ENZIMAS
ASPECTOS GENERALES
Reacciones qumicas en los seres vivos
estn catalizadas por enzimas.
Catalizadores especficos: Un solo tipo de
reaccin, y casi siempre acta sobre un
nico sustrato o sobre un grupo muy
reducido de ellos.
Enzima + Sustrato
Complejo Enzima-Sustrato
Enzima + Productos
ASPECTOS GENERALES
Sustancia sobre la que acta la enzima
sustrato.
El sustrato se une a una regin concreta de la
enzima centro activo.
1. Sitio de unin Aminocidos que estn en
contacto directo con el sustrato
2. Sitio cataltico Aminocidos directamente
implicados en el mecanismo de la reaccin
Una vez formados los productos la enzima puede
comenzar un nuevo ciclo de reaccin
1.- La enzima y su
sustrato
2.- Unin al centro activo
3.- Formacin de productos
PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS
Protenas que actan como catalizadores.
Altamente especficas
Se requieren pequeas cantidades para lograr la
reaccin
Punto de saturacin determina la velocidad
mxima
Cambios en la conformacin cambios en la
actividad cataltica debido a factores que afectan
la reaccin.
ALTA
ESPECIFICIDAD
DE REACCIN
INTERACCIN
ESTEREO
ESPECFICA
CON SU
SUSTRATO
REGULACIN DE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA
Una enzima no acta siempre a la misma
velocidad. Su actividad puede modularse por:
cambios en el pH
cambios en la temperatura
presencia de cofactores
concentraciones del sustrato y de los
productos finales
presencia de inhibidores
modulacin alostrica
modificacin covalente
activacin por protelisis
isoenzimas
EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA
Enzimas grupos qumicos ionizables (carboxilos COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol, etc.) en las
cadenas laterales de sus aminocidos.
Segn el pH del medio carga elctrica positiva,
negativa o neutra.
Conformacin de protenas cargas elctricas pH
en el cual la conformacin ser la ms adecuada para
la actividad cataltica = pH ptimo.
EFECTO DEL pH SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Generalmente sensibles
a cambios de pH.
Pequeas desviaciones
(dcimas) del pH ptimo
pueden afectar su actividad
drsticamente.
Los seres vivos amortiguadores
fisiolgicos.
EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA
EFECTO DE LA TEMPERATURA
SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
Aumentos de temperatura aceleran reacciones qumicas*:
C/ 10C de incremento, la velocidad de reaccin se
duplica.
Las enzimas protenas: se denaturan por calor a partir
de cierta temperatura.
Temperatura ptima: T a la cual la actividad cataltica es
mxima. Por encima de esta temperatura, la velocidad de
rx es contrarrestada por prdida de actividad cataltica por
desnaturalizacin trmica la actividad enzimtica
decrece rpidamente hasta anularse.
EFECTO DE LOS COFACTORES
SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
Cofactores: Grupos prostticos y coenzimas
unidos covalentemente a la enzima. 1/3 de las
enzimas conocidas requieren cofactores.
Coenzimas: Molculas orgnicas derivadas de las
vitaminas, transfieren grupos.
Grupos prostticos : Sustancias no proteicas que
colaboran con la funcin enzimtica. Iones
inorgnicos Fe++, Mg++, Mn++, Zn++ ...
EFECTO DE LOS COFACTORES
SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
Holoenzima: Forma catalticamente activa de la
enzima. Enzima unida a su grupo prosttico.
La parte proteica de una holoenzima (inactiva) se
llama apoenzima.
Apoenzima + Cofactor = Holoenzima
EFECTO DE LAS CONCENTRACIONES
SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
La velocidad de una rx enzimtica concentracin
de sustrato.
La presencia de los productos finales puede hacer
que la reaccin sea ms lenta, o invierta su sentido.
INHIBIDORES ENZIMTICOS
IRREVERSIBLES: Genera la inactivacin inminente de la
enzima, se usan en farmacologa y tratamientos para
diferentes patologas.
ORGANOFOSFORADOS -/ ACETILICOLINESTERASA
REVERSIBLES: Hay de tres tipos:
- Competitivo
- No competitivo
- Acompetitivo
Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato
de diisopropilo (DFP)
Acetilcolina
Acetilcolinesterasa
Acetato + Colina
EFECTO DE LOS INHIBIDORES SOBRE
LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
Inhibidores: Molculas que impiden o disminuyen la
accin cataltica de un enzima.
inhibidor competitivo: Ocupa temporalmente el centro
activo por semejanza estructural con el sustrato original
inhibidor no competitivo: Altera la conformacin
espacial de la enzima, impidiendo su unin al sustrato
Inhibidor acompetitivo: Favorece la unin E-S pero
inhibe la liberacin del producto
MODULACIN ALOSTRICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Activadores alostricos: Molculas que actan en la
enzima sobre una regin diferente al centro activo,
aumentan afinidad por el sustrato.
MODULACIN ALOSTRICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Inhibidores alostricos: Modifican la protena,
disminuye la afinidad E-S aumenta Km.
AB
AB+CD
B inhibe su propia sntesis
B inhibe A y C la potencia
Disminuye afinidad por el sustrato
EFECTO DE LA MODIFICACIN
COVALENTE SOBRE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA
Enzimas: forma menos activa forma ms activa
mediante uniones covalentes a un grupo qumico
pequeo (Pi, AMP).
Enzima muy activa se desactiva al liberar algn grupo
qumico.
Vas degradativas del metabolismo: Fosforilada > no
fosforilada.
Vas biosintticas: No fosforilada > fosforilada.
Enzima activa
ACTIVACIN PROTEOLTICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Proenzimas o zimgenos:
Se sintetizan inicialmente
como protenas precursoras
sin actividad enzimtica, para
activarse ataque hidroltico
liberando uno o varios
pptidos.
El resto de la molcula
proteica adopta conformacin
y propiedades del enzima
activo.
ACTIVACIN PROTEOLTICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Enzimas digestivas* se secretan como
zimgenos y en el tubo digestivo se convierten
en la forma activa.
Tripsina pancretica (una proteasa)
tripsingeno (inactivo). Si se activa en el propio
pncreas, la glndula sufre un proceso de
autodestruccin (pancreatitis aguda), a
menudo mortal.
ISOENZIMAS
Isoformas de las enzimas que catalizan las
mismas reacciones.
Codificadas por genes homlogos que han
divergido con el tiempo o por diferentes genes
Las Aloenzimas representan enzimas de
diferentes alelos de un mismo gen
* Los dos trminos de forma incorrecta se suelen
usar indistintamente.
ENZIMAS MULTIFUNCIONALES
ENZIMAS MULTIFUNCIONALES
Enzima con varias subunidades catalizadoras, cada
una cuenta con su sitio activo.
Regiones bien definidas, con actividad
independiente, que realizan una reaccin qumica
especifica.
Vas de reaccin:
* Secuencia aleatoria y ordenada
* Secuencia de ping-pong
VIAS DE REACCIN EN LAS
ENZIMAS MULTIFUNCIONALES
Aleatoria y Ordenada
VIAS DE REACCIN EN LAS
ENZIMAS MULTIFUNCIONALES
Ordenada tipo ping - pong
NOMENCLATURA DE LAS
ENZIMAS
Diferentes formas de nombrarlas:
* nombre particular: personas o eventos
relacionadas con su desarrollo.
* nombre sistemtico: Sustrato, tipo de
reaccin, terminacin asa
* cdigo de la Comisin Enzimtica
(Enzyme Comission): Numeracin,
Clases, subclases y grupo qumico.
NOMBRES PARTICULARES
Antiguamente, las enzimas reciban
nombres particulares, asignados por su
descubridor. Al ir aumentando el nmero
de enzimas conocidos, se hizo necesaria
una nomenclatura sistemtica que
informara sobre la accin especfica de
cada enzima y los sustratos sobre los que
actuaba.
NOMENCLATURA DE LA
COMISIN ENZIMTICA
El nombre de cada enzima se identifica por un
cdigo numrico, encabezado por las letras EC
(enzyme commission), seguidas de cuatro
nmeros separados por puntos.
Primer nmero indica a cual de las seis clases
pertenece la enzima.
Segundo nmero se refiere a distintas
subclases dentro de cada grupo
NOMENCLATURA DE LA
COMISIN ENZIMTICA
Tercero y cuarto se refieren a grupos
qumicos especficos que intervienen en la
reaccin.
ATP: glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa)
se define como EC 2.7.1.2. El nmero 2
indica que es una transferasa, el 7 que es una
fosfotransferasa, el 1 indica que el aceptor es
un grupo OH, y el ltimo 2 indica que es un
OH de la D-glucosa el que acepta el grupo
fosfato.
NOMBRE SISTEMTICO
El nombre consta de 3 partes:
* el sustrato preferente
* el tipo de reaccin realizado
* terminacin "asa
La glucosa fosfato isomerasa que cataliza la isomerizacin
de la glucosa-6-fosfato en fructosa-6-fosfato.
Enzimas catalizan reacciones reversibles.
No hay una manera nica para fijar cual de los dos
sentidos se utiliza para nombrar la enzima.
* La glucosa fosfato isomerasa tambin podra llamarse
fructosa fosfato isomerasa.
CLASIFICACIN DE LAS
ENZIMAS
En funcin de su accin cataltica
especfica:
Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Clase 2: TRANSFERASAS
Clase 3: HIDROLASAS
Clase 4: LIASAS
Clase 5: ISOMERASAS
Clase 6: LIGASAS
Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de oxidorreduccin:
transferencia de hidrgeno (H) o electrones
(e-) de un sustrato a otro, segn la reaccin
general:
AH2 + B
A + BH2
* Succinato deshidrogenasa Citocromo C
oxidasa
Clase 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo
qumico (distinto del hidrgeno) de un
sustrato a otro, segn la reaccin:
A-B + C
* Glucoquinasa
A + C-B
Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrlisis:
A B + H 2O
* Lactasa
AH + B-OH
Clase 4: LIASAS
Catalizan reacciones de ruptura o soldadura
de enlaces covalentes en los sustratos:
A-B
A+B
* Acetacetato descarboxilasa
Clase 5: ISOMERASA
Catalizan la interconversin de ismeros:
A
B
* Fosfotriosa isomerasa y la fosfoglucosa
isomerasa
Clase 6: LIGASAS
Catalizan la unin de dos sustratos con
gasto simultneo de un nucletido
trifosfato (ATP, GTP, etc.):
A + B + XTP
* Piruvato carboxilasa
A-B + XDP + Pi
MECANISMOS CATALTICOS
Determina la intensidad del metabolismo
asimila o no asimila sustancias. Proceso en el
que aumenta la velocidad a la que una reaccin
llega a su equilibrio.
cido Base
Covalente
Electrosttica
Orientacin y aproximacin
Transicional
Por Iones metlicos
MECANISMOS CATALTICOS
cido Base: La transferencia de un donador
de protones (cido) disminuye la energa libre
de una reaccin. Bioqumicamente comn.
Hidrlisis de steres y pptidos, grupos PO4,
adicin de carbonilo.
Covalente: Entre el sustrato y la enzima se
forma un enlace covalente.
Descarboxilacin qumica de acetoacetato.
MECANISMOS CATALTICOS
Electrosttica: Eliminacin de agua
interaccin E+S, el sitio activo de la enzima es
no polar
Orientacin y aproximacin: Caractersticas
isostricas de la enzima efectos no regulables
Transicional: Depende de la afinidad entre E y
S. Catlisis temporal.
MECANISMOS CATALTICOS
Iones metlicos: 30% de las enzimas.
Metaloenzimas iones metlicos unidos
fuertemente (Fe++, Cu++, Zn++, Mg++, Co++).
Iones en solucin unidos dbilmente ( Na+, K+,
Ca++).
Mecanismos:
*Enlace con S para orientarse adecuadamente.
*Redox con participacin del metal.
*Atraen cargas del S, neutralizndolo y
estabilizando la reaccin.
CINTICA ENZIMTICA
Los principios generales de las reacciones
qumicas se aplican tambin a las reacciones
enzimticas.
Cintica enzimtica
Modelo cintico de Michaelis-Menten
Clculo de la Km y la Vmax de un enzima
Actividad enzimtica
MODO DE ACCIN DE LAS ENZIMAS
El comienzo de la reaccin requiere un
aporte inicial de energa energa de
activacin (Ea).
Si es menor la Ea requerida ms fcilmente
transcurre la reaccin.
MODO DE ACCIN DE LAS ENZIMAS
Reaccin con catalizador y sin catalizador
CINTICA ENZIMTICA
Estudia la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas
Mecanismo de reaccin
y especificidad de la enzima.
ALTA ESPECIFICIDAD DE
REACCIN
INTERACCIN
ESTEREO ESPECFICA
CON EL SUSTRATO
CINTICA ENZIMTICA
La velocidad de una reaccin catalizada por una
enzima puede medirse fcilmente*, no es
necesario purificar o aislar el enzima, utilizando
condiciones ptimas.
V mx, puede determinarse midiendo la aparicin
de los productos o la desaparicin de los
reactivos.
CINTICA ENZIMTICA
CINTICA ENZIMTICA
Curva de avance de la reaccin aparicin de
producto o de desaparicin del sustrato, en
funcin del tiempo
A medida que la reaccin transcurre, la velocidad
de acumulacin del producto va disminuyendo
porque se va consumiendo el sustrato de la
reaccin.
Determinacin Cuantitativa de la
Cintica Enzimtica
1. La reaccin global
2. Procedimiento analtico para determinar el S que
desaparece o el P que aparece
3. S la E requiere Cofactores (ines o coenzimas)
4. La dependencia de la actividad enzimtica con la [S] o
se la KM del S.
5. El pH ptimo
6. Un intervalo de temperatura en la que la E es estable
y muestra actividad elevada.
MODELO CINTICO DE MICHAELIS-MENTEN
Estudios del efecto de la concentracin
inicial del sustrato sobre la actividad
enzimtica finales del siglo XIX.
1882 introduccin del concepto complejo
enzima-sustrato
1913 Leonor Michaelis y Maud Menten
explican el comportamiento cintico de las
enzimas.
MODELO CINTICO :MICHAELISMENTEN
MODELO CINTICO :MICHAELIS-MENTEN
Vo = Vmax. Los sitios
estn ocupados y no hay
Enzima libre = saturacin
al 100%
Si la saturacin es 50%. Vo = 1/2 Vmax
Km + [S] = 2 [S]
Km = [S]
Km = Cantidad de sustrato necesaria para fijarse a
la mitad de enzima produciendo la mitad de la
velocidad mxima
Cintica enzimtica en funcin de la
concentracin de sustrato
La Km es un parmetro de Actividad
Enzimtica
La Km es inversamente proporcional con
la actividad de la enzima.
Valor de Km grande, baja actividad
Valor de Km pequeo, alta actividad
Km de algunas enzimas
ENZIMA
Catalasa
SUSTRATO
H2O2
Hexoquinasa
Anhidrasa carbnicoa
Quimotripsina
Km (mM)
25.0
ATP
0.4
D-Glucosa
0.05
D-Fructosa
1.5
HCO3-
9.0
Gliciltirosinilglicina
108.0
N-Benzoiltirosinamida
2.5
-Galactosidasa
D-Lactosa
4.0
Treonina deshidrogenasa
L-Treonina
5.0
ENZIMAS EN CLNICA
Anlisis de patologas en suero, saliva, lquido
cefaloraqudeo,
orina,
semen
detectan
alteraciones en diferentes rganos
Enzimas plasmticas
*Especficas: [mayor en suero]
*No especficas: Su funcin no es en plasma
-De secrecin: glndulas exocrinas (pncreas)
-Metabolismo intermediario:[alta] por necrosis
MARCADORES ENZIMTICOS
Diagnstico para actividad enzimtica especfica en
el organismo.
Las patologas pueden alterar la accin enzimtica.
Se realiza combinando la enzima con su sustrato
para monitorear el resultado, que se reporta como
porcentaje de la actividad enzimtica normal.
MARCADORES ENZIMTICOS EN
SUERO
Marcadores
hepticos:
Dao
hepatocelular,
obstruccin renal liberacin enzimtica a suero.
*[elevada] por alteracin celular heptica, cirrosis
-Alanino aminotransferasa
-Aspartato aminotransferasa
-Deshidrogenasa lctica
-Glutamiltransferasa
-Fosfatasa alcalina
-Glutatin sulfurotransferasa
MARCADORES ENZIMTICOS EN
SUERO
Marcadores pancreticos: descarta pancreatitis
aguda.
-Amilasa: Digestin de CH, 7 isoformas
-Lipasa: Rin y pncreas. [insuficiencia renal]
-Tripsina: Pancreatitis aguda
Marcadores cardiacos: deteccin inmediata de
IAM (infarto agudo al miocardio)
-Deshidrogenasa lctica
-Aspartato Aminotransferasa
-Creatinfosfokinasa (CPK) isoformas
MARCADORES ENZIMTICOS EN
SUERO
Marcadores
musculares.
musculares:
Distrofias musculares,
hipotiroidismo, HM.
Valora
transtornos
afecciones
metablicos,
- CPK: muy sensible.
Marcadores seos: Valorar funcin de clulas
seas.
- Fosfatasa alcalina / isoenzima sea: placenta,
hgado, hueso y bazo cambios en la funcin sea
y heptica
MARCADORES ENZIMTICOS EN
SUERO
Marcadores renales: Dao renal temprano.
- Glutatin-s-transferasa: Enzimas detoxificantes.
Rin, hgado, pulmn, glndulas suprarenales,
testculos, placenta, eritrocitos.
Marcadores tumorales: Detectar cncer.
-Deshidrogenasa lctica
-Fosfatasa alcalina
