Javier Pichaco Garca
Inmunologa
2 Grado en Bioqumica
Fuerza del campo elctrico= Fuerza de friccin
qE
fv
f = coeficiente de friccin
(CVs / m2 = kg/s)
v = velocidad de la molcula
(m/s)
q = carga (C)
E = intensidad del campo
(V/m = N/C)
Las molculas se movern en funcin de sus movilidades electroforticas:
= v/E =q*E/E*f=q/f
Todo sistema que adquiera una corriente, debe emplearla en un trabajo qumico o
mecnico o se disipar en forma de calor. Una temperatura muy alta tiene un
efecto nefasto en el desarrollo de la electroforesis:
Provoca un ensanchamiento de las bandas
Forma corrientes que mezclan muestras separadas
Desnaturaliza los analitos ms sensibles a la temperatura
Disminuye la viscosidad del soporte y por tanto la resistencia al medio
Para controlar todos estos efectos indeseados, se emplean sistemas
refrigerantes de aire o lquido que consiguen mantener una temperatura
constante
La electroforesis se lleva a cabo en soportes que deben ser:
Porosos
Inertes
Distinguiremos dos tipos en funcin a estas caractersticas:
Restrictivos Separacin por tamao y forma
No restrictivos Separacin por carga de la molcula
Los soportes Se utilizan fundamentalmente para reducir la movilidad del frente
de molculas que migran hacia los polos.
-Geles de agarosa:
Es un polisacrido lineal cuyo monmero es la agarobiosa. Sus propiedades
gelificantes se atribuyen a la formacin de enlaces intra e intercatenarios.
Generalmente no posee cargas, aunque la sustitucin con determinados residuos
con grupos carboxilos, metoxilos, sulfatos generan cargas que pueden ser
pocos beneficiosas para el proceso.
-Geles de poliacrilamida:
Se le suele llamar PAGE
Es un polisacrido cuyo monmero es la acrilamida
-Electroforesis Zonal:
La muestra se desplaza por un soporte slido (PAGE, acetato de celulosaetc) y
consta de una fuente de alimentacin (para proporcionar la corriente elctrica),
una cubeta y el propio soporte
-Electroforesis Libre:
Las diferentes biomolculas, que se encuentran libres es una disolucin, se desplazan a
velocidades diferentes segn sus cargas y coeficientes de friccin respectivos, formndose
nubes que se van desplazando en la disolucin tampn y que puede seguirse con diversos
sistemas pticos, ponindose de manifiesto las sustancias que se van separando.
-Electroforesis Capilar:
Los componentes bsicos
incluyen:
Fuente de alimentacin (alto
voltaje)
Capilar (25-100 micrmetros
dimetro)
2 recipientes para el
tampn donde se acopla el
capilar
Los dos electrodos
conectados a la fuente
Detector (espectrofotmetro)
Es una tcnica que combina la electroforesis zonal y la inmunodifusin doble
Durante la historia a permitido caracterizar diferentes protenas en suero y distinguir
distintos tipos de inmunoglobulinas y sus caractersticas electroforticas
Se suele llevar a cabo en gel de agarosa
Procedimiento:
Se aplica la muestra sobre el gelElectroforesis
Se aplica suero con anticuerpos especficosReposar 24-48 horas
Formacin de complejos Anticuerpo-Antgeno insolubles Aparicin de bandas
Se lava
Se tie con azul de coomassie (Por ejemplo)
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ote%C3%[Link] (Laura Rncn de Pablo)
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Biochemical methods : a concise guide for students and
researchers / A. Pingoud ... [et al.]. [Link]
S/Sesi%C3%[Link]
