombre, clave y firma de responsable en la ficha de
identificacin (formato M-3-0-23) y en la historia clnica (formato M-3-010-a y b) y solicita la firma al disponente

No Apto

El mdico anota causa de rechazo

en la ficha de identificacin formato
M-3-0-23 y en la Historia clnica en
el formato M-3-0-10-(a y b) del
sistema informtico de banco de
sangre (y manual)

Si es Apto
El mdico informa al
disponente la causa de
rechazo
Deposita en el Kamban del rea de Recepcin la Ficha de Identificacin,
impreso de biometra hemtica y la Historia Clnica para que en recepcin
se le asigne nmero de unidad e impresin de etiquetas para
posteriormente colocar todos estos documentos en el Kamban del rea de
flebotoma afresis segn corresponda y proceder a la extraccin de
sangre total (Ver CAL-46) o de componentes sanguneos por afresis. (Ver
Procedimiento CAL-50)

CAL-02-B

El mdico informa trabajo

social y a recepcin que
el disponente no es apto,
para posterior evaluacin
social y/o reprogramacin
de cita

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 12 Julio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 54 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

FICHA DE IDENTIFICACION DEL DONADOR M-3-0-23 (PROCEDIMIENTO

MANUAL)

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 12 Julio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 55 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica
HISTORIA
CLINICA
DE
(PROCEDIMIENTO MANUAL)

CAL-02-B

CANDIDATO

DONADOR

M-3-0-10a

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 12 Julio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 56 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica
HISTORIA
CLINICA
DE
(PROCEDIMIENTO MANUAL)

CAL-02-B

CANDIDATO

DONADOR

M-3-0-10b

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 12 Julio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 57 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

FICHA DE IDENTIFICACIN DEL

INFORMTICO DE BANCO DE SANGRE

CAL-02-B

DONANTE

(M-0-3-23)

SISTEMA

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 12 Julio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 58 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

HISTORIA CLNICA (SISTEMA INFORMTICO DE BANCO DE SANGRE)

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 12 Julio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 59 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-40
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 12 Julio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 60 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

En el caso de los candidatos a donacin No Aptos:

La ficha de identificacin y/o la Biometra Hemtica impresas, se archivan
durante 3 meses como indica la NOM-003-SSA-1993
La historia clnica permanece resguardada en el sistema informtico de
banco de sangre.
En el sistema quedan registrados los candidatos a donacin excluidos
permanentemente que por no cumplir con los requisitos no sern aceptados como
donadores en caso de solicitar nuevamente ser candidatos.

REGISTROS
Bitcora de entrega y recepcin de Historias Clnicas CAL-50D se almacena en el
archivo durante 3 meses.
Bitcora CAL-20B (Registro de donadores), se almacena en el archivo durante 3
meses.
Ficha de Identificacin (M-3-0-23) (Manual y sistema informtico de banco de
sangre), se almacena junto con la historia clnica.
Historia Clnica M-3-0-10-(a y b) (Manual y sistema informtico de banco de
sangre). Cuando el donador es Apto dichos registros permanecen durante 5 aos
en archivo activo y 5 aos en archivo muerto.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-42
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 61 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de solicitud y entrega de estudios
en el laboratorio

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-42
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 62 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de solicitud y entrega de estudios
en el laboratorio

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Ninguno

29/09/03

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-42
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 63 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de solicitud y entrega de estudios
en el laboratorio

DESCRIPCION DEL PROCESO

Los diferentes estudios que se realizan en el rea de Inmunohematologia del
laboratorio se solicitan de la siguiente manera:

El Mdico tratante solicita al rea de Inmunohematologia los estudios con los siguientes documentos:
-El formato A-13-14-07 original y copia donde indica los estudios que requiere
-Y la muestra del paciente identificada (Registro y nombre completo del paciente, fecha y hora de toma de muestra)
La muestra puede ser entregada en el rea de Inmunohematologia por el Mdico tratante, Residente, personal paramdico y mensajeros

El personal de Inmunohematologia revisa el original y la copia de los formatos que le entrega y verifica que coincida el nombre que tiene
el formato A-13-14-07 y la muestra , tambien verifica que la muestra sea la adecuada para los estudios solicitados . Si la identificacin de
la muestra o el tipo de muestra no es la correcta se procede a retener la muestra y solicitar una nueva muestra identificada correctamente.

El personal de inmunohematologia entrega los formatos al medico, enfermera o mensajero y le pide que anote en la bitcora de solicitud
de productos CAL-28-A los datos que se le solicitan y asigna el # consecutivo del da y una inicial segn el horario (M para matutino, V
para vespertino, N para nocturno y E para sabado, domingo o dias festivos) en el formato A-13-14-07 .

Solo en caso de duda se consulta con el Jefe de Laboratorio o con el Mdico especialista

SI

NO

Se esta de acuerdo con lo

solicitado lo indica en el
formato con un SI en la parte
superior derecha

Se cancela su realizacin, y se notifica al servicio solicitante

El personal de inmunohematologia realiza las pruebas solicitadas

Una vez que el personal de inmunohematologia realizo los estudios solicitados anota en la bitcora de estudios especiales CAL-42-A los
datos que se le solicita y procede a anotar los resultados en el original y en la copia del formato A-13-14-07 y guardar en el folder de
estudios especiales la copia del formato

Cuando el Mdico, enfermera o mensajero solicita los resultados se le indica anote en la Bitacora de entrega de resultados de estudios
especiales CAL-42-B lo que se le solicita y firme de entregado y se le entregan la copia del formato A-13-14-07 con los resultados.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-42
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 64 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de solicitud y entrega de estudios
en el laboratorio

El formato A-13-14-07 es llenado por el Mdico que solicita el producto y se

muestra a continuacin:

La bitcora CAL-28-A es llenada por el Mdico que solicita el producto y se

muestra en el Procedimiento CAL-28.
El formato A-13-14-07 que se entrega al laboratorio como solicitud del estudio
contiene al frente en la parte superior izquierda un recuadro en blanco donde se
plaquea el carnet o se le escriben los datos de la persona a la que se realizara el
estudio.
Cualquiera de los datos que no se encuentren en el formato A-13-14-07 y no sean
esenciales para realizar el estudio se puede quedar el espacio vaci o cancelar
con una raya
La bitcora de Estudios especiales de Inmunohematologia CAL-42-A debido a su
tamao no se muestra dentro de este procedimiento.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-42
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 65 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de solicitud y entrega de estudios
en el laboratorio

La bitcora de Estudios especiales de Inmunohematologia CAL-42-A se llena

de la siguiente manera:
Fecha:
Registro:
Nombre:

Edad:
Sexo:
Depto. y/o servicio:
Cama:
Diagnostico:

Da, mes y ano en que se solicita el estudio.

# asignado por el INP
Apellido paterno, Apellido materno y Nombre del
paciente o donador a quien se le solicita se le realicen
los estudio.
Se calcula de la fecha de nacimiento que contiene el
carnet
M masculino y F femenino y puede ser obtenido del
carnet.
Se encuentra en el formato A-13-14-07
# de cama donde se encuentra el paciente
Se encuentra en el formato A-13-14-07

Datos referentes a la madre

G:
P:
A:

# de gesta es el paciente
# de parto es el paciente
# de abortos

RHOGAM:
Transfusin:
Fecha:

Vacuna anti-D
Si existen transfusiones anteriores
Si existe alguna transfusin la fecha en que se le realizo

Estudios de Laboratorio
Bilis:
Si se requiere este resultado para los estudios que se
van a realizar debe ser incluido por el medico que
solicita los estudios.
HTO:

HB:

CAL-02-B

Si se requiere este resultado para

van a realizar debe ser incluido
solicita los estudios.
Si se requiere este resultado para
van a realizar debe ser incluido
solicita los estudios.

los estudios que se

por el medico que
los estudios que se
por el medico que

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-42
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 66 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de solicitud y entrega de estudios
en el laboratorio

RETIS:

TP:

P/G:

Si se requiere este resultado para

van a realizar debe ser incluido
solicita los estudios.
Si se requiere este resultado para
van a realizar debe ser incluido
solicita los estudios.
Si se requiere este resultado para
van a realizar debe ser incluido
solicita los estudios.

los estudios que se

por el medico que
los estudios que se
por el medico que
los estudios que se
por el medico que

SABO
Grupo:
Subgrupo:

Estudio que se puede solicitar al laboratorio.

Estudio que se puede solicitar al laboratorio.

SRh
D, Du, Rh salino, C,
c, E, e:

Estudios que se puede solicitar al laboratorio.

Coombs
IgG-C3d, IgG, C3d,
IgM, Titulo, Potencia:

Estudios que se puede solicitar al laboratorio.

Rastreo de anticuerpos irregulares FSABO

Suero, Eluido Absorcin ( Positivo o Negativo),
Especificidad, Titulo, Potencia:
Estudios que se puede solicitar al laboratorio.
Fenotipo
P, M, N, S, s, Fya,
Fyb, Jka, Jkb, Lea,
Leb, K, k, Dia:
RPR
Positivo, Negativo,
Titulo:

CAL-02-B

Estudios que se puede solicitar al laboratorio.

Estudios que se puede solicitar al laboratorio para el

anlisis de sfilis.

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-42
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 67 de 7

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de solicitud y entrega de estudios
en el laboratorio

Ab inmunes
Anti A y/o Anti B:

Estudios que se puede solicitar al laboratorio para

conocer la presencia de anticuerpos.

La bitcora de Entrega de resultados de Estudios

Inmunohematologia CAL-42-B se muestra a continuacin:

especiales

de

BITACORA DE ENTREGA DE RESULTADOS DE ESTUDIOS ESPECIALES DE INMUNO HEMATOLOGA

CAL-42-B

Fecha

Registro

Nombre del
paciente

Estudio
solicitado

Personal que recoge el

resultado
Nombre/Firma/clave

La bitcora de Entrega de resultados de Estudios especiales

Inmunohematologia CAL-42-B se llena de la siguiente manera:

de

Fecha: Da, mes y ao en que se realiza el estudio.

Registro: Numero de registro del paciente.
Nombre del paciente: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del
paciente.
Estudios solicitados: Prueba Que se solicita se realice
Personal que recoge el resultado, Nombre, firma, clave: Rubrica o/y firma
y clave del personal que recoge los resultados del estudio.
REGISTROS

El formato A-13-14-07 se debe almacenar 5 ao en archivo activo y 5 aos en

archivo muerto.
La bitcora CAL-42-A se debe almacenar 5 ao en archivo activo y 5 aos en
archivo muerto.
La bitcora CAL-42-B se debe almacenar 5 ao en archivo activo y 5 aos en
archivo
muerto.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 07 de Octubre 2009
Pgina 68 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de toma de muestra

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 07 de Octubre 2009
Pgina 69 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de toma de muestra

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Se modifica procedimiento con datos

administrativos actualizacin del
equipo automatizado de Biometra
Hemtica.

04

07 de Octubre de 2009

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 07 de Octubre 2009
Pgina 70 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de toma de muestra

DESCRIPCION DEL PROCESO

Una vez que al donador se le realiza la valoracin DE SIGNOS VITALES Y
SOMATOMETRIA (Ver procedimiento CAL-30), el Qumico/Laboratorista del rea de
toma de muestras de Banco de Sangre toma la Ficha de Identificacin del Donador
(Formato M-3-0-23) del Buzn de valoracin del disponente, que se encuentra en
recepcin y se procede de la siguiente manera:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 07 de Octubre 2009
Pgina 71 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de toma de muestra

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 07 de Octubre 2009
Pgina 72 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de toma de muestra

El formato F-A-14-26 se muestra a continuacin:

Instituto Nacional de Pediatra

BANCO DE SANGRE

CLASIFICACION DE GRUPOS ABO Y Rh0 (D)

RESULTADOS
SUBGRUPOS DE A

No. DE
UNIDAD

ANTI-A

ANTI-B

ANTIAB

AUTO

GR-A1

GR-A2

GR-B

GR-O

LEC.-A1 ANTI-H

S-RH

ANTI-D

CRho

GRUPO

Hto

Hb

LEUCO

PLAQ RAiFSABO HORA REQ. HORA RES

1
k

0
F-A-14-26

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 07 de Octubre 2009
Pgina 73 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de toma de muestra

El formato F-A-14-26 se llena de la siguiente manera:

Resultados:
Hb (Hemoglobina): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados del CELL DYN RUBY
Hto (Hematocrito): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados del CELL DYN RUBY
LEUCO (Leucocitos):Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados del CELL DYN RUBY
PLAQ (Plaquetas): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados del CELL DYN RUBY
Nota 1: En el equipo CELL DYN RUBY se debe correr controles diariamente antes de
su uso (Ver procedimiento CAL-14).
Nota 2: Los tubos deben contener el nombre completo del paciente, nmero de registro,
nmero de toma de muestra y fecha.
REGISTROS
F-A-14-26 Se debe almacenar en el archivo activo durante 5 aos y en el archivo muerto
5 aos.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 27 Junio del 2011
Pgina 74 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de toma de muestra

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 27 de Junio del 2011
Pgina 75 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de toma de muestra

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Se inserta el nuevo formato M-3-4-10

05

27 de Junio del 2011

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 27 de Junio del 2011
Pgina 76 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de toma de muestra

DESCRIPCION DEL PROCESO

Una vez que al donador se le realiza la valoracin DE SIGNOS VITALES Y
SOMATOMETRIA (Ver procedimiento CAL-30), el Qumico/Laboratorista del rea de
toma de muestras de Banco de Sangre toma la Ficha de Identificacin del Donador
(Formato M-3-0-23) del Buzn de valoracin del disponente, que se encuentra en
recepcin y se procede de la siguiente manera:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 27 de Junio del 2011
Pgina 77 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de toma de muestra

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 27 de Junio del 2011
Pgina 78 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de toma de muestra

El formato M-3-4-10 se muestra a continuacin:

El formato M-3-4-10 se llena de la siguiente manera:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Nivel de Revisin: 05
Fecha: 27 de Junio del 2011
Pgina 79 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de toma de muestra

Resultados:
Hb (Hemoglobina): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados
Hto (Hematocrito): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados
LEUCO (Leucocitos):Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados
PLAQ (Plaquetas): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados
Nota 1: En el equipo Automatizado de Biometras se debe correr controles diariamente
antes de su uso (Ver procedimiento CAL-14).
Nota 2: Los tubos deben contener el nombre completo del paciente, nmero de registro,
nmero de toma de muestra y fecha.
REGISTROS
No asociados

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-44
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 80 de 3

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de separacin y almacenamiento
de muestras

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-44
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 81 de 3

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de separacin y almacenamiento
de muestras

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Ninguno

29/09/03

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-44
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 82 de 3

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de separacin y almacenamiento
de muestras

DESCRIPCION DEL PROCESO

El Personal Auxiliar del laboratorio del Banco de sangre que se encarga de separar y
almacenar las muestras analizadas lleva a cabo el siguiente proceso:
De las muestras obtenidas en el rea de sangrado (en enfermera) y que son utilizadas en el rea de serologia se
realiza la separacin y almacenamiento de la muestra.
Los tubos de sangre total (tapon rojo) se centrifugan en la centrifuga Hettich Eba8s, de 5 a 10 minutos, de 3500 a
5500 rpm, y de 70 a 100% de potencia.
Los tubos de biometra hemtica (tapn morado) se separan en la centrifuga Sero-fuge durante 3 minutos a su
mxima velocidad.
Coloca las muestras separadas en una gradilla y las entrega al rea de serologa.
Para realizar el almacenamiento:
Se marca el criotubo (s) con el nmeros de registro del da y/o Nombre completo del paciente o # del donador
Se toma el tubo que contiene la muestra y se trasvasa al criotubo identificado con ese mismo # o Nombre,
asegurandose solo pase el suero, se cierra y se coloca en una gradilla de unicel
Una vez que se a terminado de vaciar todas las muestras, se saca la gradilla del refrigerador observando que sea la
que contenga la ltima muestra colocada un da anterior.

Una vez que se encuentran ordenadas se resguardan en el refrigerador a -70 C

El Auxiliar de laboratorio marca las gradillas de unicel para poderlas guardar en el

refrigerador con el # correspondiente visible para que sea posible identificarlas
fcilmente y las coloca por # consecutivo.
REGISTROS
No existen registros asociados a este procedimiento

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-45
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 27 JULIO 2006
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 83 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de lavado del material

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-45
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 27 JULIO 2006
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 84 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de lavado del material

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Ninguno

27/07/2006

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-45
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 27 JULIO 2006
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 85 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de lavado del material

DESCRIPCION DEL PROCESO

El Personal Auxiliar de laboratorio del Banco de sangre encargado del lavado de
los diferentes tipos de material lleva a cabo el siguiente proceso:
El Auxiliar del laboratorio prende el horno a una temperatura aprox. de 120 C.
Se toman los diferentes botes de las reas de Pruebas cruzadas y grupos sanguineos y se verifica que el material haya estado en
contacto con la solucin que contiene el bote. Si no es as se sumergen durante 10-15min. Aproximadamente para que se lleve a cabo
la desactivacin.

El bote que contiene las pipetas se vacia en la tarja y se

seleccionan
-Las rotos: las separo o tiro al contenedor de material
peligrosos.
-Las que tienen presencia de contaminacin las pongo al
chorro del agua y las ordeno para que la punta de todas quede
hacia el mismo lugar.
-Las que presentan una contaminacin mayor se ponen a
remojar en una mezcla de agua/jabn/ cloro.

El bote que contiene los tubos se vacia en la tarja y se

seleccionan
-Los rotos: se separan y tiran a una caja de cartn
-Los que tienen presencia de contaminacin los pone al
chorro del agua y los talla con el escobillon uno por uno
-Los que presentan una contaminacin mayor se ponen a
remojar en una mezcla de agua/jabn/ cloro

Una vez que las pipetas o tubos contaminados se han remojando se enjuagan uno por uno
(si se cree necesario) en el chorro del agua

Si alguno de los tubos presentara algun tipo de marca con plumn se les talla con el sacate hasta borrarla en su totalidad .

Cuando ya se tallarn se enjuagan con agua a presin, se sacuden y se unden en una charola que contiene agua destilada , hasta que
se observe que no contienen jabn.

Las pipetas se sacuden y se colocan boca a arriba en una canastilla y los tubos boca a bajo .

Una vez que se termina el tiempo en la estufa se ponen los guantes adecuados y se saca la canastilla , se deja enfriar y se coloca el
material en su lugar.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-45
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 27 JULIO 2006
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 86 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de lavado del material

Nota: Observar que el material este en contacto con la mezcla agua/jabn/cloro

antes de lavar. Si no fue as hundir durante 30-45 minutos aproximadamente para
desactivarlos.
REGISTROS
No existen registros asociados a este procedimiento.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-45
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 27 JULIO 2006
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 87 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de lavado del material

INDICACIONES DEL LAVADO DE MATERIAL DEL EQUIPO VITROS ECiQ

1. -Inactivar con alcohol etlico durante 30 minutos

2. Enjuagar con agua de la llave

3. Dejar en
minutos.

una mezcla de agua-jabn al 2 % por aproximadamente 15

4. Enjuagar con abundante agua de la llave y posteriormente con agua

destilada.

5. Dejar boca-abajo para escurrir y secar.

6. Colocar el material en el lugar correspondiente.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-45
Nivel de Revisin: 2
Fecha: 27 JULIO 2006
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 88 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de lavado del material

TABLA PARA PREPARAR MEZCLA CLORO-AGUA AL 1:10

LTS. AGUA
0.900
1.800
4.5
9.0
13.5

ml CLORO
100
200
500
1000
1500

VOL. FINAL
1 LT
2 LT
5 LT
10 LT
15 LT

TABLA PARA PREPARAR MEZCLA JABON-AGUA AL 2%

LTS. AGUA
0.980
1.960
4.900
9.800
10.780
11.760

ml JABON
20
40
100
200
220
240

REGISTROS
No existen registros asociados a este procedimiento.

CAL-02-B

VOL. FINAL
1 LT
2 LT
5 LT
10 LT
11LT
12LT

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-46
ISBN: 978-968-9170-17-4
Nivel de Revisin: 08
Fecha: 05 de Diciembre 2011
Pgina 89 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Extraccin Sangunea

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre: Enf. Martha

Concepcin Jimnez Martnez

Nombre: Dra. Margarita L.

Medina Macas

Nombre: Dra. Dinora Aguilar

Escobar

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha: 1de diciembre 2011

Fecha: 5 de diciembre 2011

Fecha: 5 de diciembre 2011

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-46
Nivel de Revisin: 08
ISBN: 978-968-9170-17-4
Fecha: 05 de Diciembre 2011
Pgina 90 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Extraccin Sangunea

CAMBIO
Se detalla el procedimiento de
asepsia
Se ajusta el sistema para la toma de
muestras para la determinacin de
grupo sanguneo y serologa.
Se agrega la captura en la bitcora
electrnica de cada donador.

CAL-02-B

REVISIN

FECHA

08

5 de diciembre de 2011

08

5 de diciembre de 2011

08

5 de diciembre de 2011

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-46
Nivel de Revisin: 08
ISBN: 978-968-9170-17-4
Fecha: 05 de Diciembre 2011
Pgina 91 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Extraccin Sangunea

DESCRIPCION DEL PROCESO

Una vez que al candidato a donacin se le ha realizado la toma de la muestra (Ver
procedimiento
CAL-43) y cumple con las especificaciones publicadas en el rea se procede as:

La Enfermera administrativa recibe del rea de recepcin la Historia clnica de candidatos a donacin (cuando
el procedimiento es manual, tambin el formato M-3-0-10-a y b), la Ficha de Identificacin del donador,
formato M-3-0-23, las etiquetas que salen del sistema de cmputo (en procedimiento manual se usa la etiqueta
M-3-0-30), Y hoja de resultado de Biometra Hemtica.
De la Historia clinica de candidatos a donacin observa el nombre completo del donador, lo llama y le
indica que pase a la sala donde se le realizar recoleccin sangunea. Verifica que coincida
Identificacin Oficial con el donador y los datos de la Historia Clnica
Las enfermeras solicitan al donador le indique en que brazo le fue tomada la muestra, le pide se
acomode en el reposet
Se le muestra al donador que el material que se va a utilizar esta cerrado , esteril y nuevo. Se le d a
leer el folleto informativo: El que tenga un amor .. Que lo cuide.
Las Enfermeras verifican el nombre del donador de la Historia Clnica y Nmero de Unidad asignado,
coloca las etiquetas en los tubos, lila para la determinacin de grupo sanguneo y rojo para la
serologa ( transcribe los datos a las bolsas cuando el sistema es manual)
La enfermera que realiza la flebotoma corrobora que los datos del donador sean correctos verificndolos con
la identificacin con fotografa. Coloca el torniquete en el brazo, identifica la vena en donde se realizar la
flebotoma y realiza el procedimiento de asepsia en el siguiente orden: jabn antisptico, iodopovidona y
alcohol. Posteriormente realiza la flebotoma y se fija la lnea al brazo con tela adhesiva, indica al donador
abrir y cerrar el puo de la mano durante el tiempo que dure la extraccin sangunea.
La pantalla y la alarma de la balanza indica el llenado adecuado de la bolsa (450 a 480 ml +/- el 10%
dependiendo de la bolsa que est en uso), automticamente se cierra el sistema y no deja pasar ms sangre,
o se pinza la lnea de extraccin y se retira la aguja y la bolsa (se da mximo 10 minutos y si no se obtiene el
volumen deseado retira la aguja y la bolsa).

Las muestras sanguneas se tomarn dependiendo de la bolsa que est en uso al inicio o al final de la
extraccin, respectivamente. Primero se toma la muestra del tubo con el tapn color lila (grupo sanguneo) y
luego el tubo de tapn color rojo o amarillo (serologa).
Se pinza la lnea y se retira la aguja, colocando inmediatamente una torunda de algodn seca, dando indicacin
al donador de que permanezca acostado con el brazo suavemente doblado sin hacer presin hasta que le den la
indicacin de levantarse. La enfermera que retir la aguja sella y corta la lnea de la misma as como la lnea del
vacutainer, depositando el material punzocortante en el contenedor de RPBI. Anota la hora de inicio y trmino
del sangrado. Homogeniza la lnea 2 veces y en el sellador dielctrico se realizan las secciones para los pilotos
para su uso en el laboratorio. Se coloca la bolsa en el refrigerador (Temperatura 1 a 6C) para que el personal
de laboratorio la traslade al mismo.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-46
Nivel de Revisin: 08
ISBN: 978-968-9170-17-4
Fecha: 05 de Diciembre 2011
Pgina 92 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Extraccin Sangunea

La enfermera da las indicaciones a los donadores de permanecer acostados aprox. 10 minutos. Coloca parche adhesivo
en el sitio de la flebotoma y vendaje ligeramente compresivo en el rea. Entrega etiqueta de autoexclusin al donador
( taln en sistema manual) Para que de acuerdo a lo que ley del folleto marque lo que considere si su sangre es
segura si o no. Pregunta al donador como se siente:

Si

Se siente
bien?

No

Se suspende la extraccin si estuviera en este

proceso e inmediatamente se avisa al mdico
responsable del rea quien dar indicaciones
para el manejo del evento

Le indica que se puede levantar y mantenga doblado el brazo durante 20 minutos ms, deposite la etiqueta en el
buzn y pase a tomar un refrigerio para posteriormente pasar a recepcin y registrar su hora de salida, pedir su
comprobante de donacin con la trabajadora social (ver procedimiento CAL-19) , el cual se imprime del sistema de
cmputo (o comprobante con formato M-3-0-25, cuando se emplea sistema manual). Despide al donador y da la
gracias.

La etiqueta (o taln, en procedimiento manual) de autoexclusin, permite al donador,

informar si considera que su sangre es segura o no es segura

SI

La enfermera llena la Bitcora CAL-46 A

(Disponentes y eventos adversos) con los datos
de los donadores y coloca la etiqueta de
autoexclusin en el ngulo superior izquierdo de la
ficha de identificacin del donador

Mi sangre
es segura?

no

Las enfermeras registran la Autoexclusin y el Producto

no Conforme por defecto de recoleccin en la bitcora
CAL-46-B.
Colocan la etiqueta de Producto No Conforme
inmediatamente en la bolsa de sangre total (etiqueta
fluorescente) ; Notifican al qumico responsable y al
personal de fraccionamiento para que le de el manejo
de producto de conforme.

Al final de la jornada, las enfermeras registran en la Bitcora 46-A los datos de todos los
donadores del da y eventos adversos a la donacin (en caso de que se presenten). Captura
los datos en la bitcora electrnica de cada donador y entrega los documentos de los
donadores efectivos al mdico asignado.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-46
Nivel de Revisin: 08
ISBN: 978-968-9170-17-4
Fecha: 05 de Diciembre 2011
Pgina 93 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Extraccin Sangunea

VIGILANCIA MDICA
En cuanto a la permanencia de los mdicos en el rea de seleccin de
disponentes se determina lo siguiente:
1. Durante el procedimiento de toma de muestra, extraccin de sangre total y
afresis cualquier reaccin adversa ser atendida de manera inmediata por
la persona que realiza el procedimiento. (enfermera o qumico)
2. La enfermera o qumico, avisar al mdico.
3. Los mdicos deben permanecer en el rea, durante los procedimientos
mencionados.
4. cuando algn mdico requiera ausentarse del rea, avisar y encargar a
otro mdico para que est pendiente de los donadores.

BITCORAS Y FORMATOS RELACIONADOS A ESTE PROCEDIMIENTO

CAL-46-A
BITACORA DE DISPNENTES Y EVENTOS ADVERSOS A LA DONACIN

Los rubros que contiene la Bitcora CAL-46-A, son los siguientes:

FECHA

Numero de
Donadores

Sexo
Femenino

CAL-02-B

Masculino

HORA DE
INICIO

HORA DE
TERMINO

AUTOEXC
LUSION

No de
UNIDAD

OBSERVACIONES
Y
EVENTOS
ADVERSOS A LA
DONACIN

ENFERMERA

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-46
Nivel de Revisin: 08
ISBN: 978-968-9170-17-4
Fecha: 05 de Diciembre 2011
Pgina 94 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Extraccin Sangunea

BITCORA DE REGISTRO DE PRODUCTO NO CONFORME

Los rubros que contiene la Bitcora CAL-46-B, son los siguientes:

FECHA

Numero de
unidad

NOMBRE
DONADOR

CAUSA DE LA NO
CONFORMIDAD

NOMBRE Y FIRMA DE
ENFERMERA QUE
ENTREGA

NOMBRE Y FIRMA DE LA
PERSONA DEL
LABORATORIO QUE
RECIBE

Los datos que solicita la Bitcora son los siguientes:

Fecha: se anota la fecha actual, del da en el se esta llevando a cabo el
procedimiento
Nmero de unidad: se anota el nmero que se asign en toma de muestra y
que se encuentra en el extremo superior derecho de la ficha de Identificacin
con formato M-3-0-23
Nombre del Donador: se anota el nombre del donador que aparece en la parte
superior de la Historia Clnica y que coincide con el nmero de unidad que
tiene la etiqueta o taln de autoexclusin.
Causa de la No Conformidad: Se detalla el motivo por el cual no cumple con
los requisitos del producto.
Nombre y firma de la Enfermera que entrega: Se anota el nombre y la firma de
la enfermera quien detect el producto no conforme.
Nombre y firma del personal de laboratorio que recibe: Se anota el nombre y la
firma de la persona del laboratorio que recibe el producto no conforme.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-46
Nivel de Revisin: 08
ISBN: 978-968-9170-17-4
Fecha: 05 de Diciembre 2011
Pgina 95 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Extraccin Sangunea
Taln de autoexclusin se muestra a continuacin:
Taln del sistema informtico de
Banco de Sangre

Taln sistema Manual

El Taln de autoexclusin se debe llenar de la siguiente manera:

DESPUES DE QUE HAYAS
DONADO SANGRE,
DEPOSITALO EN EL BUZON.

MI SANGRE:
SI ES SEGURA (Tacha aqu si consideras que tu
sangre SI es segura)
NO ES SEGURA (Tacha aqu si consideras que tu
sangre NO es segura)
No. DE REGISTRO: Nmero de unidad asignado
consecutivamente y se encuentra
en la bitcora de ingresos y
egresos.
Nota 1:

El Personal del laboratorio debe recoger las muestras

identificadas y el formato M-3-0-30 previamente lleno.

Nota 2:

Es importante revisar que la enfermera deje en

recepcin los formatos M-3-0-10-a y b, M-3-0-23,
cupn de autoexclusin y el ticket de resultado de
toma de muestra.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-46
Nivel de Revisin: 08
ISBN: 978-968-9170-17-4
Fecha: 05 de Diciembre 2011
Pgina 96 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Extraccin Sangunea
Nota 3:

En el Procedimiento CAL-19 se indica como llenar el

formato M-3-0-25.

Nota 4:

La bolsa de recoleccin de sangre no debe contener

burbujas mayores a 3mm de dimetro antes de ser
utilizada. Y debe de contener el sello que indica
PENDIENTE DE ESTUDIOS NO TRANSFUNDIR.

Nota 5:

Las unidades marcadas con autoexclusiones

implican su destruccin al llegar a la seccin de
fraccionamiento

Nota 6:

ASEPSIA: En caso de que algn candidato a donar

sangre refiera ser susceptible a algn componente
que se utiliza para realizar al asepsia, previo a la
venopuncin, se modificar el procedimiento,
eliminando la sustancia o solucin a la que es
susceptible.

REGISTROS
CAL-46-A Bitcora de control de disponentes.
CAL-46-B.-La bitcora de control de autoexclusin
y efectos adversos a la donacin , CAL-46-B No tiene Caducidad.
Cupn de autoexclusin se almacena en el archivo activo durante 5 aos y en el
archivo muerto 5 aos.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-46
Nivel de Revisin: 08
ISBN: 978-968-9170-17-4
Fecha: 05 de Diciembre 2011
Pgina 97 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Extraccin Sangunea
ANEXO 1
CARACTERISTICAS DE REFRIGERIO A DONADORES

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-46
Nivel de Revisin: 08
ISBN: 978-968-9170-17-4
Fecha: 05 de Diciembre 2011
Pgina 98 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Extraccin Sangunea

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 99 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 100 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Ninguno

31/07/03

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 101 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio
DESCRIPCION DEL PROCESO
En el rea de Control de calidad aplicado a la sangre y sus componentes
obtenidos en el Banco de sangre del INP se realizan las siguientes pruebas:
A. CONCENTRADOS ERITROCITARIOS:
Determinacin de Biometra hemtica:
Conteo de leucocitos
Hematocrito
Hemoglobina
Control Bacteriolgico
B. CONCENTRADOS PLAQUETARIO Y PLAQUETAFERESIS:
Determinacin de Biometra Hemtica:
Conteo de leucocitos
Cuenta de plaquetas:
Indices plaquetarios:
ADP
VPM
Control Bacteriolgico
Determinacin de pH
C. PRODUCTOS LEUCORREDUCIDOS:
Determinacin de leucocitos residuales
Determinaciones acorde al tipo de producto estudiado
(Ver incisos A y B)
D. PLASMA FRESCO CONGELADO:
Determinacin de Factores de Coagulacin:
Factor I
Factor VIII
Factor IX
Determinacin de protenas totales

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 102 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio
E. PLASMA DESPROVISTO DE FACTOR:
Determinacin de Factores de Coagulacin:
Determinacin de Factor IX
Determinacin de Protenas Totales
F. CRIOPRECIPITADOS:
Determinacin de Factores de Coagulacin:
Determinacin de Factor I
Determinacin de Factor VIII
Este anlisis se realiza en 8 productos (8 CE, 8 CP, 8 PFC, 8PSF, 8 GAH) de la
poblacin captada mensualmente y en todo producto anormal.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 103 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio

CONTROL DE CALIDAD DEL CONCENTRADO ERITROCITARIO

El Qumico de Control de calidad toma al azar el 1% o 8 Unidades (lo que sea mayor ) de los Concentrados eritrocitarios del mes en cuestin
obtenidos del refrigerador donde se resguardan para ser utilizados

Se colocan las bolsas que contienen el CE en la campana de extraccin y se Identifica un tubo por cada producto con el # de registro que
presenta la bolsa que contiene el C.E. a analizar

Se coloca la bolsa que contiene el CE en agitacin aproximadamente de 10-15 min. con una velocidad de 100- 120 RPM ( es importante que
la temperatura de la bolsa no suba demasiado).
La bolsa contiene 2 lineas. la que fue utilizada para realizar la extraccin de la sangre y la otra es la que una a las dems bolsas. Esta ltima
es la que se purga.

La homogenizacin entre el CE que contiene la bolsa y el que se encuentra en la linea es muy importante por que esta linea sera la va de
extraccin de la muestra. Se toma la punta de la linea de la bolsa con las pinzas de rodillo y se purga (se mueve la pinza en direccin de la
bolsa, para dejar pasar todo el CE que contiene y sin quitar la pinza se agita la bolsa sosteniendola en la palma de la mano) este proceso de
purga y agitacin se realiza varias veces.

Se utiliza el conector esteril ( TERUMO STERILE TUBING WELDER TSCD) para unir una bolsa de transferencia con el fin de evitar habrir el
sistema y contaminarlo.

BOLSA DE TRANSFERENCIA
De la Bolsa de transferencia que contiene
aproximadamente con 50 ml se toma una
muestra para el estudio

Se analizan las muestras en el Sysmex

KX-21N observando los resultados obtenidos
en la muestra y el tubo de leucocitos,
hemoglobina y hematocrito.

De la Historia clinica del donador se buscan

los valores iniciales de leucocitos,
hemoglobina y hematocrito para establecer la
eficiencia del producto.

Todos los datos obtenidos durante este

proceso se escriben en la bitcora de Control
de Calidad CAL-47-A y se anexa el ticket
obtenido del Sysmex KX-21N y se escriben
los datos indicados en la bitcora de Control
de Calidad Bacteriolgico CAL-47-B

Los CE analizados se mandan al laboratorio

de bacteriologa junto con el formato M-3-106-a o el F-A-13-16-06 y
la bitcora CAL-47-B para que el personal de
bacteriologa firme de recibido el producto.

Los resultados de bacteriologa son enviados

al Jefe del banco de sangre y el Qumico de
control de calidad los pasa a la bitcora
CAL-47-A

CAL-02-B

BOLSA ORIGINAL CON EL

VOLUMEN REMANENTE:
se envia al servicio de bacteriologia
para su cultivo.

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 104 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 105 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio

Curva de actividad para dosificacin de FACTORES en el equipo ORGANON

TEKNIKA COAG-A-MATE

Muestra biolgica:
Estndar liofilizado o
Pool de plasmas citratados (mnimo 10)

Reactivos:

Sustrato liofilizado deficiente en factor VIII

Sustrato liofilizado deficiente en factor IX
Tromboplastina parcial activad
Trombina
Cloruro de clacio 0.025M
Buffer veronal (Owren)

Material:
Micropipetas de 50, 100, 200 y 1000 l
Cubeta de plstico para el equipo de coagulacin
Gradilla metlica en cubeta de hielo
Condiciones:
Sustratos, reactivos, controles y muestras de trabajo
mantenerlos en bao de hielo
Sistema de reaccin a 37C

Nota: el pool de plasmas se obtiene de donadores, se recomienda que sean

mujeres (mayor concentracin de factor VIII y/o IX).
En caso de no correr la curva el mismo da de la toma de muestra, se mantiene a 35C hasta por un ao.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 106 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio
CURVA DE ACTIVIDAD O CONCENTRACION

Tubo 1(dilucin 1/5)

Se adiciona 800microlitros de Buffer + 200microlitros de la muestra
Tubo 2 (dilucin 1/10)
Se adiciona 500microlitros de Buffer + 500microlitros de la muestra del Tubo 1
Tubo 3(dilucin 1/20)
Se adiciona 500microlitros de Buffer + 500microlitros de la muestra del Tubo 2
Tubo 4(dilucin 1/40)
Se adiciona 500microlitros de Buffer + 500microlitros de la muestra del Tubo 3
se quitan 500microlitros despus de homogenizar para que contenga la misma
cantidad que los dems.
Las diluciones utilizadas para la calibracin de la curva de Fibrinogeno son las
siguientes:
Tubo 1(dilucin 1/5)
Se adiciona 200microlitros de la estndar o control (360mg%) + 800microlitros de
Tampn Owren
Tubo 2 (dilucin 1/10)
Se adiciona 100microlitros de la muestra+ 900microlitros de Tampn Owren
Tubo 3(dilucin 1/20)
Se adiciona 100microlitros de la muestra + 1.9ml de Tampn Owren
Tubo 4(dilucin 1/30)
Se adiciona 100microlitros de la muestra+ 2.9ml de Tampn Owren
Reactivos para reconstituir para la curva de Factor VIII, IX y Fibrinogeno:
STA Factor IX se reconstituye en 1ml de agua destilada.
Factor VIII Deficient plasma se reconstituye en 1ml de agua destilada.
Trombina se reconstituye en 5ml de agua destilada.
PTT Reagent se reconstituye 30min. antes de ser utilizado.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 107 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio
El Patrn de Fibringeno se reconstituye en 1ml de agua destilada.

Coagulacin
La Prueba de coagulacin se realiza para los siguientes productos:
Al Plasma fresco congelado se le realiza Factor VIII, IX y Fibringeno.
Al Plasma sin factor se le realiza Factor IX.
A los Crioprecipitados se les realiza Factor VIII y Fibringeno.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 108 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio
CURVA DE CALIBRACIN

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 109 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio

MUESTRA

Cuando la muestra que se va a analizar es un Crioprecipitado se reconstituye con

15ml de solucin salina todo el crioprecipitado, se agita durante 15minutos y se
toma una alicuota y diluye con diluyente o tampn 1:5 o 1:10

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 110 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio

A continuacin se describe el manejo del Citometro:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 111 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 112 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 113 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio

El formato M-3-1-06-a se llena de la siguiente manera:

En el recuadro vaco del lado superior izquierdo se anota el numero de la unidad

que se encuentra en la etiqueta de la bolsa del producto.
El grupo:
Grupo sanguneo del paquete.
El tipo de producto: Hemoderivado enviado (CE, CP, Plasma, etc.)
Servicio :
Servicio que solicita el anlisis Banco de sangre.
Fecha:
Da, mes y ao en que se solicita el anlisis.
El formato F-A-13-16-06 se llena de la siguiente manera:
Dependencia:
Servicio :
Fecha:

Institucin que requiere el anlisis INP

Servicio que solicita el anlisis Banco de sangre.
Da, mes y ao en que se solicita el anlisis.

En el recuadro vaco del lado superior izquierdo se anota el nmero de la unidad

que se encuentra en la etiqueta de la bolsa del producto.
El grupo:
Grupo sanguneo del paquete.
El tipo de producto: Hemoderivado enviado (CE, CP, Plasma, etc.)

La bitcora de Control de calidad de Bacteriologa CAL-47-A

siguiente manera:

se llena de la

Fecha: Da en que se realiza el control de calidad.

Procedencia: Institucin de donde se manda realizar el anlisis.
Registro: # Unidad
Producto: Tipo de hemoderivado para analizar.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 114 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio
Anticoagulante: Anticoagulante que contiene la bolsa cuando se realiza el
sangrado, se encuentra especificado en la etiqueta del hemoderivado.
RPM : Velocidad a la que fue fraccionado el hemoderivado (Bitcora de
fraccionamiento)
TC:Temperatura a la que fue fraccionado el hemoderivado (Bitcora de
fraccionamiento)
Fecha de caducidad del producto: Da, mes y ao en que caduca el
hemoderivado esta especificado en la etiqueta.
Hemlisis: Cuando se realiza el conteo en los CE se requiere saber si el
hemoderivado se encuentra hemolizado o no.
pH: Cuando se realiza conteo en CP se requiere conocer el pH
Peso bruto: Se requiere conocer el peso del hemoderivado (Bitcora de
fraccionamiento)
Volumen (ml): Se requiere conocer el volumen del (Bitcora de
fraccionamiento)
PLQ/microlitros: Cuando se realiza conteo en CP (ticket del Sysmex)
PLQ/U: Cuando se realiza conteo en CP (Dilucin)
Leucocitos/microlitros: Cuando se realiza conteo en CP y CE (ticket del
Sysmex)
Leucocitos/U: Cuando se realiza conteo en CP y CE
Hematocrito inicial: Cuando se realiza conteo en CE (ticket del Sysmex)
Hematocrito final: Cuando se realiza conteo en CE (ticket del Sysmex)
Control bacteriolgico:.Resultados del cultivo en el Laboratorio de
Bacteriologa.
Factor VIII %: Se obtiene % de actividad del factor de coagulacin en Plasma
y crioprecipitados
Factor IX %: Se obtiene % de factor de coagulacin del Plasma y
crioprecipitados
Fibringeno (mg/dl) Se obtiene la concentracin en mg de Fibringeno en
PFC y GAH.

La bitcora de Control de BacteriologiaCAL-47-B se llena de la siguiente manera:

Fecha: Da en que se realiza el control de calidad.
Registro: # Unidad
Producto: Tipo de hemoderivado para analizar.
Grupo: Grupo sanguneo del hemoderivado (etiqueta del producto)
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-47
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 115 de 22

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio
Nombre: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del donador o
paciente.
Entrega: Nombre completo de la persona que esta solicitando el anlisis.
Recibe: Fecha en que recibe y firma de quien lo recibe.

REGISTROS
El formato F-A-13-16-06 se debe almacenar 5 aos en archivo activo y 5 aos en
archivo muerto.
El formato M-3-1-06-a se debe almacenar 5 aos en archivo activo y 5 aos en
archivo muerto.
La bitcora CAL-47-A se debe almacenar 5 aos en archivo activo y 5 aos en
archivo muerto.
La bitcora CAL-47-B se debe almacenar 5 aos en archivo activo y 5 aos en
archivo muerto.

LISTA DE DISTRIBUCION

Laboratorista:

____________________________________

Laboratorista:

____________________________________

Suplente:

____________________________________

Suplente:

____________________________________

Suplente:

____________________________________

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 116 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre: Dra. DORIS

LORDMENDEZ JACOME

Nombre: Dra. M. LETICIA

MEDINA MACAS

Nombre: Dra. DINORA

AGUILAR ESCOBAR

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha: 23 de junio 2011

Fecha:23 de junio 2011

Fecha:23 de junio 2011

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 117 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis

CAMBIO
a) Se modifica el nombre de la
bitcora CAL-46 B (Bitcora de
registro de producto no
conforme)
b) Se agregan lineamientos
incluyendo las caractersticas
del producto conforme de
Afresis.
c) Se agrega el formato Control
diario de procedimientos de
afresis

CAL-02-B

REVISIN

FECHA

04

23 de junio 2011

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 118 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis

DESCRIPCION DEL PROCESO

El Instituto Nacional de Pediatra requiere la donacin de plaquetas en el Banco de
sangre para el diferente aporte transfusional que se lleva a cabo en el mismo, la
cantidad de donadores al procedimiento de afresis depender de la demanda en el
Banco de Sangre.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 119 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis

El candidato a donador solicita a la Trabajadora social una cita para donar plaquetas
Se presenta el donador el da de su cita, presentando su identificacin oficial con fotografa y vigente, pasa a recepcin en
donde se registra (Ver procedimiento CAL-20); y se identifica el formato M-3-0-23 de acuerdo al procedimiento de afresis que
se vaya a realizar (PLAQUETAS, GRANULOCITOS, CLULAS TALLO)
Se le realiza la valoracin de venas y signos vitales (Ver procedimiento CAL-30), toma de muestra (Ver procedimiento CAL-43) y
la valoracin medica (Ver procedimiento CAL-40).
Si el donador se encuentra apto el Mdico le proporciona la informacin sobre el procedimiento y lo ingresa a la sala de Afresis y
solicita el nmero de unidad y las etiquetas correspondientes (Ver procedimiento CAL-20) pegando una etiqueta en la hoja de
identificacin y desprende otra para que entrega a trabajo social para que sea pegada en el comprobante de donacin y anota en
forma manual el motivo de la donacin (control interno de trabajo social . Si por necesidades del servicio o por ser producto
dirigido se programar una cita registrndose en la Bitcora de Citas de Afresis CAL-50-B se le entrega recordatorio CAL-50-C
de cita y se le dan indicaciones generales previas a la donacin.

Cita
programada
no

si

Cuando el candidato acude a su cita de donacin, el

mdico recaba la documentacin con resultados en el
rea de Serologa, y verifica resultado de marcadores
serolgicos

El mdico entrega al rea de

enfermera la documentacin
correspondiente, para inicio del
proceso de afresis
si

Serologfa
Negativa

no

Si alguna(s) de las pruebas del candidato a

donador presenta un resultado REACTIVO se
descarta como donador y el rea de Serologa
notifica al Medico para que se solicite 2da muestra
para realizale la prueba confirmatoria, y una vez
que se tiene el resultado se anexa la hoja de
resultados en su documentacion y el Medico le
informa el motivo de rechazo

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 120 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis

La Enfermera llama al candidato a donacin por su nombre completo, le solicita su identificacin y le

indica que pase a la sala donde se le realizar el proceso, se le muestra el equip que ser utilizado y
se abre en su presencia haciendo nfasis en que el equipo esta cerrado , estril y es desechable.
Se le pide al donador que pase al bao y regrese al rea para iniciar la donacin .
Aproximadamente 30 minutos previos al inicio del procedimiento de afresis, la enfermera o el mdico
encargado del procedimiento administrar de manera profilctica 2 tabletas de carbonato de calcio
(500mg/tab) por va oral a cada donador. Se reforzar la informacin a los donadores sobre los
sntomas inciales de hipocalcemia por parte del personal mdico y de enfermera para asegurar la
comprensin de dicha informacin.*
Se procede a instalacin y purgado de equipo (cebado) (Ver manual del operador del separador en
uso)l e inicia el proceso de donacin de Afresis registrando la informacin en la hoja de control de
procedimientos de afresis Bitcora CAL 50-A
Al terminar el proceso de Afresis, se toman signos Vitales y se colocan parches en las zonas de venopuncin

Se le entrega al donador el folleto El que tenga un amor que lo

cuide y el taln de autoexclusin confidencial
si

AUTOEXCLUSIN
no

La Enfermera notifica
al mdico del rea de
afresis, y se
registra en la
Bitcora CAL 46-B
y se maneja como
producto No
conforme (ver
procedimiento CAL09 )

Se le pide al donador pase al comedor para ingerir su refrigerio y al terminar pasar a trabajo
social quien entrega el comprobante de donacin y proporciona informacin del horario para
recoger resultados de exmenes realizados.

Al terminar de retirar el equipo la enfermera identifica las unidades del producto obtenidas (2
bolsas), la ficha de identificacin. Una de las etiquetas se pegan en la Bitcora CAL-50-a de
la hoja que corresponde al procedimiento que se lleva a cabo
NOTA: La identificacin de las bolsas es provisional hasta la identificacin final en Serologa .
(Ver CAL- 32 )
Se anota en cada una de las bolsas el nmero de Aferesis (obtenido de la bitacora CAL-50-A), la
cantidad de concentrados plaquetarios (estimados por la mquina) y el volmen.

La enfermera lleva las bolsas del producto al rea de Inmuno-Hematologa receptores.

Se colocan en el refrigerador correspondiente y se avisa al personal del rea .
Se entrega al rea de Serologa la Historia clinica, la ficha de identificacin, el taln de
autoexclusin, los resultados de la biometra PRE.

Al terminar el procedimiento la enfermera registra la informacin en el sistema informtico de

CAL-02-B
banco de sangre .

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 121 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis

*El contenido de la pltica de informacin que deben impartir el personal mdico y de

enfermera sobre los potenciales sntomas inciales de la hipocalcemia secundaria a
efectos adversos por la anticoagulacin con citrato son:
Adormecimiento peribucal, vmitos, diarreas y menos frecuentemente contracturas.
Se anexa a la Historia Clnica el siguiente control diario de procedimiento de afresis:

LINEAMIENTOS O POLTICAS:
1.- La informacin adicional que se anexa a la hoja de identificacin del donador no
deber eliminarse (desprenderse o borrarse).
[Link] obtencin de componentes celulares por mtodos de afresis debern tener
como propsito cubrir la deficiencia especfica de dicho componente en un paciente.
3. La realizacin de los procedimientos para la obtencin de plaquetas, eritrocitos y
plasma se justificara en base a las reservas y demandas de dicho componente para
cubrir las necesidades de los pacientes.
4.- Los procedimientos de afresis para la obtencin de leucocitos (granulocitos y/o
clulas progenitoras hematopoyticas deber estar justificada por una solicitud de
interconsulta del servicio y el mdico del servicio responsable del tratamiento del
paciente
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 122 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis

5- Los donadores de componentes celulares obtenidos por afresis debern cubrir

todos los requisitos normativos de seleccin.
- Para plaquetas.
Accesos venosos adecuados.
Cuenta plaquetaria mnima de 150x103
No ingesta de medicamentos que contengan acido acetilsaliciclio en
las ultimas 72 h (nica toma) o 7 das (tomas repetidas).
- Para leucocitos (granulocitos, neutrfilos).
Accesos venosos adecuados.
Movilizacin 12 h previas al procedimiento con esteroides y/o factor
estimulante de colonias).
Por los menos dos cuentas leucocitarias con diferencial previas al
procedimiento que permitan valorar la respuesta al estimulo de la movilizacin.
Para eritrocitos (dobles rojos):
Donador: Genero. Masculino.
Peso: 65 Kg.
Talla: 165 cm
Hematocrito: 45%
Grupo: Depender de las necesidades de pacientes y/o del
faltante de las reservas del banco de sangre.
Para plasma:
Donador: genero: indistinto.
Peso: 50 Kg.
Protenas sricas: 6 g/mL
Depender de las necesidades del servicio.
6.-Los concentrados de leucocitos y plaquetas obtenidos al final de cada procedimiento
debern cumplir con los siguientes requisitos para ser considerado como producto
conforme:
Componente:
Leucocitos
(Neutrfilos)
Volumen (mL
Cuenta celular mnima
CAL-02-B

variable
1x1010 neutrfilos

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 123 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis

Plaquetas
Volumen (mL)

200-250 mL

Cuenta mnima de plaquetas

3.0x1011 de plaquetas

Plasma
450-750 mL

Protenas 60g/L
FVIII 1UI/mL
Fibringeno 160 mg/dL

12 meses congelado

Clulas progenitoras
50 mL
2x106/kg de peso de receptor de
clulas CD34+ Hematopoyticas
(Alogenico)
1.5x106/Kg de peso receptor de clulas
CD34+
(Autlogo)

Para todos los componentes sanguneos:

Integridad de los contenedores.
Identificacin de la unidad con: Nombre del donador
Nmero de unidad/Nmero de afresis.
Fecha de obtencin.
Tipo de componente.
Volumen.
Taln de autoexclusin con respuesta SI ES SEGURA. (EXCEPTO DONADORES
PEDIATRICOS)

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 124 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis

7.- Los componentes celulares obtenidos por afresis que no cumplan con los criterios
de conformidad debern ser evaluados conjuntamente con el personal mdico y de
laboratorio de banco de sangre cuando el componente sean plaquetas, glbulos rojos o
plasma Y el coordinador de trasplantes cuando se trate de Clulas progenitoras
hematopoyticas, en base a los siguientes criterios:
Cuando la dosis no sea la ptima se considerara la posibilidad de la realizacin
de otro procedimiento para poder alcanzar la dosis sumando la dosis anterior.
El volumen y la concentracin de plaquetas sea equivalente como mnimo a un
concentrado de Plaquetas obtenido de sangre total y en el caso de eritrocitos y/o
plasma fresco pueda cubrir una dosis de 10 mL/Kg de peso.

La Bitcora de Afresis CAL-50-A se llena de la siguiente manera:

Procedimiento:

Anotar el procedimiento realizado:

Plaquetafresis

Despus de anotar el procedimiento poner A (significa Afresis) / nmero consecutivo

de la bitcora CAL-50-A / los dos ltimos nmeros del ao.
Fecha:
Equipo:
Flujo:

Da, mes y ao en que se realiza la afresis.

Indicar el tipo de mquina usada.
Indicar el tipo de flujo usado para la afresis:
Continuo
Discontinuo

I. DATOS DEL RECEPTOR

Nombre:

Apellido paterno, Apellido materno y

Nombre(s) del paciente que requiere el
producto.

Cama:

# de la cama donde
hospitalizado el paciente.

Grupo sanguneo:

Tipo de sangre del paciente que va a recibir el

producto.

Diagnostico:

Diagnostico principal del paciente para el que

se realiza la donacin.

CAL-02-B

se

encuentra

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 125 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis

II. DATOS DEL DONADOR

Nombre:

Apellido paterno, Apellido

Nombre(s) del donador.

materno

Edad:

# de aos que tiene el donador al momento

de realizar el procedimiento.

Grupo sanguneo:

Tipo de sangre del donador

Parentesco:

Relacin que existe entre el paciente y el

donador (Amistad, familiar, etc).
Peso
El peso del donador expresado en Kg
H.I.V., H.C.V., HbsAg, R.P.R, BRUCELLA, OTROS.
Resultados de las pruebas realizadas al
donador por el Laboratorio del Banco de
sangre tomado de la Historia Clnica.
Nombre y firma de quien realizo las Pruebas
Sello o firma de quien realizo el anlisis de las
pruebas.
III. DATOS DEL PROCEDIMIENTO
Hora de inicio:
Hora de terminacin:
Responsable:

Hora en que se inicio el procedimiento.

Hora en que se finaliz el procedimiento
Nombre y firma de la enfermera que realiza
el procedimiento.

Otros datos que se registran en la bitcora CAL-50-A anotados por la enfermera

durante el procedimiento:
VELOCIDAD VELOCIDAD
TIEMPO
DE
DE
**
SANGRE *
PLASMA *

CAL-02-B

VOLUMEN
DE
SANGRE *

VOLUMEN
DE
PLASMA *

GOTAS DE
ACD **

SIGNOS VITALES
Y OBSERVAC. ***

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 126 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis
*. Obtenidos directamente de la mquina.
**. Al momento de llenar el registro.
***. Se registran antes, durante y despus del procedimiento.
Volumen procesado de sangre:

Cantidad de sangre que se proceso al finalizar

el procedimiento, obteniendo este dato
directamente de la mquina, referido como
END-POINT.

Anticoagulante:

Cantidad de anticoagulante que se utilizo

durante el procedimiento.

Solucin salina:

Cantidad de solucin salina que se utilizo

durante el procedimiento

NOTA: La enfermera que realizo el procedimiento calcula las cantidades de Solucin

salina y Anticoagulante mediante la inspeccin visual de las bolsas; resta al volumen
inicial marcado en las bolsas el volumen contenido en las bolsas al final del
procedimiento (Las bolsas son graduadas).
IV. RESULTADOS
Volumen de la cosecha:

DATOS DE
BIOMETRIA HEM.
PLAQUETAS
LINFOCITOS
GRANULOCITOS
HEMATOCRITO
OTROS

CAL-02-B

MUESTRA
PRE

Dato que es obtenido por la enfermera al

pesar cada bolsa que contiene el producto y
restarle el peso de la bolsa vaca (40 ml)

MUESTRA
POST

MUESTRA DE LA
COSECHA

COSECHA FINAL

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 127 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis
Datos obtenidos de:
Muestras del Donador (PRE Y POST)

Equipo
automatizado
de
biometra
hemtica
rea de Control de Calidad
Mdico que supervisa el procedimiento

Muestra de la Cosecha
Clculo de la cosecha final

Nombre y firma del Mdico que

realizo el procedimiento:

Firma de quien realiz el

anlisis de la cosecha final .

La Bitcora de Cita de Afresis CAL-50-B se muestra a continuacin:

DONADOR
FECHA Y
HORA

NOMBRE

TELEFONO

FECHA DE
ESTUDIO

PROCEDIMIE
NTO

PACIENTE
MOTIVO DE
NOMBRE
LA
DONACIN

OBSERVACI
ONES

La Bitcora de Cita de Afresis CAL-50-B se llena de la siguiente manera:

DONADOR
Fecha y hora:

Da, mes y ao de la cita de donacin. Y

Hora y minutos en que se da la cita de
donacin.

Nombre :

Apellido paterno, Apellido

Nombre(s) del donador.

materno

Telfono:

# telefnico del donador.

Fecha del estudio:

Da, mes y ao en que se le realizo los

estudios de Serologia.

PACIENTE
Procedimiento:

Procedimiento a realizar

Nombre:

Apellido paterno, Apellido

Nombre(s) del paciente.

CAL-02-B

materno

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 128 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis
Motivo de la donacin:

Diagnostico por el que el Mdico justifica el

procedimiento de plaquetafresis.

Observaciones:

Anotar cualquier observacin relacionada al

procedimiento
(Cancelado,
Suspendido,
Reprogramado, No acudi donador, etc.)

El recordatorio de cita de afresis CAL-50-C es el siguiente:

Favor de permitir el paso al

Sr. (a): Nombre completo del candidato a donar plaquetas.
DONADOR (B) DE PLAQUETAS
El da: Fecha de cita de donacin.
A las: Horario de la cita de donacin.
Fecha de Estudio: Fecha en que se tomaron muestras para estudio.
Al reverso deber contener la siguiente informacin:
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 129 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis

Indicaciones.
El da anterior a la cita:
No comer de preferencia alimentos con grasa
No tomar bebidas alcohlicas con un mnimo de 72 hrs previas a la
donacin.
No tomar medicamentos con un mnimo de 72 hrs previas a la
donacin.
Cenar sin grasa y no tomar leche
Aseo Corporal
Dormir como mnimo 6 horas
El da de la cita:
Puede tomar jugo y fruta
Usar ropa holgada y con manga corta.

La Bitcora de Entrega y Recepcin de Historias clnicas CAL-50-D se llena de la

siguiente manera:
Fecha:

Da, mes y ao en que se entregan las

Historias clnicas al personal de grupos.

# de Historias Clnicas Totales:

# final de Historias clnicas del da (donacin

de sangre total)

Intervalo de Unidades:
# de Plaquetas:
CAL-02-B

# de Unidad inicial y # de Unidad final.

# de donadores de plaquetas del da.

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 130 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis

Firma de quien entrega:

Firma del Mdico que entrega al personal de

grupos la bitcora.

Firma de quien recibe:

Firma del personal de grupos que recibe y

verifica que se encuentren el # de Historias
clnicas que se especifican en la bitcora.

Observaciones:

Comentarios con respecto a la entrega de la

documentacin.

Nota 1: Se requiere de 2 venas gruesas para que se lleve a cabo la Afresis.

Nota 2: Existen 3 maquinas Separadoras de clulas sanguneas TRIMA para realizar el
procedimiento de afresis de plaquetas.
*Nota 3: Si las plaquetas se necesitan para una urgencia, se realiza la Afresis sin
tener los resultados de las Pruebas serolgicas, pero no se liberan las plaquetas hasta
que se tienen los resultados de las mismas.
NOTA: ENTREGA DE RESULTADOS DE SEROLOGIA Y COMPROBANTE DE
DONACIN LO REALIZA EL MDICO COORDINADOR O LA ENFERMERA Y
SOLICITA QUE FIRMA LA BITACORA DE REGISTRO DE ENTREGA DE
RESULTADOS.
FECHA: En que recibe los resultados
NOMBRE: Del donador de afresis
FIRMA: Del donador de afresis
COMENTARIOS: Comentarios que el donador quiera aportar

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-50
Nivel de Revisin: 04
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 131 de 16

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Afresis

REGISTROS
Control de procedimientos de Afresis CAL-50-A clnicas se almacenan durante 5 aos
en archivo activo y 5 aos en archivo muerto.
Bitcora de Cita de Afresis CAL-50-B se almacena durante 3 meses despus de que
se termina el llenado de la ltima hoja.
Recordatorio de cita de afresis CAL-50-C se anexa a la historia clnica.
Bitcora de Entrega y Recepcin de Historias clnicas CAL-50-D, se almacena durante
3 meses despus de que se termina el llenado de la ltima hoja.
El CAL-50 A y las Historias clnicas se archivan durante 5 aos en archivo activo y 5
aos en archivo muerto.
Bitcora CAL-50-G De entrega de resultados

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-15
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 39 de 3

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de identificacin de muestras

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Ninguno

24/09/03

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-15
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 40 de 3

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de identificacin de muestras

DESCRIPCION DEL PROCESO

Una vez que al candidato a donar se le realizo la valoracin mdica (Ver
procedimiento CAL-40) y fue considerado apto en el rea de toma de muestra sale
impresa la etiqueta para la Biometra Hemtica. De donde se toma el Nombre
completo del donador y se corrobora con el de la Ficha de identificacin del
candidato y se escribe en la Hoja de toma de muestra F-A-14-26 posteriormente
se pega la etiqueta en el tubo para la Biometra.
La Etiqueta de identificacin es la siguiente:

Nombre completo del candidato a donador:

Fecha:
No. Toma:
Nombre de la Prueba:
Nmero de Toma de muestra:

La Etiqueta contiene los siguiente datos:

Nombre completo del candidato a donador:Apellido paterno, Apellido materno y
Nombre (s) del donador.
Fecha:
Da, mes y ao en que se toma la
muestra
No. de Toma:
Nmero de candidato a donador, es
consecutivo y el Qumico lo escribe
a mano
No. de Toma de muestra:
Nmero que se le asigna en Toma
de muestra.
Fecha:
Da, mes y ao en que se toma la
muestra.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-15
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 41 de 3

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de identificacin de muestras

REGISTROS
No existen registros asociados a este procedimiento.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-16
Nivel de Revisin: 4
Fecha: 27 Junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 42 de 9

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometra Hemtica

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre: Q.F.B. MARA

TERESA FLORES
CAMACHO

Nombre: M en C
GUILLERMO ESCAMILLA
GUERRERO

Nombre: DRA. DINORA

V. AGUILAR ESCOBAR

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha: 7 DE OCTUBRE DE Fecha: 14 DE OCTUBRE

2009
2009

CAL-02-B

Fecha: 14 DE
OCTUBRE 2009

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-16
Nivel de Revisin: 4
Fecha: 27 Junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 43 de 9

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometra Hemtica

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Se actualiza procedimiento y se
cambia nombre por Uso del
Equipo Automatizado para
Biometras Hemtica, se
modifican valores de leucocitos

27 de junio de 2011

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-16
Nivel de Revisin: 4
Fecha: 27 Junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 44 de 9

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometra Hemtica

DESCRIPCION DEL PROCESO

Una vez que el candidato a donador ha sido valorado por el personal de
enfermera (Ver Procedimiento CAL-30), se calibra el equipo Automatizado de
Biometra Hemtica (Ver Procedimiento CAL-14), se le toma la muestra de sangre
(Ver Procedimiento CAL-43) y posteriormente se realiza el anlisis
correspondiente de la siguiente manera:
El equipo Automatizado de Biometra Hemtica se usa para el procesamiento de
la biometra hemtica para determinar los niveles de plaquetas, hematocrito,
hemoglobina, etc. En muestras de sangre. El equipo permite obtener resultados
casi inmediatos y con ello decidir si las condiciones de la sangre son las
adecuadas para llevar a cabo la donacin.
El equipo Automatizado de Biometra Hemtica se opera de la siguiente manera:

TOMA DE MUESTRA

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-16
Nivel de Revisin: 4
Fecha: 27 Junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 45 de 9

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometra Hemtica

EL QUMICO Y/ O
LABORATORISTA ENCIENDE EL
EQUIPO AUTOMATIZADO DE
BIOMETRA HEMTICA

Verificar Niveles de Reactivos,

de Bote de Desechos ( RPBI) e
Hojas de impresin

Introducir Controles Bajo,

Normal y Alto verificar que
estn dentro del rango
especificado y checar la curva
de L J

Tomar ficha de identificacin

de Donador ( M-3-0-23) del
Buzn de Valoracin de
Disponentes ubicado en rea
de recepcin

Anotar # de registro y nombre

en el formato
M-3-4-10).
Colocar etiqueta emitida por
recepcin en tubos lila para
BH (2), y tubo rojo si es mujer

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-16
Nivel de Revisin: 4
Fecha: 27 Junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 46 de 9

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometra Hemtica

Llamar al Donador por su Nombre,

verificando su identidad con su
credencial de elector o documento
oficial con fotografa

Realizar asepsia de la zona a

puncionar, aplicar
Torniquete y puncionar en
el antebrazo seleccionado

Colocar el tubo de Biometra

Hemtica en el Rack o de
forma manual segn sea el
caso en el equipo de
Automatizado de Biometra

Anotar resultados de BH en
formato M-3-4-10), anexar hoja
en la ficha de identificacin de
donador y se coloca en buzn
de valoracin Mdica

Pegar las etiquetas con el # de

Unidad emitidas por recepcin
correspondientes a cada tubo de
Donador cuando este ha sido
aceptado

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-16
Nivel de Revisin: 4
Fecha: 27 Junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 47 de 9

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometra Hemtica

ANALIZADOR DE BIOMETRA HEMTICA

SELECCIONAR
ADMINISTRADOR

ENCENDER
ANALIZADOR
CHECAR EL
BACKGROUND
Y METER
CONTROLES
EN MODO
ABIERTO

PONER
CONTROLES
TECLEAR QC
(CAL)
BAJO
MEDIO
ALTO

RESULTADO
IMPRESO CHECAR
CON TABLA DE
VALORES
QUE VIENE EN
LAOS CONTROLES

SELECCIONAR
ICONO
MUESTREADO
R CON EL
NUMERO DE
LOTE DE
CADA
CONTROL

INICIAR

SI
NO
SELECCIONAR
SISTEMA
CERRADO
EXPLORADOR
PONER
MUESTRAS EN
RACK
DONADOR

SELECCIONAR
ICONO DE
MUESTREADOR
AUTOMTICO DE
MUESTRAS E
INICIAR

CAL-02-B

OBSERVAR
PUNTOS EN
GRFICAS DE L-J Y
VERIFICAR QUE
ENTREN EN EL
RANGO

OBSERVAR RESULTADOS
EN PANTALLA E IMPRESO
VACIAR RESULTADOS AL
FORMATO M-3-4-10
ENGRAPAR RESULTADO
EN HISTORIA

REPETIR PROCESO
Y/O
VERIFICAR
REACTIVOS
Y/O
CAMBIO DE
CONTROLES

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-16
Nivel de Revisin: 4
Fecha: 27 Junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 48 de 9

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometra Hemtica

La aceptacin o rechazo de un donador en cuanto a los valores en la Biometra

Hemtica se debe de basar en la NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-003-SSA21993 Para la disposicin de sangre humana y sus componentes con fines
teraputicos.
INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRA
DEPARTAMENTO DE BANCO DE SANGRE

VALORES MNIMOS PARA FLEBOTOMA EN DISPONENTES

ALOGNICOS.

Gnero.
Altitud sobre el
nivel del mar.

Masculino.
Hemoglobina.

0 a 1500 m.

1501 o ms.

13.5 g/dL.

14.5 g/dL.

Femenino

Hematocrito. Hemoglobina. Hematocrito.

41 a 56%

44 a 56%

12.5 g/dL.

14.0 g/dL.

Leucocitos

Plaquetas

4.0 a 12.0
x103 L.

150 a 450
x103 L.

38 a 50%

40 a 50%

La tabla de valores debe permanecer a la vista del personal que realiza las biometras hemticas para su consulta.
Autorizado.
Dra. Dinora Aguilar Escobar.
Jefe del Banco de Sangre, I.N.P.
Bibliografa:
Proyecto de Norma Oficial Mexicana PROY-NOM-253-SSA1-2009 para la disposicin de sangre humana y sus
componentes con fines teraputicos
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-003-SSA2-1993 para la disposicin de sangre humana y sus componentes con fines
teraputicos.
Ruiz Argelles, Guillermo J. Fundamentos de hematologa 4 edicin, Mxico, Editorial Mdica Panamericana, 2009.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-16
Nivel de Revisin: 4
Fecha: 27 Junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 49 de 9

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometra Hemtica

Esta tabla debe encontrarse a la vista del personal que realiza las biometras
hemticas para que siga dichos criterios.

Bibliografa
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-003-SSA2-1993
La informacin que contiene la hoja de resultados es la siguiente:

LEU
ERI
HB
HTC
VCM
HCM
CCMH
IDE
PLT
MPV
IDP
LIN %
MON %
GRA %
LIN #
MON #
GRA #

Leucocitos totales/microlitros
Eritrocitos
Hemoglobina
Hematocrito
Volumen Corpuscular Medio
Hemoglobina Corpuscular Medio
Concentracin Media de Hemoglobina Corpuscular
Ancho de Distribucin Eritrocitaria (Desviacin Estndar
Plaquetas
Volumen Plaquetario Medio
Ancho de Distribucin Plaquetaria
Porciento de Linfocitos
Porciento de Monocitos
Porciento de Neutrofilos
Linfocitos totales
Monocitos totales
Nmero de Neutrofilos

Nota 1: Los valores que se toman en cuenta para la donacin son Hemoglobina,
Hematocrito, Leucocitos y Plaquetas. Los Histogramas de WBC, RBC y PLT son
para observar grficamente los valores de dichas clulas.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-16
Nivel de Revisin: 4
Fecha: 27 Junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 50 de 9

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometra Hemtica

REGISTROS
Los Resultados que se observan en la hoja de resultados se reportan en el
formato M-3-4-10 y se engrapan en las formas M-3-0-23 se debe guardar durante
5 aos en archivo activo y 5 aos en archivo muerto.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-19
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 9 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 51 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de entrega del comprobante de donacin

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre: LIC. TS ANA

MARIA DORANTES CEH

Nombre: DRA.
MARAGARAITA LETICIA
MEDINA MACAS

Nombre: DRA. DINORA

AGUILAR ESCOBAR

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:7 JUNIO 2011

Fecha: 7 JUNIO 2011

Fecha: 9 JUNIO 2011

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-19
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 9 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 52 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de entrega del comprobante de donacin

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Se actualiza formato del comprobante

de donacin de acuerdo al sistema
informtico de banco de sangre

9/06/2011

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-19
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 9 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 53 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de entrega del comprobante de donacin

DESCRIPCION DEL PROCESO

Una vez que el donador ha realizado la donacin de sangre o afresis y ha ingerido su
refrigerio (Ver Procedimientos CAL-46 y CAL-50) se le solicita anote en la bitcora
de Registro de entrada y salida de donadores CAL-20-A su hora de salida y su firma,
sobre la misma lnea en la que se registr al inicio de la donacin, se le entrega su
Comprobante de donacin, indicndole que venga por sus resultados de Serologa y
Hematologa en 8 das y personalmente (a partir de la fecha en que realiz la
donacin), con una identificacin con fotografa y vigente. El comprobante de donacin
tiene una vigencia de 3 meses.
El formato de Comprobante de Donacin de Sangre M-3-0-25 (manual) se muestra a
continuacin:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-19
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 9 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 54 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de entrega del comprobante de donacin

El formato de Comprobante de donacin de Sangre M-3-0-25 (manual) se llena de la

siguiente manera:
Nombre del donador:

Apellido paterno, Apellido materno, Nombre(s)

del donador.

Nombre:

Apellido paterno, Apellido materno, Nombre(s)

del paciente.

Registro nmero:

Nmero de registro que el INP asigna al

paciente.

Servicio:

rea del INP donde fue solicitada la donacin.

Fecha:

Fecha en que se entrega el comprobante de

donacin.

Nombre:

Nombre de la Trabajadora Social.

Clave:

Clave de la Trabajadora Social.

Firma:

Firma de la Trabajadora Social.

Numero de unidad:

Nmero de unidad asignado en recepcin una

vez que el donador se considera APTO.

Hora:

En que se entrega el comprobante.

El formato de Comprobante de donacin de Sangre que se realiza en el sistema

informtico del banco de sangre se muestra a continuacin:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-19
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 9 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 55 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de entrega del comprobante de donacin

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-19
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 9 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 56 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de entrega del comprobante de donacin

El formato de Comprobante de donacin de Sangre que se realiza en el sistema

informtico de banco de sangre contiene lo siguiente:
No. Unidad:

Nmero de unidad asignado en recepcin una

vez que el donador se considera APTO.

Fecha y Hora:

Fecha y hora en que

comprobante de donacin.

Donador:

Apellido paterno, Apellido materno, Nombre(s)

del donador.

Nombre del paciente:

Apellido paterno, Apellido materno, Nombre(s)

del paciente.

Registro No.:

se

imprime

el

Nmero que el INP asigna al paciente.

Nombre:

Nombre de la Trabajadora Social que autoriza

Clave:

Clave de la Trabajadora Social que autoriza

Firma:

Firma de la Trabajadora Social que autoriza.

REGISTROS
Comprobante de donacin de sangre (manual) M-3-0-25.
Comprobante de donacin en el sistema informtico de banco de sangre M-3-0-25

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 57 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre: Mireya Lpez

Meja

Nombre: Dra. Margarita

Medina Macas

Nombre: Dra. Dinora V.

Aguilar Escobar

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha: 5 de Enero de 2012 Fecha: 5 de Enero de 2012 Fecha: 5de Enero de 2012

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 58 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

CAMBIO
Se homogeniza el trmino
donador
en
todo
el
procedimiento en donde se
menciona.
Se ajusta el diagrama de
proceso

CAL-02-B

REVISIN

FECHA

06

5 de enero 2012

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 59 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

DESCRIPCION DEL PROCESO

El departamento de Banco de Sangre lleva a cabo el registro diario de los
candidatos a donacin que acuden a estudiarse, as mismo se encarga de hacer
un registro de todos los candidatos para llevar a cabo su rastreabilidad.
El da de la donacin el candidato a donador presenta el folleto Cmo solicitar
una cita para donar sangre? (Ver procedimiento CAL-11) para continuar de la
siguiente manera:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 60 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

El candidato a donador muestra el folleto Cmo solicitar una cita para donar sangre? y la identificacin con
fotografa vigente al oficial en turno como pase de entrada al Banco de Sangre y este entrega un portagafete y una
ficha con numeracin consecutiva, se les solicita portar el gafete durante su permanencia en el Banco de sangre

La Trabajadora Social da una pltica de induccin y sensibilizacin sobre los facto res de riesgo y el proceso de donacin para todos
los candidatos a donadores y sobre la importancia de que la sangre donada sea segura (Ver anexo 2) y/o se les presenta un video
informativo.
Les proporciona una copia del consentimiento informado para que la lean y analicen su contenido ya que posteriormente si est n de
acuerdo lo firmarn o se aclaran dudas al respecto.

NO
SI
TS evala la situacin del donador para decidir si le programa cita por no
estar registrado ese da o lo acepta. Registra en la bitcora de citas CAL11-A en el rubro de observaciones los datos que la bitcora solicita
haciendo el sealamiento correspondiente para indicar que fue aceptado
para su valoracin el mismo da. En caso necesario programa una nueva
cita para la donacin y la registra en dicha bitcora (esto para efectos de
trazabilidad).

Si se corrobora la cita pasa al rea de

recepcin para su registro.

La recepcionista solicita el portagafete con su identificacin oficial y el folleto Cmo solicitar una cita? Para donador de
sangre, para registrar sus datos personales en el sistema informtico de banco de sangre , se imprime la ficha de
identificacin que incluye la carta de consentimiento informado (M-3-0-23) , se le solicita al disponente que firme el
consentimiento informado si es que est de acuerdo o si tiene dudas se indica que pase a trabajo social . . Posteriormente
se le devuelve el gafete con la identificacin dentro y se le indica que pase a la sala de espera .

Se le indica al donador que espere a que sea llamado para la valoracin de venas y somatometra (Ver
procedimiento CAL-30).
La ficha de identificacin se coloca en el Kanban de toma de signos vitales.

FIN

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 61 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

FORMATOS RELACIONADOS CON ESTE PROCEDIMIENTO

FICHA DE IDENTIFICACIN
continuacin:

CAL-02-B

DEL

DONANTE

M-3-0-23

se

muestra

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 62 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

El formato M-3-0-23 se llena de la siguiente manera:

Nombre:

Nombre, Apellido paterno y Apellido materno del candidato a

donar.
Parentesco:
Relacin que existe entre el candidato a donar y el paciente.
Edad:
Aos que tiene el candidato.
Fecha de nacimiento:
Da, mes y ao en que naci el candidato.
Sexo:
Indicar el sexo del candidato: Masculino (Hombre) y Femenino
(Mujer)
Estado Civil:
Indicar el estado civil del candidato: Soltero (a),
Casado (a), Unin Libre, Viudo, Divorciado.
Escolaridad:
Indicar hasta que grado de escolaridad curso el candidato:
Primaria, Secundaria, Preparatoria o equivalente, Universidad,
etc.
Ocupacin:
Actividad que realiza el candidato.
Domicilio, municipio, cdigo postal: Lugar donde vive actualmente el candidato.
Telfono:
Nmero telefnico donde se pueda localizar al candidato
(casa, oficina, caseta telefnica, etc.).
Tipo de donacin:
Se especifica si la donacin es:
o Familiar:
o
o
o
o

Altruista:
Autloga:
Dirigida:
Afresis:

Nombre del paciente:

No. de expediente:

Donacin que se realiza para un paciente familiar (Padre,

Madre, Hermano, Primo, Amigo, etc.).
Donacin que no se realiza para un paciente especfico.
Donacin que se la realiza para si mismo.
Donacin que se realiza especficamente para un paciente.
Donacin de plaquetas, Leucocitos, Granulocitos, Plasma y
Eritrocitos.
Nombre, Apellido paterno y Apellido materno del paciente
(este dato y los siguientes los puede encontrar en el folleto
Cmo solicitar una cita para donar sangre?)
Nmero que fue asignado para el paciente por el Instituto
Nacional de Pediatra (corresponde al # de registro).

PLATICA DE INDUCCION AL DONADOR

OBJETIVO: Sensibilizar e informar sobre los procesos a los cuales se someter el
disponente y la importancia de la seguridad sangunea.
1.- Introduccin
Nombre de la trabajadora social en el Banco de Sangre.
Importancia del consentimiento informado.
Registro en Bitcora.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 63 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

2.- Describe los procesos:

Descripcin del proceso de donacin y probable tiempo de estancia.
Importancia de la sangre segura.
-Documentos necesarios para el registro en el rea de recepcin.
-Importancia de los datos personales para la ficha de identificacin.
-Valoracin por el personal de enfermera.
-Toma de muestra por el personal de laboratorio.
-Valoracin mdica.
-Extraccin de sangre total o procedimiento de afresis.
Importancia de ingerir el lunch posterior a la donacin.
Entrega de comprobante de donacin.
Acudir por los resultados de sus estudios.
Registro en Bitcora.
Video Informativo.

La bitcora CAL-20-A se muestra a continuacin:

BITCORA DE REGISTRO DE DONADORES
CAL-20-A
Nombre Nombre Hora
Hora
No.
Firma
Unidad Observaciones
Donador Paciente Entrada Salida

Efectivos
Rechazados
Estudiados para Afresis
Procedimientos Afresis

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 64 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

La bitcora CAL-20-A se llena de la siguiente manera:

No.
Nombre
Donador

Nmero consecutivo en que se van anotando los

donadores
Nombre del candidato a donacin de sangre

Nombre
Nombre del paciente para el que viene a ser
Paciente
donador
Hora Entrada Hora en que se estn registrando
Hora en que sale el donador y ya se le entreg
Hora Salida
comprobante
Firma
Firma de que recibi comprobante de donacin
No. de unidad que se asign siempre que haya
Unidad
sido donador
Observaciones Motivo de rechazo o diferido, etc.
Efectivos
Nmero de donadores efectivos que pasaron donar
Rechazados

Nmero de donadores que no fueron aceptados

para donar

Estudiados Cantidad de donadores que se estudiaron para

para Afresis procedimiento de Afresis
Procedimientos
Nmero de procedimientos realizados
Afresis

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 65 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

FORMATO CAL-20-B CONTROL DE REGISTRO DE DONADORES

INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRIA
BANCO DE SANGRE
CONTROL DEL REGISTRO DE DONADORES
FECHA:______________
UNIDAD DE INICIO________________
UNIDAD_________

ULTIMA

CAL-20-B

13

25

37

En este formato el personal de recepcin registra:

1. Subraya el nmero de donador que ya ingres en el sistema de cmputo
2. Anota si algn donador sali diferido, la causa del mismo, informacin que
permite conocer qu rea rechaz al donador.
3. El nmero de unidad que le asigna a los donadores aceptados.
4. Seala los candidatos a donacin que van a ser estudiados para afresis.
5. Anota los donadores de afresis y el nmero de unidad que les
corresponde.
6. As mismo se registra el nmero de unidad de inicio y el ltimo nmero de
unidad asignado del da.

REGISTROS
La bitcora CAL-20-A se almacena durante 1 ao.
La Bitcora CAL-20-B se almacena en el archivo durante 3 meses.
M-3-0-23 (Ficha de Identificacin) que incluye el Consentimiento informado del
candidato a donador, se almacena en archivo activo 5 aos y en archivo muerto 5
aos, en los donadores aptos (Ver CAL-40 Procedimiento de valoracin mdica).
En los donadores diferidos durante 3 meses.
Sistema informtico de banco de sangre.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 66 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

ANEXO 1.-

MANUAL DEL MANEJO

DEL SISTEMA DE
CMPUTO PARA EL
REA DE RECEPCIN

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 67 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 68 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 69 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 70 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

+
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-20
Nivel de Revisin: 06
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 71 de 15

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Registro a Disponentes

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 72 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 73 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

CAMBIO

1. Se
incluye
procedimiento
alterno
en
sistema
de
fraccionamiento.
2. Se incluye nuevo formato
electrnico en la captura de
datos

CAL-02-B

REVISIN

FECHA

24/02/04

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 74 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

DESCRIPCION DEL PROCESO

Una vez que el donador ha sido sangrado (Ver procedimiento CAL-46) se procede de la
siguiente manera:
El personal de Fraccionamiento checa el estado en que se encuentran cada uno de los equipos que
utiliza para realizar el proceso y anota los resultados en la bitacora de estado de los equipos
CAL-21-A.

Toma del rea de sangrado las Bolsas con la ST recolectada al igual que los formatos M-3-0-30 y
los lleva al rea de fraccionamiento. El Paquete de Bolsas de muestra contiene: 4 Bolsas.
Una de las bolsa madre contiene la Sangre Total con 63-65 ml de anticoagulante (ACD), otra bolsa
contienen el aditivo (100 ml de SAG-MANITOL o ADSOL), un filtro leucorreductor para concentrado
eritrocitario y las dos bolsas satelites vacias
En el rea de fraccionamiento se anota en la bitcora de fraccionamiento CAL-21-B los siguientes
datos: Fecha del da de anlisis y Fecha de caducidad de cada concentrado (CE, CP, PCF
y GAH cuando se realiza).

De cada una de las muestras se anotan en la bitcora CAL-21-B los siguientes datos: # que le
corresponde al donador, Peso Bruto del sistema (ST-PB = Bolsa madre con 63-65 ml de
anticoagulante + 450 +/- 10% de sangre ms la bolsa con el aditivo (100ml), un filtro leucorreductor
rara concentrado eritrocitario y las dos bolsas satelites); sexo del donador, Peso Neto (ST-PN = PB
menos la suma de la Bolsa Madre con 63-65 ml de anticoagulante con bolsa de aditivo con dos bolsas
satelites) y volumen (V-ST= PN/1.054 o1.057)

Se pesa en una balanza granataria de 2 platos un paquete de bolsas y su peso se equilibra con otro
paquete de bolsas adicionando cualquier objeto de material similar al de las bolsas hasta que el peso
sea el mismo. Todo lo que se encuentre en el plato se cada brazo se mete a un vaso de centrfuga.
El peso en la centrfuga debe estar equilibrado para que el proceso se realice correctamente.

Para introducir las bolsas al vaso de la centrfuga y no sean maltratadas por el mismo movimiento, se
acomodan de la siguiente manera: coloque en la mesa las bolsas satelite y la del aditivo, despues las
lineas de todas las bolsas, forme un taco enrrollando las bolsas con las lneas dentro de ellas (para
proteccin). Para introducirlas en el vaso de la centrifuga: se coloca la bolsa madre con las costuras
de la bolsa alineadas con las muescas de sostn del vaso, a continuacin meter el taco al frente de
la bolsa madre.

Se revisa que las zonas de conectores para equipos de transfusion estn sin sangre para evitar
contaminacin (dar pequeos golpes a los pilotos hasta que ya no tengan sangre), se le coloca una
pinza en la linea que se uso para la extraccin de la sangre y se introduce el vaso en la centrifuga
verificando que se oriente la bolsa madre hacia la flecha y el taco hacia las paredes de la
centrfuga.,el filtro queda orientado hacia la parte externa de la centrifuga soportado por la zona media
con la boca del vaso Se procede a centrifugar
(Ver procedimiento CAL-23)

Una vez que se termina la centrifugacin, se saca el vaso de la centrifuga. Las 4 Bolsas se retiran del
vaso con sumo cuidado para evitar que el plasma se vuelva a mezclar con el
concentrado eritrocitario (CE)

Se revisa que la zona para conectores de equipo de transfusion esten limpios y se transfiere el plasma
rico en plaquetas(PRP) a una bolsa satelite, se sella en la lnea que une a la bolsa madre (sellador
dielectrico. (Ver Procedimiento CAL-24)

Al finalizar la extraccin del plasma se tienen pinzas colocadas en la bolsa que contiene el plasma rico
en plaquetas (PRP) y en la bolsa satelite si se considera necesario. Se cuelga en el tripi la bolsa que
contiene el aditivo, se rompe el broche de la bolsa de SAG-MANITOL para que pase atraves del
filtro (funciona para purgar el filtro). Se invierte el sistema para filtrar el concentrado eritrocitario (con
cuidado, evitando que pasen burbujas de aire). Se dejan colgadas en un tripie hasta que se termina el
proceso de filtracin

Cuando se termina de adicionar el aditivo se procede a la quema de las lineas con el

TUBE SEALER ACS-152 TERUFLEX. Pimero se sella la linea que sale de la bolsa que contiene el
Concentrado Eritrocitario una vez separados, se agita para ayudar a la homogenizacin del CE y el
aditivo y se pesa.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 75 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

El peso bruto del Concentrado Eritrocitario se anota en CAL-21-A en la columna de PB - CE y

posteriormente se resta el peso de la bolsa al valor del CE para obtener el PN-CE. El volumen del CE
se obtiene dividiendo el valor ( PN / 1.093 ) y se apunta en la bitcora CAL-21-A los resultados, se
verifica que se encuentren dentro de los valores especificados en la NOM-003-SSA2-1993

NO
SI
Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras CE, el volumen de CE y la caducidad (acorde al
anticoagulante empleados) y esta se pega en la bolsa e introduce en el refrigerador a 4 C cuando el
procedimiento es manual .

La Bolsa de PRP y la bolsa satelite se pesan para introducir y equilibrar con pesos iguales y no perder
la estabilidad que requiere la centrifuga para su uso adecuado (Ver Procedimiento CAL-23). Se
acomodan en pares de la siguiente manera para evitar que se rompan en la centrifuga: se coloca en la
mesa primero la bolsa satelite vacia y sobre ella la que contiene el plasma, cuando se introducen en
los vasos de la centrifuga las lineas deben quedar detrs de las bolsas. Una vez en el vaso se le
quitan las pinzas a las dos bolsas.

Se procede a
desechar la muestra y
se registra el motivo
en la bitcora
CAL-21-A y en la
Bitcora de Bajas
CAL-21-C.

Al termino del centrifugado se sacan los vasos de la centrifuga y se procede a retirar con sumo
cuidado las bolsas de PRP. Se transfiere a una bolsa satelite vacia la mayor cantidad de plasma
dejando un remanante de 40-60ml para reconstituir el botn de plaquetas (CP) (con un volumen de
40 a 60 ml) y el PF (volumen de 150-180 ml) en el T-ACE o en su defecto empleando el sistema
manual (plancha para desplasmatizar) (Ver Procedimiento CAL-22)

El Concentrado Plaquetario se pesa y se anota el Peso Bruto en la bitcora CAL-21-A en la columna

PB-CP, en la columna PN-CP el valor del Peso Neto (PN= PB-peso bolsa satelite) y en la de V-CP el
Volumen (V= PN/1.028), los que se anotan en CAL-21-A .Se verifica que los valores obtenidos se
encuentren dentro de los valores especificados en la NOM-003-SSA2-1993.
NO
SI
Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras CP, el volumen de CP y la caducidad (5 das) y esta se
pega en la bolsa, Se mantienen en el incubador entre 20-24 C cuando el procedimiento es manual .

Se continua con el pesado e identificacin de PF: el PB se anota en la bitcora CAL-21-A en la

columna PF-PB, en la de PN-PF el Peso Neto (PN= PB-peso bolsa satelite) y en la de V-PF el
Volumen (V= PN/1.028). Se verifica que los valores obtenidos se encuentren dentro de los valores
especificados en la NOM-003-SSA2-1993.

Se procede a desechar
la muestra y se registra
el motivo en la bitcora
CAL-21-A y en la
Bitcora de Bajas CAL21-C.

NO
SI

Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras PCF, el volumen de PCF y la caducidad (1 ao) y esta se
pega en la bolsa e introduce en el CONGELADOR con rangos de -30 a -70 C cuando el
procedimiento es manual .

A los productos obtenidos en este proceso como son: CE, CP y PCF se les debe anotar con un
plumon y pegar una etiqueta con su respectivo grupo sanguineo obtenido de la bitcora de serologa
CAL-26-A cuando el procedimiento es manual.

El Personal de fraccionamiento anota en la Bitcora de producto radiado CAL-21-D la fecha, tipo de

producto, # de registro y el auxiliar de laboratorio antes de entregar el producto anota la hora de
recepcion y solicita anote su Nombre y firma quien lo recibe y al finalizar la radiacin de quien entrega
el producto , una vez que el producto se recoge de radiacin se coloca en las condiciones
especificadas para su posterior identificacin.

Al finalizar el proceso se registra en CAL-21-A el nmero de donadores, el nmero de ST, CP, CE,
PCF y GAH obtenidos, el nombre o sello y firma del personal que realizo el fraccionamiento. Se
ingresan datos de volumen y fracciones al sistema de computo TESI.

CAL-02-B

Se procede a
desechar la
muestra y se
registra el motivo
en la bitcora
CAL-21-A y en la
Bitcora de Bajas
CAL-21-C.

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 76 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

El personal de Fraccionamiento checa el estado en que se encuentran cada uno de los equipos que
utiliza para realizar el proceso y anota los resultados en la bitacora de estado de los equipos
CAL-21-A.
Toma del rea de sangrado las Bolsas con la ST recolectada al igual que los formatos M-3-0-30 y
los lleva al rea de fraccionamiento. El Paquete de Bolsas de muestra contiene: 4 Bolsas.
Una de las bolsa madre contiene la Sangre Total con 63-65 ml de anticoagulante (ACD), otra bolsa
contienen el aditivo (100 ml de SAG-MANITOL o ADSOL) y las dos bolsas satelites vacias

En el rea de fraccionamiento se anota en la bitcora de fraccionamiento CAL-21-B los siguientes

datos: Fecha del da de anlisis y Fecha de caducidad de cada concentrado (CE, CP, PCF y GAH
cuando se realiza).

De cada una de las muestras se anotan en la bitcora CAL-21-B los siguientes datos: # que le
corresponde al donador, Peso Bruto del sistema (ST-PB = Bolsa madre con 63-65 ml de
anticoagulante + 450 +/- 10% de sangre ms la bolsa con el aditivo (100ml) y las dos bolsas satelites);
sexo del donador, Peso Neto (ST-PN = PB menos la suma de la Bolsa Madre con 63-65 ml de
anticoagulante con bolsa de aditivo con dos bolsas satelites) y volumen (V-ST= PN/1.054 o1.057)

Se pesa en una balanza granataria de 2 platos un paquete de bolsas y su peso se equilibra con otro
paquete de bolsas adicionando cualquier objeto de material similar al de las bolsas hasta que el peso
sea el mismo. Todo lo que se encuentre en el plato se cada brazo se mete a un vaso de centrfuga. El
peso en la centrfuga debe estar equilibrado para que el proceso se realice correctamente.

Para introducir las bolsas al vaso de la centrfuga y no sean maltratadas por el mismo movimiento, se
acomodan de la siguiente manera: coloque en la mesa las bolsas satelite y la del aditivo, despues las
lineas de todas las bolsas, forme un taco enrrollando las bolsas con las lneas dentro de ellas (para
proteccin). Para introducirlas en el vaso de la centrifuga: se coloca la bolsa madre con las costuras
de la bolsa alineadas con las muescas de sostn del vaso, a continuacin meter el taco al frente de
la bolsa madre.

Se revisa que las zonas de conectores para equipos de transfusion estn sin sangre para evitar
contaminacin (dar pequeos golpes a los pilotos hasta que ya no tengan sangre), se le coloca una
pinza en la linea que se uso para la extraccin de la sangre y se introduce el vaso en la centrifuga
verificando que se oriente la bolsa madre hacia la flecha y el taco hacia las paredes de la centrfuga.
Se procede a centrifugar
(Ver procedimiento CAL-23)

Una vez que se termina la centrifugacin, se saca el vaso de la centrifuga. Las 4 Bolsas se retiran del
vaso con sumo cuidado para evitar que el plasma se vuelva a mezclar con el concentrado eritrocitario
(CE)

Se revisa que la zona para conectores de equipo de transfusion esten limpios y se transfiere el plasma
rico en plaquetas(PRP) a una bolsa satelite, se sella en la lnea que une a la bolsa madre (sellador
dielectrico. (Ver Procedimiento CAL-44)

Al finalizar la extraccin del plasma se tienen pinzas colocadas en la bolsa que contiene el plasma rico
en plaquetas (PRP) y en la bolsa satelite si se considera necesario. Se cuelga en el tripi la bolsa que
contiene el aditivo, se rompe el broche de la bolsa para dejarlo pasar al CE.

CAL-02-B

Cuando se termina de adicionar el aditivo se procede a la quema de las lineas con el

TUBE SEALER ACS-152 TERUFLEX. Pimero se sella la linea que sale de la bolsa que contiene el
Concentrado Eritrocitario una vez separados, se agita para ayudar a la homogenizacin del CE y el
aditivo y se pesa.

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 77 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

El peso bruto del Concentrado Eritrocitario se anota en CAL-21-B en la columna de PB - CE y

posteriormente se resta el peso de la bolsa al valor del CE para obtener el PN-CE. El volumen del CE
se obtiene dividiendo el valor ( PN / 1.093 ) y se apunta en la bitcora CAL-21-B los resultados, se
verifica que se encuentren dentro de los valores especificados en la NOM-003-SSA2-1993
NO

SI
Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras CE, el volumen de CE y la caducidad (acorde al
anticoagulante empleados) y esta se pega en la bolsa e introduce en el refrigerador a 4 C cuando el
procedimiento es manual .

La Bolsa de PRP y la bolsa satelite se pesan para introducir y equilibrar con pesos iguales y no perder
la estabilidad que requiere la centrifuga para su uso adecuado (Ver Procedimiento CAL-23).
Se acomodan en pares de la siguiente manera para evitar que se rompan en la centrifuga: se coloca
en la mesa primero la bolsa satelite vacia y sobre ella la que contiene el plasma, cuando se introducen
en los vasos de la centrifuga las lineas deben quedar detrs de las bolsas. Una vez en el vaso se le
quitan las pinzas a las dos bolsas.

Al termino del centrifugado se sacan los vasos de la centrifuga y se procede a retirar con sumo
cuidado las bolsas de PRP. Se transfiere a una bolsa satelite vacia la mayor cantidad de plasma
dejando un remanante de 40-60ml para reconstituir el botn de plaquetas (CP) (con un volumen de
40 a 60 ml) y el PF (volumen de 150-180 ml) en el T-ACE o en su defecto empleando el sistema
manual (plancha para desplasmatizar) (Ver Procedimiento CAL-22)

El Concentrado Plaquetario se pesa y se anota el Peso Bruto en la bitcora CAL-21-A en la columna

PB-CP, en la columna PN-CP el valor del Peso Neto (PN= PB-peso bolsa satelite) y en la de V-CP el
Volumen (V= PN/1.028), los que se anotan en CAL-21-A .Se verifica que los valores obtenidos se
encuentren dentro de los valores especificados en la NOM-003-SSA2-1993.
NO
SI
Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras CP, el volumen de CP y la caducidad (5 das) y esta se
pega en la bolsa, Se mantienen en el incubador entre 20-24 C cuando el procedimiento es manual .

Se continua con el pesado e identificacin de PF: el PB se anota en la bitcora CAL-21-A en la

columna PF-PB, en la de PN-PF el Peso Neto (PN= PB-peso bolsa satelite) y en la de V-PF el
Volumen (V= PN/1.028). Se verifica que los valores obtenidos se encuentren dentro de los valores
especificados en la NOM-003-SSA2-1993.
NO

SI
Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras PCF, el volumen de PCF y la caducidad (1 ao) y esta se
pega en la bolsa e introduce en el CONGELADOR con rangos de -30 a -70 C cuando el
procedimiento es manual .

A los productos obtenidos en este proceso como son: CE, CP y PCF se les debe anotar con un
plumon y pegar una etiqueta con su respectivo grupo sanguineo obtenido de la bitcora de serologa
CAL-26-A cuando el procedimiento es manual.
El Personal de fraccionamiento anota en la Bitcora de producto radiado CAL-21-D la fecha, tipo de
producto, # de registro y el auxiliar de laboratorio antes de entregar el producto anota la hora de
recepcion y solicita anote su Nombre y firma quien lo recibe y al finalizar la radiacin de quien entrega
el producto , una vez que el producto se recoge de radiacin se coloca en las condiciones
especificadas para su posterior identificacin.

Al finalizar el proceso se registra en CAL-21-A el nmero de donadores, el nmero de ST, CP, CE,
PCF y GAH obtenidos, el nombre o sello y firma del personal que realizo el fraccionamiento. Se
ingresan datos de volumen y fracciones al sistema de computo TESI.

CAL-02-B

Se procede a
desechar la
muestra y se
registra el motivo
en la bitcora
CAL-21-A y en la
Bitcora de Bajas
CAL-21-C.

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 78 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

SISTEMA ALTERNO EN BOLSA

TERUMO

RECOGER DEL AREA DE SANGRADO EL PRODUCTO OBTENIDO

(SANGRE TOTAL)

Se pesa el Sistem y se ingresa en la Cal 21-B

(en sistema de computo)

Colocar en las camisas de la centrifuga la ST y balancear por peso

Centrifugar 1800 rpm/10 min

aproximadamente

Separar PG

Se pasa el PG a la
bolsa de ADSOL y
se sella

Se conceta el filtro
al PG. Por
gravedad se filtra
y almacena

CAL-02-B

Separar PRP

CENTRIFUGAR
3500 RPM /15
MIN

Pesar e ingresar
en el SISTEMA

SEPARA EL CP.
PESAR

SEPARA EL PFC.
PESAR

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 79 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

El formato de identificacin de productos sanguneos, M-3-0-30

continuacin:

se muestra a

El formato M-3-0-30 se llena de la siguiente manera para cada producto:

Nombre del donador:

Fecha y hora de caducidad:
Producto:
Volumen:

CAL-02-B

Nombre y apellido completo

Fecha en que caduca el producto.
Tipo de producto: ST, CE, CP, PCF.
Cantidad en ml que se obtuvo del producto.

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 80 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

La bitcora de estado de los equipos CAL-21-A se muestra a continuacin:

BITCORA DE ESTADO DE LOS EQUIPOS
CAL-21-A

Fecha:
Nombre o sello del Qumico de Fraccionamiento
Centrifuga DAWONDAMON/IEC DIVISION
Temperatura
RPM
Tiempo
Limpieza
Centrifuga SORVALL General-Purpose RC-3
Temperatura
RPM
Tiempo
Limpieza
Centrifuga BECKMAN J6-MC
Temperatura
RPM
Tiempo
Limpieza
Limpieza del Extractor de plasma
Funcionamiento y limpieza de Equipo T-ACE

Observaciones

La bitcora CAL-21-A se llena de la siguiente manera:

Fecha:

Da, mes y ao de uso del equipo.

Nombre o sello del Qumico

de Fraccionamiento:

Nombre(s), Apellido Paterno y Materno

Centrifuga DAWON/IEC
DIVISION,Centrifuga SORVALL
General-Purpose RC-3 y
Centrifuga BECKMAN J6-MC

Anotar una paloma en el caso de que el

equipo se encuentre en buen estado
antes de su uso y una X en caso
contrario.
:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 81 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

Temperatura:

Realizar
pruebas
a
diferentes
temperaturas y anotar una paloma en el
caso de que el equipo se encuentre en
buen estado antes de su uso y una X en
caso contrario.

RPM:

Realizar
pruebas
a
diferentes
revoluciones por minuto y anotar una
paloma en el caso de que el equipo se
encuentre en buen estado antes de su
uso y una X en caso contrario.

Tiempo:

Realizar pruebas a diferentes tiempos y

anotar una paloma en el caso de que el
equipo se encuentre en buen estado
antes de su uso y una X en caso
contrario.

Limpieza del extractor de plasma:

Si el equipo se encuentra limpio anotar

una paloma y en caso contrario una X.

Funcionamiento y limpieza del

equipo T-ACE:

Si el equipo funciona y se encuentra

limpio anotar una paloma y en caso
contrario una X.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 82 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

La bitcora de fraccionamiento CAL-21-B se muestra a continuacin:

BITACORA DE FRACCIONAMIENTO
CAL-21-B

No.

REGIS
TRO

ST
PB-ST PN-ST

SEXO

CE
VOL

PB-PG PN-PG

PF
V

PF-PB PF-PN

CP
PF-V

CP-PB CP-PN

H.
EXTR

H. F.

delta

T. FIL. INI

T. FIL.
FIN

DIF

CP-V

La bitcora de bajas CAL-21-B debido a su tamao no se muestra dentro de este

procedimiento.

La bitcora CAL-21-B se llena de la siguiente manera:

No.:

# de bitcora de Ingresos y egresos.

REGISTRO:

# de unidad

SEXO:

Masculino (M).- Densidad: 1.057

Femenino (F).- Densidad: 1.054

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 83 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

ST-PB:

Peso (gr) del sistema de sangrado: la bolsa

madre con 63-65 ml de anticoagulante ms la
sangre de la flebotomia (450 gr +/-10%), la
bolsa con el aditivo y las dos bolsas satelites.

ST-PN:

Es la diferencia de peso entre el ST-PB

y la suma de la bolsa madre con 63-65 ml de
anticoagulante ms la bolsa con 100 ml de
aditivo ms las dos bolsas satelites

ST-V:

Es el PN entre la densidad de la sangre

(Masculino 1.057 o Femenino 1.054)

CE-PB:

Peso del Concentrado eritrocitario ms la

bolsa

CE-PN:

PB-CE menos el peso de la bolsa

contenedora (47gr para el sistema que
actualmente empleamos)

VOL:

PN entre1.093 (densidad del CE)

CP:

Peso del Concentrado plaquetario ms la

bolsa.

PN:

Peso del CP menos 25 que es el peso

la bolsa

VOL:

Es el PN entre 1.028 (densidad del CP)

h. extraccion:

Hora de extraccin

H. F.

Hora de termino del sangrado

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 84 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

delta

Diferencia entre inicio y trmino del sangrado

Tfil ini.

Hora
de
inicio
prealmacenaminto

Tfil fi

Hora
de
trmino
prealmacenamaiento

Dfilt

Diferencia entre inicio y trmino del proceso

de filtracin

NOMBRE O SELLO:

Nombre(s),
Apellido
Paterno,
Apellido
Materno del Qumico de Fraccionamiento que
realizo el proceso.

FIRMA:

Firma del Qumico, Laboratorista, Tcnico o

Auxiliar de laboratorio que realizo el
Fraccionamiento

de

de

la

filtracin

la

filtracin

La bitcora de bajas CAL-21-C debido a su tamao no se muestra dentro de este

procedimiento.
La bitcora de bajas CAL-21-C se llena de la siguiente manera:
Se marca con una paloma o una X el motivo de la baja.
Fecha:
Registro:
Nombre:
Vol:

Da, mes y ao de baja del producto.

# de bitcora de ingresos y egresos
Apellido
Paterno,
Apellido
materno
nombre(s)
Volumen desechado en ml o UI.

Tipos de productos:
ST:
CE:
CAL-02-B

Sangre Total
Concentrado eritrocitario

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 85 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

PF:
PE:
PSF:
CP FERESIS:
CP:
CR:

Plasma fresco.
Plasma envejecido
Plasma sin factor
Concentrado plaquetario obtenido por afresis
abierta o cerrada.
Concentrado plaquetario
Crioprecipitado

CAUSAS DE BAJA
6.7.1 Marcadores Infecciosos:
VIH:
VBH:
VCH:
VDRL:
CHAG:
BRUC:
CMV:
OTROS:

Virus de Inmunodefiencia adquirida

Hepatitis B
Hepatitis C
Sifilis
Chagas
Brucela
Citomegalovirus
Estudios especficos solicitados.

Otros motivos de baja:

672AUTOEX.:
673 CAD.:
674 Def. conserv.:
675 Def. recolec.:
676 Roto:

Autoexclusin
Caducidad
Deficiente conservacin
Deficiente recoleccin
Sistema Roto (Bolsa, linea, etc)

677 Cont. erit/Hem.:

678 Lipem.:
679 Cont./Pic.:

Contaminacin de Eritrocitos y/o Hemlisis.

Lipemico
Picado (Bolsa, linea, etc)

Control de Calidad:
Nombre:

Utilizado en estudios de Control de calidad

Nombre Completo o sello del Qumico,
laboratorista, tcnico o auxiliar de laboratorio
que dio de baja el producto

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-21
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 86 de 102

ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento

Nota 1: El uso de guantes para el proceso de fraccionamiento es obligatorio.

Nota 2: El funcionamiento y la limpieza de los equipos deben ser revisados por el
Qumico de Fraccionamiento antes de iniciar el proceso.
Nota 3: Se puede utilizar la bolsa vaca para recolectar el PCF o la bolsa que contena el
aditivo, tomando en cuenta la variacin de peso entre cada bolsa para los clculos.
Nota 4: La temperatura de los refrigeradores es muy importante para el almacenamiento
adecuado de los diferentes tipos de muestras.
Nota 5: Se debe tener la calibracin y revisin continua de balanzas, del equipo T-ACE
y centrifugas.

REGISTROS
La bitcora CAL-21-A se debe almacenar 1ao.
La bitcora CAL-21-B se guarda 5 aos en archivo activo y 5 aos en archivo muerto.
La bitcora CAL-21-C se guarda 5 aos en archivo activo y 5 aos en archivo muerto.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-22
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 87 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de operacin
del equipo T-ACE

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-22
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 88 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de operacin
del equipo T-ACE

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Ninguno

24/09/03

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-22
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 89 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de operacin
del equipo T-ACE

DESCRIPCION DEL PROCESO

Durante el Fraccionamiento de la muestra recolectada (Ver procedimiento CAL-21)
se puede realizar la separacin utilizando el Extractor de plasma (Ver
procedimiento CAL-24) o por medio del Equipo T-ACE la siguiente manera:
Verifique en el manometro que se encuentra en la parte de atras baja del equipo que la presion este en 5. (1)

Encienda el equipo con el interruptor (2) que se encuentra en la parte de atras del equipo.

Oprima MENU en el panel de control (3) para seleccionar el programa que desea

Oprima SCROLL (4) para seleccionar el No del programa

Oprima STOP (5) y aparece la siguiente pantalla:

PROGRAMME 5
PRP
phase:05

Colocar la bolsa que contiene el plasma previamente centrifugado en frente de la puerta (7) dentro de dos
piezas de metal (6).

Colocar la bolsa satelite vacia en la balanza (8) que le corresponde

La linea que sale de la bolsa que contiene el plasma se coloca dentro de los clamps marcados con numeros y
de acuerdo al diagrama siguiendo siempre la linea marcada. (9) , (10), (11).
(marcado en el equipo en color rojo)
Cerrar la puerta y el equipo indicara que se puede comenzar y la pantalla sera la siguiente:

BREAK CLICK-TIPS
AND PUSH START

Y en el panel de control se observa que el foco del STOP (5) se prende y el del START (12) empieza a
parpadear

Oprimir START (12) para iniciar y las pantallas que se observan son las siguientes:

PROGRAMME 5
P:08
plasma (g):

PRP

PROGRAMME 5
phase:09
sealing head 1

PRP

PROGRAMME 5
phase:09
sealing head 2

PRP

PROGRAMME 5
close tubing with
plastic clamps
and push STOP

PRP

Escuchara el sonido de alarma y en el panel observara el foco del MENU (3) encendido y el STOP (5)
parapadeando y se escucha como sellan los clamps las lneas de plstico e indica que a terminado el
procedimiento

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-22
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 90 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de operacin
del equipo T-ACE

Se abren los clamps

Se ponen los dedos del lado izquierdo de los clamps 1 y 2 (13) y el sobrante de linea se desecha en el bote
correspondiente.

Quitar la bolsa que contiene el PCF y despues la que contiene el plasma teniendo cuidado al sacar las lineas
de los clamps

Equipo T-ACE
4 Obstructores y Cabezales selladores de Alta frecuencia
(10 Y 11)

Balanzas (8)

(13)

(7)
1 Pantalla Digital y un Fcil
Panel de Control (3), (4) ,(5) y (12)

(6)
(1)

Motor Regulador de Flujo y un

1 Detector (9)

12 Detectores de Presin

(2)

1 Lector de Cdigo de Barras

Universal

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-22
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 91 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de operacin
del equipo T-ACE

Nota 1: Se requiere el mantenimiento peridico del equipo.

Nota 2: Mantener limpia el rea de los clamps.
Nota 3: Realizar la inspeccin diaria para conocer el estado del equipo.

REGISTROS
No existen registros asociados con este procedimiento.

CAL-02-B

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-23
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 27 Febrero 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 93 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento general de operacin
de centrifugas

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Se anexa procedimiento de manejo

para la centrifuga SERO - FUGE

27/02/04

DESCRIPCION DEL PROCESO

Una vez que el donador ha sido sangrado (Ver procedimiento CAL-46) se procede
a realizar el Fraccionamiento de la muestra recolectada (Ver procedimiento
CAL-21) en el que se realizan varias centrifugaciones de la siguiente manera:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-23
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 27 Febrero 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 94 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento general de operacin
de centrifugas

Centrifuga DAMON/IEC DIVISION

La centrifuga DAMON/ IEC DIVISION se prende con el interuptor que indica MAINWER (1).
Al encender el equipo se ilumina al mismo tiempo el foco naranja que se encuentra arriba del la palabra
anterior y el foco verde donde indica STOPPED (2).

Se establecen las RPM (3) y la Temperatura (4) especificas para cada producto a centrifugar
(Ver Tabla CAL-23-A)

Se abre la tapa de la centrifuga con la palanca que se encuentra en la tapa, la que se giran a la izquierda y se
jala hacia arriba.

Se sacan los vasos de centrifuga

Se introduce la muestra a centrifugar en el vaso (previamente pesada y corroborado que los vasos paralelos
tendran el mismo peso para conservar la estabilidad de la centrifuga).

Se introducen los vasos que contienen las muestras a la centrifuga

Una vez adentro los 4 vasos de la centrifuga se cierra la puerta y se jala hacia la derecha la palanca.

Se pone el tiempo que se requiere segn la muestra introducida.(5)

Se aprieta START (6) y se puede observar que ha iniciado la centrifugacin cuando el foco verde que dice
STOPPED (2) se apaga.

Pasado el tiempo de la centrifugacin se enciende el foco verde STOPPED (2) lo que indica que ha terminado
de centrifugar y se pueden sacar los vasos de la centrifuga.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-23
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 27 Febrero 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 95 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento general de operacin
de centrifugas

Centrifuga SORVALL General-Purpose RC-3

La centrifuga SORVALL General-Purpose RC-3 se prende con el interuptor que dice MAIN SWITCH ON
(encender) y OFF (apagar) (1) , cuando la enciendes se prende el foco naranja que dice MAIN POWER (2)

Se establecen las RPM (3) y la Temperatura (4) especificas para cada producto a centrifugar
(Ver Tabla CAL-23-A)

La tapa de la centrifuga se abre jalando la palanca hacia arriba

Se sacan los vasos de centrifuga

Se introduce la muestra a centrifugar en el vaso (previamente pesada y corroborado que los vasos paralelos
tienen el mismo peso para conservar la estabilidad de la centrifuga).

Se incorporan los vasos que contienen las muestras a la centrifuga

Se cierra la puerta de la centrifuga

Se pone el Tiempo (5) que se requiere segn la muestra introducida.

Se aprieta START (6) y se prende el foco naranja (7) que indica el inicio de la centrifugacin.

Una vez terminada la centrifugacin se pueden sacar los vasos de la centrifuga.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-23
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 27 Febrero 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 96 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento general de operacin
de centrifugas

Centrifuga BECKMAN J6-MC

La centrifuga BECKMAN J6-MC se prende con el interuptor (1) y se observa al encender que se prende un
foco naranja donde dice MAIN POWER (2)

Para introducir las condiciones se siguen los siguientes pasos:

Para poner las RPM se presiona el boton que dice SPEED (3) teclee el valor y presione ENTER/RECALL (4)
para que se fije el dato que metio
Para introducir el tiempo se presiona el boton que dice TIME (5) teclee el valor y presione ENTER/RECALL
(4) para que se fije el dato que metio
Para introducir el valor de la temperatura presione de el boton TEMP (6) teclee el valor y presione ENTER/
RECALL (4) para que se fije el dato que metio. Los valores especificados para cada producto se encuentran
en la Tabla CAL-23-A.

La tapa de la centrifuga se abre empujando la palanca hacia abajo y jalando la tapa.

La tapa de los vasos se abre jalandola hacia arriba y se coloca en la parte interna de la tapa de la centrifuga.

Se sacan los vasos de centrifuga

Se introduce la muestra a centrifugar en el vaso (previamente pesada y corroborado que los vasos paralelos
tengan el mismo peso para conservar la estabilidad de la centrifuga).

Se incorporan los vasos que contienen las muestras a la centrifuga

Se pone la tapa de los vasos verificando que entre totalmente y posteriomente se cierra la puerta de la
centrifuga

Se presiona PROGRAM RECALL (7) para verificar que las condiciones. Se presiona START (8) y se prende el
foco verde que indica el inicio de la centrifugacin.

Al termino del tiempo suena la alarma y cambia de START (8) a STOP (9)

Se pueden sacar los vaso de la centrifuga.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-23
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 27 Febrero 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 97 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento general de operacin
de centrifugas

SERO - FUGE

El personal de banco de sangre recibe los tubos para su

separacin en tubos 12 x 75mm

Se colocan los tubos con volumen similar en cotraposicin

La SERO FUGE es una centrfuga de velocidad constante (3400 rpm

aproximadamente) y con tiempo variable.
El timer que se localiza en la parte frontal se gira en direccin a las manecillas del
relog y se ubica en el timpo deseado.

Al trmino del tiempo la centrfuga se detiene en automtico.

Destapar y sacar los tubo.

La tabla CAL-23-A se muestra a continuacin:

Sangre Total
Centrifuga DAMON/IEC DIVISION

Plaquetas

2200RPM

10MIN

18 C

1500RPM

10MIN

18 C

Centrifuga SORVALL General-Purpose RC-3 2200RPM

10MIN

18 C

1500RPM

10MIN

18 C

10MIN

18 C

1500RPM

10MIN

18 C

Centrifuga BECKMAN

CAL-02-B

J6-MC

2200RPM

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-23
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 27 Febrero 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 98 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento general de operacin
de centrifugas

Nota 1: Se requiere el mantenimiento y la calibraron peridica de las balanzas.

Nota 2: Mantener sin golpes y limpios los vasos de la centrifuga.
Nota 3: Realizar la inspeccin diaria de los equipos de trabajo.
Nota 4: Las centrifugas DAMON/IEC DIVISION y la SORVALL General-Purpose
RC-3 contienen 4 vasos para centrifugar y la BECKMAN J6-MC tiene 6 vasos.

REGISTROS
No existen registros asociados con este procedimiento

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-24
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 99 de 3

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de operacin del
extractor de plasma

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-24
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 100 de 3

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de operacin del
extractor de plasma

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Ninguno

24/09/03

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-24
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 101 de 3

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de operacin del
extractor de plasma

DESCRIPCION DEL PROCESO

Durante el Fraccionamiento de la muestra recolectada (Ver procedimiento CAL-21)
se utiliza el extractor de plasma de la siguiente manera:

Para realizar la extraccin del plasma se requiere introducir la bolsa que contiene el Concentrado eritrocitario
y el Plasma previamente separados por la centrifugacin en el Extractor de plasma.

Para introducir la bolsa se baja la palanca (1) que se encuentra en la tapa (2) que ejercera la presin y se
atora en el gancho (3) que se encuentra en la base del extractor, una vez introducida la bolsa se suellta la
palanca de la tapa girando el gancho a la derecha y se inicia la presin sobre la bolsa.

Se coloca una pinza en la lnea que va a la bolsa vaca que esta sola y se rompe el seguro de la linea principal
de la bolsa que contiene el producto para dejar salir el plasma.

Dejando un poco de plasma aproximadamente 1cm y finalizada la separacin se coloca una pinza en la linea
que va al plasma y se quita la usada en la toma de muestra (si concidera que sea necesario poner una pinza
en la bolsa vacia)

Extractor de plasma:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-24
Nivel de Revisin: 0
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 102 de 3

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de operacin del
extractor de plasma

REGISTROS
No existen registros asociados con este procedimiento

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-51
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 Dic 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 1 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-51
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 Dic 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 2 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Ninguno

00

03/Dic/03

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-51
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 Dic 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 3 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

DESCRIPCION DEL PROCESO

El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatra lleva acabo la valoracin

mdica de los pacientes para los que solicitan productos del Banco.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-51
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 Dic 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 4 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

VALORACION CLINICA DEL

PACIENTE
SOLICITUD A-13-14-07
Se recibe solicitud de producto sanguneo en ventanilla de seccin de
Inmunohematologa del Banco de Sangre. Se revisa

SI

ok

NO

NO SE RECIBE
muestra ni solicitud

Se recibe muestra
y solicitud

NO
Se notifica la
Mdico adscrito al
Banco de Sangre
para su valoracin

El Mdico revisa:
Nombre del paciente
Servicio Solicitante
Cama
Fecha de ltima transfusin
Diagnstico
Hb/Hto
Peso del paciente
Causa de la Urgencia (si existe)

Depus de realizar la valoracin

clnica del paciente, se pone una
nota en la solicitud con los
cambios a efectuar en:
A).- los productos solicitdos
B).- dosis

SI

OK

NO

SE ACEPTA

Se procede a realizar la
valoracin clnica de
acuerdo a los productos
sanguneos solicitados,
revisando al paciente as
como su expediente clnico

SI

Se realiza una
anotacin con la
palabra SI en el
ngulo superior
derecho de la
solicitud

CAL-02-B

Se da la solicitud al
personal de laboratorio
para la asignacin del
producto solicitado

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-51
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 Dic 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 5 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para valoracin mdica

REGISTROS
Formato A 13-14-07.- se almacena 5 aos en el archivo activo y 5 aos en archivo
muerto

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina: 1 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre: Dra. Doris

Lordmndez Jcome

Nombre: Dra. M. Leticia

Medina Macas

Nombre: Dra. Dinora V.

Aguilar Escobar

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha: 8-Julio-2011

Fecha: 8 Julio 2011

Fecha: 8 de Julio 2011

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 7 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

CAMBIO
Se elimina la seccin de
cuantificacin de clulas tallo (CD
34+) por citometra, ya que esto
se describe en otro procedimiento
(CAL-66 Citometra).
Se agrega el diagrama de flujo de
este procedimiento.
Se agregan lineamientos
incluyendo las caractersticas del
producto conforme de Afresis.

CAL-02-B

REVISIN

FECHA

08-07/11

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 8 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

El donador/paciente acude a su cita se registra en el rea de recepcin presentando su identificacin con fotografa y vigente, si
es menor de edad acude con el padre o tutor y se identifica el formato M-3-0-23 con la leyenda CLULAS TALLO)
La enfermera toma del Kanban de recepcin la ficha de identificacin y llama al donador para toma de signos vitales,
somatometra y toma de muestra de biometra hemtica la cual es procesada por el quco encargado del rea de toma de
muestra.

El mdico toma del Kanban de recepcin la ficha de identificacin con resultado de la biometra hemtica y realiza la historia
clnica (Ver procedimiento CAL-40). Lo ingresa a la sala de Afresis y solicita el nmero de unidad y las etiquetas
correspondientes (Ver procedimiento CAL-20) pegando una etiqueta en la hoja de identificacin y se procede a realizar la
recoleccinm de clulas tallo.
Se procede a instalacin y purgado de equipo (cebado) (Ver manual del operador del separador en uso) e inicia el proceso de
recoleccin de clulas tallo conectando el equipo desechable instalado en el separador al catter deldonado/paciente con
tcnica estril*, registrando la informacin en la hoja de control de procedimientos de afresis Bitcora CAL50-A.
Se administra gluconato de calcio y solucin salina (1gr./10 Kg) en infusin continua en la lnea de retorno como profilaxis para
prevenir la toxicidad por citrato.
Al terminar el proceso de recoleccin de clulas tallo se toman signos Vitales y se desconecta el equipo desechable
de las lneas del cateter, se cierran las lneas del mismo dejndose heparinizados.( con tcnica estril).

Se le proporciona un refrigerio y al terminar se enva al servicio de trasplantes para seguir indicaciones y se

programa para una segunda recoleccin al da siguiente (solo en caso de no haberse obtenido la dosis teraputica).

Al terminar de retirar el equipo la enfermera identifica las unidades del producto obtenidas (2 bolsas),
la ficha de identificacin. Una de las etiquetas se pegan en la Bitcora CAL -50-a de la hoja que
corresponde al procedimiento que se lleva a cabo
NOTA: La identificacin de las bolsas es provisional hasta la identificacin final en Serologa . (Ver
CAL- 32 )
Se anota en cada una de las bolsas el nmero de Aferesis (obtenido de la bitacora CAL-50-A), y el
volmen.
La enfermera lleva las bolsas del producto al rea de Inmuno -Hematologa receptores. Se colocan
en el refrigerador correspondiente y se avisa al personal del rea .
Se entrega al rea de Serologa la Historia clinica , la ficha de identificacin, el taln de
autoexclusin, los resultados de la biometra PRE.
Al terminar el procedimiento la enfermera registra la informacin en el sistema informtico de banco
de sangre .

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 9 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

1.-PROPOSITO:
Obtener clulas progenitoras de sangre perifrica de donadores alognicos o
autlogos en cantidades teraputicas que garanticen el injerto satisfactorio de las
mismas en los pacientes que lo reciban.

2.-ALCANCE:
Desde la aceptacin del paciente en protocolo de Trasplante de clulas progenitoras
hematopoyticas de sangre perifrica (TCPH-SP), el estudio/valoracin del donador
alognico o autlogo en el banco de sangre, control de la movilizacin de CPH, hasta la
recoleccin de las CPH por medio de procedimientos de afresis.
PERSONAL INVOLUCRADO Y RESPONSABILIDADES.
- COORDINADOR DEL COMIT DE TRASPLANTE DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS.
Informar a miembros del comit sobre los pacientes aceptados para el protocolo de
trasplante de clulas progenitoras hematopoyticas.
Elaborar solicitudes para estudios a realizar en Banco de Sangre (BS). (Ver
procedimiento de elaboracin de solicitudes de estudios en BS).
Administrar estimulo al donador para movilizacin.
Solicitar unidades de CPH-SP para su infusin.
- JEFE DEL DEPARTAMENTO DE BANCO DE SANGRE.
Enlazar las actividades del BS con la coordinacin del comit de TCPH.
Coordinar actividades relacionadas a la recoleccin en el Banco de sangre.
Solicitar apoyo para la criopreservacin de las CPH-SP si no se dispone del recurso en
el BS.
- COORDINADOR (A) DE LA UNIDAD DE AFERESIS.
Informar y orientar al familiar, sobre el proceso de recoleccin de CPH-SP y
apoyo transfusional peri trasplante
Recoger, verificar los resultados de los estudios realizados e informar al jefe del
departamento, al coordinador del comit de TMO sobre los resultados de los estudios
realizados en BS.
Programar los procedimientos de recoleccin de CPH-SP
Supervisar los procedimientos de recoleccin de CPH-SP.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 10 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

Informar a la jefatura de BS y a la Coordinacin del comit de TCPH sobre cualquier

eventualidad de los procedimientos.
Coordinar con el laboratorio de BS la existencia de componentes sanguneos dirigidos
para los pacientes en caso de utilizarse durante el procedimiento de
recoleccin.
JEFE DEL LABORATORIO DEL BANCO DE SANGRE.
Coordinar la realizacin de los estudios de los donadores y/o pacientes en protocolo de
TCPH.
Proporcionar de manera oportuna, a la coordinacin de afresis los resultados de los
estudios de laboratorio realizados a los donadores, pacientes en protocolo de TCPH.
Coordinar la realizacin del control de la movilizacin en sangre perifrica de los
donadores (BH, cuantificacin de clulas mononucleares (CMN) y/o CD34+)
Coordinar la realizacin del control de calidad a las cosechas de CPH-SP obtenidas en
los procedimientos de recoleccin.
Mantener bajo resguardo las CPH y supervisar la adecuada conservacin de las CPHSP obtenidas.
Proporcionar las unidades de CPH-SP cuando se lo soliciten.
RECEPCION. (Ver CAL-20 Procedimiento de registro a disponentes)
Ingresar datos personales del donador en el sistema e imprimir etiquetas para
identificacin de tubos de muestras de sangre y asignar nmero de unidad.
ENFERMERA.
Valora accesos venosos, somatometra y signos vitales de los candidatos a donadores
de CHP-SP (Ver CAL- 30 valoracin de venas y somatometra).
Realiza procedimiento de recoleccin de clulas (Ver Manual Operativo del separador
celular)
QUIMICO
Procesar muestra de sangre para BH (Ver CAL-16 Uso del equipo automatizado de
Biometra Hemtica) y cuantificacin de CD34.
3.-DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO.
Se realiza en 4 fases que son:
1.- Presentacin de pacientes al programa de Trasplante de medula sea (TMO).
Se realizan reuniones quincenales en donde se comentan los casos (Ver Minutas).
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 11 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

2.- Estudio de donador, donador/paciente en banco de sangre (Ver Cal-25

Procedimiento de grupo sanguneo y anticuerpos y Cal-26 Procedimiento de serologa).
Valoracin en la unidad de afresis.
Se realiza valoracin clnica del donador de acuerdo a edad:
A) Mayores de edad solicita cita a TMS de BS para estudio como donador
habitual.
B) Si es menor de edad llena historia clnica de disponentes de sangre, se toman
signos vitales y somatometra y se valora la utilizacin de concentrado
eritrocitario para el cebado del equipo desechable del separador celular.
Se programa procedimiento de acuerdo a caractersticas especficas de cada donador.
Se proporciona al padre o tutor o al donador la carta de consentimiento bajo
informacin donde se describen las caractersticas del procedimiento: como, donde y
quien lo realiza y quien supervisa, preparacin (movilizacin), duracin y frecuencia,
efectos adversos y posibles complicaciones; y solicita su firma de autorizacin para la
realizacin del mismo. (Ver Carta de consentimiento bajo informacin).
3.- Movilizacin.
Inicia 4 das antes del inicio de la recoleccin con la administracin de citocinas,
quimioterapia, citocinas/quimioterapia y/o radioterapia, segn protocolo de TMO.
El donador o paciente/donador acude al servicio de oncologa para la administracin
del estimulo cada 24 h incluyendo los das de recoleccin de CPH-SP.
Simultaneo a la administracin del estimulo, se toma una muestra de sangre en tubo de
BH para el control de la movilizacin, de acuerdo a el incremento de la formula blanca
(leucocitos totales, % y total de CMN).y se enva al BS el tubo con la muestra de
sangre para el conteo de clulas CD34+.
4.- Recoleccin de clulas hematopoyticas progenitoras de sangre perifrica.
El donador acude al BS al 4 5 da del inicio de la movilizacin, presenta la solicitud
de BH y CD34+.
La recepcionista ingresa la informacin en el sistema, le proporciona la hoja ficha de
identificacin de donador (M-3-0-23) la cual ha identificado con la leyenda clulas tallo,
y solicita la firme el donador o el padre /tutor.
La recepcionista solicita al familiar o al donador se anote en la Bitcora de
Disponentes Atendidos (CAL-46-B), y pase a la sala de espera.
La enfermera toma la hoja de identificacin del Kanban ubicado en la zona de
recepcin. Lo llama para tomar signos vitales. Nota: Si no tenemos resultado de
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 12 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

biometra hemtica y cuenta de CD34 previas, se tomarn en ese momento las

muestras correspondientes.
Pide al donador o al familiar que lleve al menor de edad que acudan a tomar un
desayuno ligero.
El qumico procesa la citometra hemtica y entrega el resultado a la enfermera y/o
mdico y posteriormente se realiza la cuantificacin de clulas CD34+.
El mdico encargado del procedimiento valora los resultados de la biometra hemtica
y de la cuantificacin de CD34+ si se tienen disponibles del da anterior y decide la
realizacin o no del procedimiento de acuerdo a lo programado de acuerdo a las
caractersticas clnicas del donador valoradas previamente.
La enfermera procede instalar el equipo desechable en el separador celular segn las
instrucciones del Manual del operador.
El mdico supervisa permanentemente el procedimiento, las condiciones clnicas del
paciente y da instrucciones si se presentan problemas tcnicos y/o clnicos
relacionados con el paciente.
Nota: La coneccin y desconeccin de las lneas del catter al equipo desechable
deber realzarse utilizando tcnicas de asepsia y antisepsia y se tomarn las muestras
pre y post procedimiento necesarias para el control del mismo (biometra hemtica,
hemocultivo, tiempos de coagulacin, etc.).
Al finalizar el procedimiento la enfermera o el mdico solicita al rea de recepcin las
etiquetas de identificacin de unidades y documentacin, y las pega en las bolsas de
recoleccin de CPH, plasma, bitcora, historia clnica y hoja de identificacin.
La enfermera entrega el o los productos obtenidos al rea de inmunohematologa para
su almacenamiento hasta que se soliciten para su infusin.
LINEAMIENTOS O POLTICAS:
1.- La informacin adicional que se anexa a la hoja de identificacin del donador no
deber eliminarse (desprenderse o borrarse).
2.- La obtencin de componentes celulares por mtodos de afresis debern tener
como propsito cubrir la deficiencia especfica de dicho componente en un paciente.
3.- Los procedimientos de afresis para la obtencin clulas progenitoras
hematopoyticas deber estar justificada por una solicitud de interconsulta del servicio
y el mdico del servicio responsable del tratamiento del paciente.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 13 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

4.- Los donadores de clulas hematopoyticas obtenidas por afresis debern cubrir
los requisitos normativos:
Accesos venosos adecuados (preferentemente catter venoso central)
Estudios de inmunohematologa (grupo ABO, Rh), antgenos eritrocitarios, aglutininas
en caso especficos (incompatibiloidad mayor)
Estudios de serologa del donador: VIH, HB, AgsHB, Brucella, Chagas, CMV IgM.
Consentimiento informado.
Control de movilizacin con biometra hemtica y/o cuantificacin de clulas CD34+.
Clulas progenitoras
50 mL

2x106/kg de peso de receptor de

clulas CD34+ Hematopoyticas
(Alognico)
1.5x106/Kg de peso receptor de clulas
CD34+
(Autlogo)

Para el producto final:

Integridad de los contenedores.
Identificacin de la unidad con: Nombre del donador
Nmero de unidad/Nmero de afresis.
Fecha de obtencin.
Tipo de componente.
Volumen.

5.- El producto final que no cumpla con los criterios de conformidad deber ser
evaluado conjuntamente con el personal mdico y de laboratorio de banco de sangre y
el coordinador de trasplantes, en base a los siguientes criterios:
Cuando la dosis no sea la ptima se considerara la posibilidad de la realizacin
de otro procedimiento para poder alcanzar la dosis sumando la dosis anterior.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 14 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

DESCRIPCIN DEL LLENADO DE LA BITCORA CAL-50-A (Control de

procedimientos de Afresis)
Una vez firmada la carta de consentimiento bajo informacin ya sea para disposicin
Alognica o Autloga (Ver Anexo 1 y Anexo 2) se procede a realizar la recoleccin de
clulas progenitoras hematopoyticas de sangre perifrica.
Registrndose la informacin en la bitcora CAL 50 A (Control de procedimientos de
afresis), que contiene la siguiente informacin:

HOJA DE CONTROL DE PROCEDIMIENTOS DE AFRESIS

M-3-4-06 a
No. De Afresis: Con la letra A para identificar que es procedimiento de afresis, el
nmero consecutivo del procedimiento, se inicia el No. 1 con el primer procedimiento
del ao y finaliza el 31 de diciembre, y el ao en curso.
No. De Unidad: Asignado por el sistema informtico de banco de sangre en forma
consecutiva.
Procedimiento: Segn el componente(s) que se va(n) a obtener.
Fecha:
Da, mes y ao en que se realiza la recoleccin.
Equipo:
Elegir las opciones (Abierto o Cerrado).
Flujo:
Establecer si es continuo o discontinuo
Mquina:
Se refiere al separador que se utiliza.
Cmaras:
NA (No aplica)
I. DATOS DEL RECEPTOR.
Nombre: Apellido paterno, apellido materno y nombre (s)
Registro: No. de registro otorgado por el INP
Cama: En caso de que el paciente se encuentre hospitalizado, se anotar el nmero
de cama correspondiente.
Grupo sanguneo: Se anotar solo si se tiene disponible.
Edad: En aos
Sexo: Se refiere a gnero femenino masculino.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 15 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

II. DATOS DEL DONADOR

Nombre: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del donador.
Edad: # de aos que tiene el donador al momento de realizar el procedimiento.
Grupo sanguneo: Tipo de sangre del donador
Parentesco: Relacin que existe entre el paciente y el donador (Amistad, familiar, etc).
Peso: En kilogramos.
SEROLOGIA: Se refiere a los resultados de los siguientes exmenes:
- H.I.V.
- H.C.V.
- AgS HB
- R.P.R.
- BRUCELLA
- OTROS
Nombre y firma del qumico que realiz las pruebas: El qumico anota su nombre y
firma.
III. DATOS DEL PROCEDIMIENTO
Hora de inicio: Hora en que se inicio el procedimiento.
Hora de terminacin: Hora en que se finaliz el procedimiento.
Nombre y Firma de la enfermera que realiza el procedimiento
Otros datos que se registran en la bitcora CAL-50-A anotados por la enfermera
durante el procedimiento:
VELOCIDAD DE VELOCIDAD DE
SANGRE(ml/min)
PLASMA
TIEMPO **
*
(ml/min)*

VOLUMEN
DE
SANGRE (ml) *

VOLUMEN
DE
PLASMA (ml)*

SIGNOS VITALES
Y OBSERVACIONES ***
ACD (ml)**
PRE

CAL-02-B

TRANS

POST

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 16 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

*. Obtenidos directamente de la mquina.

**. Al momento de llenar el registro.
***. Se registran antes, durante y despus del procedimiento.
Volumen procesado de sangre: Cantidad de sangre que se proceso al finalizar el
procedimiento, obteniendo este dato directamente de la mquina.
Anticoagulante: Cantidad de anticoagulante que se utilizo durante el procedimiento.
Solucin salina: Cantidad de solucin salina que se utilizo durante el procedimiento

IV. RESULTADOS
Volumen de la cosecha:

Dato que es obtenido por la enfermera al

pesar cada bolsa que contiene el producto y
restarle el peso de la bolsa vaca (40 ml)

C.P. Estimados:

El clculo que se realiza para programar la

plaquetafresis.

DATOS DE BIOMETRIA
HEMATICA

MUESTRA PRE MUESTRA POST

MUESTRA DE LA COSECHA

COSECHA FINAL

PLAQUETAS
LINFOCITOS
GRANULOCITOS
HEMATOCRITO
OTROS

Nombre y firma del mdico que supervis el procedimiento: El mdico anota su nombre
y firma.
M-3-4-06 b
Reacciones adversas durante el procedimiento: (RAP)
Present RAP: Se anota afirmativa o negativamente
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 17 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

Tipo de RAP: Se anota el tipo de reaccin presentada.

Medidas Tomadas: Se anota el manejo que se dio a la reaccin.
Observaciones: Se anota algn comentario adicional si es que existiera.
Fallas tcnicas durante el procedimiento: (FTP)
Tipo de falla: Se anota las caractersticas de la falla tcnica que hubo durante el
procedimiento.
Medidas tomadas: Se anotas las acciones tomadas para tratar de resolver la falla.
Observaciones: Se anota algn comentario adicional si es que existiera.
ESPACIO LIBRE PARA ADHERIR ETIQUETA DEL EQUIPO.
ANEXO 1: CARTA DE CONSENTIMIENTO BAJO INFORMACION (Autlogo)
INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRA
DEPARTAMENTO BANCO DE SANGRE
PROGRAMA DE RECOLECCIN DE CELULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYETICAS
(Autlogo)
CARTA DE CONSENTIMIENTO BAJO INFORMACION.
Mxico, D.F A da

mes ao-

Yo NOMBRE DEL PADRE O TUTOR acepto que mi hijo (a) NOMBRE Y APELLIDOS
DEL PACIENTE de edad en aos y meses de edad, con nmero de registro ---------done clulas hematopoyticas progenitoras obtenidas de sangre perifrica a travs del
mtodo de afresis, para que le sean transfundidas, ya que se encuentra en el
protocolo de trasplante de clulas hematopoyticas progenitoras y quin tiene el
diagnstico -------------------------------------------------. Se me explic que el procedimiento
de afresis consiste en la extraccin de sangre del organismo a travs de un equipo
plstico, desechable y de uso nico. Inmediatamente al salir la sangre del organismo
es mezclada con un anticoagulante con la finalidad de que no se coagule. Por medio
de un equipo de centrifugacin integrado a la mquina que separar de la sangre las
clulas hematopoyticas progenitoras con una pequea cantidad de sangre y plasma
que le sirve para su conservacin, el resto de la sangre ya mezclada con el
anticoagulante es retornada a su organismo.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 18 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

Todo esto requiere que antes del procedimiento haya cubierto varios requisitos que
son:
a) Acudir a una valoracin de su estado de salud actual, realizada por el mdico
tratante, y los servicios interconsultados por el mismo, incluyendo banco de sangre
En
el
banco
de
sangre
le
realizaran:
estudios para conocer su grupo sanguneo ABO Y Rh, antgenos eritrocitarios, y todas
las pruebas que se consideren necesarias para evitar o disminuir posibles
complicaciones inmunohematolgicas como consecuencia de transfusiones previas y/o
secundarias al trasplante.
b) Pruebas para la deteccin de infecciones que puedan trasmitirse por medio de
la sangre, y que de estar presente en su organismo de manera latente puedan
reactivarse como consecuencia de la baja de defensas que presentar durante el
trasplante y que garanticen su seguridad, la del personal que trabaja con su sangre y
de la persona (s) que se encuentra (n) atendindola(o).
c) Valoracin de sus signos vitales.
La aplicacin de un medicamento (factor estimulante de colonias) durante 4-6 das
previos a la realizacin del procedimiento para la obtencin de las clulas
hematopoyticas progenitoras, con el propsito de movilizarlas de la medula sea
hacia la periferia y puedan ser separadas de esta mediante el procedimiento en
cantidad suficiente para alcanzar la cantidad necesaria (dosis teraputica).
Puede presentar efectos adversos a la administracin del medicamento (factor
estimulante de colonias) como seria: dolor seo (huesos), escalofros, elevacin leve
de la temperatura corporal (menor de 38 grados C) dolor de cabeza (cefalea) los cuales
son leves y ceden generalmente con la administracin de medicamentos que calmen
el dolor o controlen la fiebre, si a pesar de estos persisten las molestias, se considerara
la suspensin del procedimiento.
d) Toma de muestras para la realizacin de estudios de laboratorio (biometra
hemtica) que se consideren necesarios para valoracin de la respuesta a la
aplicacin del que sirvi para movilizar las clulas.
Pueden ser necesarios 2 o
ms procedimientos de recoleccin de clulas
hematopoyticas para alcanzar la dosis que m paciente requiera.
Se me inform tambin que:
- El procedimiento ser realizado por una enfermera especialista en el manejo de la
mquina y por un mdico que supervisar la realizacin del mismo. Para asegurar una
buena tolerancia del procedimiento tomarn constantemente sus signos vitales:
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 19 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

frecuencia cardiaca, frecuencia respiratoria, tensin arterial, temperatura y llevaran un

registro de la
Cantidad de sangre procesada, la cantidad de anticoagulante administrado y el tiempo
en que se realiza.
Puede presentar efectos adversos como son: dolor y/o moretones al momento o
despus de las punciones y en el sitio de las mismas, por efecto del anticoagulante
las molestias pueden ser: adormecimiento de los labios u hormigueo en diferentes
partes del cuerpo, ocasionalmente mareos, vmito, mismas que sern atendidas de
manera inmediata por el mdico supervisor del Banco de sangre, quin dar las
instrucciones pertinentes para corregir estos efectos o suspender el procedimiento si
considera conveniente por ser de riesgo para el paciente continuarlo.
Existe el riesgo excepcional de que la mquina deje de funcionar por una falla de la
corriente elctrica, esto no condiciona riesgo ya que el equipo cuenta con dispositivos
de seguridad para estas situaciones y que son implementadas por el personal al cargo
de las mismas.
Existe un riesgo mnimo (1:10,000) de muerte secundaria al procedimiento.
Se me recomend que despus del procedimiento debo mantener a mi paciente en
reposo relativo y no realizar actividades intensas.
He recibido informacin amplia sobre el procedimiento de donacin de clulas
hematopoyticas progenitoras de sangre perifrica, con respuesta a todas mis
preguntas y estoy satisfecho(a) con la explicacin. Por ello acepto que mi hija(o) done
las clulas hematopoyticas progenitoras por el mtodo de afresis, enterado de los
beneficios y de los riesgos de la realizacin de este procedimiento, liberando de toda
responsabilidad al personal mdico y paramdico del Banco de Sangre.
ATENTAMENTE
Nombre Madre o tutor del paciente) -----------------------------------

Firma___________________

Coordinador (a) de Afresis---------------------------------------------Firma_____________________

Responsable del Banco de Sangre------------------------------------------

Firma____________________

Testigo--------------------------------------------------------------------------Firma___________________
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 20 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

ANEXO 2: CARTA DE CONSENTIMIENTO BAJO INFORMACION (Alognico)

INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRA
DEPARTAMENTO BANCO DE SANGRE
PROGRAMA DE RECOLECCIN DE CELULAS HEMATOPOYETICAS
PROGENITORAS.
Alognico
CARTA DE CONSENTIMIENTO BAJO INFORMACION.
Mxico, D.F A da de mes de ao
Yo NOMBRE DEL DONADOR (A) acepto donar clulas hematopoyticas progenitoras
obtenidas de sangre perifrica para que mi parentesco NOMBRE Y APELLIDOS DEL
PACIENTE de 1edad en ao y meses, (del paciente) con nmero de registro ------(del paciente) a travs del mtodo de afresis, para que le sean transfundidas, ya que
se encuentra en el protocolo de trasplante de clulas hematopoyticas progenitoras y
quin tiene el diagnstico de diagnostico del paciente.
Se me explic que el procedimiento de afresis consiste en la extraccin de sangre del
organismo a travs de un equipo plstico, desechable y de uso nico. Inmediatamente
al salir la sangre del organismo es mezclada con un anticoagulante con la finalidad de
que no se coagule. Por medio de un equipo de centrifugacin integrado a la mquina
que separar de la sangre las clulas hematopoyticas progenitoras con una pequea
cantidad de sangre y plasma que le sirve para su conservacin, el resto de la sangre ya
mezclada con el anticoagulante es retornada a mi organismo.
Todo esto requiere que antes del procedimiento haya cubierto varios requisitos que
son:
Acudir a una valoracin de mi estado de salud actual, realizada por el mdico tratante,
y los servicios interconsultados por el mismo, incluyendo banco de sangre
En
el
banco
de
sangre
me
realizaron:
a) estudios para conocer mi grupo sanguneo ABO Y Rh, antgenos eritrocitarios, y
todas las pruebas que se consideren necesarias para evitar o disminuir posibles
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 21 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

complicaciones inmunohematolgicas como consecuencia de transfusiones previas y/o

secundarias al trasplante.
b) Pruebas para la deteccin de infecciones que puedan trasmitirse por medio de la
sangre, y que de estar presente en mi organismo de manera latente puedan reactivarse
como consecuencia de la baja de defensas que presentar durante el trasplante y que
garanticen su seguridad, la del personal que trabaja con su sangre y de la persona (s)
que se encuentra (n) atendindola(o).
Valoracin de sus signos vitales.
La aplicacin de un medicamento (factor estimulante de colonias) durante 4-6 das
previos a la realizacin del procedimiento para la obtencin de las clulas
hematopoyticas progenitoras, con el propsito de movilizarlas de la medula sea
hacia la periferia y puedan ser separadas de esta mediante el procedimiento en
cantidad suficiente para alcanzar la cantidad necesaria (dosis teraputica).
Puede presentar efectos adversos a la administracin del medicamento como seria:
dolor seo (huesos), escalofros, elevacin leve de la temperatura corporal (menor de
38 grados C) dolor de cabeza (cefalea) los cuales son leves y ceden generalmente con
la administracin de medicamentos que calmen el dolor o controlen la fiebre, si a pesar
de estos persisten las molestias, se considerara la suspensin del procedimiento.
- Toma de muestras para la realizacin de estudios de laboratorio (biometra hemtica)
que se consideren necesarios para valoracin de la respuesta a la aplicacin del que
sirvi para movilizar las clulas.
Pueden ser necesarios 2 o
ms procedimientos de recoleccin de clulas
hematopoyticas para alcanzar la dosis que el paciente requiere.
Se me inform tambin que:
- El procedimiento ser supervisado por una enfermera especialista en el manejo de la
mquina y por un mdico que supervisar la realizacin del mismo. Para asegurar una
buena tolerancia del procedimiento tomarn constantemente mis signos vitales:
frecuencia cardiaca, frecuencia respiratoria, tensin arterial, temperatura y llevaran un
registro de la cantidad de sangre procesada, la cantidad de anticoagulante
administrado y el tiempo en que se realiza.
Puedo presentar efectos adversos como son: dolor y/o moretones al momento o
despus de las punciones y en el sitio de las mismas, por efecto del anticoagulante
las molestias pueden ser: adormecimiento de los labios u hormigueo en diferentes
partes del cuerpo, ocasionalmente mareos, vmito, mismas que sern atendidas de
manera inmediata por el mdico supervisor de Banco de Sangre, quien dar las
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 22 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

instrucciones pertinentes para corregir estos efectos o suspender el procedimiento si

considera conveniente por ser de riesgo para el paciente continuarlo.

Existe el riesgo excepcional de que la mquina deje de funcionar por una falla de la
corriente elctrica, esto no condiciona riesgo ya que el equipo cuenta con dispositivos
de seguridad para estas situaciones y que son implementadas por el personal al cargo
de las mismas.
Existe un riesgo mnimo (1:10,000) de muerte secundaria al procedimiento.
Se me recomend que despus del procedimiento debo mantenerme en reposo relativo
y no realizar actividades intensas.
He recibido informacin amplia sobre el procedimiento de donacin de clulas
hematopoyticas progenitoras de sangre perifrica, con respuesta a todas mis
preguntas y estoy satisfecho(a) con la explicacin. Por ello acepto donar las clulas
hematopoyticas progenitoras por el mtodo de afresis, enterado de los beneficios y
de los riesgos de la realizacin de este procedimiento, liberando de toda
responsabilidad al personal mdico y paramdico del Banco de Sangre.

ATENTAMENTE

Nombre Madre o tutor del paciente) -----------------------------------

Firma___________________

Coordinador (a) de Afresis---------------------------------------------Firma_____________________

Responsable del Banco de Sangre------------------------------------------

Firma____________________

Testigo--------------------------------------------------------------------------Firma___________________

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-52
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 08-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 23 de 18

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIN DE CLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYTICAS DE SANGRE PERIFRICA

REGISTROS

Bitcora de Afresis CAL-50-A

Bitcora de Cita de Afresis CAL-50-B
El CAL-50 A y las Historias clnicas se almacenan durante 5 aos en archivo activo y 5
aos en archivo muerto.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-55
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 24 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica de Coombs Directo

Elaborado por:
Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:
Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-55
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 25 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica de Coombs Directo

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

NINGUNO

00

3-mayo-2004

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-55
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 26 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica de Coombs Directo

DESCRIPCION DEL PROCESO

El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatra lleva a cabo estudios especiales
como el de Coombs Directo
COOMBS DIRECTO
TCNICA DIANAGEL D.C. Scan

Este procedimiento se realiza cuando el Mdico lo solicita por medio del

formato A-13-14-07 sealando el Coombs Directo, o cuando el Mdico del
banco de sangre o el personal mismo lo considera adecuado por el
dignstico del paciente.

Se realiza la centrifugacin del tubo que contiene la muestra del paciente

para separar el Paquete eritrocitario. Se recomienda lavarlo una vez.

Preparar una suspensin de hemates al 1 % (1 mililitro de Diana Sol 2 ms 10

microlitros del paquete eritrocitario).
De esta suspensin de eritrocitos se agregan 50 microlitros a cada uno de los
pozos de la tarjeta, que deber estar previamente identificada con los datos del
paciente.
Centrifugar en la centrfuga Dianafuge.
Leer e interpretar los resultados.

NEGATIVO
Registrar resultado en el
Formato A-13-14-07, y en
Bitcora CAL-31-B de
CAL-02-B
Estudios Especiales

POSITIVO
Identificar si es por complemento o
por una IgG. Se requiere titularlo
para poder reportarlo en el
Formato A-13-14-07 y en la libreta
de Estudios Especiales

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-55
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 27 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica de Coombs Directo

REGISTROS
FORMATO.- A-13-14-07

Bitcora.- CAL-31-B.-De Estudios Especiales

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-56
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 28 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica de Coombs Directo

Elaborado por:
Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:
Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-56
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 29 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica de Coombs Directo

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

NINGUNO

00

3-mayo-2004

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-56
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 30 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica de Coombs Directo

DESCRIPCION DEL PROCESO

El Laboratorio del Banco de Sangre lleva a cabo un protocolo especial para la tcnica
de Coombs en Neonatos.
Determinacin de antgenos del sistema ABO, Rh y prueba de Coombs Directo
en recin nacidos con el DianaGel Neonatal 2D.

Este procedimiento se realiza cuando el Mdico lo solicita por medio del

formato A-13-14-07 sealando el Coombs Directo, o cuando el Mdico del
banco de sangre o el personal mismo lo considera adecuado por el diagnostico
del paciente.
Se realiza la centrifugacin del tubo que contiene la muestra del paciente para
separar el Paquete eritrocitario. Se recomienda lavarlo una vez.

Preparar una suspensin de hemates al 1 % (1 mililitro de Diana Sol 2 ms 10

microlitros del paquete eritrocitario).
De esta suspensin de eritrocitos se agregan 50 microlitros a cada uno de los
pozos de la tarjeta, que deber estar previamente identificada con los datos del
paciente.
Centrifugar en la centrfuga Dianafuge.
Leer e interpretar los resultados.

NEGATIVO
Registrar resultado en la
Formato A-13-14-07, y
Bitcora CAL-56-A de
Estudios Especiales
CAL-02-B

POSITIVO
Identificar si es por complemento o por una
IgG. Se requiere titularlo, y realizar un
eluido para identificar el posible anticuerpo
pegado a los eritrocitos y as poderlo
reportaren el formato A-13-14-07 y en la
libreta de Estudios Especiales

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-56
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 31 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica de Coombs Directo

REGISTROS
FORMATO A-13-14-07
Bitcora CAL-56-A.- De Estudios Especiales

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-57
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 10-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 32 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica para
Anemia Hemoltica en el Recin Nacido

Elaborado por:
Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:
Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-57
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 10-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 33 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica para
Anemia Hemoltica en el Recin Nacido

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

NINGUNO

00

10-mayo-2004

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-57
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 10-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 34 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica para
Anemia Hemoltica en el Recin Nacido

DESCRIPCION DEL PROCESO

ENFERMEDAD HEMOLITICA DEL RECIEN NACIDO (EHRN)
La EHRN es un proceso inmunolgico que afecta al feto y al recin nacido, y se
caracteriza por un cuadro de anemia hemoltica inmune debido a la incompatibilidad
entre el grupo sanguneo de la madre y el de su descendiente.
Clasificacin de la EHRN segn la causa desencadenante:
1. EHRN debido a sensibilizacin a otros antgenos del sistema Rh-Hr: D, C, E, c, e.
2. EHRN por incompatibilidad con el sistema ABO.
3. EHRN causada por la sensibilizacin a otros antgenos: Kell, Duffy, Kidd, Diego, etc.

ENFERMEDAD HEMOLTICA DEL RECIEN NACIDO

EXAMENES DE LABORATORIO DEL BANCO DE SANGRE PARA SU
DETERMINACIN
RECIEN NACIDO (RN)
Determinacin del Sistema ABO y Rh-Hr
(fenotipos completos del sistema).
Coombs Directo (CD)

RN: grupo A, B, AB y Rh positivo.

CD positivo o negativo.
Madre: O positivo, RAI negativo.
Probable incompatibilidad por Sistema ABO

Titular el CD del RN si es positivo.

Realizar un eluido para Sistema ABO.

CAL-02-B

MADRE
Determinacin del Sistema ABO y Rh-Hr
(fenotipos completos del sistema).
Rastreo de Anticuerpos Irregulares (RAI)

RN: grupo A, B, AB, O, y Rh positivo

CD positivo o negativo.
Madre: O negativo, RAI positivo o negativo.
Probable incompatibilidad por sistema Rh-Hr

Titular el CD del nio si es positivo.

Realizar un eluido para Ac irregulares
fuera de Sistema ABO.

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-57
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 10-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 35 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica para
Anemia Hemoltica en el Recin Nacido

En caso de que se requiera exanguinotransfusin el RN seleccionar la sangre

de acuerdo con la tabla CAL-57-A

REGISTROS
No existen registros

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-58
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 24-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 36 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica de Prueba Rpida
para Coombs Directo

Elaborado por:
Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:
Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-58
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 24-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 37 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica de Prueba Rpida
para Coombs Directo

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

NINGUNO

00

24-mayo-2004

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-58
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 24-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 38 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica de Prueba Rpida
para Coombs Directo

DESCRIPCION DEL PROCESO

El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatra lleva a cabo pruebas rpidas en
tubo para Coombs Directo, la cual est indicada en:
a. Todos los mcasos de anemia o enfermedad hemoltica del recin nacido.
b. Estudios de la sangre de pacientes con anemia hemoltica.
c. Reacciones hemolticas transfusionales.
PRUEBA RPIDA EN TUBO
La muestra de los eritrocitos del paciente en estudio, deber obtenerse en un tubo
de Biometra Hemtica

Se centrifuga la muestra y se separan los eritrocitos.

En un tubo de ensayo se vierten aproximadamente 0.5 ml de eritrocitos, o una
cantidad menor, dependiendo del tamao de la muestra; se lavan 3 veces con
solucin salina fisiolgica. Un minuto a 3000 rpm.
Despus de cada lavada se retira con cuidado la solucin salina fisiolgica.

Se prepara una suspensin aproximadamente al 2% en salina fisiolgica de los

eritrocitos lavados.

En un tubo de ensayo se coloca una gota de suero Anti- Humano (Coombs),

poliespecfico (IgG-C3d), y se le aade una gota de la suspensin al 2% de las
clulas lavadas

Centrifugar durante 20 segundos a 3000 rpm (velocidad mxima de una Sero- Fuge).

Agitar el tubo suavemente para suspender el concentrado de eritrocitos y

observar perfectamente si hay presencia de aglutinacin.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-58
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 24-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 39 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica de Prueba Rpida
para Coombs Directo

Una prueba negativa se reconocer por la suspensin homognea de todas las

clulas.
Una prueba positiva mostrar eritrocitos aglutinados visibles macroscpicamente.

Registrar resultados en el
Formato A-13-14-07, (ver forma de
llenado en proc. CAL-42) Y
Bitcora CAL-31-A de Estudios
Especiales (Ver forma de llenado
en el procedimiento CAL-31)

REGISTROS
Formato A-13-14-07.- Se almacena en el Banco de Sangre 5 aos en archivo activo y 5
aos en archivo muerto.
Bitcora CAL-31-A.- Se almacena en el Banco de Sangre 5 aos en archivo activo y 5
aos en archivo muerto.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-59
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 18-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 40 de 3

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica DE Elucin por Calentamiento

Elaborado por:
Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:
Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-59
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 18-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 41 de 3

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica de Elucin por Calentamiento

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

NINGUNO

00

18-mayo-2004

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-59
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 18-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 42 de 3

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Tcnica de Elucin por Calentamiento

DESCRIPCION DEL PROCESO

El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatra lleva a cabo la tcnica de
ELUCIN POR CALENTAMIENTO (Landsteiner y Miller)
1. Lavar el volumen de clulas con un exceso de salina por 6 veces. Despus del
ltimo lavado, conservar una alcuota de salina para investigar anticuerpos
libres. Si persisten, significa que los lavados no han sido suficientes y deben
practicarse lavados adicionales hasta que el residuo de salina no muestre
anticuerpos.
2. Despus del ltimo lavado, empaquetar bien las clulas y agregarle igual
volumen de albmina bovina al 6%. La cual se prepara mezclando 2 ml de
albmina al 30% para 8 ml de salina, o 3 ml de albmina al 22% para 8 ml de
salina. Mezclar bien.

3. Llevar al bao Mara a 56C durante 10 minutos, mezclando peridicamente.

4. Centrifugar a altas velocidades por 5 minutos.

5. Separar el sobrante rosado en un tubo aparte e identificado adecuadamente.

Este mtodo ofrece buenos resultados para eluir anticuerpos anti A y anti B,
pero no es recomendable para otros anticuerpos.
Registrar el resultado en el
Formato A-13-14-07, Ver forma de llenado
en proc. CAL-42) y Bitcora CAL-31-A de
Estudios Especiales (Ver forma de llenado
en el procedimiento, CAL-31)
REGISTROS
Formato A-13-14-07.- Se almacena en el Banco de Sangre 5 aos en archivo activo y 5
aos en archivo muerto.
Bitcora CAL-31-A.- Se almacena en el Banco de Sangre 5 aos en archivo activo y 5
aos en archivo muerto.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-60
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 25-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 43 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Prueba de Coombs Directo
para Titular Eritrocitos Problema Positivos.

Elaborado por:
Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:
Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-60
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 25-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 44 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Prueba de Coombs Directo
para Titular Eritrocitos Problema Positivos.

CAL-02-B

CAMBIO

REVISIN

FECHA

NINGUNO

00

25-mayo-2004

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-60
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 25-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 45 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Prueba de Coombs Directo
para Titular Eritrocitos Problema Positivos.

DESCRIPCION DEL PROCESO

El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatra lleva a cabo la Prueba de
Coombs para titular eritrocitos problemas positivos.
PRUEBA DE COOMBS DIRECTO PARA TITULAR ERIOTROCITOS PROBLEMA POSITIVOS.

MATERIAL.1. Sangre problema anticoagulada con EDTA (eritrocitos problema)

2. Eritrocitos sensibilizados con IgG (testigo positivo de Coombs)
3. Eritrocitos no sensibilizados (testigo negativo de Coombs)
4. Suero de Coombs poliespecfico IgG-C3d

Preparacin de los eritrocitos.a. Se requieren 3 tubos de 12 X 75 mm, en uno de ellos se coloca 1 gota de eritrocitos problema, en
otro 1 gota de testigo positivo de Coombs, y en el tercero 1 gota de testigo negativo de Coombs.
b. Lvelos con Solucin Salina Fisiolgica (SSF) tres veces, llenando el tubo.
c. Resuspndalos al 2.5% con SSF (25 microlitros de eritrocitos en 1 ml de SSF)

Preparacin de la dilucin del suero de Coombs.1. Numere 4 series de tubos de 10 X 75 mm o de 12 X 75 mm del 1 al 8.

2. La serie 1 se utilizar para hacer la dilucin del Suero de Coombs, en los tubos No 1 y 2, se
colocan 8 gotas de suero de Coombs.
3. A partir del tubo 2 hasta el No 8, coloque 8 gotas de Solucin Salina Fisiolgica.
4. Mezcle el contenido del tubo No 2 y pase 8 gotas al tubo No 3 y as sucesivamente hasta el No 8
donde se descartan 8 gotas.
5. Del tubo No 8 , pasar con una pipeta limpia m2 gotas a los tubos 8 de la serie 2, 8 de la serie 3, 8
de la serie 4.
6. Pase el tubo No. 7, 2 gotas a los tubos 7 de la serie 2, 7 de la serie 3, 7 se la serie 4, y as
sucesivamente hasta los tubos No 1 de la serie 2, 1 de la serie 3, 1 de la serie 4.
7. Con una pipeta limpia se pone una gota de los eritrocitos problema a todos los tubos de la serie 2.
1 gota de eritrocitos sensibilizados a todos los tubos de la serie 3 y una gota de eritrocitos no
sensibilizados a la serie 4.
8. Mezcle cuidadosamente cada serie.
9. Centrifugue todos los tubos a 3000 rpm durante 20 segundos.
10. Lea cuidadosamente cada uno de los tubos, comenzando del tubo No 8 al No 1.
11. Los resultados positivos se reportan en cruces, 4+ para el ms positivo, 1+ para el menos positivo.
12. El ttulo se reporta de acuerdo a la dilucin que resulte ms elevada.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-60
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 25-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 46 de 4

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de la Prueba de Coombs Directo
para Titular Eritrocitos Problema Positivos.

Registrar resultado en el
Formato A-13-14-07, (ver forma de
llenado en proc. CAL-42) y Bitcora
CAL 31-A de Estudios Especiales
(Ver forma de llenado en el
procedimiento CAL-31)

REGISTROS
Formato A-13-14-07.- Se almacena en Banco de Sangre 5 aos en archivo activo y 5
aos en archivo muerto.
Bitcora CAL-31-A.- Se almacena en Banco de Sangre 5 aos en archivo activo y 5
aos en archivo muerto.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-63
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 10 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 47 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para manejo de Condonaciones

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Lic. TS Ana Mara Dorantes

Ceh

Dra. Margarita Leticia

Medina Macas

Dra. Dinora V. Aguilar

Escobar

Firma:

Firma:

Fecha:
10-enero-2012

CAL-02-B

Firma:

Fecha:
10-enero-2012

Fecha:
10-enero-2012

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-63
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 10 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 48 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para manejo de Condonaciones

CAMBIO
Se elimina el inciso 3 de los
requisitos para la condonacin
Se
establece
tiempo
de
resguardo del formato A-14-33A

CAL-02-B

REVISIN

FECHA

01

10-enero-2012

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-63
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 10 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 49 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para manejo de Condonaciones

DESCRIPCIN DEL PROCESO

Dentro del Instituto Nacional de Pediatra se solicitan donaciones de sangre, segn
el manual de procedimientos del Departamento de Trabajo Social (Ver Manual de
Procedimientos de Trabajo Social para la donacin de sangre y procedimiento CAL-11,
del Banco de Sangre) y lleva a cabo la condonacin de sangre para los pacientes que
lo ameriten. Dichas propuestas de condonacin se llevan a cabo en Trabajo Social del
Banco de Sangre y en Trabajo social de Hospitalizacin, y son autorizados por la
Trabajadora Social del Banco de Sangre y por el Jefe del Departamento del Banco de
Sangre o quien este a cargo del departamento.
CONDONACIONES EN EL BANCO DE SANGRE
El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatra lleva a cabo condonaciones
de donacin de sangre cuando la situacin socio-econmica de los pacientes lo amerite
y bajo las siguientes situaciones:
1. Cuando son pacientes que forman parte de algn protocolo de investigacin.
2. Cuando el paciente este bajo proteccin institucional.
3. Por diagnstico conocido del paciente y/o de los padres.
Dicha determinacin se basa en el estudio social del rea de Trabajo Social del
Banco de Sangre y es autorizado por el Jefe del Departamento del Banco de
Sangre.
Si el Jefe del Departamento autoriza la Condonacin de Sangre, La Trabajadora
Social realiza el llenado del Formato de Condonacin A-14-33-A, (ver abajo) y
entrega a los padres la parte correspondiente y se queda en el Banco de Sangre la
parte que registra la condonacin realizada, as mismo se acompaa de una breve
descripcin del motivo de condonacin.
El Formato de Condonacin A-14-33-A, es almacenado por el Banco de Sangre en
el archivo del rea de recepcin.

La Trabajadora Social de Hospitalizacin da indicaciones a los padres del paciente

para que pase a Trabajo Social del Banco de Sangre y entregue el motivo social
para sugerir que se condone la donacin de sangre y/o documento que ampara la
proteccin institucional del paciente.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-63
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 10 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 50 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para manejo de Condonaciones

Notifica al jefe del Departamento de Banco de Sangre y llena el Formato de

Condonacin con clave A-14-33-A, esto con la finalidad de que El Banco de Sangre
lleve un registro y evidencia de las condonaciones que se realizan en el Instituto.
Llenado del Formato de Condonacin A-14-33-A, la Trabajadora Social del Banco
de Sangre, lo pasa a autorizacin con el Jefe del Departamento, o el responsable
del Departamento que se encuentre en ese momento.

FORMATOS RELACIONADOS A ESTE PROCEDIMIENTO

Formato A-14-33-A

INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRA

BANCO DE SANGRE
Nombre del Paciente:________
Reg.___ Servicio:___Cama:____
Se condon Sangre:
1Donacin ( )
2 Donaciones ( )
Motivo:_______________________
____________________________________
A-14-33-A

CAL-02-B

INSTITUTO NACIONAL DE
PEDIATRA
BANCO DE
SANGRE
No
Nombre del
paciente:_______________________
Reg:______ Servicio:______
Cama_______
Se condon sangre:
1Donacin ( )
2
Donaciones ( )
JEFE DEL BANCO DE SANGRE

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-63
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 10 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 51 de 6

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento para manejo de Condonaciones

Forma de Llenar el Formato A-14-33-A

Nombre del
Paciente:
Registro:
Servicio
Cama:
Se condon sangre:
1Donacin ( ) 2
Donaciones ( )
Motivo:

Nombre del paciente para el que se solicita la

donacin
Nmero de expediente que tiene el paciente en el
INP
Servicio para el que le estan solicitando la
donacin sangre
Cama en la que esta hospitalizado nio, o referir
si es externo
Tachar en el espacio correspondiente a la
cantidad de donaciones condonadas
Describir brevemente la razn por la que se
decide condonar la donacin de sangre

REGISTROS

A-14-33-A se almacena en el Banco de Sangre, en el archivo del rea de Recepcin,

durante 5 aos.

ANEXO 1.- MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE TRABAJO SOCIAL, AUTORIZADO

INSTITUCIONALMENTE

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 52 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

Elaborado por:

Revisado por:

Nombre: Pilar Snchez S.

Nombre: Guillermo Escamilla Nombre: Dinora Escobar

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:
02 Enero 2012

Fecha:
02Enero 2012

Fecha:
02 Enero 2012

CAL-02-B

Aprobado por:

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 53 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

CAMBIO

CAMBIO DE EQUIPO COBAS

AMPLICOR A TAQ MAN

CAL-02-B

REVISIN

01

FECHA

02 ENERO 2012

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 54 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

DESCRIPCION DEL PROCESO

Despus de que las muestras de los pacientes que resultaron positivas, al Virus de
Inmunodeficiencia Humana (VIH-1) al Virus de la Hepatitis C, se continuar el seguimiento
clnico con determinaciones de la carga viral de manera peridica solicitndola al Banco de
Sangre.
OBTENCION

DE LA MUESTRA (CAL-76) Y CENTRIFUGACION DE LA MISMA

Campana de Flujo Laminar

OBTENER ALICUOTA DE 550 uL DE PLASMA (de ser posible dos ), IDENTIFICAR Y
GUARDAR EN EL CONGELADOR DE -20 C A -80 C A

Campana de Flujo Laminar

PROCESO DE EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS

Software AMPLINK / Equipo Taq Man

CREACION DE SERIE ANALITICA

Software AMPLINK / Equipo Taq Man

AMPLIFICACION Y DETECCION DE ACIDOS NUCLEICOS

Software AMPLILINK
VALIDACION DE RESULTADOS Y GENERACION DE ARCHIVO (RESPALDO
ELECTRONICO)

IMPRESIN DE RESULTADOS Y DESCARGAR AL SIBS (Sistema Informtico de Banco de

Sangre)

LOS REPORTES IMPRESO GENERADOS SE GUARDAN 5 AOS EN ACTIVO Y 5 AOS

EN ARCHIVO MUERTO
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 55 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

Carga viral del Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH)

La prueba COBAS TaqMan HIV-1, para uso con el sistema de alta pureza (HPS) es una
prueba in vitro de amplificacin del cido nucleico para la determinacin cuantitativa de ARN
del virus de inmunodeficiencia humana de tipo 1 (HIV-1) 1 en plasma humano con EDTA,
utilizando el kit para cido nucleico vrico del sistema de alta pureza para la preparacin
manual de las muestras y el analizador COBAS Taq Man 48 para la deteccin y
amplificacin automtica.
La prueba est indicada para usarse conjuntamente con la presentacin clnica y otros
marcadores analticos de progreso de la enfermedad para el tratamiento clnico de los
pacientes infectados por HIV-1. La prueba puede utilizarse para evaluar la prognosis del
paciente mediante la medicin de la concentracin de referencia (antes de iniciar el
tratamiento) de ARN del HIV-1 o para controlar los efectos de la terapia antirretrovrica
mediante la medicin de los cambios en las concentraciones de ARN del HIV-1 en plasma
en el curso del tratamiento antirretroviral.
La prueba COBAS TaqMan HIV-1 no est indicada para utilizarse para detectar la
presencia de HIV-1 en sangre o hemoderivados ni como prueba diagnstica para confirmar la
existencia de una infeccin por HIV-1.
Utiliza la tecnologa PCR para lograr una sensibilidad mxima y un intervalo dinmico para la
deteccin cuantitativa del ARN del HIV-1 en plasma anticoagulado con EDTA.
La prueba puede cuantificar el ARN del HIV-1 en un intervalo de 47 - 10.000.000 copias/ml.
Una copia de ARN del HIV-1 es equivalente a 1,7 UI basndose en el estndar de la OMS
(Cdigo NIBSC 97/656).
NOTA: Para mayor informacin consulta el inserto

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 56 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

Principios del ensayo

La prueba COBAS TaqMan HIV-1 est basada en tres procesos principales:
1. Preparacin manual de las muestras para obtener el ARN del HIV-1
2. Transcripcin reversa automtica del ARN del objetivo para generar un ADN
complementario (ADNc).
3. Amplificacin simultnea del ADNc del objetivo con iniciadores complementarios
especficos del HIV-1, y la deteccin de sondas de deteccin oligonucletidas marcadas con
dos colorantes fluorescentes que permiten la determinacin cuantitativa del producto
amplificado del objetivo del HIV-1 (amplicn) y del ARN del estndar de cuantificacin del
HIV-1, que se procesa, amplifica y detecta simultneamente con la muestra.( Ver inserto)

Obtencin de la muestra y centrifugacin:

Para la obtencin de la muestra se proceder de acuerdo al procedimiento CAL-76 de
recoleccin y toma de muestras de pacientes.
En este proceso se utilizan nicamente muestras con EDTA.
La sangre obtenida con EDTA se puede almacenar a una temperatura de 2 a 28C hasta 6
hrs. a partir de su obtencin.
Una vez obtenida la muestra se proceder a separar el plasma de los hemates mediante
centrifugacin a 800-1600g por 20 minutos a temperatura ambiente. Separar e identificar el
plasma en tubos de rosca en (uno dos) alcuotas de 550 L y almacenar de -20C a -80C
en caso de no ser usado de inmediato.
Para mayor informacin referirse a la pagina 11 del inserto)

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 57 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS PARA MUESTRAS Y CONTROLES PARA VIH-1

1) Descongelar las muestras.
2) Preparar los siguientes reactivos:.
a) Inhibitor Removal Buffer (IRB)
No Test

IRB
(negro)
(mL)

Etanol
(mL)

12 test

8.25

24 test

16.5

10

48 test

Todo

20

Conservar a 15-25 C
Estabilidad 30 das

Mezclar por inversin (5 a 10 veces)

b) Wash Buffer
No Test

Wash
Buffer
(azul) (mL)

Etanol
(mL)

12 test

20

24 test

10

40

48 test

Todo (20)

80

Conservar a 15-25 C
Estabilidad 30 das

Mezclar por inversin (5 a 10 veces)

c) Elution Buffer (ELB). Incubar a 70C. 75 ul por muestra

CAL-02-B

No Test

ELB (mL)

12 test

24 test

10

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 58 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

d) Isopropanol en tubo Falcon

e) CAR (Blanco)

No Test

Isopropanol
(mL)

12 test

24 test

10

f) PK (Magenta)

Para 24 tests: 0,5 ml ELB en

frasco CAR. Mezclar por
inversin y vortex.

Para 24 tests: 5 ml ELB en frasco

PK. Mezclar por inversin y
vortex.

Conservar a -20C hasta 28 das.

Conservar a -20C hasta 28 das.

3) Vrtex a muestras, controles y QS.

4) Tener Lysis Rack blanco listo con marca orientacin de primera
muestra y N de rack.
5) Preparar la Lysis Binding Working Solution en tubo Falcon agregando los
reactivos en el siguiente orden. Cuando se agrega el QS y PK mezclar
inversin (no vortex).

Reactivo

12 Test

24 Test

7 mL

14 mL

CAR RNA

140 L

280 L

HIV-1 QS

84 L

168 L

PK

1.4 mL

2.8 mL

Lysis Binding

6) Agregar inmediatamente 625 l de la Lysis Binding Working Solution

preparada en cada well del Lysis Rack (blanco).
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 59 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1
7) Agregar 500 l de muestra y controles a sus respectivos wells del
Lysis Rack. Vortex el Rack 10 seg.
8) Incubar el Lysis rack a 50 C 10 minutos en bao de agua (5 cm
altura de agua).
9) Secar el Rack y centrifugar 20 sec a 4600 g.
10) Agregar 350 l de isopropanol a cada well (1 por vez). Mezclar el Rack por inversin y luego vortex 10 seg.
11) Centrifugar 20 sec a 4600 g.
12) Preparar el Filter Tube Rack (amarillo) con su Waste Rack.
Colocar las marcas de orientacin y N de Rack.
13) Transferir 750 l de cada well al well correspondiente del Filter
Tube rack (amarillo) con su Waste Rack ajustado. Tener en cuenta las
marcas de muestras.
14) Centrifugar 2 min a 4600 g.
15) Transferir el remanente de cada well del Lysis rack (blanco ) a su
correspondiente well en el rack amarillo. Descartar el Lysis Rack
blanco.
16) Centrifugar 2 min a 4600 g. Reemplazar el Waste Rack por uno nuevo.
17) Abrir los wells con el gripper. Agregar 400 l del IRB preparado por la pared del well sin tocar la pared.
18) Centrifugar 2 min a 4600 g.
19) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 l de Wash Buffer preparado por la pared del well sin tocar.
20) Centrifugar 2 min a 4600 g. Reemplazar el Waste Rack por uno nuevo.
21) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 l de Wash Buffer por
la pared del well sin tocar.
22) Centrifugar 3 min a 4600 g. Descartar el Waste Rack. Colocar Elution Rack (base azul).

23) Abrir los wells con el gripper. Agregar 75 l de ELB a 70 C a

cada well (en el centro del filtro sin tocarlo).
24) Incubar 3 min a Temp amb.
25) Centrifugar 3 min a 4600 g. Descartar el Filter Tube Rack (amarillo) y poner el Cover Rack (azul). Respetar
las marcas de orientacin.
26) Utilizar 50 l del eluido para la PCR. Agregar a los K-tubes con
la MMX de trabajo. Mezclar por pipeteo 3 veces , evitando la
formacin de burbujas. Estabilidad eluido en el Rack: 2 horas a 4-30 C
27) Iniciar la PCR dentro de 1hora de agregadas las muestras a la
MMX de trabajo.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 60 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1
21) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 l de Wash Buffer por
la pared del well sin tocar.
22) Centrifugar 3 min a 4600 g. Descartar el Waste Rack. Colocar Elution Rack
(base azul).

23) Abrir los wells con el gripper. Agregar 75 l de ELB a 70 C a

cada well (en el centro del filtro sin tocarlo).
24) Incubar 3 min a Temp amb.

25) Centrifugar 3 min a 4600 g. Descartar el Filter Tube Rack (amarillo) y poner el
Cover Rack (azul). Respetar las marcas de orientacin.
26) Utilizar 50 l del eluido para la PCR. Agregar a los K-tubes con
la MMX de trabajo. Mezclar por pipeteo 3 veces , evitando la
formacin de burbujas. Estabilidad eluido en el Rack: 2 horas a 4-30 C

27) Iniciar la PCR dentro de 1hora de agregadas las muestras a la

MMX de trabajo.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 61 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

Preparacin de Master Mix (MMX)

1) Sacar los reactivos de la MMX de la heladera y estabilizar a Temperatura
ambiente 30 minutos. Proteger de la luz. Limpiar los K-carriers y K-carrier holders
con isopropanol 70%.
2) Colocar el K-carrier (gradilla) en el K-carrier Holder.
3) Colocar los K-tubes en el K-carrier sin tocar las paredes del tubo.
Posiciones obligatorias: 1-2-5-20-23-24
4) Preparar la MMX de trabajo:
12 tests
En tubo 1,5
ml

24 tests
En vial MMX

HIV-1 MMX (l)

700

Todo el vial de HIV-1 MMX

CTM Mn 2+ (l )

85

170

Reactivo

Mezclar por inversin. No usar vortex.

Usar dentro de las 2 horas de preparada (proteger de la luz).
5) Destapar los K-tubes con el destapador y colocar las tapas en su gradilla.
6) Agregar 50 l de la MMX preparada a cada K-tube.
Agregar 50 L del eludo de muestras y controles a cada K-tube mezclar por pipeteo 3 veces
sin producir burbujas.
Llevar al equipo de PCR.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 62 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

Software Amplilink/Taq Man

Encender:
CPU
Monitor
Impresora

Pestaa
Service
Due

Perform
Siga las
instrucciones

Usuario:_____
Pasword_____

Icono System

Al finalizar:
Done

Escritorio
Icono
AMPLILINK

Encender el
Equipo
Taq Man

Creacin de Serie Analtica

2) Pestaa
K-Carrier

1)Icono
Orders

3) New

Icono System
4) Ingresar la
identificacin de
las muestras

5) Escoger el
Test

6) Save

Introducir al termociclador
el K-Carrier con ayuda de
transportador

Star

CAL-02-B

Open

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 63 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1
RESULTADOS
Clculo de resultados
El analizador COBAS TaqMan 48 determina de forma automtica la concentracin de ARN
del HIV-1 para la muestra o el control. La concentracin de ARN del HIV-1 se expresa en
copias/ml. El factor de conversin entre copias/ml de HIV-1 y unidades internacionales UI/ml
es de 0,6 copias/UI, utilizando el material de referencia de la OMS para el HIV-1B 97/65635.
El analizador COBAS TaqMan 48:
Determina el valor umbral del ciclo (Ct) para el ARN del HIV-1 y el ARN del estndar de
cuantificacin del HIV-1.
Determina la concentracin de ARN del HIV-1 basndose en los valores Ct del ARN del HIV1 y el ARN del estndar de cuantificacin del HIV-1, as como los coeficientes de calibracin
especficos de cada lote.
Determina que las concentraciones calculadas en copias/ml para el HIV-1 L(+)C y HIV-1
H(+)C se encuentran dentro de los intervalos asignados.
Validacin de la serie
Compruebe la ventana de resultados del software AMPLILINK o la impresin en busca de
avisos y comentarios para asegurarse de que la serie es vlida.
La serie es vlida si no aparecen avisos para los controles
La serie no es vlida si aparece alguno de los siguientes avisos en los controles

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 64 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

Si la serie no es vlida, repita toda la serie incluyendo la preparacin de las muestras y los
controles, transcripcin reversa, amplificacin y deteccin.
Interpretacin de resultados:
Para obtener una serie vlida, compruebe cada una de las pruebas por si presentan avisos o
comentarios en la impresin de resultados. Interprete los resultados de la siguiente manera:
Una serie vlida puede incluir resultados de muestras vlidas y no vlidas dependiendo de si
los avisos y/o los comentarios se obtienen para las muestras individuales.
Los resultados de las muestras se interpretan de la siguiente manera:

NOTA: Las muestras por encima del intervalo del ensayo tambin pueden producir un resultado no
vlido con un aviso QS_INVALID. Si se desean resultados cuantitativos, la muestra original
debera diluirse con plasma humano con EDTA negativo para la presencia de HIV-1 y repetirse la
prueba. Multiplique el resultado notificado por el factor de dilucin.

Nota: Para mayor informacin referirse al Inserto y al Manual.

Anotar los resultados en la bitcora CAL-65-A

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 65 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

VALIDACION DE RESULTADOS
1)Icono Results

Usuario:___
Pasword___

3) Nmero de
K-Carrier
(doble click)

4) Revisar
RESULTADOS

11) En barra de
mens
File

12) Shut Down

CAL-02-B

2) Nmero de
Review

5) Revisar
RESULTADOS

10) Apagar el equipo

(Interruptor lado
Izquierdo)

7)Yes

6) Accept

9) Close

8) Ir a System
Open
Retirar el K-Carrier

13) Cerrar
Windows

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 66 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

Carga viral del Virus del Hepatitis C (VHC)

La prueba est indicada para su uso conjunto con la presentacin clnica y otros indicadores
de laboratorio como una ayuda en la evaluacin de la respuesta vrica frente al tratamiento
antivrico a travs de la determinacin de cambios en los niveles sricos o plasmticos de
ARN del HCV. Datos recientes parecen indicar que las variaciones tempranas en los niveles
de ARN de HCV en suero/plasma pueden pronosticar respuestas a largo plazo del tratamiento
con interfern1.
El virus de la hepatitis C est considerado como el principal agente etiolgico responsable del
90 al 95% de los casos de hepatitis post-transfusional no A y no B. El HCV es un virus ARN
monocatenario de sentido positivo con un genoma de aproximadamente 10.000 nucletidos
que codifican 3.000 aminocidos. Como virus transportado en sangre, el HCV es transmisible
a travs de la sangre y los productos hemoderivados. La adopcin ms o menos generalizada
de medidas de deteccin sistemtica del HCV en sangre ha reducido de forma considerable el
riesgo de hepatitis asociado a las transfusiones.
La prueba puede cuantificar el ARN del VHC en un intervalo de 25 391, 000,000 UI/ml en
plasma conservado en EDTA y suero

Principios del ensayo

La prueba COBAS Taq Man HCV, v2.0 se basa en tres procesos principales: (1)
preparacin manual de las muestras para obtener el ARN del HCV; (2) transcripcin reversa
automtica del ARN diana para generar un ADN complementario (ADNc); (3) amplificacin
mediante PCR del ADNc diana utilizando primers complementarios especficos del HCV, y
deteccin simultnea de sondas oligonucletidas marcadas con doble marcador fluorescente
escindido que permiten la determinacin cuantitativa del producto amplificado de la diana del
HCV (amplicn). Ver Inserto

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 67 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

Obtencin de la muestra y centrifugacin:

Para la obtencin de la muestra se proceder de acuerdo al procedimiento CAL-76 de
recoleccin y toma de muestras de pacientes.
En este proceso se utilizan muestras con EDTA suero.
La sangre obtenida con se puede almacenar a una temperatura de 2 a 28C hasta 6 hrs. a
partir de su obtencin.
Una vez obtenida la muestra se proceder a separar el plasma de los hemates mediante
centrifugacin a 800-1600g por 20 minutos a temperatura ambiente. Separar e identificar el
plasma en tubos de rosca en (uno dos) alcuotas de 550 L y almacenar de -20C a -80C
en caso de no ser usado de inmediato.
Para mayor informacin referirse a la pagina 13 del inserto)

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 68 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS PARA MUESTRAS Y CONTROLES PARA VHC

1) Descongelar las muestras.
2) Preparar los siguientes reactivos:.
a) Inhibitor Removal Buffer (IRB)
No Test

IRB
(negro)
(mL)

Etanol
(mL)

12 test

8.25

24 test

16.5

10

48 test

Todo

20

Conservar a 15-25 C
Estabilidad 30 das

Mezclar por inversin (5 a 10 veces)

b) Wash Buffer
No Test

Wash Buffer
Agua
Etanol (mL)
(azul) (mL)
desionizada(mL)

12 test

12.5

7.5

24 test

10

25

15

48 test

Todo (20)

50

30

Conservar a 15-25 C
Estabilidad 30 das

Mezclar por inversin (5 a 10 veces)

c) Elution Buffer (ELB). Incubar a 70C. 75 ul por muestra

CAL-02-B

No Test

ELB (mL)

12 test

24 test

10

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 69 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

d) Isopropanol en tubo Falcon

e) CAR (Blanco)

No Test

Isopropanol
(mL)

12 test

24 test

10

f) PK (Magenta)

Para 24 tests: 0,5 ml ELB en

frasco CAR. Mezclar por
inversin y vortex.

Para 24 tests: 5 ml ELB en frasco

PK. Mezclar por inversin y
vortex.

Conservar a -20C hasta 28 das.

Conservar a -20C hasta 28 das.

3) Vrtex a muestras, controles y QS.

4) Tener Lysis Rack blanco listo con marca orientacin de primera
muestra y N de rack.
5) Preparar la Lysis Binding Working Solution en tubo Falcon agregando los
reactivos en el siguiente orden. Cuando se agrega el QS y PK mezclar
inversin (no vortex).
Reactivo

12 Test

24 Test

7 mL

14 mL

CAR RNA

140 L

280 L

HCV QS

56 L

112 L

PK

1.4 mL

2.8 mL

Lysis Binding

6) Agregar inmediatamente 625 l de la Lysis Binding Working Solution

preparada en cada well del Lysis Rack (blanco).

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 70 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1
7) Agregar 500 l de muestra y controles a sus respectivos wells del
Lysis Rack. Vortex el Rack 10 seg.
8) Incubar el Lysis rack a 50 C 10 minutos en bao de agua (5 cm
altura de agua).
9) Secar el Rack y centrifugar 20 sec a 4600 g.
10) Agregar 250 l de isopropanol a cada well (1 por vez). Mezclar el Rack por
inversin y luego vortex 10 seg.
11) Centrifugar 20 sec a 4600 g.
12) Preparar el Filter Tube Rack (amarillo) con su Waste Rack.
Colocar las marcas de orientacin y N de Rack.
13) Transferir 750 l de cada well al well correspondiente del Filter
Tube rack (amarillo) con su Waste Rack ajustado. Tener en cuenta las
marcas de muestras.
14) Centrifugar 2 min a 4600 g.
15) Transferir el remanente de cada well del Lysis rack (blanco ) a su
correspondiente well en el rack amarillo. Descartar el Lysis Rack
blanco.
16) Centrifugar 2 min a 4600 g. Reemplazar el Waste Rack por uno nuevo.
17) Abrir los wells con el gripper. Agregar 400 l del IRB preparado por la pared del
well sin tocar la pared.

18) Centrifugar 2 min a 4600 g.

19) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 l de Wash Buffer preparado por la
pared del well sin tocar.
20) Centrifugar 2 min a 4600 g. Reemplazar el Waste Rack por uno nuevo.
21) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 l de Wash Buffer por
la pared del well sin tocar.

22) Centrifugar 3 min a 4600 g. Descartar el Waste Rack. Colocar Elution Rack
(base azul).
23) Abrir los wells con el gripper. Agregar 75 l de ELB a 70 C a
cada well (en el centro del filtro sin tocarlo).

24) Incubar 3 min a Temp amb.

25) Centrifugar 3 min a 4600 g. Descartar el Filter Tube Rack (amarillo) y poner el
Cover Rack (azul). Respetar las marcas de orientacin.
26) Utilizar 50 l del eluido para la PCR. Agregar a los K-tubes con
la MMX de trabajo. Mezclar por pipeteo 3 veces , evitando la
formacin de burbujas. Estabilidad eluido en el Rack: 2 horas a 4-30 C
CAL-02-B

27) Iniciar la PCR dentro de 1hora de agregadas las muestras a la

MMX de trabajo.

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 71 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1
21) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 l de Wash Buffer por
la pared del well sin tocar.
22) Centrifugar 3 min a 4600 g. Descartar el Waste Rack. Colocar Elution Rack
(base azul).

23) Abrir los wells con el gripper. Agregar 75 l de ELB a 70 C a

cada well (en el centro del filtro sin tocarlo).
24) Incubar 3 min a Temp amb.

25) Centrifugar 3 min a 4600 g. Descartar el Filter Tube Rack (amarillo) y poner el
Cover Rack (azul). Respetar las marcas de orientacin.
26) Utilizar 50 l del eluido para la PCR. Agregar a los K-tubes con
la MMX de trabajo. Mezclar por pipeteo 3 veces , evitando la
formacin de burbujas. Estabilidad eluido en el Rack: 2 horas a 4-30 C

27) Iniciar la PCR dentro de 1hora de agregadas las muestras a la

MMX de trabajo.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 72 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

Preparacin de Master Mix (MMX)

1) Sacar los reactivos de la MMX de la heladera y estabilizar a Temperatura
ambiente 30 minutos. Proteger de la luz. Limpiar los K-carriers y K-carrier holders
con isopropanol 70%.
2) Colocar el K-carrier (gradilla) en el K-carrier Holder.
3) Colocar los K-tubes en el K-carrier sin tocar las paredes del tubo.
Posiciones obligatorias: 1-2-5-20-23-24
4) Preparar la MMX de trabajo:
12 tests
En tubo 1,5
ml

24 tests
En vial MMX

HIV-1 MMX (l)

700

Todo el vial de HIV-1 MMX

CTM Mn 2+ (l )

85

170

Reactivo

Mezclar por inversin. No usar vortex.

Usar dentro de las 2 horas de preparada (proteger de la luz).
5) Destapar los K-tubes con el destapador y colocar las tapas en su gradilla.
6) Agregar 50 l de la MMX preparada a cada K-tube.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 73 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1
Encender:
CPU
Monitor
Impresora

Pestaa
Service
Due

Perform
Siga las
instrucciones

Usuario:_____
Pasword_____

Escritorio
Icono AMPLILINK

Icono System

Encender el
Equipo
Taq Man

Al finalizar:
Done

Usuario:_____
Pasword_____

Creacin de Serie Analtica

2) Pestaa
K-Carrier

1)Icono
Orders

3) New

Icono System
4) Ingresar la
identificacin de
las muestras

5) Escoger el
Test

6) Save

Introducir al termociclador
el K-Carrier con ayuda de
transportador
Star

CAL-02-B

Open

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 74 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

RESULTADOS
Clculo de los resultados
El analizador COBAS Taq Man 48 determina automticamente el ttulo del ARN del
HCV para la muestra o el control. El ttulo del ARN del HCV se expresa en unidades
internacionales (UI)/ml segn el segundo estndar internacional de la OMS para ensayos
NAT de ARN del HCV (cdigo NIBSC 96/798).
El analizador COBAS Taq Man 48:
Determina el valor de ciclo umbral (Ct) correspondiente al ARN del HCV y al ARN del
estndar de cuantificacin del HCV.
Determina el ttulo del ARN del HCV segn los valores Ct para el ARN del HCV y el ARN
del estndar de cuantificacin del HCV y los coeficientes de calibracin especficos del
lote.
Determina si las UI/ml calculadas para HCV L(+)C, v2.0 y HCV H(+)C, v2.0 estn dentro
de los intervalos asignados.
Validacin de la serie analtica
Compruebe la ventana de resultados del programa AMPLILINK o la impresin de los
posibles avisos y comentarios para asegurarse de que la serie es vlida.
La serie ser vlida si no aparecen avisos para los controles de HCV .
La serie no es vlida si aparece cualquiera de los avisos siguientes para los controles de
HCV :

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 75 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 76 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1
Si la serie no es vlida, reptala por completo incluyendo los pasos de preparacin de las
muestras y los controles, transcripcin reversa, amplificacin y deteccin.
Interpretacin de los resultados:
Para determinar si una serie es vlida, compruebe los posibles avisos o comentarios
asociados a cada muestra en la impresin de los resultados. Interprete los resultados de la
siguiente manera:
Una serie vlida puede incluir resultados de muestras tanto vlidos como no vlidos segn
los avisos o comentarios asociados con cada una de las muestras.
Los resultados de las muestras se interpretan como se indica a continuacin:

NOTA: Las muestras por encima del intervalo del ensayo tambin pueden producir un resultado no
vlido con un aviso QS_INVALID. Si se desean resultados cuantitativos, la muestra original
debera diluirse con plasma humano con EDTA negativo para la presencia de HIV-1 y repetirse la
prueba. Multiplique el resultado notificado por el factor de dilucin.

Nota: Para mayor informacin referirse al Inserto y al Manual.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 65
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02 Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 77 de 25

PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL

VHC Y VIH-1
1)Icono Results

Usuario:___
Pasword___

3) Nmero de
K-Carrier
(doble click)

4) Revisar
RESULTADOS

11) En barra de
mens
File

12) Shut Down

2) Nmero de
Review

5) Revisar
RESULTADOS

10) Apagar el equipo

(Interruptor lado
Izquierdo)

7)Yes

6) Accept

9) Close

8) Ir a System
Open
Retirar el K-Carrier

13) Cerrar
Windows

REGISTROS
La bitcora CAL-65-A Se debe almacenar en el archivo activo durante 5 aos y en el
archivo muerto 5 aos.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 66
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 78 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE
CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 66
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 79 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE
CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA

CAMBIO

REVISIN

FECHA

En la calibracin y lectura en el equipo

01/11/11

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 66
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 80 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE
CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA

DESCRIPCION DEL PROCESO

Cuantificar el nmero de clulas CD 34+ y determinar el porcentaje de viabilidad
de las mismas en la cosecha de clulas Clulas Tallo recolectadas por afresis
para el Protocolo de Transplante de Mdula.

PROCESO:

1. Recepcin de muestra:
a. Biometra Hemtica
b. Cosecha
2. Cuantificacin de cantidad de leucocitos empleando citometra en equipo
de Biometra Hemtica
3. Ajuste del nmero de clulas: 10,000 l
4. Preparacin de muestra acorde a inserto
5. Antes de usar el citmetro de Flujo, se recomienda:
a. Proceso de lavado largo
b. Calibracin
c. Usar en cada corrida un control normal (ver viabilidad)

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 66
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 81 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE
CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA

A.- Preparacin de muestras para conteo de clulas CD34+

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 66
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 82 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE
CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA

B.- Lavado previo al uso del equipo

CVE: BDIS

LAVADO
ENCENDER

REVISAR
PRESION
Cambiar de

ANALIZADOR (LO +
PRIME ; OBSSERVAR
BURBUJAS)

VENT-TANK CHANGE
A
VENT-RUN

LOADER
MANAGER

CPU

MAINTENANCE

MONITOR

DILUYENTE : LLENAR
MAX

IMPRESORA

DESECHOS: VACIAR

TEST OPTION

COLOCAR LOS TUBOS

EN EL RACK COMO SE
INDICA
EN LAS POSICIONES:

EQUIPO
RUN

ESCOGER
LONG

39.. FACS CLEANE

SHORT

40. FACS RINSE

CLEAN

HI

COLOCAR EL
EN EL EQUIPO

RACK

MONITOR

RUN

RUN

ESPERAR A QUE
TERMINE EL
LAVADO

CAL-02-B

FILE

DONE

QUIT

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 66
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 83 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE
CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA

Realizar Calibracin

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 66
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 84 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE
CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA

Llevar las muestras al equipo para proceder a su lectura

CD34

CITOMETRO
CD34
Plantillas

PANTALLA
PRINCIPAL

APARECE EL
ULTIMO
RESULTADO
OBTENIDO

ISHAGE
(Doble Click)

ACQUIRE

AL FINALIZAR LA CORRIDA REALIZAR UN

LAVADO LARGO (LONG) DEL EQUIPO.

CONECTAR
CITOMETRO

ACQUIRE

PARAMETERS
DESCRIPTION

PRESIONAR

LA TECLA COMAND
JALAR LA
CALIBRACIO
N L.N.W

CYTOMETER

INTRUMENTS
SETTINGS

MOVER
LOS
TUBOS
CON
EL
CONTROL
ADOR
M,ANUAL

PESTAA

COUNTER S

ACQUIRE

INGRESAR LOS
DATOS DEL
PACIENTE

( Y SIN SOLTAR
PRESIONAR 1, 2 Y 3
[Link]

OPEN

EQUI
PO
RUN

HI

DESKTOP

FACSTATION

COLOCAR LOS TUBOS

EN EL ORDEN QUE
SE INDICA. Y EN LAS
POSICIONES

38. H 2 O
39.. FACS CLEANE
40 . FACS RINSE

BD FILES

CHECAR QUE EN
THRESHOLD ESTE
SELECCIONADO FL 1 Y
ESTE EN UN RANGO DE
350-360

INTRUMENT
S SETTINGS

SET

DONE

COLOCAR EL RACK
EN EL EQUIPO
ACQUISITION
CONTROL

ACQUI
RE

ACQUISITION
CONTROL
PAUSE

ABORT

DESPUES DE
5 MIN

PAU
SE

SET UP

QUIT CELL QUEST

SET UP

DONT
SAVE

CAL-02-B

SAVE

IMPRIMIR
RESULTAD
OS

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 66
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 85 de 8

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE
CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA

Resultados
Obtencin de resultados impresos en automtico vaciar en el formato
PERLAS BOLSA
_________________

LOTE____________

NOMBRE

PESO: _______

Muestra:
CD 34+ viables
CD34+ total
CD 45+ viables
CD45+ total
Perlas
G6
G7
Dilucin
Cuenta total
CD 34+/l
CD34+/Kg paciente
(Clulas CD34+ viables) / (# perlas) X

(# perlas en el tubo) / (50 l muestra) X

Viabilidad de 34+: (CD 34+ viables)(100) / CD34+

REGISTROS

Ningn registro asociado

CAL-02-B

dilucin

Viabilidad de 45+: (CD 45+ viables)(100) / CD45+

Instituto Nacional de Pediatra

Banco de Sangre
Cdigo: CAL- 68
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 26 de Marzo 2008
Pgina 86 de 6
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
AGLUTININAS INMUNES

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:
Firma:
Q.F.B. JUDITH
M. en C. GUILLERMO
RODRIGUEZ HERNANDEZ ESCAMILLA GUERRERO

Firma:
DRA. DINORA
AGUILAR ESCOBAR

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Fecha:

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-68
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 26 de Marzo 2008
Pgina 87 de 6
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
AGLUTININAS INMUNES

CAMBIO

CAL-02-B

REVISIN

FECHA

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-68
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 26 de Marzo 2008
Pgina 88 de 6
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
AGLUTININAS INMUNES

OBJETI VO
Cuantificar la concentracin de un Ac presente en una muestra de suero con fines teraputicos, de
investigacin y en la elaboracin y control de calidad de los reactivos.
MATERIAL Y EQUIPO
Suero en estudio, hemates conteniendo el Ag correspondiente al Ac a titular, pizeta con SSF,
guantes quirrgicos, programador o gradilla, lpiz graso, pipeta de Pasteur de igual calibre, bulbo
de goma, tubos de ensaye 12 x 75 mm, termoblock temperatura variable (37, 56 a 70 C),
termmetro, centrifuga, antiglobulina humana (Coombs).
METODO
A.- Titulacin de Ac anti "A" y anti "B" naturales. Realizar titulo de Ac naturales del sistema
ABO, segn grupo sanguneo:
Si es grupo "0" titular anti "A" y anti "B"
Si es grupo "A" titular anti "B"
Si es grupo "B" titular anti "A"
1. Utilizar guantes quirrgicos
2. Obtener el suero en estudio
3. Realizar diluciones doble seriadas (solucin salina / suero problema) segn se requiera.
4. Colocar 100 l de solucin salina a partir del tubo nmero 1. Aadir 100 l de suero.
5. Mezclar y pipetear el contenido del tubo 1 y transferir 100 l al tubo 2, asi
sucesivamente hasta la dilucin deseada.
6. Se preparan tres series: para aglutininas A, aglutininas B y un testigo
7. A la primer serie se le agregan 50 l de eritrocitos A, a la segunda 50 l de eritrocitos B
y a la tercera: 50 l de eritoctios O.
8. Mezclar y centrifugar a tiempo y revoluciones (30 / 3500 RPM) .
9. Leer y anotar resultados en cruces, tubo en mano en formato correspondiente.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-68
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 26 de Marzo 2008
Pgina 89 de 6
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
AGLUTININAS INMUNES

INTERPRETACION DE RESULTADOS
A1/2

A1/4

4+

4+

B1/2 B1/4
4+

4+

A1/8

A1116

3+

2+

B1/8
3+

A1/32

A1/64

A1/128

1+

1/2+

B1/16

B1/32

B1/64

B1/128

3+

2+

1+

1/2+

A1/256

B1/256

A1/512

B1/512

A1/102

B1/102

Re s ul t ad o del ti t ul o a nti "A " y a nti "B "

Anti "A" 64
Anti "B" 128

B. Titulacin de anti "A" y anti "B" inmunes

Tcnica para neutralizar el suero:

1. Utilizar guantes quirrgicos.

2. Neutralizar el suero en estudio, utilizar una dilucin de 1/4, 3 gotas de solucin salina
fisiolgica mas 1 gota de suero en estudio; adecuar esta proporcin para obtener mayor
numero de gotas. ya que se debe comprobar si ocurri a no la neutralizacin de los
anticuerpos naturales, utilizando pipetas de Pasteur o agregar a los tubos 1/2 de cada hilera
cuatro gotas del suero en estudio con pipeta de Pasteur o automatizada
3. Incubar el contenido de la dilucin preparada de entre 56C a 70C por 30 minutos.
4. Retirar el contenido de la dilucin neutralizada del bao de Maria y dejar reposar por 10
minutos.
5. Marcar dos tubos 12 x 75 mm como A y B.
6. Agregar a cada tubo 2 gotas de suero, posiblemente inactivado.
7. Al tubo A agregar eritrocitos "A," y al tubo "B" agregar eritrocitos B.
8. Mezclar y centrifugar a tiempo y velocidad establecida.
9. Leer y observar aglutinacin.
10. Repetir los pasos 6, 7, 8, 9 y 10, si da negativo demuestre que los anticuerpos naturales han
sido neutralizados, procediendo a investigar anticuerpos inmunes.
11. Colocar dos tubos anteriores previamente neutralizados a 37C por 30 a 60 minutos.
12. Lavar ambos tubos cuatro veces con SSF, y aadir dos gotas de suero de Coombs, mezclar y
centrifugar.
13. Leer y anotar resultados en cruces, tubo en mano en formato correspondiente. Si hay
aglutinacin existe presencia de anticuerpos inmunes, proceder a realizar titulacin.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-68
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 26 de Marzo 2008
Pgina 90 de 6
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
AGLUTININAS INMUNES

Interpretacin:
Si se observa aglutinacin, la neutralizacin ha sido insuficiente, se debe incubar el tubo con el
contenido de la dilucin preparada durante 10 min. a 56C a 70C para que se termine de
neutralizar.
B.1 Ttulo del suero
1. Identificar dos (2) hileras de tubos 12 x 75 mm, con la letra A 1 /2, A 1 /4 hasta A 1 /
1024 y proceder igualmente con la hilera B
2. Agregar a cada hilera un tubo adicional con Al 1, 1311.
3. 3. Colocar en ambas hileras excepto en el tubo numero 11, cuatro gotas de SSF con
pipeta de Pasteur.
4. Aadir a los tubos Al /2 y B 1 /2, cuatro gotas de suero en estudio, previamente
neutralizada.
5. Mezclar y pipetear el contenido del tubo A1/2 y transferir cuatro gotas al tubo A1/4 y
as sucesivamente hasta el tubo numero 11.
6. Repetir el paso numero 5 con la hilera B.
7. Agregar a la hilera A, excepto en el tubo numero 11, una gota de hemates "A1".
8. Agregar a la hilera B, excepto en el tubo numero 11 una gota de hemates "B".
9. Mezclar e incubar ambas hileras en bao Maria a 37 C durante 30 a 60 min.
10. Lavar todos los tubos, de ambas hileras con SSF por cuatro veces consecutivas
resuspendiendo en cada lavado, con una pequea alcuota de SSF.
11. Agregar a cada tubo dos gotas de reactivos antiglobulina humana (Coombs).
12. Centrifugar a tiempo y revoluciones establecidas.
13. Leer, desprendiendo suavemente el botn celular, observando hemlisis o aglutinacin,
comenzando de la mas alta dilucin (1/2) a la menor sobre una fuente de luz.
14. 14. Anotar los resultados en cruces, tubo en mano en el formato correspondiente.
lnterpretacin de resultados
A1/2
4+

A1/4
4+

A1/8
3+

A1/16
2+

*12

12

10

B1/2
4+

B1/4
4+

B1/8
3+

B1/16
3+

*12

12

10

10

Titulo
Anti A = 64

CAL-02-B

' Score
Anti A = 49

A1/32
1+

A1/64
1/2+

A1/128

Sc

B1/32
2+

B1/64
1+

B1/128
1/2+

A1/256

A1/512

A1/1

B1/256

B1/512

B1/1

Sc

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-68
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 26 de Marzo 2008
Pgina 91 de 6
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
AGLUTININAS INMUNES

TCNICA ALTERNA
Tcnica del 2- -mercaptoetanol
La prueba es de utilidad en la investigacin serolgica en la investigacin de enfermedad hemoltica del
recin nacido, donde slo las IgG son capaces de atravesar la placenta. Se emplea esta tcnica tambin
el la demostracin de anti-A y anti-B no neutralizables.
Los anticuerpos de naturaleza IgM al ser tratados con 2- -mercaptoetanol sufren la ruptura de los
puentes de disulfuro en su molcula afectandose as su funcin o actividad serolgica. Bajo condiciones
similares, las IgG no sufren dao.

Mtodo:
1. Adicione 1 ml de suero problema a una solucin recin preparada del 2- mercaptoetanol 0.1 M en buffer a pH 7.4.
2. Se prepara un control con suero normal en forma similar
3. Incubar los tubos a 37C durante 2 horas.
4. Dialice durante la noche buffer pH 7.4. o aplique mtodo pertinente a fn de eliminar el
reactivo 2- -mercaptoetanol
Interpretacin
En titulacin no se observa mucha diferencia entre el suero tratado del no tratado. Aquellas
muestras que contienen mezcla de IgG/IgM muestran una disminucin sensible al ser reducidas con el
2- -mercaptoetanol.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 70
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 15 JUNIO 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 92 de 12

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Limpieza y manejo de RPBI

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre: GUILLERMO
ESCAMILLA GUERRERO

Nombre: MARGARITA
LETICIA MEDINA MACIAS

Nombre: DINORA
AGUILAR ESCOBAR

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 70
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 15 JUNIO 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 93 de 12
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI

CAMBIO

CAL-70

REVISIN

FECHA

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 70
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 15 JUNIO 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 94 de 12
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI

En este procedimiento se describen los mtodos de limpieza que se utilizan en las

diferentes reas y la metodologa para la recoleccin de los residuos peligrosos
biolgicos infecciosos, los materiales, equipos y utensilios a emplear en cada
actividad, as como la asignacin de responsables a realizar dicho procedimiento,
la frecuencia con que se debe realizar.

TECNICAS DE LIMPIEZA / DESINFECCIN APLICABLES

La descripcin de las actividades para la limpieza de las reas y su supervisin se
desglosan en el formato CAL-70-A y este se publica en cada una de las reas
para que sean del conocimiento de todo el personal y puedan ser consultadas por
los mismos cada vez que sea necesario.
Una vez que el personal asignado para la limpieza conozca la descripcin de sta
actividad, deber realizarla conforme a lo descrito y para ello ser monitoreado
por:
A. Planta Baja: Jefa de enfermera.
B. Laboratorio: Jefe del Laboratorio.
a. Turno matutino: auxiliar asignado
b. Turno vespertino: auxiliar asignado
c. Turno nocturno: personal de guardia nocturna
d. Turno especial: auxiliar de turno
El reporte de cada turno en el rea de laboratorio se remite a la jefatura del
laboratorio para elaborar reporte de informe semanal que ser entregado a la
jefatura del Departamento de Banco de Sangre
El formato CAL-70-A se muestra a continuacin:

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 70
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 15 JUNIO 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 95 de 12
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI

S UPE RVIS ION DE L IMPIE ZA

FE C HA
NOMBR E DE L S UPE R VIS OR
TURNO

MATUTINO
VE S PE R TINO
NOC TUR NO
E S PE C IAL

AR E A

BANC O DE S ANGRE
M

C ONC E PTO
FR E C UE NC IA
PIS OS Y MUR OS

PR ODUC TOS
INS TR UME NTOS

PUE R TAS

FR E C UE NC IA
PR ODUC TOS
INS TR UME NTOS

VIDR IOS

FR E C UE NC IA
PR ODUC TOS
INS TR UME NTOS

MUE BLE S DE OFIC INA

FR E C UE NC IA
PR ODUC TOS
INS TR UME NTOS
FR E C UE NC IA

E QUIPO ME DIC O

PR ODUC TOS
INS TR UME NTOS
FR E C UE NC IA
PR ODUC TOS

LIMPIE ZA Y DE S INFE C C ION DIAR IA TR APE ADO

C ONTINUO
GE R MIC IDA - J ABON NE UTR O
MAQ. LAVADOR A/AC C S C E PILLOS DE R AIZ,
C R UC E TAS , R E C OGE DOR , C UBE TAS ,
TR APE ADOR E S MANGO GR IS
LIMPIE ZA DIAR IA Y LAVADO C ADA OC HO DIAS
GE R MIC IDA - DE S E NGR AS ANTE
E S C ALE R A, FR ANE LA, GR IS , C UAS DE
MADE R A, C UBE TA, ATOMIZADOR
LIMPIE ZA Y DE S MANC HADO DIAR IO
DE S E NGR AS ANTE
ATOMIZADOR , C R UC E TA, FR ANE LA GR IS ,
C UBE TA, C E PILO
LIMPIE ZA DIAR IA Y LAVADO C ADA OC HO DIAS
DE S E NGR AS ANTE
ATOMIZADOR , FIBR A DE NY LON, FR ANE LA
GR IS
LIMPIE ZA DIAR IA (S UPE R VIS ION DE L
PE R S ONAL ME DIC O)
GE R MIC IDA-DE S E NGR AS ANTE

LAVADO DIAR IO Y TR APE ADO C ONTINUO

GE R MIC IDA-DE S E NGR AS ANTE
ATOMIZADOR , FR ANE LA R OJ A, FIBR A NY LON,
INS TR UME NTOS
GUANTE S DE HULE , C UBE TA, C UBR E BOC A
FR E C UE NC IA TR APE ADO Y BAR R IDO UNA VE Z POR TUR NO
PR ODUC TOS
GE R MIC IDA
E S C ALE R AS
TR APE ADOR MANGO GR IS , DOS C UBE TAS ,
INS TR UME NTOS
C R UC E TA
R E C OLE C C ION DE BAS UR A
TR E S VE C E S POR TUR NO
R E C OLE C C ION DE R PBI
DOS VE C E S POR DIA
S ANTIAR IOS

C OME NTAR IOS :

TOTAL
M
R
B

MALO
R E GULAR
BUE NO
CAL-70-A

El formato CAL-70-A se elabora de acuerdo a las necesidades de las reas del

laboratorio de la siguiente manera:

REA:

Se escriben las diferentes reas del Banco de Sangre que

se deben limpiar y/o desinfectar.

FRECUENCIA:

Se indica la frecuencia con la que se debe realizar la

actividad mencionada

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 70
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 15 JUNIO 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 96 de 12
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI

PRODUCTOS:

Se lista los productos necesarios para realizar la limpieza

y/o desinfeccin del rea en cuestin

INSTRUMENTOS:

Se lista los instrumentos y/o materiales necesarios para

realizar la limpieza y/o desinfeccin del rea en cuestin

M:

Malo, calificacin de la actividad

R:

Regular, calificacin de la actividad

Bueno, calificacin de la actividad

FECHA:

Fecha en que se realiza la supervisin

NOMBRE DEL
SUPERVISOR:

Nombre de la persona encargada de la supervisin

TURNO:

Turno en que se realiza la supervisin, cruzar el espacio

adecuado

RESPONSABLES:

Se indica quien o quienes van a ser los responsables de

llevar a cabo la actividad mencionada.

COMENTARIOS:

Anexar comentarios extras, si es necesario

TOTAL:

Puntaje total de columnas M, R y B

Es responsabilidad de los jefes de laboratorio elaborar el programa mensual

de limpieza y verificar que las actividades se realicen.
Importante:
El material de limpieza de cada rea incluyendo las soluciones debe
guardarse limpio y seco en el lugar asignado, para evitar un uso indebido
en otras reas.
No se debe dejar equipo de limpieza fuera de los lugares asignados para
ello.
CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 70
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 15 JUNIO 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 97 de 12
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI

Las precauciones a seguir para el manejo de los qumicos de limpieza y

sanitizacin sern las descritas por el proveedor cada producto.
MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICO INFECCIOSOS

1. IDENTIFICACIN
INFECCIOSOS

DE

LOS

RESIDUOS

PELIGROSOS

BIOLGICO-

Clasificacin.
Se deben clasificar los residuos peligrosos biolgico infecciosos (RPBI) que se
generan en el laboratorio, as como el nivel de establecimiento que le corresponde
al mismo de acuerdo con lo que indica la norma NOM-087- ECOL-SSA1-2002.

2. ENVASADO
DE
INFECCIOSOS

LOS

RESIDUOS

PELIGROSOS

BIOLGICO-

Los contenedores para RPBI se clasifican de acuerdo al tipo de RPBI y los

mismos deben de cumplir con lo requerimientos especificados en la NOM-087ECOL-SSA1-2002.
TIPO DE RESIDUOS

ESTADO
FISICO

Sangre

Lquidos

Cultivos y cepas de agentes

infecciosos

Slidos

Patolgicos

Slidos
Lquidos
Slidos
4

Residuos no anatmicos
Lquidos

5 Objetos punzocortantes
CAL-70

Slidos

ENVASADO
Recipientes
hermticos
Bolsas de
polietileno
Bolsas de
polietileno
Recipientes
hermticos
Bolsas de
polietileno
Recipientes
hermticos
Recipientes
rgidos
polipropileno

COLOR
Rojo
Rojo
Amarillo
Amarillo
Rojo
Rojo
Rojo

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 70
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 15 JUNIO 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 98 de 12
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI

Durante el envasado, los RPBI no deben mezclarse con ningn otro tipo de
residuos municipales o peligrosos.
Los contenedores de los diferentes tipos de RPBI deben de cumplir con las
siguientes especificaciones:

a) Contenedores para residuos slidos (bolsas de polietileno)

Las bolsas debern ser de polietileno color rojo de calibre mnimo 200 y
color amarillo calibre mnimo 300 , impermeables
Los materiales utilizados debern estar libres de metales pesados y cloro,
mientras que los colorantes debern ser fisiolgicamente inocuos.
Resistentes.
Destruibles por medios fisicoqumicos.
Etiquetados con la leyenda Peligro, residuos slidos biolgico infecciosos
y con el smbolo universal de riesgo biolgico.

b) Contenedores para residuos punzocortantes.

Deben ser rgidos
De polipropileno color rojo
Los materiales utilizados debern estar libres de metales pesados y cloro,
mientras que los colorantes debern ser fisiolgicamente inocuos.
Resistentes a fracturas y perdidas del contenido al caerse.
Destruibles por medios fsicos.
Esterilizables.
Resistencia a la penetracin en todas partes.
Tener tapa con y sin separador de agujas.
Abertura para depsito con dispositivo para cierre seguro.
Etiquetados con la leyenda Peligro, residuos punzocortantes biolgico
infecciosos y con el smbolo universal de riesgo biolgico.
Una vez llenos los recipientes no deben ser abiertos o vaciados.

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 70
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 15 JUNIO 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 99 de 12
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI

c) Contenedores hermticos para residuos lquidos.

Deben ser rgidos.
Hermticos.
De polipropileno color rojo o amarillo
Los materiales utilizados debern estar libres de metales pesados y cloro,
mientras que los colorantes debern ser fisiolgicamente inocuos.
Resistentes a fracturas y perdidas del contenido al caerse.
Destruibles por medios fsicos.
Etiquetados con la leyenda, Peligro, residuos peligrosos lquidos biolgico
infecciosos.
Marcados con el smbolo universal de riesgo biolgico.
A continuacin se muestra el smbolo universal de riesgo biolgico

3. RECOLECCIN Y TRANSPORTE INTERNO.

El manejo interno del material de residuos biolgico infeccioso, ser exclusivo
del rea de Intendencia, utilizando el equipo de proteccin que se les ha asignado
(bata, guantes, lentes protectores y cubrebocas).
Estos pasos comprenden la recoleccin de las diferentes reas de laboratorio del
material residuo biolgico infeccioso, el rea de almacenamiento temporal y su
transporte por personal capacitado al lugar de su eliminacin.
Para la recoleccin interna se siguen las siguientes normas:
CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 70
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 15 JUNIO 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 100 de 12
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI

Los residuos nunca deben ser compactados.

Las bolsas y contenedores recolectados deben estar llenos al 80% de su
capacidad y no ms.
Una vez cerrados los contenedores estos no deben ser abiertos.
Se utilizaran carritos para uso exclusivo de residuos biolgico infecciosos.
Los carritos debern ser lavados y desinfectados diariamente.
La persona que realiza esta labor deber contar con equipo de proteccin
personal individual.
Se deben utilizar las rutas de evacuacin diseadas y sealadas con los
smbolos que marcan el manejo de RPBI.
TRANSPORTE INTERNO
1. El personal responsable recolectara diariamente todos los depsitos de RPBI
slidos, identificndolos.
2. Se deber identificar a simple vista que los RPBI se encuentren clasificados
debidamente, informando cualquier anomala detectada al responsable en
turno.
3. El recorrido se llevara a cabo con las mximas precauciones y utilizando
siempre el material de proteccin asignado.
4. La ruta de RPBI podr identificarse por flechas de color verde y las siglas RPBI
as como el smbolo universal de RPBI.
5. El transporte se realizara hasta el Almacn temporal, este deber contar con
los sealamientos indicados de manejo de Precaucin RPBI, as como el
smbolo universal de RPBI.

4. ALMACENAMIENTO TEMPORAL DE RPBI

A. Destinar un rea exclusiva para el almacenamiento temporal de los RPBI y
debe de cumplir con las caractersticas establecidas en el punto 6.3.5 de la
norma NOM-087- ECOL-SSA1-2002, excepto para los establecimientos
incluidos en el nivel 1.
B. El Almacn temporal deber contar con un candado de seguridad al cual solo
tendrn acceso el personal asignado.
C. Este solo ser abierto para el depsito y transporte externo de RPBI por la
empresa contratada para su eliminacin.
CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 70
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 15 JUNIO 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 101 de 12
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI

D. El periodo de almacenamiento temporal esta sujeto al nivel del establecimiento,

como sigue:
Nivel I: Mximo 30 das
Nivel II: Mximo 15 das
Nivel III: Mximo 7 das

E. Los residuos patolgicos, humanos o de animales (que no estn el formol)

deben conservarse a temperatura de refrigeracin no mas de 4C
5. RECOLECCIN Y TRANSPORTE EXTERNO.
El transporte externo y la disposicin final de los RPBI ser efectuado por una
empresa contratada para este propsito, misma que se encuentra autorizada para
este fin por SERMANAT y en cumplimiento de la NOM-087-ECOL-SSA1-2002
para la disposicin final de RPBI.
La empresa en el momento de la recoleccin emite un reporte de la cantidad de
RPBI recolectados, la cual es firmada por el responsable de laboratorio en turno.
Se encuentra establecida y actualizada una bitcora de la gestin de los residuos
biolgico-infecciosos a fin de evaluar el desempeo de la gestin, as como para
mostrar el cumplimiento de la normatividad.

6. ACCIDENTE CON RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICOS INFECCIOSOS.

Se debe entender como accidente con residuos peligrosos biolgico infecciosos
los siguientes:
Punciones y cortaduras.
Salpicaduras con residuos lquidos.
Inhalacin de gases producidos por los escurrimientos.
Derramamientos, cadas o fracturas de bolsas y contenedores.

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 70
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 15 JUNIO 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 102 de 12
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI

a) En el caso de derrames. Se debe estar en posibilidad de descontaminar y

limpiar el sitio contaminado. Para ello se puede emplear una solucin de cloro
inorgnico al 0.5 por ciento que representa una dilucin de 1:10 del blanqueador
domstico habitual; el cual tiene actividad esporicida, tuberculocida, inactiva
bacterias vegetativas, es fungicida y virocida. Se sugiere consultar al experto en
control de agentes infecciosos y la exclusin del movimiento de personas en el
rea durante el proceso de desinfeccin y de limpieza.
Se debe disponer de un paquete de materiales de desinfeccin que incluya:
el desinfectante
el material absorbente de lquidos
las bolsas rojas para contener los materiales de limpieza
el equipo de seguridad para la proteccin de los trabajadores de limpieza.
Se deben establecer procedimientos para la contencin y limpieza de derrames
que incluyan:
Salida inmediata del rea para prevenir exposicin
Determinacin de si ocurri exposicin.
Identificacin del residuo derramado.
Restriccin de acceso al rea.
Proporcionar el equipo de proteccin para limpieza.
Rociado de los materiales derramados con el desinfectante.
Remocin del material derramado.
Desinfeccin, enjuague y limpieza del rea.
Disposicin de los materiales de desinfeccin y limpieza.
Remocin del equipo de proteccin.
Lavado extenso de manos y piel expuesta.
Reemplazo de los materiales usados del paquete.
b) Incidentes de exposicin: El seguimiento adecuado y estricto de los
procedimientos que atiendan los casos de exposicin de trabajadores durante el
manejo de los RPBI como resultado de un derrame o salpicadura, podrn
minimizar las complicaciones que deriven de ello. El seguimiento pos exposicin
es requerido para atender oportunamente cualquier infeccin.
Para ello es importante el uso y seguimiento del material de proteccin
proporcionado y el seguimiento estricto de los puntos tratados en este manual de
procedimientos.
CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 70
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 15 JUNIO 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 103 de 12
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI

Para el personal a cargo se debern seguir los siguientes pasos:

Evaluacin mdica posterior a la exposicin.
Documentar como ocurri el accidente.
Identificar y documentar la fuente de sangre o muestra contaminada que
caus el accidente.
Notificar al empleado los resultados de las pruebas y que se hagan las
recomendaciones pertinentes.
Obtener el consentimiento del empleado, para hacer la determinacin del VIH
y VHB; tan pronto como sea posible documentar los resultados del anlisis.
Si el empleado no da el consentimiento para el anlisis serolgico, conservar
la muestra de sangre y convencerlo de la necesidad de realizar las pruebas.

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11 Enero 2012
Pgina 104 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 105 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

CAMBIO

1. Se incluye trabajo no conforme

2. Se incluye formato CAL-71-a
3. Se incluye bitcora de trabajo
CAL-71-b
4. Se incluye formato CAL-71-c

CAL-70

REVISIN

01

FECHA

11/01/2012

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 106 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

OBJETIVO GENERAL

La realizacin del tamizaje de las muestras de plasma de los donadores en

forma de pool para la deteccin del Virus de la Hepatitis C(VHC), el Virus de
inmunodeficiencia Humana (VIH) y el Virus de la Hepatitis B (VHB)

Resumen:
El VHC est considerado como el principal agente etiolgico responsable del 90% al
95% de los casos de hepatitis postransfusional no A no B. El VHC es un virus ARN
monocatenario de sentido positivo con un genoma de aproximadamente 10,000
nucletidos que codifican 3 000 aminocidos. Como es un virus transportado por la
sangre, el VHC puede ser transmitido por la sangre y los productos sanguneos.
Los ensayos serolgicos han conseguido reducir en gran medida la transmisin, pero no
se ha eliminado por completo
El virus de la hepatitis B (HBV) est considerado como uno de los principales agentes
etiolgicos causantes de la hepatitis crnica, aguda, cirrosis y carcinoma hepatocelular.
El virus HBV es un virus ADN circular parcialmente bicatenario con un genoma de
aproximadamente 3200 bases que contiene cuatro marcos de lectura abiertos
solapantes que codifican todas las protenas vricas. Como virus transportado en sangre
el HBV es transmisible, con un riesgo ms alto que el HCV y el HIV, a travs de la
sangre y los productos hemoderivados.
El virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) es el agente etiolgico del sndrome de
Inmunodeficiencia adquirida (SIDA). La infeccin por el HIV puede transmitirse por
contacto sexual, exposicin a sangre o productos sanguneos infectados o por
transmisin de la madre infectada al feto. Dentro de las tres a seis semanas a partir de la
exposicin al HIV, los individuos infectados generalmente desarrollan un sndrome
agudo, breve, caracterizado por sntomas de tipo gripal y asociado con valores elevados
de viremia en la sangre perifrica.

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 107 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

El ARN del HIV puede determinarse cuantitativamente en el plasma utilizando las

tcnicas de amplificacin del cido nucleco, entre ellas la reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR).

La prueba COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR, versin 1.5, usa la tcnica de la PCR
para lograr un mximo de sensibilidad y de lmites dinmicos para la deteccin
cuantitativa del ARN del HIV-1 en plasma anticoagulado con EDTA o ACD.

PRINCIPIOS DEL ENSAYO

La prueba consta de cuatro procesos principales para HBV: preparacin de la muestra;

amplificacin del DNA objetivo usando iniciadores complementarios especficos para el
HBV; hibridacin de los productos amplificados con sondas oligonucletidos especificas
para los objetivos; deteccin de los productos amplificados fijados a las sondas mediante
determinacin colorimtrica.
Para el caso del HIV y HCV la prueba se basa en cinco procesos principales:
preparacin de la muestra; transcripcin reversa del RNA objetivo para generar ADN
complementario(ADNc),amplificacin por PCR del ADNc objetivo usando iniciadores
complementarios especficos para cada marcador; hibridacin de los productos
amplificados con sondas oligonucletidas especificas para los objetivos y por ultimo
deteccin de los productos amplificados fijados a las sondas mediante determinacin
colorimtrica.

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 108 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

PROCESO GENERAL

OBTENCION

DE LA MUESTRA Y CENTRIFUGACION DE LA MISMA

Software DATA SCREEN

FORMACION VIRTUAL DE POOLS Y EMISION DE ETIQUETAS Y LISTA

Software AT WIN / Equipo HAMILTON

FORMACION FISICA DE POOLS Y PLACA DE ARCHIVO

Campana de Flujo Laminar

PROCESO DE EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS

Software AMPLINK / Equipo COBAS

AMPLIFICACION Y DETECCION DE ACIDOS NUCLEICOS

Software AMPLILINK
VALIDACION DE RESULTADOS Y GENERACION DE ARCHIVO
(RESPALDO ELECTRONICO)

Software DATA SCREEN

OBTENCION DE ARCHIVOS PARA INTERPRETACION DE RESULTADOS

Y EXPORTACION AL SIBS (Sistema Informtico de Banco de Sangre)

LOS REPORTES IMPRESO GENERADOS SE GUARDAN 5 AOS EN ACTIVO Y 5 AOS

EN ARCHIVO MUERTO
CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 109 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

OBTENCION DE LA MUESTRA Y CENTRIFUGACION

Se pueden utilizar muestras con EDTA, CPD, CPDA-1, CP2D, ACD-A y citrato de sodio
al 4%. Siga siempre las instrucciones del fabricante de los tubos de muestras.
Para la obtencin de la muestra se proceder de acuerdo al procedimiento CAL-43 para
la obtencin de muestras de donadores.
En este proceso se utilizan muestras con EDTA.
La sangre obtenida con EDTA se puede almacenar a una temperatura de 2 a 30c
(mximo 72 hrs) a partir de su obtencin.
Una vez obtenida la muestra se proceder a separar el plasma de los hemates
mediante centrifugacin a 1600g por 20 minutos.

TRABAJO NO CONFORME:
Se considera trabajo no conforme muestra con:
1. Lipemia
2. Hemolisis
3. Volumen insuficiente
4. Discrepancia en la identificacin
5. No se haya tomado la muestra

En estos casos se tomara un piloto del producto plaquetario o se le llamara al donador

para la toma de la muestra; se realiza la observacin en la bitcora de trabajo CAL-71-b.

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 110 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

Software DATA SCREEN

FORMACION VIRTUAL DE POOLES DE 6 DONADORES, EMISION DE ETIQUETAS
Y LISTA DE TRABAJO
Se ingresa a Data Screen siguiendo los pasos:
1. Encienda la computadora que contiene el software Amplilink.
2. Encienda el equipo Hamilton.
3. Encienda la computadora que contiene el software Data Screen y ATwin.
4. Etiquete los tubos de donadores de acuerdo al sistema de laboratorio.
5. Para abrir el software de Data Screen dar doble clic sobre el icono que se encuentra
en la computadora.
6. Escriba su nombre de usuario (INP)y contrasea (INP) para ingresar al sistema.
7. Dar clic sobre la opcin muestras x 6

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 111 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

8. Para crear una nueva placa de archivo que contendr nuevos pools, dar clic en la
opcin Nuevo.

9. Teclear el cdigo de la placa de archivo que se utilizara (cdigo predeterminado). Este

nmero est compuesto de los ltimos cinco dgitos que conforman la etiqueta para
placas de archivo.
10. Elegir el nmero de pools que se desea realizar en la opcin No de posiciones

11. A continuacin aparecern en la pantalla el nmero de tubos correspondientes al

nmero de pools que se desea realizar.
CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 112 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

12. Pasar por el escner los tubos de los donadores que formaran parte de un solo pool
y colocarlos en el primary rack en la posicin que indica en la pantalla de la
computadora.

13. cuando todos los tubos han sido escaneados, las imgenes de los tubos de pools
debern aparecer con los puntos de amarillo, lo cual indica que la posicin ha sido
ocupada por un donador.

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 113 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

14. Dar clic en el botn de grabar.

15. Cuando el archivo es grabado la opcin cdigo ser activada. Dar clic en cdigos
para imprimir las etiquetas que identificaran a los pools.

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 114 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

16. Pegar las etiquetas de los pools sobre dos tubos Sarstedt.
17. Llenar los datos y pegar las etiquetas en la hoja de trabajo (CAL- 71 a).
CAL-71a

18. Dar click en listados para imprimir el listado de todos los donadores a estudiar.

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 115 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 116 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

19. Salir de Data Screen.

Software AT WIN / Equipo HAMILTON

FORMACION FISICA DE POOLS Y PLACAS DE ARCHIVO

1. . Colocar el primary rack en el equipo Hamilton.

2. Entrar al software dando doble clic en el icono AT Win, escribir su usuario asignado y su
contrasea (ADMIN para ambos casos).

3. Colocar en la placa primaria los tubos de los donadores (tubos primarios) del rengln
A al F y del 1 al 10, los tubos Sarstedt en el regin H del 1al 10 identificados con sus
respectivas etiquetas.
4. Colocar la placa de archivo, identificada con sus respectivas etiquetas.

5. Asegurarse que estn colocadas las suficientes puntas para trabajar.

6. Realizar el Boot Run que sugiere el sistema dar clic en Yes

7. Posteriormente ir al men de Execute y dar clic en la opcin Run Next Method si

se quiere seguir usando el mismo mtodo en caso contrario dar Reset Method
(esto borrar el anterior y se podr elegir otro mtodo deseado).
8. Aparecer la pantalla, en la parte inferior izquierda encontrara el icono Reduce el
cual oprimir encaso de no realizar los 12 pools (si trabaja solo 10 pools), de lo
contrario oprimir el icono START y el sistema se iniciar a trabajar.
9. Si eligi el icono Reduce aparecer otra ventana donde tendr que elegir (dar
click) los renglones que no sern procesados, estos cambiarn a color gris y
posteriormente oprimir el icono Reduce.
CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 117 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

10. Regresar a la ventana inicial, en este momento oprimir START y el equipo

iniciar a trabajar.

11. Al terminar la corrida aparecer una ventana pidiendo escanear automticamente

o manualmente la identificacin de los donadores o pools que no ley el escner
del equipo Usted eligir la opcin manual y aceptar. Usted leer con el escner
estos nmeros.

Con esto termina el proceso de obtencin de pooles. Ir a la campana de flujo laminar.

Cualquier duda consultar el manual del equipo.

CAMPANA DE FLUJO LAMINAR

PROCESO DE EXTRACION DE ACIDOS NUCLEICOS
El proceso de extraccin puede ser de dos formas:
Pre-PCR Preparacin de mltiples muestras.
Pre-PCR Preparacin de muestras individuales (Proceso que usar en caso de
que algn pools fuese positivo se hara la apertura para la identificacin
individual de la muestra positiva).

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 118 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 119 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 120 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 121 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 122 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

Diagrama del Equipo Cobas

Preparacin de reactivos para el equipo COBAS

Se preparan reactivos:

Especficos
Genricos

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 123 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

Reactivos Especificos

Reactivos Genricos

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 124 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 125 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 126 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

VALIDACION DE RESULTADOS
Revisar los resultados generados en los Cobas, por cada control y muestra el equipo
genera dos resultados uno detecta el virus humano (H) y el otro detecta el control interno.
NC= control negativo
PC= control positivo
M0JXRZA= nombre del pol

RESULTADO

INTERPRETACION
DEL RESULTADO

NUMERO
DEL
ANILLO

MUESTRA (S) O
CONTROL(C)
NUMERO DE
POSICION EN EL
ANILLO

CONTROL
- CN
+ CP
- CN
+ CP

CAL-70

HIV
HIH
+

AII
+
+

HCV
ACH
+

ACI
+
+

HBV
ABH
+

ABI
+
+

+
+
+
+
+
+
+
+
+
Cualquier otro resultado la corrida se invalida (se repite el proceso)

CORRIDA
VALIDADA

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 127 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

PROCEDIMIENTO DE CONTROL DE CALIDAD

1. Por cada prueba se deben procesar al menos un control Multiprep (-) y uno (+), y para
cada control su correspondiente control interno.
Para que el Control Negativo sea vlido, la Absorbancia a 660 nm para el MP (-)
C debe ser < 0.1 y la obtenida para el control interno MP IC asociado 0.2.
Para que el Control Positivo sea vlido, la Absorbancia a 660 nm para el MP (+)
C debe ser < 0.1 y la obtenida para el control interno MP IC asociado 0.2.

Resultado para CI (HCV, HIV1,HBV) :

Resultado para:

Control
Negativo
Control
Positivo

HCV
A660

HIV-1,HBV
A660

Comentario

A660

Comentario

<0.1

<0.2

Negativo

0.2

Valido

1.0

1.0

Positivo

0.2

Valido

En caso de no cumplir con algunos de estos criterios se invalida la prueba y se

tendr que repetir todo el proceso de extraccin, amplificacin, desnaturalizacin
y deteccin.
Nota: para informacin ms detallada consultar los insertos correspondientes.

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 128 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

INTERPRETACION DE RESULTADOS:

Resultados para HCV

A660
Comentario
< 0.2
NEGATIVE

Resultados para CI
A660
Comentario
0.2
VALID

< 0.2

NEGATIVE

< 0.2

INVALID

0.2

POSITIVE

CAL.

VALID

Resultados para HIV-1

A660
Comentario
< 0.2
NEGATIVE

Resultados para CI
A660
Comentario
0.2
VALID

< 0.2

NEGATIVE

< 0.2

INVALID

0.2

POSITIVE

CAL.

VALID

Resultados para HBV

A660
Comentario
< 0.2
NEGATIVE

Resultados para CI
A660
Comentario
0.2
VALID

< 0.2

NEGATIVE

< 0.2

INVALID

0.2

POSITIVE

CAL.

VALID

Interpretacin
La muestra es negativa para ARN del HCV
Resultado no vlido, repita el todo procedimiento
para la muestra no vlida
La muestra es positiva para ARN del HCV

Interpretacin
La muestra es negativa para ARN del HIV-1
Resultado no vlido, repita el todo procedimiento
para la muestra no vlida
La muestra es positiva para ARN del HIV-1

Interpretacin
La muestra es negativa para ADN del HBV
Resultado no vlido, repita el procedimiento para
la muestra no vlida
La muestra es positiva para ADN del HBV

Nota: para informacin ms detallada consultar los insertos correspondientes.

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 129 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

VALIDACION, INTERPRETACION Y EXPORTACION DE RESULTADOS

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 71
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 11-Enero-2012
Pgina 130 de 22

PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)

CAL-71-c

Terminado este proceso se proceder de forma manual o automtica (interfaz) el ingreso de los
resultados al SIBS.

Documento asociado CAL-43

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 75
Nivel de Revisin: 1
Fecha:01 Noviembre 2011
Pgina 131 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES
LINFOCITOS

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 75
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 132 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES
LINFOCITOS

CAL-70

CAMBIO

REVISIN

FECHA

Diagramas de flujo

01/11/11

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 75
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 133 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES
LINFOCITOS

Introduccin
El monitoreo de pacientes de diagnstico conocido es llevado a cabo por la
conjugacin de la determinacin de subpoblaciones de linfocitos CD4+; CD8+;
CD3+ & CD 45+ y determinando el porcentaje de ellos, as mismo, establecer el
radio CD8+/CD4+.
Principio de estudio
Anticuerpos monoclonales conjugados con diferentes cromgenos con
especificidad conocida se desafan con clulas de fenotipo desconocido a fin de
establecer la presencia o ausencia con el empleo de citometra de flujo de los
marcadores CD 4+, CD8+, CD45+ y CD3+
Responsabilidades

Jefe del Dpto

Jefe del Lab.
Medico
de
B.S.
Qumico
Laboratorista
Auxiliar

Material..
a) Tubos trucount
b) Pipeta semiautomtica (25 l, 50 l, 1000 l)
c) Puntas para pipeta semiautomtica

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 75
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 134 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES
LINFOCITOS

Tipo de muestra:
a) Biometra hemtica

PROCESO:

6. Recepcin de muestra:
a. Biometra Hemtica
7.

Cuantificacin de cantidad de leucocitos empleando citometra con equipo

para Biometra Hemtica
8. Preparacin de muestra acorde a inserto
9. Antes de usar el citmetro de Flujo, se recomienda:
a. Proceso de lavado largo
b. Calibracin
c. Usar en cada corrida un control

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 75
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 135 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES
LINFOCITOS

A.- Lavado previo al uso del equipo

CVE: BDIS

LAVADO
ENCENDER

REVISAR
PRESION
Cambiar de

ANALIZADOR (LO +
PRIME ; OBSSERVAR
BURBUJAS)

VENT-TANK CHANGE
A
VENT-RUN

CPU

LOADER
MANAGER

MAINTENANCE

MONITOR

DILUYENTE : LLENAR
MAX

IMPRESORA

DESECHOS: VACIAR

TEST OPTION

COLOCAR LOS TUBOS

EN EL RACK COMO SE
INDICA
EN LAS POSICIONES:

EQUIPO
RUN

ESCOGER
LONG

39.. FACS CLEANE

SHORT

40. FACS RINSE

CLEAN

HI

COLOCAR EL
EN EL EQUIPO

RACK

MONITOR

RUN

RUN

ESPERAR A QUE
TERMINE EL
LAVADO

CAL-70

FILE

DONE

QUIT

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 75
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 136 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES
LINFOCITOS

B.- Realizar Calibracin

CALIBRACION (DIARIO O EN CADA USO DEL

INSTRUMENTO)

3) Ir A:
1) PREPARAR DOS TUBOS CON:

A)
B)

1 mL de Facs Flow
3 mL de Facs Flow
Mezclar suavemente las microesferas
CALIBRITE y aadir una gota (invertir
completamente el vial) como se
indica en la siguiente tabla

ICONO DE FACCOMP

INGRESAR NOMBRE DEL USUARIO

FACS FROM
INGRESAR Y/O VERIFICAR CADA UNO
DE LOS # DE LOTE

DE LA SEGUNDA COLUMNA DE LA
CAJA DEL CALIBRADOR (ETIQ.
NARANJA) Y DEL APC ( ETIQ. VERDE)

EN EL CARRUSEL PONER LOS TUBOS

sin tapn EN LAS SIGUIENTES
POSICIONES:

1. TUBO A
2. TUBO B
39. FACS CLEAN
40. FACS RINSE

2) Mezclar por inversin .

EN SOFTWARE :
RUN

CLEAN

NOTA: Es necesario revisar el

inserto para mayor detalle y en
caso de alguna modificacin.

CAL-70

QUIT

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 75
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 137 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES
LINFOCITOS

C.- Preparacin de muestras para conteo de clulas CD4+

CD4/CD8 (AUTOMATICO)

ID Rack
Ingresar #
del Rack

ICONO
WORLIST
MANAGER

BARRA
IZQUIERDA

PANTALLA
PRINCIPAL

Assign
Rack

CD 4 (Un solo
tubo)
MULTISET

LINFOS T / B
(cuando son
tres tubos)

COLOCAR LOS
TUBOS EN EL
ORDEN QUE
SE INDICA. Y

INGRESAR
LOS
DATOS DE
LAS
MUESTRAS

ACEPTAR

SKIP FACS
COMP (Si ya se
realiz la
calibracin
previamente)

Checar que en
el recuadro
derecho este
Multiset

ACEPTAR

EQUIPO

EN LAS
POSICIONES

39.. FACS

OPERADOR

EQUIPO

ACEPTAR

RUN

RUN

HI

CLEANE

40. FACS RINSE

COLOCAR EL
RACK EN EL
EQUIPO

CAL-70

AL FINALIZAR LA CORRIDA DEL

PROGRAMA SE REALIZA EN
AUTOMATICO UN LAVADO DEL
EQUIPO.

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 75
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 138 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES
LINFOCITOS

EQUIPO

CD4/CD8 (MANUAL)
PANTALLA
PRINCIPAL

ICONO

BARRA
IZQUIERDA

OPERADOR

ACEPTAR

MULTISET

Abri---USUARIOS--banco sangre2--MAYO 2008

PANTALLA SET UP
Data Source

FACS COMP

ACEPTAR

From Cytometer:Aquisition with Analysis

Entry Level NamePrefix
Sample name viewReports
Until Next Button Pressed

LAUNCH SKIP
FACS COMP

Automatics SavingOption
Data Files
Facstation: USUARIOS. banco sangre 2

Location

MAYO 2008

Laboratorio

Location

SELECCIONAR
MAYO 2008

Physician Report

Location

Summary Report
Use Date Generated File Name

Location

Export Document
Use Date Generated File Name

QUIT

SELECCIONAR

CAMBIAR LA FECHA SI PERDER

LA TERMINACION

Location

Lot IDs

SUBIR
EL
SEGUNDO TUBO
P/CD8

ACQUIRE

SAVE

ACCEPT

INTRODUCIR
[Link]
Ejemp.:
SOLIS.020508

SUBIR
PRIMER
P/CD4

EL
TUBO

EQUIPO

(CD4-CD8-CD19). Y EN LAS

RUN

39.. FACS CLEANE

CAL-70

COPIAR
RESULTADOS

QUIT

HI

POSICIONES

COLOCAR EL RACK EN
EL EQUIPO

ACQUIRE

ACQUIRE

# Muestra

40 . FACS RINSE

AGITAR
PRIMERO

SUBIR
EL
SEGUNDO TUBO
P/CD19

Panel

Sample ID
# registro

COLOCAR LOS TUBOS EN

EL ORDEN COMO SE
INGRESARON
MOVER
LOS
TUBOS CON EL
CONTROLADOR
MANUAL

Dont Save

CAMBIAR LA FECHA SI PERDER

LA TERMINACION

[Link]

Continue
Absolute Counts
Bead
# lote
# De Perlas

[Link]

AL FINALIZAR LA CORRIDA DEL PROGRAMA SE

REALIZAR UN LAVADO LARGO DE FORMA
MANUAL.

Linfos T CD4,CD8 y
Linfos B

RUN TEST

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 75
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 139 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES
LINFOCITOS

Resultados

Obtencin de resultados impresos en automtico vaciar en el formato

CAL-70

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 75
Nivel de Revisin: 1
Fecha: 01 Noviembre 2011
Pgina 140 de 11

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES
LINFOCITOS

LAVADO EXHAUSTIVO

REVISAR
PRESION
VENT-TANK CHANGE

DESCONECTAR LA
TUBERIA QUE VA AL
FILTRO Y CONECTAR
LA TUBERIA
BLANCA(DEL FACS
FLOW)

EL EL TUBO DE LA
CANULA 3 ML DE FACS
RINSE

DILUYENTE : LLENAR
MAX DE SOL FACS
RINSE

ENCENDER
EL EQUIPO

RUN

HI

DESECHOS: VACIAR

ESPERAR POR
15 MIN.

DESPRESURIZAR

VENT-TANK CHANGE

ENCENDER
EL EQUIPO

EL EL TUBO DE LA
CANULA 3 ML DE AGUA
DESIONIZADA

DILUYENTE : LLENAR
MAX DE AGUA
DESIONIZADA

APAGAR EL EQUIPO

DESECHOS: VACIAR

RUN

HI

ESPERAR POR
20 MIN.

REVISAR

ENCENDER

PRESION

ANALIZADOR (LO +
PRIME ; OBSSERVAR
BURBUJAS)

VENT-TANK CHANGE
APAGAR EL EQUIPO

REGISTROS
Ningn registro asociado

CAL-70

DILUYENTE : LLENAR
MAX DE SOL FACS
FLOW

MONITOR

DESECHOS: VACIAR

IMPRESORA

CPU

PANTALLA
PRINCIPAL

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL-76
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 enero 2011
Pgina 141 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recoleccin y toma de
muestras de pacientes

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL 76
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 enero 2011
Pgina 142 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recoleccin y toma de
muestras de pacientes

CAMBIO

CAL-02-B

REVISIN

FECHA

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL 76
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 enero 2011
Pgina 143 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recoleccin y toma de
muestras de pacientes

DESCRIPCION DEL PROCESO

Para el Banco del Instituto Nacional de Pediatra, una muestra primaria es una muestra de
sangre tomada a un paciente o a un candidato a donar para ser enviada o tomada en el
Banco de Sangre y la cual est destinada para practicarle un examen en el laboratorio del
mismo.
Se le conoce como muestra primaria debido a que es la muestra de la cual se parte para
generar alcuotas para practicar los exmenes
La toma de muestra primaria se efecta por personal del Banco de Sangre especialista en
toma de muestra en base a lo especificado en la solicitud de trabajo.
Para la toma de muestra primaria se toman en cuenta las siguientes consideraciones:
Nombre de la prueba para la que se toma la muestra primaria
Condiciones en las que se debe presentar el paciente previas a la toma de muestra
Tipo y cantidad a tomar de la muestra primaria, con descripciones de los contenedores
de la misma y cualquier aditivo necesario.
El horario ms adecuado para la toma de muestra, si se requiere
La informacin clnica, autorizacin y/o consentimientos cuando se requiera
Las condiciones de preservacin de la muestra primaria
Los requisitos de acondicionamiento de la muestra
Los detalles de transportacin desde los sitios de toma de muestra hasta las reas
analticas
Los criterios de aceptacin para las muestras primarias.

MATERIAL
-

Tubos tipo vacutainer con anticoagulante (EDTA y citrato) y sin anticoagulante.

Guantes
Torundas con alcohol
Agujas estriles de calibre 20 y 21
Jeringas de 5 y 10 ml
Agujas tipo vacutainer

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL 76
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 enero 2011
Pgina 144 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recoleccin y toma de
muestras de pacientes

Camisas para tubo vacutainer

Ligaduras
Gradillas
Contenedor para desechos punzo-cortantes
Mezclador para biometra.

PROCEDIMIENTO
1. Solicitar al paciente o donador una identificacin con fotografa y corroborar los
datos con los de la solicitud y etiqueta y colocarla en el tubo.
2. El personal de laboratorio solicita al paciente y/o donador que tome asiento en la
silla de toma de muestra, y selecciona la vena asignada para puncionar.
NOTA
En caso de observar alguna lesin drmica como datos de mltiples venopunciones (que
podra ser sospechoso de antecedente de administracin de drogas intravenosas,
donacin reciente), huellas de rascado (que podra ser sospechoso de reaccin alrgica
activa o proceso infeccioso local), o dermatitis local (condicionada por infecciones virales
como herpes, verrugas), lo informar al mdico que valorar al candidato a donador para
aceptacin o rechazo de acuerdo a su criterio.

3. El personal encargado de tomar la muestra se coloca guantes para la toma de

muestra, realiza la asepsia, en un rea de 5 cm. aproximadamente en zona de
puncin, realizando una limpieza vigorosa de arriba hacia abajo sin invertir el
orden, utilizando jabn/ alcohol/isodine dejando secar, se liga inmediatamente y no
se vuelve a tocar el rea ya preparada para la puncin, inmediatamente despus
se realiza la puncin de la vena.
MTODO 1 CON JERINGA:
1. Ligar el brazo e introducir la aguja en la vena, para que el sangrado sea ms rpido,
se le pide al paciente o donador que apriete el puo y que no mueva ni doble el brazo.
2. Quitar la ligadura antes de retirar la jeringa, pidiendo al paciente o donador que abra
su puo.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL 76
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 enero 2011
Pgina 145 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recoleccin y toma de
muestras de pacientes

3. Al retirar la aguja, colocar una torunda con alcohol en el sitio de puncin presionando
gentilmente, pidiendo al paciente o donador que mantenga su brazo doblado de 3 a 5
minutos.
4. Trasvasar puncionando la parte central del tapn, vaciar primero las muestras en los
tubos que contienen anticoagulante y despus las muestras en los tubos sin
anticoagulante.
5. Desechar la aguja o jeringa directamente en el contenedor sin taparla.
NOTA: Por ningn motivo se deben tomar muestras solo con aguja, en caso de pacientes
peditricos se debe solicitar apoyo al servicio de pediatra.

MTODO II VACUTAINER:
1. La aguja para el vacutainer es especial ya que se fija a la camisa en forma de tornillo.
2. Al pinchar la vena lo nico que se sujeta es la camisa, para as tener un apoyo al
introducir los tubos en la camisa. se toman primero las muestras que no requieran
anticoagulante y despus las que requieren de ste, sacar el tubo sin retirar la aguja
de la vena, en caso de muestras con anticoagulante, colocarla en el mezclador de
biometras. Procurar no hacer movimientos bruscos para evitar lastimar al paciente o
donador. as mismo nunca se saca la aguja sin haber retirado el tubo totalmente.
3. Al terminar de tomar la ltima muestra se retira la ligadura y pedir al donador o
paciente que abra el puo, retirar la aguja y presionar la vena gentilmente con una
torunda de algodn con alcohol indicndole que mantenga el brazo doblado de tres a
cinco minutos aproximadamente.
4. La aguja se desecha en un envase rgido de plstico (contenedor) que no ofrezca
ningn peligro.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL 76
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 enero 2011
Pgina 146 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recoleccin y toma de
muestras de pacientes

TIPOS DE PRUEBAS, TUBOS EN LOS QUE SE RECOLECTA LA SANGRE Y

VOLUMEN REQUERIDO

TIPO DE PRUEBA

Biometra Hemtica

VOLUMEN
REQUERIDO TEMPERATURA
(ml)

Grupo sanguneo
4-6

Tubo morado
(anticoagulante EDTA)

NAT

4-6

CD4/CD8
4-6

Tubo rojo (sin

anticoagulante) o Tubo
dorado

CARGA VIRAL

4-6

SEROLOGIA

4-6

Las muestras se conservan a temperatura ambientes mientras

se pasan al laboratorio para su anlisis

TUBOS PARA
RECOLECTAR LA
MUESTRA

Una vez que el especialista en toma de muestras obtiene la muestra primaria, la identifica
de manera nica (ID para donadores o nombre del paciente) incluyendo la identificacin
de quin tom la muestra, la fecha y hora de la toma.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL 76
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 enero 2011
Pgina 147 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recoleccin y toma de
muestras de pacientes

Nota: Cualquier desviacin a las condiciones pre analticas para la obtencin de una
muestra adecuada para anlisis, se debe informar al donador y/o paciente y en su
caso repetir la toma, o anotarse en la solicitud.
Los materiales empleados par la toma, son desechados en los contenedores que les
corresponda segn lo marca la norma NOM-087 aplicable a los residuos peligrosos
biolgico infecciosos.
Las muestras son inspeccionadas por el personal que las recibe y en caso de ser
aceptadas para su procesamiento se ingresan en la bitcora y en el sistema de
informtico del laboratorio. Las que no cumplen los criterios de inspeccin se tratan como
PRODUCTO NO CONFORME.
La temperatura de almacenamiento depender del tipo de estudio a realizar:
rea de red fra de 1 a 6 C, -18C o menor en refrigeradores, congeladores o
ultra congeladores.
rea de temperatura ambiente

TRASNPORTE DE MUESTRAS
Es responsabilidad del personal del Banco de Sangre el transporte hasta el rea de
laboratorio del Banco de Sangre de las muestras tomadas en las secciones de:
a) Toma de Muestras perteneciente al Laboratorio Central
b) Toma de Muestras del Banco de Sangre
c) Seccin de flebotoma del Banco de Sangre
procedern de la siguiente forma:
Usando hieleras de plstico o unisel, el personal coloca las muestras previamente
tapadas e identificadas, en la gradilla que se encuentra dentro de la hielera.
La hielera es propiedad del Banco de Sangre, por lo que est identificada como:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL 76
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 enero 2011
Pgina 148 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recoleccin y toma de
muestras de pacientes

Los recipientes secundarios deben llevar las etiquetas de:

Riesgo biolgico
Riesgo secundario (segn caso)
Datos del laboratorio al que van referidos
Datos de orientacin
Seal de orientacin

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL 76
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 enero 2011
Pgina 149 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recoleccin y toma de
muestras de pacientes

NOTA: Para la recepcin de muestras es necesario el uso de guantes.

Quien recibe los contenedores de las muestras verifica que estn bien cerrados.
1. Revisa que se encuentren a la temperatura correspondiente.
2. Revisa que las muestras estn correctamente identificadas.
3. Revisa el correcto llenado de la solicitud de cada muestra.
De detectar anomalas en esta inspeccin no se recibirn las muestras afectadas.

INSPECCION DE LA MUESTRA
El personal Qumico/Tcnico que recibe de muestras primarias, lleva a cabo la inspeccin
de las mismas segn el estudio solicitado tomando como base los siguientes criterios de
aceptacin:
a) Tipo de muestra:
El tipo de muestra debe cumplir con lo indicado en la especificacin del estudio a realizar.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL 76
Nivel de Revisin: 00
Fecha: 03 enero 2011
Pgina 150 de 10

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de recoleccin y toma de
muestras de pacientes

b) Volumen:
El volumen de muestra debe cumplir con lo indicado en la especificacin del estudio a
realizar. Una cantidad excedente o deficiente puede provocar problemas para la
realizacin del (los) examen(es) por lo que en este caso se procede a consultar con el
encargado de realizar al(s) prueba(s).
c) Contenedor
El contenedor en el que se recibe la muestra debe cumplir con lo indicado en la
especificacin del estudio a realizar .
d) Aditivo
El aditivo de la muestra debe cumplir con lo indicado en la especificacin del estudio a
realizar.
e) Temperatura de transportacin y preservacin de la muestra
La temperatura a la que se recibe la muestra debe cumplir con lo indicado en la
especificacin del estudio a realizar.
f) Identificacin de la muestra
Las muestras deben estar identificadas por lo menos con el nombre del paciente, el cual
debe coincidir con el nombre que aparece en la solicitud de estudios.
Si alguna muestra no cumple con los criterios definidos en la especificacin del estudio a
realizar y/o no est identificada, no se recibe en el laboratorio y se le informa al cliente la
razn de ello.
Si la muestra cumple con los criterios, se recibe en el laboratorio, con la solicitud
correspondiente y se registra su entrada en la bitcora y en el sistema de informtica del
laboratorio (SIL)-.

REGISTROS
F-A-14-26
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02- enero-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 1 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:
Nombre:
Nombre:
EBC Ma. Teresa de Lourdes M. en C. Guillermo Escamilla Dra. Dinora V. Aguilar
Flores Camacho
Guerrero
Escobar
Firma:

Firma:

Firma:

Fecha: 2 Enero 2012

Fecha: 2 Enero 2012

Fecha: 2 Enero 2012

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 2 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

CAMBIO

1. Modificacin de crioprotectores
2. Requisitos de recepcin de
Clulas Tallo
3. Se incluye flujograma de
preparacin de equipo para el
proceso.
4. Se incluye flujograma de
RECEPCIN Y PROCESO
5. Se incluye manejo de PNC

CAL-02-B

REVISIN

FECHA

01

2 de enero 2012

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 3 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

ABREVIATURAS

CPH
CPHSP
SP
MO
CMN
C
DMSO
NaCl
N2L
U. V.
BH
Hb
Hto
EDTA
Kg
l
SSF
Dx
Tx

CAL-02-B

Clulas Progenitoras Hematopoyticas

Clulas Progenitoras Hematopoyticas de Sangre Perifrica
Sangre perifrica
Mdula sea
Clulas Mononucleares
Grados Centgrados Celsius
Dimetilsulfoxido
Cloruro de Sodio
Nitrgeno Lquido
Ultra violeta
Biometra Hemtica
Hemoglobina
Hematocrito
Anticoagulante, Etilendiaminotetraactico disdico
Kilogramo
Microlitro
Solucin Salina Fisiolgica al 0.9%
Diagnostico clnico
Tratamiento

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 4 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

Propsito y Alcance
1.1 Propsito
Criopreservar las Clulas Progenitoras Hematopoyticas (CPH) obtenidas mediante
procedimientos de Afresis y en el quirfano; conservando su viabilidad, esterilidad y
funcionalidad.
1.2 Alcance
Todos los usuarios podrn seguir este procedimiento para la criopreservacin y el
trasplante de CPH.
2. Responsables
Personal Responsable del Cumplimiento de este Documento
Puesto
Departamento
Banco de Sangre
Jefe del Laboratorio
Personal adscrito al Laboratorio

CAL-02-B

Banco de Sangre

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 5 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

3. Introduccin

3.1 Antecedentes

La logstica de trasplantes de Clulas Progenitoras Hematopoyticas (CPH)

incluye en la mayora de casos, una etapa de criopreservacin a temperaturas de
196C y en condiciones ptimas garantizan su almacenamiento durante el tiempo que
sea necesario, con la mnima prdida de sus capacidades de autorregulacin y
diferenciacin. Las tcnicas de congelacin ms extendidas utilizan DMSO como
crioprotector para optimizar la viabilidad y funcionalidad de las clulas reduciendo la
proporcin de agua congelada y la deshidratacin intracelular durante el proceso de
congelacin.
La presencia del crioprotector hace que las suspensiones celulares
descongeladas sean hipertnicas y como las clulas responden importando y
exportando agua frente a un cambio de osmolaridad, el retorno a condiciones
isotnicas puede resultar en la superacin de los lmites mecnicos de las membranas
plasmticas por una entrada masiva de agua al citoplasma (choque osmtico). Este
fenmeno es de especial importancia durante la reconstitucin y manipulacin de
clulas descongeladas debido a que la membrana celular es un conjunto de lpidos y
protenas organizados que por debajo de los 20C pierde fluidez, limitando su
resistencia y por tanto su capacidad de respuesta osmtica.

3.2. Condiciones generales para la preservacin de la ultra estructura y funcin

celular
La resistencia al fro y al congelamiento depende de un gran nmero de diferentes
factores. En primer lugar el descenso repentino de la temperatura puede tener un
efecto adverso en ciertas clulas: una forma de CHOQUE TRMICO, que puede ocurrir
tanto por arriba y por debajo del punto de congelamiento. Tambin, la FORMACIN DE
CRISTALES DE HIELO, dentro y fuera de las clulas pueden acarrear un gran DAO
FSICO.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 6 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

Otra consecuencia de la formacin del hielo es un cambio del medio ambiente

extracelular, en donde el congelamiento del agua tiene como resultado un
INCREMENTO EN LA CONCENTRACIN DE SALES de la solucin, elevndose a un
nivel especfico que corresponde al punto.
Un incremento tal en la concentracin de los electrolitos permite la DESHIDRATACIN
CELULAR. Es de notar que las clulas que son ms resistentes, son las mismas que
son ms resistentes en bajar su temperatura.

3.3 Choque trmico

El choque trmico puede ocurrir cuando ciertas clulas son enfriadas demasiado
repentinamente, incluso en la ausencia de cristalizacin. El rango crtico oscila entre +
15 C y 0 C, aunque tambin puede ocurrir entre 0 C y - 80 C. El choque trmico
comienza en la membrana como un resultado de:
Contraccin diferencial de varios componentes de la membrana
Rompimiento mecnico
Cambios conformacionales en la topografa de la membrana
El dao infligido no es dependiente significativamente del perfil CATIONICO en el fluido
extracelular, sin embargo, el perfil ANINICO es mucho ms importante. Los aniones
ms importantes, desde el menos daino al ms daino, son el acetato, cloruro, nitrato,
yoduro y sulfato.
El choque trmico pude ser minimizado por:
Agentes crioprotectores
La presencia de ciertos fosfolpidos (fosfatidil serina)
Enfriamiento lento
Acondicionamiento previo en medios de alta concentracin de sales
3.4 Umbral de deshidratacin
La mayora de las clulas de los vertebrados son susceptibles incluso a una
deshidratacin parcial (tanto a una temperatura normal o baja). Dependiendo del tipo
celular especfico y de la especie, las clulas no pueden tolerar la prdida de ms del
20 al 80% de su lnea basal de contenido de agua, establecindose as un lmite del
umbral de deshidratacin, en el cual las estructuras celulares sufren un dao
irreversible. La correlacin entre la resistencia de las clulas a la deshidratacin y su
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 7 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

resistencia a las bajas temperaturas es un reflejo de los efectos en el balance inico.

Esto es, el incremento en la concentracin de sales que acompaa a la cristalizacin es
el responsable de los efectos ms dainos.
El incremento en la concentracin de sales induce la precipitacin de protenas
daando la estructura lipoprotena de la membrana. Al mismo tiempo, la cristalizacin
de los amortiguadores electrolticos puede inducir grandes cambios del pH. El
incremento en la concentracin de ciertos iones y compuestos tiene efectos txicos en
el interior celular.
El congelamiento tambin puede afectar la naturaleza coloidal del medio intracelular,
un efecto que puede ser reversible o irreversible. El sistema coloidal puede separase
en dos fases distintas con molculas de agua asociadas, siendo eliminadas de las
macromolculas orgnicas de tal manera que posteriormente se agregan y se vuelven
vitrificadas.
3.5 Velocidad de congelamiento y calentamiento
El mtodo ideal del congelamiento y la velocidad ptima de enfriamiento dependen de
varios factores conflictivos, muchos de los cuales son pobremente entendidos. Las
condiciones ideales son a menudo determinadas por pruebas de ensayo y error, dando
como resultado protocolos, en donde se establece la velocidad del enfriamiento; s la
temperatura debera de ser disminuida en intervalos de tiempo; qu agente
crioprotector es empleado; etc. El objetivo es prevenir el choque trmico, los efectos
adversos de la excesiva concentracin de sales, y el dao al medio coloidal de la
clula. En las velocidades de enfriamiento para uso rutinario, la CRISTALIZACIN y el
INCIO (SEEDING) siempre comienzan en el compartimiento extracelular. Esto significa
que el balance osmtico de la clula es perturbado, provocando una deshidratacin
inicial. Una vez que el hielo ha empezado a formarse, un factor importante, con
respecto en mantener la viabilidad durante la subsecuente congelacin, es el
VELOCIDAD DEL CAMBIO DE TEMPERATURA. Esto determina:
La extensin del tiempo de las clulas durante el punto eutctico, por ejemplo, el
tiempo transcurrido en que son expuestas a una alta concentracin de sales
La velocidad de congelamiento intracelular
El tamao y la forma de cualquier cristal de hielo formado.
Si el enfriamiento es lento, el crecimiento de los cristales de hielo en el compartimiento
extracelular es de tal manera que las clulas se contraen y son expuestas a altas
concentraciones de sales. Subsecuentemente, la fase lquida se congela a la
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 8 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

temperatura eutctica. Si el enfriamiento es muy rpido, el agua en el interior de las

clulas forma pequeos cristales de forma irregular que son relativamente inestables.
Si las clulas son descongeladas subsecuentemente muy lentamente, estos cristales
se agregarn a una forma ms grande, formando cristales ms estables, los cuales
pueden causar dao. El incremento en la concentracin de sales que acompaa al
proceso de congelamiento causa contraccin celular, y si contina por encima de cierto
umbral, permite la permeabilizacin de iones en la membrana. Por ello, la VIABILIDAD
CELULAR depende de la velocidad de enfriamiento. La MAYOR SOBREVIDA a una
cierta velocidad disminuir conforme esta velocidad se incrementa. La VELOCIDAD
IDEAL es disminuyendo lentamente la temperatura, que permita a las clulas perder
suficiente agua para prevenir el congelamiento intracelular prematuro. Sin embargo, si
la velocidad es demasiadamente lenta, las clulas sern expuestas a altas
concentraciones de sales por un largo periodo de tiempo. Adems, el rango ideal de
enfriamiento depende del VOLUMEN CRTICO de las clulas que es definido por:
La permeabilidad de la membrana celular al agua
El rea de la superficie de la membrana
La superficie de la clula a su radio de volumen.
En resumen, podra decirse que la ms simple explicacin por el cual una velocidad
ideal de enfriamiento existe para ello, es porque la viabilidad celular depende de dos
factores conflictivos, los cuales dependen de la velocidad del reenfriamiento.
El factor principal que causa la perdida de la viabilidad es la formacin de cristales de
hielo intracelularmente, y especialmente la agregacin de estos cristales durante el
descongelamiento. A una velocidad lenta de enfriamiento la alta concentracin de sales
resultante ejerce efectos adversos cuando el agua intracelular que tiene un alto
potencial qumico- difunde hacia el exterior celular y se congela en el compartimiento
extracelular.
Los PORCENTAJES MS ALTOS DE SOBREVIDA son obtenidos en una variedad de
velocidades de enfriamiento referida como la ZONA DE TRANSICIN, en el cual el
efecto de ambos mecanismos es mnimo.
3.6

Fenmeno a temperaturas bajas

Hay un gran consenso de informacin acerca de los cambios biofsicos y bioqumicos

que ocurren en las clulas vivientes en temperaturas inferiores a los 0 C. Se puede
concluir que, a no ser que la temperatura de almacenamiento sea demasiada baja,
algunas clulas continuarn viviendo y su tiempo de sobrevida depender de su radio
metablico residual que ser lentamente desacelerado a una mayor o menor extensin.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 9 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

A temperaturas entre 0 C y - 40 C, que no es lo suficientemente baja para la

preservacin eficientemente de ciertos tipos celulares, la difusin procede y esto puede
modificar el balance inico en el medio. A temperaturas ms bajas, estas soluciones de
electrolitos son solidificados en eutticos.
La estructura cristalina del hielo puede cambiar tambin (con el crecimiento de cristales
o recristalizacin) resultando en un serio dao fsico a estructuras biolgicas
importantes.
3.7

Preservacin a temperaturas bajas

En el mundo de los seres vivos, la temperatura de -70 C es considerada el umbral de

temperatura ms bajo en el cul ningn proceso vital esta permitido. Cuando se
contempla el almacenamiento a largo o muy largo plazo, temperaturas por debajo de
este umbral deben de ser empleadas.
Muchos investigadores, conservan clulas almacenadas en la presencia de algn
agente crioprotector (por ejemplo, Dimetilsulfoxico [DMSO] o glicero, HES, Albmina),
para prevenir cualquier dao, al momento en que son almacenadas a temperaturas
inferiores de -130 C. En al prctica, es difcil creer que cualquier proceso daino puede
ocurrir todava a esta temperatura que corresponde en la cual el agua se vuelve
vitrificada. Algunas clulas particularmente lbiles, pueden necesariamente
almacenarse a temperaturas extremadamente bajas de -196 C, como es el caso del
NITROGENO LIQUIDO (N2L).
3.8

Medicin de la Temperatura

Debido a que la velocidad de congelamiento y descongelamiento pueden tener un

mayor impacto en la viabilidad de las clulas y tejidos, deben de ser medidas en una
forma cuantitativa. La mejor manera de realizarlo es generar una curva completa que
describa el proceso de congelamiento y descongelamiento. Para esto, lo siguiente
puede ser determinado:
El enfriamiento antes de que el congelamiento inicie (1)
El tiempo de super-enfriamiento (*) y sus parmetros (2)
El inicio de la cristalizacin y la duracin de la meseta de la fase de transicin (3)
El rango en el cual la temperatura desciende despus de la fase de transicin (4)

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 10 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

Esta curva es referida como el PERFIL DE LA TEMPERATURA del sistema en

consideracin y puede ser normalizada a una referencia medible para su fcil
manipulacin. El parmetro ms posible de estimar el rango de enfriamiento, es el
tiempo en que la temperatura cae desde 5 C, (al punto en el cual la mayor parte del
cambio de fase o eutctico procede, con su correspondiente liberacin del calor latente
de fusin) hasta -50C. Sobre este rango, la temperatura tiende a volverse lineal en
funcin del tiempo. Ver figura 1.
(*) SUPER-ENFRIAMIENTO: Durante el proceso de congelamiento, el superenfriamiento constituye una fase importante y crtica del perfil de temperatura. En
trminos prcticos, la manera en que una solucin es enfriada por debajo de su punto
de congelacin puede determinar cmo ocurrir el inicio de la formacin de cristales de
hielo y por ende la forma de cristalizacin.
Figura 1. Perfil de la temperatura durante el proceso de congelamiento controlado.

Congelamiento
ideal
Incremento en la
velocidad de enfriamiento

3.9

Agentes crioprotectores

Las causas principales de la destruccin celular son la formacin de hielo intracelular, y

la exposicin a altas concentraciones de sales. El xito durante el congelamiento
depende en mantener un volumen de agua suficiente en la fase lquida, tanto en los
compartimientos intracelular y extracelular, para mantener los electrolitos en solucin.
El INICIO y la subsecuente CRISTALIZACIN pueden ser inhibidas por la inactivacin
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 11 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

del punto del potencial de condensacin por medio de un ENVENENAMIENTO

QUMICO. Los agentes usados para este fin son capaces de unirse a las molculas del
agua a travs de puentes de hidrgeno y son referidos como CRIOPROTECTORES,
son muy diversos en estructura qumica pero todos actan de la misma manera.
Cualquiera que sea su estructura, todos son muy solubles en agua y por su capacidad
de formar puentes de hidrgeno con las molculas de agua, disminuyen el punto de
congelamiento de cualquier solucin en la cual son incluidos.
La segunda propiedad importante de estos agentes es de que no son txicos a las
clulas. La toxicidad en este caso es ms difcil redefinir a consecuencia de
condiciones externas, tan opuestas a la naturaleza de producto en s mismo. En la
prctica, la toxicidad depende de la concentracin del agente crioprotector, la tonicidad
del medio, y de cmo las clulas estn en contacto con el agente. Las otras variables
que determinan la extensin a la cual un aditivo en particular ser capaz de proteger
las clulas de un sistema biolgico dado dependen de factores tales como el peso
molecular del compuesto y su habilidad de atravesar la membrana celular.
En trminos generales los agentes crioprotectores modulan las propiedades
eutcticas de una solucin de tal manera que la cantidad de hielo formado y en
consecuencia, la concentracin de sales es reducida. Por disminuir el punto de
congelamiento del fluido extracelular, ellos inhiben el flujo de agua intracelular,
previniendo as la disminucin del volumen celular a su mnimo volumen crtico. Por
reducir la retraccin celular, estos agentes atenan la hiperconcentracin del fluido
intracelular y por ello inhiben la precipitacin de las protenas.
En la prctica, una solucin salina isotnica (9 gramos de NaCl por litro) en la
presencia de 1% de DMSO alcanzar una concentracin de 50 g/L a una temperatura
de -5 C. En la presencia de 5% de DMSO, esta concentracin no ser alcanzada
hasta que la temperatura haya descendido a -20 C y a una concentracin de 10% de
DMSO no se alcanzar hasta los -50 C.
La cantidad del dao inducido en las clulas durante el congelamiento depende de dos
factores conflictivos, y ambos dependen de la velocidad de enfriamiento: a velocidades
que son demasiado lentas, altas concentraciones de sales sern generadas, ya
velocidades que son demasiado rpidas, el hielo se formar en el interior de las
clulas. La mxima viabilidad es obtenida por el enfriamiento a una velocidad en la
zona de transicin en el cual el efecto combinado de ambos mecanismos es
minimizado.

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 12 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

Como regla general, el agente crioprotector parece proteger a las clulas a velocidades
de enfriamiento lento en el cual el dao asociado con los EFECTOS DE SOLUCIN
predominan. Basadas en observaciones empricas, se ha demostrado que el resultado
de incrementar la concentracin de un agente crioprotector (por ejemplo, glicerol o
DMSO) en la suspensin celular siendo enfriada a diferentes velocidades, es trasladar
el radio ptimo ms inferior acoplado con un incremento del rango general de
sobrevida, y se ha documentado que los problemas asociados con el congelamiento
intracelular no son afectados por la presencia del agente crioprotector.
Con referencia a la idea de la zona de transicin descrita anteriormente, se pude decir
que el agente crioprotector presente durante el congelamiento, traslada la zona entera
en la direccin de rangos ms bajos por disminuir el umbral asociado con el dao
causado por la combinacin de las altas concentraciones de sales y del hielo
intracelular.

4. Instrucciones y procedimiento
Los factores crticos en este procedimiento son:
La suspensin celular:
o La suspensin inicial de una muestra de CPH obtenida de sangre
perifrica movilizada no debe de exceder de 2-3 x 10 7 clulas/ ml.
El medio crioprotector:
o El medio crioprotector puede variar, se recomienda que contenga una
fuente nutritiva (albmina humana, suero o plasma), en una concentracin
final del 10%.
o El agente crioprotector de eleccin es el DMSO a una concentracin final
del 10%.
o Se parte de una solucin crioprotectora con DMSO al 20%. Se mezclan
un volumen de cosecha de CPH con uno de solucin crioprotectora. La
concentracin final del DMSO ser 10%.
NOTA: La adicin del DMSO debe de realizarse lentamente y a
una temperatura de 4 C.
o Una vez terminada la mezcla, se transfiere a una bolsa de congelamiento
de material plstico no lipoflico (poliolefina/ o tefln-kapton) para evitar el
dao a las membranas celulares, y adems debe de ser lo
suficientemente resistente a bajas temperaturas (-196 C).

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 13 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

o La bolsa se introduce en un soporte de aluminio que mantenga

comprimidas ambas superficies, proporcionando as un espesor y forma
homognea de la muestra que facilite un correcto intercambio de calor.
El programa de congelamiento:
o El programa de congelacin puede variar, pero en trminos generales
debe incluir primero una fase de estabilizacin a una temperatura de 4 C,
seguida de un descenso constante de la misma a un ritmo de 1-2 C/min.
En el momento previo al punto eutctico, se debe de inducir un descenso
prolongado de la temperatura de la cmara para compensar la liberacin
del calor latente de fusin e inducir el proceso de nucleacin. Una vez
superada la fase de transicin, el ritmo de enfriamiento debe de
permanecer constante entre 1-2 C/min.
El sistema de almacenamiento:
o Las clulas congeladas pueden almacenarse en un contenedor de N2L, en
su fase lquida, donde la temperatura se mantiene constante a 196 C.
Si la muestra se mantiene en la fase gaseosa, la temperatura puede
oscilar entre 100 C y 140 C.
NOTA: El tiempo mximo de almacenamiento bajo estas
condiciones se desconoce con exactitud (pero se han llegado a
reinfundir productos almacenados durante 15 aos, con resultados
satisfactorios).
4.1 Observaciones
El dimetilsulfoxido es potencialmente txico para las clulas en temperaturas por arriba
de 0 C, por ello la adicin del DMSO y los pasos subsecuentes deben de realizarse lo
ms rpido posible y todo el procedimiento, tanto en la preparacin de los reactivos,
como en la preparacin de las muestras biolgicas se deben de mantener a una
temperatura de 4 C y con asepsia en la campana de flujo laminar.
En el laboratorio se han realizado experimentos de criopreservacin usando la prensa
para la bolsa criognica, incluida en el equipo CryoMed Freezeer, el casete de aluminio
(canister), y los sensores de temperatura, superficial o dentro de la muestra, con lo cual
hemos observado que el proceso se ve afectado por estas configuraciones y por tal
motivo es necesario elegir el programa adecuado al momento de criopreservar las CPH
segn la manera que se elija al congelar las muestras.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 14 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

4.2 Material y equipo requerido para criopreservar CPH

1. Bata quirrgica
2. Cubre bocas
3. Gorro quirrgico
4. Guantes estriles
5. Campos estriles
6. Tijeras inoxidables estriles
7. Pinzas inoxidables estriles (Rocher)
8. Gasas estriles
9. Torundas de algodn (jabn, alcohol, isodine)
10. Alcohol isopropilico al 70%
11. Desinfectante (glutaraldehdo, fenol al 5%, o formaldehdo)
12. Isodine
13. Frascos estriles (100 ml) o matraz Elermeyer de 250 ml
14. Probeta graduada estril (100 ml)
15. Acopladores para toma de muestras (Sampling Site Couplers, Fenwal 4C-2405)
16. DMSO estril (Sigma, Cat D-2650) o USP (Sigma, Cat. D-1435)
17. Jeringas desechables estriles de 5, 10, y 20 ml
18. Agujas estriles del No, 18 G
19. Bolsa criognica de 250 ml (OriGen, Cryostore, Cat. CS 250n)
20. Casete de aluminio (Canister) para bolsa criognica a 4 C
21. Equipo para congelamiento controlado CrioMed Freezer
22. N2L a baja presin (22 PSI dewars)
23. Guantes criognicos
24. Frascos para hemocultivo y de hongos/micoplasma (peditricos, 1-3 ml)
25. Tubos para Biometra Hemtica (BH)
26. Hielo frppe
27. Refrigerantes envueltos en papel
28. Azul Tripano al 0.4%
29. Cubre y porta objetos
30. Microscopio ptico
31. Sellador dielctrico
32. Bolsas para desechos
33. Etiquetas de identificacin
34. Crioviales estriles
35. Campana de Flujo Laminar
36. Depsito para almacenamiento con N2L, Cryoplus 2
37. Formato del material necesario para criopreservar CPH (Formato I)
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 15 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

38. Formato de registro del procedimiento para criopreservar CPH (Formato II)
39. Marcos metlicos (Racks) numerados
40. Diagrama del sitio de almacenamiento en el depsito de N2L.
41. Pipetas automticas de 200 y 1000 l
42. Puntas para pipetas automticas de 200 y 1000 l
43. Solucin Salina Fisiolgica
4.3 Espcimen a criopreservar
Clulas progenitoras hematopoyticas (alognicas o autlogas) movilizadas de
sangre perifrica y obtenidas mediante afresis.
Mdula sea autloga obtenida en quirfano.
Si es necesario, la suspensin celular es primero concentrada en forma manual o por
una tcnica automatizada (seguir el procedimiento apropiado).
4.4 Procedimientos previos a la criopreservacin de CPH
4.4.1 Realizar la limpieza y desinfeccin de la campana de flujo laminar.
4.4.2 Realizar la esterilizacin con Luz ultravioleta (U.V.) del material que no se puede
esterilizar con vapor usado en la campana de Flujo laminar (por ejemplo, bolsas
criognicas, DMSO, tubos de BH, etc.), dejar 15 minutos dentro de la campana de flujo
laminar y encender la lmpara de luz U.V. Colocar un letrero que indique que la luz
U.V. est encendida.
4.4.3 Solicitar el plasma del paciente (aprox. 100 ml) obtenido durante la afresis al
equipo de enfermera y mantenerlo a 4 C.
4.4.4 Rotular las bolsas criognicas y el casete de aluminio (canister).
[Link] Colocar una etiqueta de identificacin en la porta-etiqueta de la bolsa
criognica. Sellar con el sellador dielctrico en varios puntos la portaetiqueta sin sellarlo completamente.
[Link] La informacin de la etiqueta debe contener:
Nombre del donador
No. de unidad o identificacin (por ejemplo, expediente)
Fecha
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 16 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

Producto celular (por ejemplo, CPHSP alognica, MO o CPHSP autloga

reducida), si es autloga: SOLO PARA USO AUTOLOGO
No. de secuencia de la bolsa criognica, (por ejemplo, 1 de 3)
[Link] Apartar las bolsas criognicas hasta que se necesiten.
[Link] Rotular una bolsa criognica como bolsa control y apartarla hasta su uso.
[Link] Rotular los frascos de cultivo, BH y crioviales con la informacin del paciente.
[Link] Rotular el casete de aluminio (canister) con una etiqueta con la
de paciente.

informacin

[Link] Verificar el nivel de N2L. Abrir la vlvula del N2L, y encender el equipo
congelamiento y elegir el programa que va ser utilizado.

de

[Link] Colocar el casete de aluminio (canister) en el congelador hasta su uso.

[Link] Anotar el nmero de lote, la fecha de caducidad y la casa comercial del DMSO
y de las bolsas criognicas en el Formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE
CRIOPRESERVACIN DE CPH (Formato II).
4.5 Procedimiento para criopreservar
4.5.1 Pesar la bolsa que contienen las CPHSP al terminar su recoleccin. Restar el
peso de la bolsa vaca (bolsa transfer de 600 ml de equipo CobeSpectra = 32 g; bolsa
de recoleccin de equipo CS-3000 = 25 g) y dividir el resultado entre la densidad
especfica de las CPH (d= 1.066) para obtener el volumen aproximado de la cosecha
de CPH. Con este valor se puede calcular la cantidad de bolsas criognicas que sern
necesarias para la criopreservacin de CPHSP.
Ejemplo,

Peso de la bolsa con CPHSP =

Peso de la bolsa transfer de 600 ml =

Densidad especfica de las CPHSP =

CAL-02-B

133 g
32 g
- __________
101 g CPHSP

1.066 g/ml
__________
94.74 ml de CPHSP

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 17 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

En la siguiente tabla se muestran el volumen mnimo y mximo permitido al

criopreservar CPH en las bolsas criognicas de diferentes capacidades (Nota. Los
datos fueron tomados de las bolsas Cryostore de Origen Biomedical, pero se puede
aplicar a cualquier bolsa con las mismas dimensiones y capacidades).

Cdigo del
Producto

Volumen, a
congelar
Min - Max

Volumen
Nominal

Largo,
cm

Ancho,
cm

CS 50

10 a 20

50

11.4

7.6

CS 250

30 a 70

250

15.2

12.7

CS 500

55 a 100

500

19.0

12.7

Tomando en cuenta la capacidad de las bolsas criognicas, el volumen de CPH se

dividira en 3 bolsas criognicas con un volumen de 31.58 ml (ms un volumen igual de
solucin crioprotectora con DMSO al 20%).
[Link] Si el volumen de la cosecha es mayor a 140 ml, el volumen deber ser
reducido, segn el protocolo establecido en el Servicio de Medicina
Transfusional.
4.5.2 Si el volumen de la cosecha es igual o menor a 140 ml, colocar la bolsa dentro de
la campana de flujo laminar. Realizar la asepsia de uno de los puertos de entrada y
colocar un acoplador de toma de muestra en el
puerto y realizar su asepsia
correspondiente. Si no se cuenta con dicho acoplador, realizar la asepsia del tubo de
recoleccin de la bolsa de CPH para puncionarlo con una jeringa con aguja del calibre
18 G. En este momento se puede realizar la asepsia de los puertos de entrada de las
bolsas criognicas y de los frascos de hemocultivo. De igual forma, realizar la asepsia
de un extremo de tubo de la bolsa del plasma para poder tomar el volumen indicado
para preparar la solucin crioprotectora.
4.5.3 Usando una jeringa de 5 ml con aguja del calibre 18G retirar 2 ml de la
suspensin celular y depositar 1 ml en un tubo de BH (Tubo morado con EDTA),
rotulado previamente. Realizar el recuento celular en el equipo CellDyn 3500 y
determinar el nmero de clulas Mononucleares en la muestra. Inocular 1 ml de la
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 18 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

suspensin celular a un frasco de hemocultivo, rotulado previamente como precongelamiento o pre-DMSO.

4.5.4 Tomar las jeringas de 20 ml con aguja del calibre 18G y llenar completamente a
un volumen de 20 ml cada una. Usar las jeringas necesarias para recolectar el volumen
total de CPHSP. La ltima jeringa contendr menos de 20 ml.
4.5.5 Tapar la aguja con su capuchn cuidadosamente y retirar la aguja de la jeringa
(desechar la aguja en un contenedor de punzo cortantes). Unir cada jeringa a una bolsa
criognica. Dispensar la suspensin celular hacia la bolsa, dejando la jeringa unida.
Comenzar con la bolsa criognica # 1.
4.5.6 Repetir el procedimiento con las otras jeringas y bolsas criognicas como en el
paso 4.5.4.
4.5.7 Anotar el volumen de cada bolsa criognica en el formato del REGISTRO DEL
PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN DE CPH (Formato II).
4.5.8 Dispensar a la bolsa control un volumen igual al de la bolsa de CPH con mayor
cantidad de la solucin control (se puede utilizar plasma).
4.5.9 Colocar las bolsas criognicas entre los refrigerantes e incubar durante 30
minutos.
4.5.10 Calcular la cantidad de la mezcla crioprotectora (plasma autlogo con DMSO al
20%) para que al ser mezclada 1:1 con las CPH su concentracin final sea del DMSO
al 10%.
[Link] Volumen de cosecha de CPH + volumen bolsa control = volumen de
solucin crioprotectora + 10 ml de excedente. Ejemplo: 70 ml para CPH + 20 ml
para la bolsa control = 100 ml de solucin
crioprotectora (90 ml para bolsas + 10 ml
excedente). Por lo tanto se
prepara de Solucin crioprotectora = 80 ml de plasma
+ 20 ml DMSO.
En la siguiente tabla se muestran los clculos de diferentes volmenes
crioprotectora:

CAL-02-B

de

solucin

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 19 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

Valores de DMSO-Plasma para la medicin exacta del DMSO al 20%

Volumen Total (ml) =
DMSO
+
Plasma
5
1
4
10
2
8
15
3
12
20
4
16
25
5
20
30
6
24
35
7
28
40
8
32
45
9
36
50
10
40
55
11
44
60
12
48
65
13
52
70
14
56
75
15
60
80
16
64
85
17
68
90
18
72
95
19
76
100
20
80
105
21
84
110
22
88
115
23
92
120
24
96
125
25
100
130
26
104
135
27
108
140
28
112
145
29
116
150
30
120
160
32
128
170
34
136
180
36
144
190
38
152
200
40
160
250
50
200
300
60
240
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 20 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

[Link] Anotar el volumen de la solucin crioprotectora de cada bolsa criognica en

el Formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE
CRIOPRESERVACIN DE
CPH (Formato II).
[Link] Anotar el volumen total de cada bolsa en el Formato del REGISTRO DEL
PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN DE CPH (Formato II).
Volumen Total = volumen de CPH + volumen de solucin crioprotectora.
4.5.11. Colocar un reloj con alarma a los 30 minutos y otro a los 20 minutos.
4.5.12 A la alarma de los 20 minutos preparar la solucin crioprotectora. Con la probeta
estril medir la cantidad del plasma autlogo fro (a 4 C) y depositarlo en un frasco
estril en hielo. Con una jeringa de 20 ml tomar la cantidad necesaria de DMSO y
adicionar al plasma mezclando perfectamente para evitar desnaturalizar las protenas
del plasma debido a la reaccin exotrmica.
4.5.13. Iniciar el programa correspondiente del congelador programable y permitir que
se enfre a 4 C.
4.5.14 A la alarma de los 30 minutos tomar con una jeringa de 20 ml la cantidad
necesaria de la solucin crioprotectora. Retirar la jeringa vaca de la suspensin de
CPH, y en su lugar colocar la jeringa de la solucin crioprotectora: Secuencialmente y
con prontitud adicionar la solucin crioprotectora en cada bolsa criognica, empezando
con la bolsa control y posteriormente a las bolsas con las CPH, mezclar perfectamente
las clulas. Usar el mbolo de la jeringa para retirar la mayor cantidad posible de aire y
tomar aproximadamente 2.5 ml de la mezcla. Colocar 0.5 ml en un criovial rotulado, 1
ml en el tubo de BH, rotulado previamente como post-DMSO, para corroborar su
viabilidad. Mantener el tubo a 4 C. Inocular 1 ml de la mezcla en el frasco de
hemocultivo, rotular como post-DMSO.
4.5.15 Sellar la lnea de la bolsa criognica que contiene la jeringa tres veces con un
sellador dielctrico. Cortar con unas tijeras en medio de la lnea sellada y desechar la
lnea unida y la jeringa. Secar rpidamente cada bolsa criognica y colocarlas adentro
del casete de aluminio (canister) previamente enfriado a -20 C; por ejemplo, colocar la
bolsa #1 en el casete (canister) #1. Cuando corte la lnea sea cuidadoso en no dejar
cualquier gota de CPH en el rea de sellado. Las clulas en un extremo abierto de la
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 21 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

lnea despus del sellado debe de ser evitado a causa de que puede contaminar el N2L
en el tanque de depsito. Ver observaciones para otras opciones para congelar las
bolsas criognicas usando una prensa para congelamiento del equipo CryoMed
Freezer.
4.5.16 Colocar los casetes de aluminio (canister) y el criovial en la cmara de
enfriamiento. Distribuir individualmente los casetes de aluminio (canister) en una
gradilla metlica para que se lleve a cabo el proceso en las mismas condiciones el
congelamiento.
4.5.19 Coloque la bolsa control dentro de un casete de aluminio (canister) e inserte el
sensor de la temperatura en uno de los puertos de muestreo. Tener cuidado de no
dejar aire para evitar un registro inadecuado del proceso de congelamiento. Cerrar con
cuidado el casete de aluminio (canister) para evitar maltratar el sensor de la
temperatura, y colocarlo en la gradilla metlica. Ver observaciones para otras
opciones para congelar las bolsas criognicas usando una prensa para
congelamiento del equipo CryoMed Freezer.
4.5.20 Cerrar la puerta de la cmara de enfriamiento y oprimir el botn de RUN del
equipo. Registrar el programa utilizado para el congelamiento controlado y el tiempo de
inicio
en
el
Formato
del
REGISTRO
DEL
PROCEDIMIENTO
DE
CRIOPRESERVACIN DE CPH (Formato II).
4.5.21 Al final del proceso de congelamiento presionar el botn STOP para silenciar la
alarma del equipo. Registrar el tiempo final en el Formato del REGISTRO DEL
PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN DE CPH (Formato II).
4.5.22 Abrir la puerta de la cmara de enfriamiento, remover los casetes de aluminio
(canister) y el criovial de las CPH y colocarlos en el depsito de almacenamiento con
N2L en la fase de lquida o de vapor. Anotar el No. del marco metlico (rack), el lugar
en el marco metlico (rack), la fase de almacenamiento de N 2L, y el sitio dentro del
depsito de N2L en el Formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE
CRIOPRESERVACIN DE CPH (Formato II), segn el siguiente diagrama:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 22 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

Esquema de la localizacin dentro del contenedor de N2L:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 23 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

Esquema de la localizacin dentro del marco metlico (Rack):

4.5.23 Imprimir la grfica del registro de temperatura y rotular con la identificacin del
paciente. La carta de congelamiento ser parte del registro permanente del proceso. La
grfica del congelamiento no deber mostrar un cambio inusual o inesperado en la
temperatura. La curva apropiada del calor latente de fusin deber de estar por debajo
de 0C.
4.5.24 Cerrar la puerta de la cmara de enfriamiento y accionar el botn de
calentamiento (warm) para descongelar la cmara. Al terminar, retirar la bolsa control y
almacenarla a -20 C y apagar el equipo de congelamiento.
4.5.25 Limpiar la campana de flujo laminar y tirar todo el material desechable en las
bolsas correspondientes.
4.6 Procedimiento para determinar el No. De CMN de las CPH
4.6.1 Encender el equipo para Biometra Hemtica.
4.6.2 Evaluar los controles alto, normal y bajo, y establecer si el equipo no muestra
valores fuera del rango para dichos controles. Si algn valor est por afuera de estos
rangos ser necesario calibrar el equipo segn el manual del usuario.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 24 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

4.6.3 Procesar por duplicado la muestra rotulada como pre-DMSO que se obtuvo de la
cosecha de CPH. Si los valores estn por encima del rango de deteccin del equipo
diluir la muestra de CPH 1:10 con SSF. Obtener el promedio de los valores y
reportarlos en el formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE
CRIOPRESERVACIN DE CPH
4.6.4 Calcular el No. De CMN presentes en la muestra y la dosis / Kg de peso, como
sigue:
Leucocitos Totales = valor de leucocitos obtenido del Cell-Dyn (K/l) x 1000000 x
Dilucin (si se realiza) x Volumen de la cosecha.
CMN Totales = % de Linfocitos Cell-Dyn + % de Monocitos Cell-Dyn 100 x Leucocitos
Totales.
Dosis de CMN/Kg = CMN totales peso del donador.
Anotar los resultados en el formato del REGISTRO DEL
PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN DE CPH (Formato II).
4.7 Procedimiento para determinar la viabilidad celular de las CPH
4.7.1 Material requerido:
1. Portaobjetos
2. Microscopio ptico
3. Pipeta automtica de 50 l
4. Puntas para pipeta automtica
5. Tubos de ensayo de 12 x 75 mm
6. Cmara de Neubauer
7. Cubreobjetos para cmara de Neubauer
4.7.2 Reactivos
Azul de Tripano al 0.4 %
4.7.3 Procedimiento
[Link] Verificar que el material este completamente limpio.
[Link] Rotular un tubo de ensaye de 12 x 75 mm con el nombre Donador y CPHcosecha Donador.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 25 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

[Link] Rotular otro tubo de ensaye de 12 x 75 mm con el nombre del Donador y CPH
post-DMSO.
[Link] Adicionar a cada tubo 50 l de la CPH de la cosecha y de la muestra postDMSO, respectivamente.
[Link] Adicionar en cada tubo 50 l de la solucin de Azul Tripano al 0.4% y mezclar
perfectamente.
[Link] Adicionar la muestra en la cmara de Neubauer y contar el nmero de clulas
vivas y muertas con el microscopio ptico (40X). En caso de no mtener marcador de
viabilidad o anticuerpo monoclonal 7 ADD.
[Link] Reportar el porcentaje de viabilidad de las muestras.

4.8 Limpieza y asepsia de la campana de flujo laminar

Debido a que las CPH son recolectadas en un ambiente abierto y porque muchos de
los pasos de su procesamiento no pueden ser realizados en un sistema completamente
cerrado, hay numerosas oportunidades para la contaminacin con microorganismos.
Por esto, se debe asumir un mtodo estricto de asepsia que deber de ser realizado en
el rea de trabajo dentro de la campana de flujo laminar. Cultivos bacterianos y de
hongos debern de ser realizados en las diferentes etapas del procesamiento para
determinar si cualquiera de las tcnicas y/o materiales en uso estn comprometiendo la
pureza del las CPH.
4.8.1 Material y equipo requerido
1. Solucin de limpieza Dextran-Hipoclorito de Sodio
2. Solucin desinfectante PRESEPT (Code Nr. SPW50, Johnson &
Johnson).
Disolver una tableta de 5 g en 3 litros de agua.
4. Alcohol al 70%
5. Fenol al 5 %
6. Guantes desechables
7. Cubrebocas
8. Lentes de Proteccin.
9. Gasas estriles
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 26 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

4.8.2 Procedimiento
[Link] Encender la luz de la campana de flujo laminar y realizar la limpieza de la
superficie del piso, techo y paredes de la campana con la solucin de DextrnHipoclorito de Sodio.
[Link] Realizar la desinfeccin de las cuatro paredes de la campana con la solucin
PRESEPT.
[Link] Humedecer las gasas estriles con etanol al 70 % y pasar por toda el rea de
trabaja dentro de la campana.
[Link] Con la ayuda de las gasas estriles desinfectar toda el rea de la campana con
la solucin de Fenol al 5 %. Dejar actuar por 15 minutos.
[Link] Encender el motor de la campana y dejar durante 30 minutos como mnimo.
Posteriormente encender la luz U.V. y dejar actuar durante 15 minutos. Colocar un
letrero indicando que la luz U.V. est encendida.
[Link] Apagar la Luz U.V. A partir de este momento se puede trabajar en la campana
de flujo laminar, procurando evitar salirse del rea estril, as como tambin, evitar
movimientos bruscos para no provocar flujo de aire hacia el interior de la campana.
4.9 Verificacin de la esterilidad del proceso
Mantener la esterilidad es una consideracin importante en el procesamiento y
criopreservacin de las CPH. Se ha reportado contaminacin en pacientes que han
recibido trasplantes alognicos y autolgos. Los microorganismos identificados fueron
flora normalmente encontrada en la piel.
La contaminacin puede ocurrir durante la coleccin de las CPH y en varias etapas
durante el procedimiento. La disponibilidad de sistemas semicerrados de recoleccin
reduce oportunamente la contaminacin, sin embargo la esterilidad debe de ser
monitoreada con cultivos bacterianos y de hongos. La identificacin del organismo
y su sensibilidad debera de ser realizada en los cultivos que resultaran positivos.
Aunque el mayor propsito de esta prueba es la proteccin del paciente, tambin
suministra informacin epidemiologa til acerca de las actividades de laboratorio y del
trasplante en general.
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 27 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

4.10 Procedimiento para descongelar CPH criopreservadas

Las CPH criopreservadas son descongeladas en un bao mara a 37 40 C
inmediatamente antes de infundirlas y administrarlas a travs de un catter central. Es
posible diluir y/o lavar las CPH antes de la infusin en orden de remover el DMSO, pero
esta operacin es rara vez realizada. Aunque la infusin de DMSO ha sido asociada
con cierta toxicidad incluyendo nauseas, vmitos, rubor, incremento en la frecuencia
cardiaca y presin sangunea, y elevacin de las transaminasas en suero, muchos
investigadores creen que la manipulacin de las CPH descongeladas pueden resultar
en la prdida celular inaceptable. Las CPH pueden ser tanto infundidas directamente
de la bolsa a travs de un equipo de administracin, o removidas de la bolsa con una
jeringa e inyectada hacia la lnea central.
4.10.1 Material necesario
Bao Mara
Cronmetro
Agua estril
Solucin de limpieza Dextran-Hipoclorito de Sodio
Solucin desinfectante PRESEPT (Code Nr. SPW50, Johnson & Johnson)
Disolver una tableta de 5 g en 3 litros de agua.
Alcohol al 70%
Fenol al 5 %
Refrigerantes
Tubos de vidrio de 12x75 mm
Frascos para Hemocultivo y Hongos
Microscopio ptico
Porta y cubre objetos
Azul de tripano al 0.4%
Campos quirrgicos
Contenedor de N2L porttil
Ropa quirrgica
Gasas estriles
Tijeras estriles
Acoplador para toma de muestra
Jeringas desechables estriles de 10 y 20 ml
Agujas estriles del calibre 18 G
Torundas de alcohol e isodine
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 28 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

Guantes estriles
Cubrebocas
4.10.2 Procedimientos previos para descongelar las CPH
[Link] Localizar en el depsito de almacenamiento de N2L las bolsas criognicas con
las CPH correspondientes al paciente que va a ser reinfundido. Verificar perfectamente
que los datos de las bolsas concuerden con los datos del paciente que se va a
transfundir,
[Link] Determinar la cantidad de CMN y/o clulas CD34 de cada bolsa criognica.
[Link] Transferir los casetes de aluminio (canister) de la fase lquida a la fase
gaseosa del depsito de N2L, por lo menos 12 horas antes de la reinfusin.
4.10.3 Procedimiento
[Link] Realizar la limpieza del Bao Mara con la solucin de Dextran-Hipoclorito de
sodio.
[Link] Realizar la desinfeccin del Bao Mara con la solucin desinfectante
PRESEPT con la ayuda de gasas estriles.
[Link] Realizar la asepsia del Bao Mara con una solucin de Fenol al 3 %. Dejar
actuar por espacio de 30 minutos.
[Link] Cubrir el Bao Mara con un campo quirrgico y trasladar el bao a pie de
cama del paciente al que se van a reinfundir las CPH.
[Link] Localizar las CPH criopreservadas y acomodar las bolsas de mayor a menor
concentracin de CPH en el depsito de N2L porttil, el cual contiene N2L Trasladar el
contenedor al rea donde se llevar a cabo la reinfusin.
[Link] En el rea donde se llevar a cabo la reinfusin, conectar el Bao Mara a una
toma de corriente elctrica. Adicionar agua estril al bao y dejar que alcance la
temperatura de 40 C. Adicionar al un antisptico.
[Link] A la indicacin del Mdico responsable, seleccionar la primera bolsa con
mayor concentracin de CPH del contenedor porttil de N 2L y verificar una vez ms los
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 29 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

datos de identificacin de la bolsa y del paciente. Introducir la bolsa al Bao Mara y

con una leve agitacin dejar que se descongele aproximadamente 1 minuto y 50
segundos. Este tiempo puede variar segn el volumen de las CPH y de las
caractersticas de la bolsa criognica. NOTA: No descongelar completamente las
CPH, sino hasta el punto en que se note la apariencia de una moneda de 10
pesos en el centro de la bolsa.
[Link] Retirar la bolsa criognica del Bao Mara y colocarla entre dos refrigerantes.
Realizar la asepsia de uno de los puertos de entrada con las torundas de alcohol e
isodine e insertar el equipo de transfusin para su reinfusin en el paciente. Otra opcin
sera, colocar un acoplador de toma en el puerto de entrada y con la ayuda de una
jeringa de 20 ml con aguja del calibre 18 G, tomar las CPH e iniciar la reinfusin en
alguna de las lneas de soluciones que tenga el paciente.
[Link] Vigilar los signos vitales y reacciones que pudiera presentar el paciente.
[Link] Realizar el mismo procedimiento, pasos [Link] a [Link], para cada una
de las bolsas criognicas restantes.
[Link] En cada una de las bolsas realizar la asepsia de una esquina y cortar con las
tijeras estriles un extremo de las bolsas. Tomar el sobrenadante remanente de las
CPH para realizar los cultivos bacterianos (hemocultivo y hongos) y la viabilidad de las
CPH despus de descongelarlas. El DMSO es toxico para las CPH a temperaturas
mayores de 4 , por tal motivo, conservar todas las muestras en los refrigerantes.
Requisitos de recepcin de Clulas Tallo
Una vez que llega la bolsa de recoleccin el rea de criopreservacin deber de
traer:
1.- Nombre del Donador
2.-Nombre de Paciente
3.- Nmero de la unidad asignada
4.- Volumen de obtenido
5.- Equipo en donde fue recolectada
6.- Marca de la bolsa de recoleccin
7.- Fecha de caducidad
8.- Nmero de Lote
9.- Tubo de biometra hemtica previa a la recoleccin
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 30 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

10.- Resultado de la biometra Hemtica

11.- Resultado de CD 34, CD 45 y 7 ADD
12.- Resultado de Serologa
o Nota estos requisitos son indispensables para la separacin automtica y
manual

METODO MANUAL PARA LA REDUCCIN DE VOLUMEN

Este mtodo lo usaremos en caso que el Sepax no pueda ser utilizado debido a que
tenemos mayor volumen de muestra que rebase las especificaciones del fabricante.
Es muy importante pesar la bolsa de recoleccin vaca y llena
En la campana de flujo laminar previa limpieza con alcohol al 70% e irradiacin de 15 a
20 min llevar la bolsa de recoleccin para limpiar toda la bolsa especialmente las lneas
Poner el acoplador a la bolsa de recoleccin (jeringa de 60 m de preferencia) se extrae
un volumen y se vaca en tubos Falcon de 50 ml, estriles, se tapa y se centrifuga por
15 min a 4 C a 3500 RPM.
En la campana, abrir la tapa de tubo Falcon extraer el Plasma dejando alrededor de 5
ml. Dar pequeos golpecitos para despegar las clulas de la pared del tubo y
resuspender con un poco de plasma, tratando de recuperar el mayor nmero de clulas
posibles . Con una jeringa de 60 0 20 ml y aguja lila (16 G) se pasan las clulas a la
bolsa de criopreservacin a travs de la lnea de la bolsa (pueden ser ms bolsas
dependiendo del volumen que tengamos) de 250 ml y poner en el refrigerador.
Prepa en un tubo Falcon de 50 ml la solucin Crioprotectora
DMSO al 10 % -------------------------------------------------10 ml
HEST (Hidroxietilalmidon) si es al 10 %.30 ml
Albmina Humana al 20% o 25%--------------------------10 ml
En el caso que el HEST sea del 6% ------------------------35ml
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 31 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

Albmina Humana del 20% o 25% -----------------------5 ml

Poner en el refrigerador la solucin de DMSO por 15 minutos a 4C, pues este debe
estar fro a la hora de ponerlo a las clulas
Encender el congelador minutado el cual deber contener una sensor y a falta de este
una bolsa con la mezcla de DMSO como control y en cuanto llegue a una Temperatura
de 4C
En lo que el congelador minutado llega a la Temperatura deseada se prepara la
Cosecha en la campana de flujo laminar con las solucin crioprotectora la cual debe
ser agregada poco a y en frio mezclando al mismo tiempo que se va adicionando
lentamente.
Eliminar el aire y burbujas con una jeringa de la criobolsa, conservando 1.5 ml de
muestra, 500l en un tubo criovial debidamente identificado y el resto de divide para
realiza hemocultivos viabilidad con citometria o azul de tripan
Se sella la bolsa con un sellador automtico el cual tambin debe estar limpio y cerca
de la campana de flujo laminar

REACTIVOS PARA CRIOPRESERVACION

INSUMOS
La siguiente lista son reactivos indispensables para realizar la criopreservacin de
Clulas Progenitoras Hematopoyticas (CPH), procedentes de Sangre Perifrica,
Medula sea y Cordn Umbilical
1.- Dimethyl Sulfoxide (DMSO) grado clnico
2.- Hidroxietil almidon al 10% (HES)
3.- Seroalbumina Humana al 20 %
4.- Etanol al 70% (desinfectante)

Sigma Aldrich
PISSA Fresniere

MATERIAL PARA CRIOPRESERVACION

1. Bolsas de 250ml Congelacin Cryostoic
Biomedica
2. Acopladores ( Sampling Site Copler ) ( en caso de no tener suplir con llave de
tres vias)
Baxter
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 32 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

3. Sepax Cell Separetion Kitt

Biosafe
4. Crioviales de Nitrgeno liquido de 2ml
Labcon
5. Tubo Falcon de 50 ml
6. Jeringas (propulsor o perfusor) DE 60 ml
7. Jeringas de 20 ml
8. Agujas Insyde 14 G 1.7 sin 2.1x45mm
9. Agujas 16 G 1
10. Pipetas de plstico de 25 ml estril
11. Bolsas Estriles para descongelacin ( syplog )
12. Pipetas con filtro desechables de 10 ml
13. Puntas para 200 l
14. Puntas desechables para 1000 l
15. Cubre bocas
16. Guantes Estriles
17. Guante manejo de temperaturas extremas (bajas)
EQUIPO
1. Congelador Programable
2. Tanque de almacenaje
3. Cajas y Marcos para almacenar bolsas y criobiales
4. Placas de Presin
5. Campana de Bioseguridad Clase II
6. Pipetor Automtico
7. Sellador Automtico
8. Tanques de Nitrgeno Lquido
9. Balanza Digital
10. Pinzas de Rodillo
11. Sellador dielctrico
12. Conector estril

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 33 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

PREPARACION DE EQUIPO PARA EL PROCESO

LIMPIEZA Y
DESINFECCIONJ DEL
AREA BLANCA DE
PROCESAMIENTO

VERIFICAR Y LIMPIAR CON

ALCOHOL AL 70% EL
CONGELADOR MINUTADO,
TENER LOS CANESTER A
OCUPAR LIMPIOS Y SECOS

VERIFICAR QUE LAS BOLSAS

CRIOPROTECTORAS TENGAN
BUENA CADUCIDAD Y EL
CASO DE USO DE SEPAX
LIMPIARLO

LIMPIEZA DE CAMPANA DE FLUJO LAMINAR

COMO SE MENSIONA EN ESTE MANUAL EN EL
PUNTO 4.8.2

COLOCAR EL MATERIAL
REQUERIDO PARA EL
PROCESO EN LA CAMPANA Y
COMO JERINGAS GASAS
TUBOS SELLADOR ETC. DEJAR
15 MIN CON UV

CHECAR QUE HAYA

SUFICIENTE NITROGENO PARA
TODO EL PROCESO DE
CONGELACION

LIMPIEZA Y DESINFECCION DE
CENTRIFUGA REFRIGERADA

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 34 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

RECEPCION Y PROCESO

LA BOLSA OBTENIDA DE CELULAS PROGENITORAS HEMATOPOYETICAS, YA SEA

DE MEDULA OSEA O SANGRE PERIFERICA DEBERA SER ENTREGADA CON NUMERO
DE UNIDAD ASIGNADA POR EL BANCO DE SANGRE, RESULTADOS DE SEROLOGIA,
NOMBRE DE EL DONADOR, NOMBRE DE RECEPTOR, PESO DEL RECEPROR, EDAD,
VOLUMEN DE LA COSECHA, BIOMETRIA HEMTICA , VOUMEN OBTENIDO,
NOMBRE DE EQUIPO UTILIZADO PARA SU OBTENCION Y RECUENTO DE CD 34 Y
VIABILIDAD
UN TUBBO DE BH CON MUESTRA DE LA COSECHA

L
ROTULAR FRASCOS DE HEMOCULTIVO, CRIOVIALES, CON NUMERO DE
UNIDAD Y NOMBRE
OBTENER EL PESO DE LA BOLSA VACIA Y DE BOLSA LLENA PARA
CALCULAR EL VOLMEN REAL DE LA COSECHA

MEZCLAR BIEN LAS CELULAS CON MOVIMIENTO SUAVE ASI COMO

TAMBIEN LAS LNEAS DE LA BOLSA CON AYUDA DE PINZAS, PONER UN
CAMPO ESTRIL EN LA CAMPANA DE FLUJO LAMINAR Y LIMPIAR BIEN LAS
VAS, DE ESTAS DARLE UN PILOTO A CITOMETRIA Y OTRO
PARABACTERIOLOGIA

SI EL PROCESO SE VA A REALIZAR DE FORMA MANUAL PONER EL

ACOPLADODR A LA BOLSA DE RECOLECION Y CON JERINGA DE 60 ML DE
PEREFERENCIA EXTRAER TODO EL VOLMEN Y VACIAR A 2TUBOS FALCON
ESTRILES DE 50 ML, TAPAR Y CENTRIFUGAR POR 15 MINUTOS A 4 C SIN
FRENO

SACACAR CON MUCHO CUIDADO LOS TUBOS FALCON Y LLEVARLOS A

LA CAMPANA DE FLUJO LAMINAR, EXTRAEER EL PLASMA Y PASARLO A
OROS TUBOS FALCON ESTRILES.
MEDIR EL VOLMEN DE CLULAS QUE NOS QUEDARON CON JERINGA
CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 35 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

PONER EN LA CAMPANA LAS BOLSAS CRIOPROTECTORAS LIMPIARLAS

CON ALCOHOL
CON JERINGAS DE 20 ML EXTRAEER TODAS LAS CELULAS DE LOS TUBOS
FALCON, PONER UN POCO DE PLASMA PARA DEJAR LO MENOS POSIBLE
DE CELULAS EN EL TUBO, CONECTAR A LA LINEA HEMBRA DE LA BOLSA
DE CRIOPRESERVACION Y TRASVASARLAS A LA BOLSA.
RETIRAR LAS JERINGAS Y CERRAR LA LNEA
ES IMPORTANTE TOMAR EN CUENTA EL VOLMEN QUE SE TIENE Y
REPARTIRLO EN LAS BOLSAS QUE SEAN NECESARIAS TOAMDO EN
CUENTA EL VOLUMEN QUE SE AADIR DE SOLUCION
CRIOPROTECTORA DE MANERA QUE NO VAYAN A QUEDAR MUY LLEAS
PUES SE CORRE EL RIESGO DE QUE SE ROMPAN A LA HORA DE
CRIOPRESERVAR O DESCONGELAR

PREPARAR LA SOLUCION CRIOPROTECTORA EN HIELO O EN UN MEDIO QUE

EST A 4 C

Prepa en un tubo Falcon de 50 ml la solucin crioprotectora

DMSO al 10 % -------------------------------------------------10 ml
HEST (Hidroxietilalmidon) si es al 10 %.30 ml
Albmina Humana al 20% o 25%--------------------------10 ml
En el caso que el HEST sea del 6% ------------------------35ml
Albmina Humana del 20% o 25% -----------------------5 ml

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 36 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

ENCENDER EL CONGELADOR MINUTADO EN UTILIZANDO EL PROGRAMA # 6 PARA QUE

LLEGUE A UNA TEMPERATURA DE 4 C, MIENTRAS SE PREPARA LA SOLUCION Y SE
ENFRIA
PONER EN EL REFRIGERADOR LOS TUBOS CON LA SOLUCION DE DMSO POR 15 MIN A 4 C
PUES DEBE DE ESTAR FRIO A LA HORA DE PONERLO A LAS CLULAS

SUPONIENDO QUE SE OBTIENEN 2 BOLSAS CON 25 ML DE CLULAS CADA UNA SE

ADICIONARAN 25 ML DE SOLUCION CRIOPROTECTORA A CADA BOLSA
SE PONEN LAS BOLSAS DE LAS CLULAS ENTRE 2 BOLSAS DE GEL CONGELDO
PARA ADICIONAR LENTAMENTE CON UNA JERINGA LA SOLUCION
CRIOPROTECTORA LENTAMENTE Y MOVIENDO LAS BOLSAS SUAVEMENTE PARA
MEZCLAR, SE ADICIONAN DE 2EN 2 ML HASTA TERMIAR LA SOLUCION SIEMPRE
MEZCLANDO
LAVAR LAS JERINGAS SIN DESCONECTAR CON LA MUESTRA DE TAL MODO QUE
EN LAS LNEAS NO QUEDE SOLO SOLCION.
CON LA MISMA JERINGA Y LAS CLULAS YA MEZCLADAS DEJAR ALRREDEDOR DE
5 ML DE MUESTRA PARA PONER:
EN 4 CRIOVIALES PONER 500 MICROLITORS DE MUESTRA, UNO PARA CITOMERIA,
3 PARA CRIOPRESERVAR, DOS JUNTO CON LAS BOLSAS Y OTRO PARA CONTROL
LOS OTROS 3 ML VACIAR EN FRASCO DE HEMOCULTIVO

DAR A EL AREA DE CTOMETRIA UN CRIOVIAL O TUBO CON LA MUESTRA PARA

QUE REALICE DETERMINACI0N DE CD 34 Y VIAVILIDAD PARA ASI OBTENER EL
VUMERO FINAL DE CELUALS A CRIOPRESERVAR AS COMO CONTOL DEL
MANEJO CON LOS CRIOPROTECTORES

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 37 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

ANTES DE DESCONECAR LAS JERINGAS SACAR TODO EL AIRE DE LAS BOLSAS DE

TAL MANERA QUE NO QUEDE NADA DE AIRE DENTRO Y SEGUIR MANTENIENDOLAS
EN FRIO

YA LISTO EN CONGELADOR PONER LAS BOLSAS EN LAS PRENSAS PARA

CONGELAR JUNTO CON UN CRIOBIAL PROCURANDO QUE EL SENSOR DE
EL EQUIPO QUEDE ENTRE UNO DE LAS PRENSAS PARA QUE MIDA LA
TEMPERATURA REAL DE CONGELACION DE LA BOLSA Y TAMBIEN
PONER LOS 3 CRIOVIALES EN EL CONGELADOR HASTA QUE TERMINE EL
PROCESO A LOS 80C
SACAR Y DESPEGAR CON CUIDADO LAS BOLSAS, COLOCARLAS EN LOS
CANESTER RESPECTIVOS JUNTO CON EL CRIOVIAL QUE DEBE ESTAR LO
MAS FRIO POSIBLE
EL CRIOVIAL DE CONTROL PONERLO EN LA CAJA DE CONTROLES
PONER EL CANESTER EN EL PORTACANESTER E INTRODUCIRLO EN EL
TANQUE DE CRIOPRESERVACION QUE ESTAR A 196 C

LLENAR LA HOJA DE REGISTRO CON TODOS LOS DATOS TANTO DE

UBICACIN EN EL TANQUE, BH, CONTEO CELULAR, CD34, VIAVILIDAD
NOMBRE Y EDAD DE PACIENTE DIAGNOSTICO PESO FECHA DE PROCESO
TAMBIEN SE DEBE TENER EL REGISTRO EN ELECTRONICO LA
UBICACIN EN EL TANQUE CON FECHA Y NOMBRE

Todos los datos que resultan de este procedimiento se concentran en la Bitcora CAL77-A, que se muestra a continuacin:

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 38 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

Bitcora CAL-77-A HOJA DE REGISTRO DE CLULAS TALLO

CRIOPRESERVADAS
NUM DE UNIDAD ---------------

FECHA PROCESO: ___________________

TIPO DE TRANSPLANTE ------------------------------------------------NOMBRE DE RECEPTOR---------------------------------------------------------------- NUM. DE EXPEDIENTE ------------EDAD DE RECEPTOR-------------------------------------

PESO DE RECEPTOR---------------------------

NOMBRE DE DONADOR----------------------------------------------------

PARENTESCO-----------------------------

DIAGNOSTICO ----------------------------------------------------------------------

GRUPO SANGUINEO DONADOR------------------GRUPO SANGUINEO RECEPTOR--------------------------

SEROLOGIA
HCV--------------

AgSHB -----------------

HIV----------------

CMV-IgM-------------------

NAT: HIV:-_________

HCV:_____________

SIFILIS----------------- BRUCELLA-------CHAGAS----------HBV:__________

LEUCOCITOS TOTALES = WBC K/min L X 1000 X VOL DE BOLSA-------------------------------8

DOSIS DE LEUCOS = LEUCOCITOS TOTALES X 10 / Kg DE DONADOR -----------------------------------CMN% = LINFOCITOS% + MONOCITOS % ----------------------------------------------------8

DOSIS DE CMN = CMN% X LEUCOCITOS TOTALES X 10 / Kg / 100 --------------------------------------------

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 39 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

CD 34 Cel / l -----------------------------------VIABILIDAD -------------------------------------

DOSIS DE CD 34 X DILUCION X 1000X VOL / PESO DE RECEPTOR =--------------------X 10

VOL STEM CELLS CONCENTRADAS EN mL. --------------------------------------------------------

VOL SOL. CRIOPRESERVADORA-------------------------------------------------------------------VOL TOTAL DE BOLSA CRIOPRESERVADA-----------------POSICION DE CRIOVIALES--------------------------------POSICION DE BOLSA EN TANQUE ----------CULTIVO BACTERIOLOGICO:

HEMOCULTIVO PRE CRIOPRESERVACION----------------HEMOCUTIVO POS CRIOPRESERVANTES---------------------VIABILIDAD POS DMSO----------------VIABILIDAD POST- DESCONGELACION-------------------FECHA DE DESCONGELACION Y ENVIO: ______________
CD 34--------------------REALIZO ------------------------------

CAL-02-B

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatra

Cdigo: CAL- 77
Nivel de Revisin: 01
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Pgina 40 de 40

PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIN

PRODUCTO NO CONFORME
Producto no conforme debido a mala operacin o mal manejo del producto durante el
proceso

Producto entregado con bolsa rota, fuga en las lneas

Mal sellado de lneas
Clulas tallo para Trasplante Alognico con clulas CD 34+ < 2 x 106 / Kg de
peso de receptor.
Clulas tallo para Trasplante Autlogo con clulas CD 34+ < 1.5 x 106 / Kg
de peso del receptor

REGISTROS
Bitcora CAL-77-A hoja de registro de clulas tallo criopreservadas

CAL-02-B

NUM DE UNIDAD --------------FECHA

PROCESO:_______________________
TIPO DE TRANSPLANTE ------------------------------------------------NOMBRE DE RECEPTOR---------------------------------------------------------------- NUM. DE
EXPEDIENTE ------------EDAD DE RECEPTOR------------------------------------PESO DE
RECEPTOR--------------------------NOMBRE DE DONADOR----------------------------------------------------PARENTESCO---------------------------DIAGNOSTICO ---------------------------------------------------------------------GRUPO SANGUINEO DONADOR------------------GRUPO SANGUINEO RECEPTOR-------------------------SEROLOGIA
HCV--------------

AgSHB -----------------

SIFILIS----------------- BRUCELLA-------

HIV----------------

CMV-IgM-------------------

NAT: HIV:-_________

HCV:_____________

CHAGAS-----------

HBV:__________

LEUCOCITOS TOTALES = WBC K/min L X 1000 X VOL DE BOLSA------------------------------DOSIS DE LEUCOS = LEUCOCITOS TOTALES X 10 / Kg DE DONADOR ----------------------------------CMN% = LINFOCITOS% + MONOCITOS % ----------------------------------------------------DOSIS DE CMN = CMN% X LEUCOCITOS TOTALES X 10 / Kg / 100 -------------------------------------------

CAL-02-B

CD 34 Cel / l -----------------------------------VIABILIDAD -------------------------------------

DOSIS DE CD 34 X DILUCION X 1000X VOL / PESO DE RECEPTOR =--------------------X

10

VOL STEM CELLS CONCENTRADAS EN mL. -------------------------------------------------------

VOL SOL. CRIOPRESERVADORA-------------------------------------------------------------------VOL TOTAL DE BOLSA CRIOPRESERVADA-----------------POSICION DE CRIOVIALES--------------------------------POSICION DE BOLSA EN TANQUE ----------CULTIVO BACTERIOLOGICO:

HEMOCULTIVO PRE CRIOPRESERVACION----------------HEMOCUTIVO POS CRIOPRESERVANTES---------------------VIABILIDAD POS DMSO----------------VIABILIDAD POST- DESCONGELACION-------------------DESCONGELACION Y ENVIO:______________
CD 34--------------------REALIZO ------------------------------

CAL-02-B

FECHA DE