Facultad de Ingeniera Qumica
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Identificacin de Staphylococcus Aureus en
superficies vivas
Integrantes:
Bardales Subia, Hctor
Gutierrez Flores, Israel
Lopez Monja, Jean Carlos
Dagiau Tejada Bruno Jos
Galox Reategui, Frank Lionel
Profesora:Mg. Herrera Sanchez, Sonia
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
I.
OBJETIVOS
Determinar la presencia de staphylococcus aureus en superficies vivas (mano).
Identificar y reconocer las caractersticas que poseen las colonias formadas.
II. FUNDAMENTO TERICO
AGENTE ETIOLGICO
Los integrantes del gnero Staphylococcus, son cocos gram positivos, de
0.5-1.5 m de dimetro, catalasa positivos, que se encuentran microscpicamente
aislados, en pares, ttradas o formando racimos irregulares (trmino derivado del
griego staphyl: racimo de uvas, Ogston, 1883). Son inmviles, facultativamente
anaerobios, no formadores de esporas, generalmente no capsulados o con
limitada formacin de cpsula.
El gnero Staphylococcus est ubicado junto a los gneros Micrococcus,
Planococcus y Stomatococcus en la Flia. Micrococcaceae. Staphylococcus
aureus, especie coagulasa positiva, es un reconocido patgeno humano, siendo
agente etiolgico de un amplio espectro de infecciones de origen comunitario y
nosocomial.
S. aureus, tiene una amplia gama de determinantes de virulencia, que abarca
componentes de pared celular y una gran variedad de exoprotenas que
contribuyen en su habilidad para colonizar y causar enfermedad en mamferos.
Casi todas las cepas producen un grupo de enzimas y citotoxinas que incluyen 4
hemolisinas (alfa, beta, gamma y delta)
nucleasas, proteasas, lipasas,
hialuronidasas y colagenasa. La principal funcin de estas protenas sera
convertir tejidos del husped en nutrientes requeridos para el desarrollo
bacteriano.
Algunas cepas producen una o ms exoprotenas adicionales, que incluyen:
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Pgina 1
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
- toxina -l del shock txico estafilocccico (TSST-l)
- toxina exfoliatina (ETA y ETB)
- leucocidina y
- el grupo de toxinas que nos ocupan en este captulo, enterotoxinas
estafilocccicas (SE): SEA, SEB, SECn, SED, SEE, SEG,SEH Y SEI. Son
protenas inmunolgicamente diferentes, con pesos moleculares que oscilan entre
28.000 y 35.000 dalton.
Cada una de estas toxinas es conocida por sus potentes efectos en clulas del
sistema inmune, pero muchas de ellas tambin tienen otros efectos biolgicos,
siendo reconocidas como superantgenos pirognicos (PTSAgs).
Cada una de estas exotoxinas exhiben al menos tres propiedades biolgicas:
- pirogenicidad,
- superantigenicidad, que se refiere a la habilidad de estas exotoxinas de estimular
la proliferacin de linfocitos T sin tener en cuenta la especificidad antignica de
estas clulas.
- aumento de sensibilidad a la accin de endotoxina en modelos experimentales
en conejo.
Algunas
de
ellas
presentan
propiedades
adicionales.
Por
ejemplo
las
enterotoxinas de las que nos referiremos a partir de ahora son potentes agentes
emticos en tanto los otros integrantes no lo son y por esta razn estn
histricamente relacionadas con un cuadro bien definido que es la intoxicacin
alimentaria por Staphylococcus aureus.
Son producidas en la fase exponencial del desarrollo y los genes que las codifican
se encuentran en plsmidos, bacterifagos o elementos genticos heterlogos,
referidos como islotes de patogenicidad.
Su expresin es controlada por al menos tres sistemas reguladores globales
denominados:
- gen regulador accesorio (agr)
- gene accesorio regulador estafilocccico (sar)
- sistema represor por catabolitos.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Pgina 2
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
Cada enterotoxina es traducida en un precursor proteico conteniendo una
secuencia seal aminoterminal, que es clivada durante la exportacin desde la
clula. La enterotoxina (SE) madura es una pequea molcula polipeptdica no
glicosilada, moderadamente estable a inactivacin qumica, proteolisis y
desnaturalizacin por ebullicin.
ENFERMEDAD PRODUCIDA
La enfermedad estafilocccica trasmitida por alimentos, resulta de la ingestin de
enterotoxinas
termoestables
preformadas
por
una
cepa
toxignica
de
Staphylococcus aureus que contamin y desarroll en el alimento.
Generalmente ocurre en brotes, predominantemente en verano, y el organismo
responsable es generalmente aislado de personas involucradas en la preparacin
del alimento.
La incidencia es desconocida pero es probablemente una de las causas de
enfermedad trasmitida por alimentos ms frecuentes.
Entre los alimentos implicados contaminados ms frecuentemente se encuentran:
ensaladas de papas y huevos, pastelera, jamn, pollo, cremas heladas.
En Uruguay, segn datos recogidos del Sistema de Informacin Regional para la
Vigilancia Epidemiolgica de las ETA, durante el perodo 1993-2001 han sido
declarados 12 brotes de intoxicacin estafilocccica, con un total de 164 afectados
sin fallecimientos.
En 9 brotes se identificaron lcteos como alimento responsable, siendo carnes
rojas y aves en los 3 restantes.
En cuanto a los locales de origen, 7 brotes ocurrieron en comedores, 2 en
viviendas y los 3 restantes en restaurants, escuela y otros.
ASPECTOS CLNICOS
La contaminacin de alimentos por S. aureus, est asociada con una forma de
gastroenteritis que se manifiesta clnicamente por un cuadro caracterizado por
vmitos (76% de casos) y diarrea (77% de casos). El corto perodo de incubacin
de 1-6 horas orienta a la sospecha de enfermedad producida por ingestin de una
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Pgina 3
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
o ms enterotoxinas preformadas en el alimento que ha sido contaminado con
cepas de S. aureus productor de la misma.
Son raramente observados signos de toxicidad sistmica, tales como fiebre
e hipotensin
En general, es un cuadro autolimitado que tpicamente se resuelve en 2448 horas desde el inicio.
No est claro si se desarrolla en humanos inmunidad a largo plazo, pero
anticuerpos frente a una SE no necesariamente confieren inmunidad frente a la
intoxicacin por S. aureus, ya que existe mltiples SE capaces de producir
enfermedad. En algunos casos, anticuerpos producidos frente a una SE confieren
proteccin cruzada contra otra SE, ya que algunas comparten eptopes.
Todas las SE son capaces experimentalmente en primates de producir emesis, y
no se registra enterotoxemia, excepto en dosis muy altas, probablemente debido a
su dificultad para atravesar mucosas.
El 99% de casos de intoxicacin alimentaria por enterotoxinas estafilocccicas
est
asociado
S.
aureus y ocasionalmente
se
reportan
casos
por
Staphylococcus epidermidis.
Las cepas estafilocccicas enterotoxignicas aisladas de alimentos implicados en
brotes de infeccin son ms a menudo lisadas por fagos del grupo lll, y menos
frecuentemente simultneamente por los grupos l y lll.
PATOGENIA
El sitio blanco de accin de las enterotoxinas que origina el reflejo emtico est
localizado en la vscera abdominal, donde existen receptores celulares para SE.
Debido a que estos receptores no han sido identificados resta mucha
incertidumbre con respecto a los eventos tempranos en la patogenia de la
intoxicacin por S. aureus.
La hiptesis ms sustentada argumenta que los vmitos ocurren en respuesta a la
inflamacin inducida por las enterotoxinas. Los sntomas estn altamente
correlacionados con la produccin de un gran nmero de mediadores de la
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Pgina 4
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
inflamacin,
incluyendo
prostaglandina
E2,
leucotrieno
B4,
cido
5-
hidroxicicosatetraenoico.
No est claro si estos mediadores son generados directa o indirectamente en
respuesta a las SE.
En ltima instancia, la respuesta emtica a las SE es dependiente de la activacin
del centro del vmito en el tronco enceflico, el cual es estimulado por impulsos
trasmitidos desde el vago y nervios simpticos.
TRATAMIENTO
Como para la mayora de enfermedades trasmitidas por alimentos autolimitadas,
las medidas de sostn son la base del tratamiento. No est indicado tratamiento
con antimicrobianos.
METABOLISMO
Los Staphylococcus aureus se desarrollan rpidamente en todos los medios,
fermentan lentamente en carbohidratos, como en manitol salado, pero no se
produce gas. La actividad proteoltica vara mucho de una cepa a otra. Los
staphylococcus aureus producen pigmentos que van desde un color blanco hasta
un amarillo intenso con halo amarillo como en el manitol salado.
Estas bacterias tienen un metabolismo anaerobio facultativo, con excepcin de las
subespecies Staphylococcus aureus anaerobius y Staphylococcus aureus
saccharolyticus que crecen en forma anaerobia y a menudo son catalasa
negativa.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Pgina 5
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
III.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Esterilizamos el rea de trabajo y los materiales a utilizar.
2. Preparamos 1L de solucin salina 0,08%, del cual utilizaremos 100mL.
3. Colocamos agua en un vaso de precipitado, logrando que cubra 3/4del
envase del agar, y lo llevamos a calentar hasta fundir el agar, quedando el
agar en estado lquido y se encuentre en un intervalo de temperaturas de
45 a 65 C.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Pgina 6
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
4. Medimos en una probeta 20ml del agar.
5. Ahora agregamos los 100mL de solucin salina 0,08% a una bolsa ziploc
en el cual sumergimos la mano de un compaero durante 5 minutos segn
norma.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Pgina 7
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
6. Luego del lavado, en una placa Petri agregamos 1mL de la muestra de la
bolsa ziploc con 20 mL del Agar ya fundido. Esperamos a que se enfre y lo
colocamos en la incubadora.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Pgina 8
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
IV.
INFORME DE ENSAYO
Anlisis: Microbiolgico de Staphylococcus aureus en superficies vivas
Lugar de muestreo: Primer piso de laboratorio de Ing. Qumica Laboratorio de
Microbiologa
Nombre de la muestra: Mano de individuo
Identificacin de Staphylococcus aureus
Fecha de muestreo: 03/06/15
Fecha de anlisis: 05/06/15
ENSAYO
RESULTADO
LIMITE
PERMISIBLE
STAPHYLOCOCCUS
AUREUS
0 UFC/mano
< 100 UFC/mano
FOTO
CONCLUSIN
LA MANO DEL
LABORATORIO.
INDIVIDUO
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
EST
APTA
PARA
EL
TRABAJO
EN
Pgina 9
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
V.
CONCLUSIONES
En la placa Petri no se observ la formacin de colonias de Staphylococcus
aureus (0 colonias), por lo tanto la mano del individuo est apta para el
trabajo en el laboratorio, ya que el lmite mximo permisible no debe
sobrepasar las 100 UFC por mano.
VI.
RECOMENDACIONES
Trabajar en un ambiente lo ms estril posible.
Esterilizar todos los materiales a utilizar.
VII.
REFERENCIA BIBLIOGRAFIA:
Manual of Clinical Microbiology. Murray, P. 1995 6th edition.
Principles and Practice of Infectious Diseases. Mandell, Douglas, Bennett.
1995. 4th edition.
Dinges M, Orwin P, Schlievert P. 2000. Exotoxins of Staphylococcus
aureus. Clinical Microbiology Reviews, vol 13; 16-34.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Pgina 10
