Cromatografa

Principios de la Cromatografa
La cromatografa es uno de los principales mtodos para la separacin de especies qumicas
estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografa es un mtodo fsico de
separacin basado en la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases
inmiscibles, una fija o estacionaria y otra mvil.
En todas las separaciones cromatogrficas la muestra se disuelve en una fase mvil, que
puede ser un gas un lquido o un fluido supercrtico. Esta fase mvil se hace pasar a travs de
una fase estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija en una columna o sobre una
superficie slida. Las fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se
distribuyen de modo distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes
que son retenidos con ms fuerza por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo;
por el contrario los componentes que unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con
rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se
separan en bandas discriminadas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.
Cromatografa de Lquidos

Cromatografa de lquidos HPLC

Principios de la tcnica
En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs de una columna
que contiene a la fase fija. La separacin cromatogrfica en HPLC es el resultado de las
interacciones especficas entre las molculas de la muestra en ambas fases, mvil y
estacionaria
A diferencia de la cromatografa de gases, la cromatografa de lquidos de alto rendimiento
(HPLC, de high-performance liquid chromatography) no est limitada por la volatilidad o la
estabilidad trmica de la muestra.

La HPLC es capaz de separar macromolculas y especies inicas, productos naturales lbiles,

materiales polimricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto peso
molecular. Con una fase mvil lquida interactiva, otro parmetro se encuentra disponible
para la selectividad, en adicin a una fase estacionaria activa.
La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que permite una mayor gama
de estas interacciones selectivas y ms posibilidades para la separacin.
HPLC preparativa
Es la tcnica escogida para aislamiento y purificacin de productos de valor en las industrias
qumicas y farmacuticas as como en la biotecnologa y la bioqumica. La cromatografa
preparativa comprende un amplio rango de aplicaciones, desde el aislamiento de 1g de
muestra para identificacin espectroscpica hasta el aislamiento de un compuesto puro de
una mezcla de 100 g.

Aplicaciones
Campos de Aplicacin de HPLC

Frmacos: Antibiticos, sedantes esteroides, analgsicos

Bioqumica: Aminocidos, protenas, carbohidratos, lpidos

Productos de alimentacin: Edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas,

aditivos

Productos de la industria qumica: Aromticos condensados, tensoactivos, propulsores,

colorantes

Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB

Qumica forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcticos

Medicina clnica: cidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina,

estrgenos.
Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa

Separacin y purificacin de metabolitos

Separacin y purificacin de los metabolitos de las drogas procedentes de muestras de

orina

Purificacin y separacin de enantimeros

Purificacin de compuestos naturales

Purificacin y caracterizacin de enzimas y protenas

Funcionamiento del servicio

Las muestras deben ir acompaadas de la hoja de solicitud de servicios generada en esta
pgina web una vez realizado el registro en la misma. El ususario debe rellenar todos los
campos de la solicitud de servicios que conozca, con el fin de obtener el mejor resultado
posible.

Equipos
HPLC analtico 1200 Series de Agilent Technologies

Bomba cuaternaria G1311

Detector de longitud de onda variable G1314B

Detector de diodo y de longitud de onda variable G1315D

Detector de ndice de refraccin G1362A

Detector de fluorescencia G1321A

HPLC preparativo 1200 Series de Agilent Technologies

Dos Bombas preparativas G1361A

Detector de diodo y de longitud de onda variable G1315D

Muestreador automtico G1329A

Colector de fracciones G1364B

Cromatografa de gases
Principios de la tcnica
En cromatografa de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna
cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil que es un gas inerte, y a

diferencia de la mayora de los tipos de cromatografa, la fase mvil no interacciona con las
molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el analito a travs de la columna.
Respecto a la cromatografa lquida, la cromatografa de gases tiene la ventaja de disponer de
detectores mucho ms universales (por ejemplo, el de ionizacin de llama). Adems, para
numerosas aplicaciones, los mtodos son ms simples, ms rpidos y ms sensibles que los
correspondientes a la cromatografa lquida de alta resolucin. La instrumentacin requerida
para cromatografa de gases tambin es mucho ms sencilla y econmica que la empleada en
HPLC. Sin embargo, en cromatografa de gases, la influencia de la temperatura sobre la
distribucin del equilibrio es considerable, a diferencia de la cromatografa lquida. Por ello,
la cromatografa de gases presenta limitaciones en tres casos:

compuestos poco voltiles, generalmente los de peso molecular superior a 300 u.m.a.

compuestos sensibles a una elevacin de la temperatura incluso moderada

(determinados compuestos de inters biolgico)

compuestos que se encuentran en forma inica (puesto que son e n general poco
voltiles)

Por esta razn, la cromatografa de gases se emplea cuando los componentes de la mezcla
problema son voltiles o semivoltiles y trmicamente estables a temperaturas de hasta 350400C. En cambio, cuando los compuestos a analizar son poco voltiles y/o termolbiles, la
tcnica separativa adecuada suele ser la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC).
A menudo la cromatografa de gases se emplea para confirmar de la presencia o ausencia de
un compuesto en una muestra determinada.
Aplicaciones
Medioambientales: Anlisis de pesticidas y herbicidas, anlisis de hidrocarburos, semivoltiles
y voltiles, anlisis del aire...
Alimentos y aromas: fragancias y aromas, aceites, bebidas, cidos orgnicos, azcares,
FAMES, steres metlicos, triglicridos, alcoholes...
Qumica Industrial: alcoholes, cidos orgnicos, aminas,aldehdos y cetonas, steres y
glicoles, hidrocarburos, disolventes, anilinas, gases inorgnicos...
Biociencia: drogas, frmacos, alcoholes y contaminantes en sangre, disolventes residuales...
Derivadas del petrleo: gas natural, gases permanentes, gas derefinera, gasolinas, gasleos,
parafinas...
Funcionamiento del servicio

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Equipos
Cromatgrafos de gases Agilent Technologies 7890A

Detector de captura electrnica (ECD)

Detector de ionizacin de llama (FID)

Cromatografa inica
Principios de la tcnica
En las ltimas dcadas, la cromatografa inica se ha convertido en uno de los mtodos ms
importantes para el anlisis de trazas de aniones y cationes. Tcnica absolutamente
imprescindible en el anlisis de aguas y medio ambiente
Se basa en el uso de resinas de intercambio inico. Cuando una muestra inica atraviesa estas
columnas, los iones presentes se separan debido a las diferentes retenciones que sufren al
interactuar con la fase fija de las columnas analticas. Una vez separada, la muestra pasa a
travs de un detector (conductimtrico, amperomtrico, UV...) donde se registra la seal
obtenida respecto al tiempo de retencin. El resultado son unos cromatogrmas donde la
posicin de los mximos nos indica el in presente (carcter cualitativo) y su rea nos indica
que cantidad existente de dicho in (carcter cuantitativo).
Potencial analtico de la cromatografa inica
- Aniones inorgnicos y orgnicos: Fluoruros, cloruros, nitritos, bromuros, nitratos, fosfatos,
sulfatos, bromatos, cloritos, cloratos, actico, ctrico, tartrico, lctico, srbico, benzoico
- Azcares y polialcoholes: Monosacridos, disacridos, oligosacridos, polisacridos.
- Cationes: Sodio, amonio, potasio, calcio, magnesio
Aplicaciones

Aguas de consumo

Aguas minerales

Bebidas

Productos crnicos

Productos vegetales

Alimentacin infantil

Funcionamiento del servicio

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Equipo
Cromatgrafo Inico IC Professional 850 de Metrohm con sistema de utrafiltracin

Detector de conductividad. Supresin qumica secuencial

Detector amperomtrico de pulsos (PAD)