UNIVERSIDAD
VERACRUZANA
Facultad de ciencias qumicas
Ing. Ambiental
Experiencia educativa:
Bioquimica
PRACTICAS DE LABORATORIO
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
LABORATORIO DE BIOQUMICA GENERAL
PRCTICA No. 3
22 de Mayo de 2015
PROPIEDADES QUMICAS DE LAS PROTENAS
HOJA DE RESULTADOS
NOMBRE: Ivonne
FECHA: 22/May/15
Lagunes
Herrera
GRUPO:
Ing.
Ambiental
1.- Anota tus observaciones en el siguiente cuadro:
REACCIN
a) Precipitacin con etanol y acetona.
b) Precipitacin de las protenas por
metales.
OBSERVACIONES.
Se formaron dos capas, no se mezclaron
entre s y entre ellas haba un una superficie
blanquecina que impide que estas se
mezclen. La capa superior tena una
consistencia ms liquida; menos densa.
Con el AgNO3, la solucin tomo un color
blanco y en las paredes se qued adheridos
residuos del mismo color. Era de un color
blanco opaco.
En cambio con el
c) Precipitacin salina.
HgCl2 , no era tan opaco
el color que adquiri (tambin blanco).
Concentraci
1 pesada
2
n
pesada
saturado
1.88 g
2.66 g
50%
1.89 g
2.62 g
10%
1.85 g
2.36 g
La pruebe revela que con diferentes
concentraciones se puede filtrar diferentes
cantidades de protenas, mientras ms
concentrado el reactivo mayor ser la
cantidad de protena.
En la primera prueba, la albumina, al ser
agregado 5 gotas de tunstanato de sodio,
produjo un precipitado, formando una
sustancia blanca. Al agregarle el cido
actico, el precipitado se desplaz hacia la
parte superior del tubo y se disolvi un poco.
En la segunda prueba, al ser agregado el
d) Precipitacin de las protenas por cido pcrico, ocasiono que se formaran
los cidos.
partculas de color amarillo en la parte
superior del tubo de ensaye. Al agregarle
tunstato de sodio en la primera prueba se
22 de Mayo de 2015
forman partculas de color blanco en el tubo
colocndose en la parte media de este y a lo
largo, con el cido actico.
e) Prueba de Biuret para enlaces
peptdicos.
Al agregarle tricloacetico a otro tubo el
resultado obtenido fue un precipitado blanco.
En la ltima prueba, al ser agregado acido
pcrico, el precipitado se desplaza hacia la
parte superior del tubo y se torna de color
amarillo.
Al ser aadidas 5 gotas de sulfato de cobre a
2mL de la muestra, la sustancia paso a
tornarse de color azul y se form un
precipitado.
Al agregar 2mL de NaOH al 40%, se volvi de
un color morado, se observ que en la parte
superior el color era ms fuerte, mientras que
el fondo era ms claro. El morado es el color
caracterstico para la identificacin de
protenas.
Al mezclar vigorosamente la mezcla, se
obtiene un color homogneo en todo el tubo.
Al agregarle 2mL de
HNO3
se formaron
dos capas, una amarilla en la parte media del
tubo y una capa blancuzca encima de esta
capa.
Calor
f) Desnaturalizacin
pH extremos
Al poner a calentar los otros tubos, el que
contena acido se torn ligeramente amarillo,
el que contenida agua se puso blanco
(ligeramente, como si se hubiera cocido) ,
mientras que aquel que contena hidrxido se
torn gelatinoso (transparente), en las
paredes del tubo se podan observar burbujas
adheridas.
Los tubos alcalinos se solubilizaron mientras
que los tubos cuyos pHs eran cidos, se
precipitaron.
22 de Mayo de 2015
DISCUSIN DE RESULTADOS.
En la realizacin de esta prctica no se encontraron dificultades algunas y se
realiz satisfactoriamente, ya que los resultados fueron adecuados al objetivo
planteado en esta prctica, el cual fue determinar la presencia de protenas
mediante reacciones de identificacin especficas, como lo fueron por el mtodo
del Biuret, por desnaturalizacin en cambios de pH y temperatura, precipitacin
por sales, metales y cidos.
CONCLUSIONES.
Las protenas son sustancias que forman un grupo de compuestos con gran
diversidad estructural y funcional, y se comportan como electrolitos. Son
molculas compuestas por 20 o ms aminocidos distintos, que estn en ellas con
un oren y proporcin definidos genticamente para cada protena. Esta unin se
da por los enlaces peptdicos.
Las protenas pueden tener diferentes tipos estructuras, como lo son la estructura
primaria (secuencia lineal de los residuos de los aminocidos), secundaria
(conformacin que se repite en la cadena polipeptidica y permite la formacin de
hlices alfa o placas beta), terciaria (conformacin tridimensional) y por ltimo la
estructura cuaternaria (dos o mas cadenas polipeptidicas iguales o diferentes).
Estas estructuras pueden romperse y ser identificadas por diferentes medios,
como lo son por el mtodo del Biuret, por un cambio en el pH o temperatura o al
ser agregados ciertos agentes qumicos especficos para romper el enlace
peptdico donde se encuentre un determinado aminocido.
CUESTIONARIO.
1.-Escriba la reaccin de formacin de biurea por calentamiento de la urea.
CO ( NH 2 )
2( 2)+ N 2 H 2C 2 H 6 N 4 O2
2.-Escriba la frmula del complejo de coordinacin de la biurea con los iones
Cu+2.
22 de Mayo de 2015
2+Cu(C 2 H 6 N 4 O2 )
C2 H 6 N 4 O2+Cu
3.-Describe el mtodo colorimtrico para evaluar protenas basndose en la
formacin de complejos tipo Biuret.
Se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH
2+
de los enlaces peptdicos en medio bsico. Cu
se acompleja con 4NH. La
intensidad de coloracin es directamente proporcional a la cantidad de protenas
(enlaces peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de manera que pocas
sustancias interfieren.
4.-Las protenas pueden clasificarse segn sus funciones biolgicas en:
Estructurales, transporte, defensa, hormonales, factores de crecimiento, catalticas
o enzimas, contrctiles, receptoras y de transferencia de electrones.
5.- Cul de las siguientes protenas tiene una estructura cuaternaria? Explica tu
respuesta.
a) -quimotripsina
tiene ms de una cadena polipeptidica y tiene estructura globular.
b) hemoglobina
Tiene cuatro cadenas polipeptidicas.
c) Insulina
d) Mioglobina
Tiene estructura cuaternaria. La mioglobina es una protena globular
formada por una nica
cadena polipeptidica de 153 residuos de
aminocidos de secuencia conocida.
e) Tripsina
Es una protena oligomrica, ya que es una enzima alosterica, la cual
cuenta con el sitio activo y el sitio alosterico, en el sito activo es donde se
adhiere el sustrato y en el alosterico donde la co-enzima.
22 de Mayo de 2015
LABORATORIO DE BIOQUMICA
PRCTICA No. 5
OBTENCIN DE CATALASA Y AMILASA
NOMBRE: Ivonne Lagunes Herrera
GRUPO: Ing.
FECHA: 22/May/15
Ambiental
1.-Qu funcin tienen las enzimas en los procesos metablicos?
Las enzimas son protenas de alto peso molecular, actan como catalizadores y
controlan los procesos metablicos de la clula, determinando el inicio y la marcha
de algunas reacciones.
2.-Qu es un cofactor o coenzima?
Un cofactor es un componente de tipo no proteico que complementa a una enzima
(que es una sustancia proteica). El cofactor tiene que estar presente en cantidades
adecuadas para que la enzima pueda actuar, catalizando una reaccin bioqumica.
Son cofactores las coenzimas y los iones metlicos.
Una coenzima es un tipo de cofactor; es un cofactor orgnico no proteico que se
requiere junto con la protena enzimtica para que tenga lugar la reaccin
enzimtica.
HOJA DE RESULTADOS
1.- Realice una tabla donde indique la intensidad del burbujeo que apreci en cada
tubo de cada serie.
2.- Anote la temperatura observada en el calormetro para cada 30 segundos.
3.- Describa los cambios de color para cada tiempo en la obtencin de la amilasa
salival.
22 de Mayo de 2015
Precipitacin de etanol y acetona: La parte superior se aprecia de otro
color
Precipitacin por mtales:
o Ag NO3 Se precipita con un color blanco ligero y el otro con un
blanco espeso.
o HgCl2: Precipita un color blanco espeso.
Precipitado por acido: Blanco transparente y se aprecia una separacin
Prueba de biuret: Se aprecia un precipitado morado y espuma blanca,
toma consistencia gelatinosa.
DISCUSIN DE RESULTADOS
Por la desnaturalizacin cambi de calor ya que se increment la temperatura y
cambi en su pH.
CONCLUSIONES
En la mayora de las protenas se present una desnaturalizacin debido a los
incrementos en la temperatura y es por ello que algunos presentaron cambio de
color y se separaron en dos fases.
CUESTIONARIO
1.- Qu son las peroxisomas y que importancia tienen dichos organismos
celulares?
Es el organelo celular en el que asientan algunas vas del metabolismo lipdico y
de algunos aminocidos y, de forma destacada, numerosas actividades
enzimticas de tipo oxidasa.
22 de Mayo de 2015
2.- La catalasa rompe el perxido de hidrgeno cerca de 107 veces ms rpido
que la reaccin no catalizada. Si la ltima requiere un ao, cunto tiempo se
necesitara para la reaccin catalasa-catalizador?
3.-Describe otros dos mtodos empleados para determinar la actividad de amilasa.
Mtodo de Lintner: Mide principalmente la actividad de la beta-amilasa de malta
o de jarabes y se basa en producir maltosa por un infuso de malta, haciendo
actuar una solucin de enzima en solucin tampn, bajo condiciones estndares
de tiempo y temperatura. Los grados de Lintner se calculan a partir del poder
reductor o contenido de maltosa del almidn convertido, determinado ya sea por el
ferricianuro o por la solucin de Fehling (41). Los grados de Lintner, multiplicados
por el factor 4, dan el equivalente en maltosa.
Mtodo de la Maltosa: Se basa en suspender 10 g de harina en 46 ml de solucin
tampn de pH 4,5-4,8 e incubar por 1 hora a 30C. Esto permite que la enzima
presente en la harina acte sobre el almidn y lo convierte en maltosa, la que se
determina por el mtodo del ferricianuro. El valor de maltosa se define como los
mg de maltosa producidos por 10 g de harina bajo las condiciones ya sealadas.
4.-Cules son los dos tipos de amilasa que se conocen?
pancretica o amilopsina y salival
5.-Menciona los productos de la accin de la -amilasa cuando se hidroliza un
enlace glicosdico
dextrinas y algunos monosacridos
22 de Mayo de 2015
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
LABORATORIO DE BIOQUMICA
PRCTICA No. 6
EFECTO DEL pH Y LA TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DE
REACCIN DE LA UREASA
NOMBRE: Ivonne
FECHA: 22/May/15
Lagunes
Herrera
GRUPO:
Ing.
Ambiental
PREGUNTAS PRELABORATORIO
1.- Qu es la ureasa?
Es una enzima que cataliza la hidrlisis de urea a dixido de carbono y amonaco.
2.- En donde se encuentra la ureasa?
Se encuentran en numerosas bacterias, hongos, algas, plantas y algunos
invertebrados, as como en los suelos, como una enzima del suelo.
HOJA DE RESULTADOS
1.- Grafique en papel milimtrico los micromoles de urea hidrolizados (ordenadas)
contra el pH o temperatura segn sea el caso (abscisas) y una los puntos en lnea
recta.
22 de Mayo de 2015
El nmero de micromoles de urea hidrolizados en cada tubo es igual a los ml de
HCl 0.1 N multiplicados por 50, que se deduce de la siguiente forma: se necesitan
dos moles de HCl por cada mol de urea hidrolizada. As, la solucin de HCl 0.1 N
contiene 100 micromoles/ml, por lo que a cada ml le corresponden 50 micromoles
de urea hidrolizados.
Ph
5
6
7.2
8
10
Temperatura
20
30
40
50
60
Ml de HCl 0.01N
Ml
de
urea
hidrolizados
1.1
5.5
1.5
7.5
14.6
73
8.4
42
1.1
20
Gotas de HCl 0.1 Ml de HC 0.1 N
hidrolizados
N
1
0.05
2.5
1
0.05
2.5
2
0.1
5
3
0.15
7.5
2
0.1
5
de
2.- Escriba la reaccin balanceada y con frmulas desarrolladas, de la hidrlisis de
la urea.
22 de Mayo de 2015
3.- Escriba la reaccin que ocurre entre el carbonato de amonio y el HCl durante la
titulacin.
HCl (ac) + NaHCO3 (ac) --> NaCl (ac) + H2CO3 (ac)
4.- De acuerdo con los resultados de tu grafica cul es el pH ptimo y la
temperatura ptima para la ureasa?
La temperatura optima de 40 ya que se acerca a un ph neutro
DISCUSIN DE RESULTADOS
Al presentarse cambio de temperatura tambin presenta tambin cambios de ph
CONCLUSIONES
El ph depende de la temperatura ya que en cuanto cambia la temperatura cambie
el ph y que la temperatura indicada es 40 ya que obtienes un ph neutro.
CUESTIONARIO
1.- Una enzima la cual tiene su actividad mxima en pH 5 exhibe una gran
reduccin de su actividad en pH 7 Explica brevemente por qu?
La mayora de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones
de pocas dcimas por encima o por debajo del pH ptimo pueden afectar
drsticamente su actividad. Es por ello que se han desarrollado sistemas ms o
menos complejos para mantener estable el pH intracelular: Los amortiguadores
fisiolgicos.
2.-Qu parmetros fundamentales influyen en la constante de velocidad de una
reaccin enzimtica? Qu parmetros influyen en la velocidad de una reaccin
enzimtica?
Depende de la cantidad de enzima con sustrato suficiente. La V ser igual y la
saturacin depender de la concentracin de enzima
3.-En las reacciones qumicas orgnicas e inorgnicas la temperatura es
incrementada ms rpidamente. Esta misma direccin es observada cuando una
reaccin de la enzima catalizada es llevada a cabo a 15, 25 y 40 C. Sin embargo
22 de Mayo de 2015
a 45 y 50 C la velocidad dereaccin disminuye fuertemente. Explica Por qu
sucede esto?
Al principio la velocidad de reaccin aumenta cuando la temperatura se eleva
debido al incremento de la energa cintica de la energa de las molculas
[Link] embargo, al final, la energa cintica de la enzima excede a la
barrera energtica para romper los enlaces dbiles de hidrogeno que conservan
su estructura secundaria y terciaria.
4.-Indica si los siguientes enunciados son Falsos o Verdaderos, si el enunciado es
falso, corrgelo.
a) El valor de la Vmx es una caracterstica fundamental para cada enzima.
b) Enzimas las cuales se ajustan a la cintica de Michaelis-Menten no estn
directamente involucradas en cualquier regulacin de realimentacin.
c) El HCl puede actuar como un cido general de la catlisis
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Lehninger, Albert. PRINCIPIOS DE BIOQUIMICA. 4 ED. BARCELONA. OMEGA.
2005
LAGUNA JOSE, ENRIQUE PIA [Link], Bioqumica de Laguna, 6 edicin
Pea. Bioqumica. Mxico. Limusa. 2004
HARPER, Bioqumica ilustrada, 17 edicin.
22 de Mayo de 2015
