Pruebas Bioqumicas
Prueba triple azcar hierro
Composicin
Extracto de carne
Extracto de levadura
Peptona
Proteasa
Lactosa
Dextrosa
Sulfato ferroso
Cloruro de sodio
Tiosulfato de sodio
Agar
Agua destilada
Indicador: Rojo de fenol
o cido: amarillo
o Alcalino: rojo
o Medio no inoculado:
naranja rojizo (pH =7.4)
Fundamento Bioqumico: Observar si una bacteria es capaz de producir
la enzima tiosulfato reductasa para reducir el tiosulfato de sodio a cido
sulfhdrico y desdoblar uno, dos o los tres carbohidratos.
El agar AHK es un medio diferencial, principalmente para Enterobacterias,
que determina la fermentacin de hidratos de carbono y la produccin de
cido sulfhdrico.
Resultados:
1. Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo
solamente fermenta la glucosa.
2. Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo
fermenta glucosa, y lactosa.
3. Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azcares.
4. La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
5. El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido
sulfhdrico.
Pico Alcalino
Fondo
Alcalino
Pico alcalino
Fondo cido
Produccin
de H2S
Pico alcalino
fondo cido
No H2S
Pico cido
Fondo cido
Produccin
H2S
Pico acido
fondo cido
No H2S
Alcaligenes
Psudomonas
Acinetobact
er
La mayoria
de
Salmonella
Arizona
Citrobacter
Shigella
Algunas
Proteus
Citrobacter
Arizona
algunos
Proteus
Escherichia
Klebsiella
Enterbacter
Prueba Lisina Hierro
Peptona
Extracto de levadura
Dextrosa
L-lisina
Purpura de bromocresol
Fundamento Bioquimico: Observar si una bacteria es capaz de
descarboxilar la lisina por medio de la Lisina Descarboxilasa y producir
cido sulfhdrico por la enzima Tiosulfato Reductasa.
Resultados:
1. Descarboxilacin de la lisina:
Prueba positiva: pico violeta/fondo violeta
Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo
2. Desaminacion de la lisina:
Pico rojizo/fondo violeta
3. Produccin de cido sulfrico:
Positivo: ennegrecimiento del medio
Tiosulfato de sodio
Sales de amonio citrato hierro
o Acido: color amarillo
o Alcalino: color violeta
o No inoculado: color
violeta (pH =6.0)
Ejemplos:
Tubo 1: Citrobacter
Tubo 2: Proteus, Providencia,
Morganella
Tubo 3: Escherichia,
Enterobacter, Klebsiella
Tubo 4: Salmonella,
Edwarsiella
Prueba Simmons Citrato
Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la
capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa.
Composicin
Fosfato monoamnico
Fosfato dipotsio
Cloruro de sodio
Citrato de sodio
Sulfato de sodio/magnesio
Azul de bromotimol
o cido: amarillo
o Alcalino: azul
o Neutro: verde
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de
nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono, su uso lleva a
aumentar la alcalinidad
Prueba
Negativa o
No
Prueba
Positiva
Prueba SIM
Destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de
hidrogeno en un mismo tubo. Es til para diferencias miembros de la familia
Enterobacteriaceae.
Composicin:
Triptena
Peptona
Sulfato de hierro y amonio
Tiosulfato de sodio
Fundamento bioqumico: El triptfano es un aminocido constituyente de
muchas peptonas, y particularmente de la Triptena, que puede ser oxidado
por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un
conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina
con el aldehdo del reactivo de Kovacs o de Erlich, para originar un
compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este
medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra,
mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la
formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato
siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2.
Resultados:
1. Movilidad:
Positivo: presenta turbidez o crecimiento ms all de la lnea de siembra.
Negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra.
2. Produccin de H2S
Positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo a lo largo de la lnea de
siembra o en todo el medio
Negativo: el medio permanece sin cambio de color.
3. Prueba del Indol: Agregar al medio 3 a 5 gotas de Indol Reactivo.
Positivo: Color rojo
Negativo: El color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.
Tubo A: Indol positivo y H2S positivo
Tubo B: Indol negativo y H2S positivo
Tubo C: Indol Positivo y movilidad positivo
Tubo D: Control negativo
Prueba de Nitratos
Determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos o
en nitrgeno libre.
La reduccin de nitrato en nitrito y en gas nitrgeno tiene lugar
generalmente en condiciones anaerobias, en las cuales un organismo
obtiene su oxigeno del nitrato. El oxgeno sirve como acepto final de
electrones. Las enzimas responsables de ambas reducciones se
denominan nitrato y nitrito reductasa
Composicin:
Peptona
Cloruro de sodio
Extracto de carne
Nitrato de potasio
Fundamento bioqumico: la reduccin de nitrato a nitrito est indicado por
la aparicin de color cuando el nitrito reacciona con los dos reactivos. La
reaccin de color resultante se debe a la formacin de un compuesto
diazoico. P-sulfobenceno-azo-alfa-naftilamina (color rojo).
Resultados:
1. Positivo: rosa a rojo intenso, el microorganismo reduce nitratos a nitritos
2. Negativo: ausencia de color rosa-rojo, se debe agregar unos granallas de
zinc y observar el color producido.
I.
Positivo: ausencia de color rosa-rojo luego del agregado de Zinc, el
microorganismo redujo los nitratos a gas nitrgeno.
II.
Negativo: desarrollo del color rosa-rojo luego del agregado de zinc, el
microorganismo no reduce los nitratos
Prueba de la Ureasa
Medio utilizado para la identificacin de microorganismos, en base a la
actividad uresica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea,
tales como Proteus, otras enterobacterias y estafilococos.
Composicin:
Peptona
Urea
Glucosa
Cloruro de sodio
Fosfato mono potsico
Rojo fenol
Fundamento bioqumico: Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de
la enzima ureasa liberando amonaco y dixido de carbono. Estos
productos alcalinizan el medio haciendo virar el rojo de fenol del amarillo al
rojo. En este medio, la fermentacin de la glucosa activa la enzima ureasa,
acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos organismos que
hidrolizan lentamente la urea, como especies de Enterobacter o Klebsiella.
Resultados:
1. Microorganismos que hidrolizan la urea: el medio de cultivo es de color
rosado-rojo
2. Microorganismos que no hidrolizan la urea: el medio de cultivo permanece
de color amarillo
Ejemplos:
Positivo: Proteus y Klebsiella(rosa dbil)
Negativo: Escherichia, Shigella, salmonella
Prueba Voges Proskauer
Determina la capacidad de algunos organismos para producir porductos
finales neutros como la acetona. Esta fermentacin de la glucosa es
caracterstica de E. aerogenes
Composicin:
Polipeptona
Dextrosa
Fosfato de potasio
Agua destiliada
Fundamento Bioqumico: La reaccin de VP se basa en la deteccin de
acetona como producto final neutro derivado del metabolismo de la
glucosa. sta es metabolizada en cido pirvico, intermediario clave en la
gluclisis. A partir del cido pirvico, una bacteria puede seguir muchas
vas. La produccin de acetona (precursor de la produccin de 2,3butanediol) que es uno de los ciclos para la degradacin de la glucosa en
las bacterias. La formacin de acetona y butilenglicol es una va alternativa
del metabolismo del cido pirvico. Las bacterias que utilizan esta va
producen solo pequeas cantidades de cidos mixtos que son insuficientes
para disminuir el pH del medio de rojo de metilo, lo bastante como para
producir un cambio de color. Por este motivo muchas de las especies de
Enterobacterias son VP positivas, con pocas excepciones son RM
negativas y viceversa.
Resultados:
1. Positivo: rosa-rojo en la superficie del medio.
2. Negativo: Amarrillo, tambin puede formarse un color cobrizo
Prueba Rojo Metilo
Detecta la fermentacin cido-mixta. Se acumulan cidos (actico, frmico,
etc.), relativamente fuertes y bajan el pH del medio hasta 4-5. Dicho cambio
de pH se detecta aadiendo un indicador (rojo de metilo) al cultivo.
Composicin:
Polipeptona
Glucosa
Fosfato dipotsico
Agua destilada
Rojo de metilo(indicador)
Resultados
1. Positivo: rojo en la superficie del medio, algunas bacterias pueden producir
menores cantidades de cido a partir del sustrato por ello es posible que
aparezca un color naranja, esto indica una prueba positiva (pH=4.4)
2. Negativo: amarillo o naranja (pH=6.0)
Ejemplos:
Positivo: Escherichia Coli, algunas especies de Yersinia
Negativo: Enterobacter Aerogenes, Enterobacter Cloacae, Klebsiella
Resultados: INVIMiC
