BENEMERITA UNIVERSIDAD
AUTONOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE MEDICINA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Y VIROLOGIA
M.C. CECILIA RUIZ MADRID
PRACTICA 8:
ANTIBIOGRAMA
ALUMNOS:
ARTURO MONTALBAN GARCIA
JOSUE EMMANUEL LOPEZ GALVAN
JESUS YAIR SANCHEZ SANCHEZ
GABRIELA DURAN GONZALEZ
FELIPE DE JESUS CABA FLORES
DANIEL LARA PEREZ
PRIMAVERA 2015
ANTIBIOGRAMA
Es
Estudio de la sensibilidad in vitro
de las bacterias a los antibiticos.
Cuyo objetivo es
Proveer al clnico recomendaciones
sobre una terapia especifica.
Aunque
NO siempre resulta eficaz, pues
influyen factores
Como
Por ejemplo
Por ejemplo
Factores del
Agente
microbiano
Por ejemplo
Factores del
Husped
Factores del
Microorganismo
Enfermedad
Farmacocintica
Virulencia
Estado inmunolgico
Unin a protenas del
plasma
Alta concentracin de
microorganismos
Formacin de
absceso
Vas de
administracin
Infeccin mixta
Funcin renal y
heptica
Concentracin en el
sitio de infeccin
Resistencia durante el
tratamiento
Cumplimiento del
tratamiento
Accin
bacteriosttica
O bactericida
Determinan
Sensibilidad de un organismo
A determinados antimicrobianos
Mediante
Pruebas de sensibilidad
Que buscan
Menor concentracin del antimicrobiano en mg/ml
que evita el crecimiento in vitro del microbio
Como
Se
Pueden realizar por
distintos mtodos
Es
Concentracin mnima inhibitoria (CMI)
Como
Difusin
Dilucin
Utilizadas en
- Tubos
- Placas
- Agar
Utilizadas en
Pruebas
De disco
Introduccin
Trabajo Prctico N 3
Objetivo
DETERMINACIN DE LA SENSIBILIDAD
DE LAS BACTERIAS A LOS
ANTIBIOTICOS (ANTIBIOGRAMA)
Fundamento
Procedimiento
Resultados
Observaciones
INTRODUCCIN
La resistencia de las bacterias es el principal obstculo para la eficacia teraputica de los antibiticos, pues
no slo puede anular la accin curativa si se manifiesta en el curso del tratamiento, sino que tiene a la
larga consecuencias todava ms graves para el conjunto de la poblacin, ya que provoca la desaparicin
de las cepas susceptibles y la propagacin de las resistentes. Ese es el motivo por el cual la determinacin de la sensibilidad de las bacterias a los antibiticos haya adquirido tanta importancia y sea indispensable para hacer de los antibiticos un uso racional y
para preservar la eficacia de este grupo tan valioso
de agentes teraputicos.
El conocimiento de la sensibilidad a los antibiticos,
del microorganismo causante de una enfermedad, no
es slo importante para hacer la seleccin inicial del
agente teraputico correspondiente, sino que adems
en aquellos casos en los cuales el paciente presente
intolerancia a determinado frmaco, permite seleccionar el ms adecuado para ese paciente en particular.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA ANTIBIOGRAMA
_________________________________________________________________________________________________
Los antibiogramas son mtodos in vitro que determinan la susceptibilidad de los
microorganismos a una variedad de agentes antimicrobianos, bajo condiciones
de laboratorio especficas y estandarizadas. La meta principal del estudio de
susceptibilidad es proveer al clnico algunas recomendaciones sobre la terapia
que puede ser ms apropiada en pacientes con una infeccin especfica. No
obstante, la correlacin exacta entre los resultados in vitro y la respuesta clnica
es muchas veces difcil de predecir, ya que existen numerosos factores que influencian la interaccin de los agentes antimicrobianos y los microorganismos en
un determinado paciente. Entre los factores podemos resaltar:
Factores del agente antimicrobiano
o
Farmacocintica
Unin a protenas del plasma
Vas de administracin
Accin bacteriosttica o bactericida
Concentracin en el sitio de la infeccin
Factores del husped
o
Enfermedad
Estado inmunolgico
Formacin de absceso
Presencia de cuerpo extrao
Funcin renal y heptica
Cumplimiento del tratamiento
Factores del microorganismo
o
Virulencia
Alta concentracin de microorganismos
Infeccin mixta
Desarrollo de resistencia durante el tratamiento
La metodologa usada para realizar el antibiograma toma en consideracin algunos de estos factores para determinar ms eficientemente cmo un microorganismo podra responder in vivo a un determinado antibitico.
Existen diversos mtodos para determinar la sensibilidad bacteriana a los antibiticos, presentando adems cada uno de estos mtodos, mltiples variantes.
3.2
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA ANTIBIOGRAMA
_________________________________________________________________________________________________
Cualquiera que sea el mtodo seleccionado, el medio de cultivo a emplear ha de
ser aquel que permita un buen desarrollo del microorganismo cuya sensibilidad
se determina y adems no debe ejercer ningn efecto inhibidor sobre la actividad antibacteriana de los antibiticos o quimioterpicos ensayados.
Usualmente se utiliza el agar de Mueller-Hinton en las pruebas de sensibilidad
de microorganismos aerbicos de rpido crecimiento. Cuando se trata de estreptococos u otros microorganismos exigentes, se le aade al Mueller-Hinton, 5%
de sangre desfibrinada.
De los mtodos existentes, el ms popular es el del disco de papel. La variante
ms utilizada de este mtodo es la de Kirby Bauer, la cual consiste en utilizar
una sola concentracin de antibitico y medir el tamao de la zona de inhibicin.
OBJETIVO
Realizar un ensayo de sensibilidad de un cultivo bacteriano a los antibiticos,
usando el mtodo de Kirby Bauer. Interpretar los resultados y hacer el informe
correspondiente.
FUNDAMENTO
En el mtodo de Kirby Bauer, el microorganismo es inoculado en la superficie de
una placa de agar, sobre el cual se colocan discos impregnados con una concentracin conocida del antibitico. Las placas se incuban por 16-18 horas a 3537C. Durante la incubacin, el antibitico difunde radialmente desde el disco a
travs del agar, por lo que su concentracin va disminuyendo a medida que se
aleja del disco. En un punto determinado, la concentracin del antibitico en el
medio es incapaz de inhibir al germen en estudio. El dimetro del rea de inhibicin alrededor del disco puede ser convertido a las categoras de sensible, intermedio o resistente (S, I, o R) de acuerdo a tablas publicadas por los organismos encargados del control de tales mtodos, por ejemplo el Comit Nacional
de Estandar de Laboratorios Clnicos de los Estados Unidos de Norteamrica
(National Committee for Clinical Laboratories Standards).
PROCEDIMIENTO
Para obtener resultados confiables y reproducibles mediante este mtodo, es
imprescindible seguir fielmente las instrucciones que daremos a continuacin:
1.
Funda el medio de cultivo y djelo enfriar a 45-50C.
2.
Vierta aspticamente suficiente cantidad de medio de cultivo en una placa
de Petri, para obtener una capa de 4 mm de espesor. Para una placa de 10
3.3
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA ANTIBIOGRAMA
_________________________________________________________________________________________________
cm. de dimetro se requieren 30 mL de medio y para una de 15 cm se requieren 70 mL.
3.
Deje solidificar el medio de cultivo y luego seque las placas durante 30 minutos antes de usarlas para la inoculacin.
4.
Inocule la placa mediante un hisopo estril utilizando una suspensin del
germen de 18 a 24 horas de incubacin con una turbidez equivalente a
1,5 x 106 bacterias (Equivale al tubo No. 5 de la escala de Mc Farland). Para la inoculacin sumerja un hisopo estril en el cultivo y elimine el exceso
rotndolo firmemente contra la pared interna del tubo. Frote el hisopo sobre
la superficie del medio de cultivo.
5.
Repita esta operacin por tres veces sucesivas, rotando la placa para obtener una dispersin uniforme del inculo en toda la superficie.
6.
Coloque la tapa a la placa y deje secar el inculo por 3 a 5 minutos.
7.
Coloque los discos con los antibiticos sobre el agar mediante pinzas estriles o usando un aplicador de discos. Oprima los discos suavemente con
una pinza para asegurar un buen contacto con el medio de cultivo. Los discos deben estar espaciados de manera que su distancia a la pared de la
placa sea de 15 mm y entre ellos de 30 mm.
8.
Incube a 35 37C hasta el siguiente da (aproximadamente 18-19 horas).
Si se requieren los resultados con rapidez se pueden leer las zonas de inhibicin despus de 6-8 horas de incubacin, pero estos resultados deben
ser confirmados mediante una nueva lectura despus de la incubacin por
las 18 -19 horas.
9.
La medida del dimetro de la zona de inhibicin se hace preferentemente
desde el exterior de la placa, sin quitar la tapa, esto puede hacerse con una
regla milimetrada, un vernier o cualquier otro Instrumento similar.
10. Los resultados se interpretan de acuerdo con la tabla 1.
3.4
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA ANTIBIOGRAMA
_________________________________________________________________________________________________
11. Ensayos de control con microorganismos cuya sensibilidad se conoce, tales
como el Staphyloccccus aureus ATCC 25923 y Escherichia coli ATCC
25922, deben ser efectuados simultneamente con el de los grmenes en
estudio y las zonas de inhibicin obtenidas con ellos deben estar comprendidas entre los valores indicados en la tabla 2.
3.5
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA ANTIBIOGRAMA
_________________________________________________________________________________________________
TABLA 1. INTERPRETACIN DEL MTODO DE KIRBY BAUER
Dimetro
de
Contenido del en mm
disco
Resistente
<o=
Agente antimicrobiano
la
zona
de
inhibicin
Intermedio
Sensible
>o=
BETALACTMICOS, PENICILINAS
Ampicilina Enterobacteriaceae
10 g
13
14-16
17
Ampicilina Estafilococos
10 g
28
---
29
Ampicilina Enterococos
10 g
16
---
17
Ampicilina Estreptococos hemolticos
10 g
18
19-25
26
Mezlocilina Pseudomonas aeruginosa
75 g
15
---
16
Mezlocilina Enterobacteriaceae
75 g
17
18-20
21
Oxacilina Estafilococos
1 g
10
11-12
13
Oxacilina Neumococos para evaluar sensibilidad a penicilina
1 g
---
---
20
Penicilina G Estafilococos
10 U
28
---
29
Penicilina Enterococos
10 U
14
---
15
Penicilina Estreptococos hemolticos
10 U
19
20-27
28
Piperacilina Pseudomonas aeruginosa
100 g
17
---
18
Piperacilina Enterobacteriaceae
100 g
17
18-20
21
COMBIN. CON INHIBIDORES B-LACTAMASA
Amoxicilina / Acido Clavulnico Estafilococos
20/10 g
19
---
20
Amoxicilina / Enterobacteriaceae
20/10 g
13
14-17
18
Ampicilina / Sulbactama
10/10 g
11
12-14
15
Piperacilina / Tazobactama Enterobacterias
100/10 g
17
18-20
21
Piperacilina / Pseudomonas aeruginosa
100/10 g
17
---
18
Piperacilina / Esfafilococos meticilina S
100/10 g
17
---
18
CEFALOSPORINAS
Cefaclor
30 g
14
15-17
18
Cefazolina
30 g
14
15-17
18
Cefepima
30 g
14
15-17
18
Cefixima
5 g
15
16-18
19
Cefoperazona
75 g
15
16-20
21
Cefotaxima
30 g
14
15-22
23
Cefoxitina
30 g
14
15-17
18
Ceftazidima
30 g
14
15-17
18
Ceftixozima
30 g
14
15-19
20
Ceftriaxona
30 g
13
14-20
21
Cefuroxima sdica parenteral
30 g
14
15-17
18
Cefalotina
30 g
14
15-17
18
3.6
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA ANTIBIOGRAMA
_________________________________________________________________________________________________
CARBAPENEMS
Imipenem
10 g
13
14-15
16
Meropenem
10 g
13
14-15
16
15
16-21
22
MONOBACTAMAS
Aztreonam
30 g
GLICOPPTIDOS
Teicoplanina
30 g
10
11-13
14
Vancomicina Enterococos
30 g
14
15-16
17
Vancomicina Estafilococos
30 g
---
---
15
AMINOGLUCSIDOS
Amicacina
30 g
14
15-16
17
Gentamicina
10 g
12
13-14
15
Kanamicina
30 g
13
14-17
18
Netilmicina
30 g
12
13-14
15
MACRLIDOS
Azitromicina
15 g
13
14-17
18
Claritromicina
15 g
13
14-17
18
15 g
13
14-22
23
Eritromicina
TETRACICLINAS
Minociclina
30 g
14
15-18
19
Tetraciclina
30 g
14
15-18
19
5 g
15
16-20
21
QUINOLONAS
Ciprofloxacina
Fleroxacina
5 g
15
16-18
19
Nalidxico cido
30 g
13
14-18
19
Norfloxacina
10 g
12
13-16
17
5 g
12
13-15
16
10 g
13
14-16
17
Ofloxacina
Trovafloxacina
OTROS ANTIMICROBIANOS
Cloranfenicol
30 g
12
13-17
18
Clindamicina
2 g
14
15-20
21
Nitrofurantona
300 g
14
15-16
17
Polimixina B
300 U
9 - 11
12
Rifampicina
5 g
16
17-19
20
300 g
12
13-16
17
1.25/23.75 g
10
11-15
16
Sulfonamidas
Trimetoprima - Sulfametoxazol
3.7
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA ANTIBIOGRAMA
_________________________________________________________________________________________________
Tabla 2 CONTROLES DEL MTODO DE KIRBY BAUER
ANTIBITICO
Ampicilina
Bacitracina
Cefalotina
Cloramfenicol
Colistina
Eritromicina
Gentamicina
Kanamicina
Meticilina
Neomicina
Novobiocina
Oleandomicina
Penicilina G
Polimixina B
Estreptomicina
Tetraciclina
Vancomicina
CONCENTRACIN
DEL DISCO
10 g
10 U
30 g
30 g
10 g
15 g
10 g
30 g
5 g
30 g
30 g
15 g
10 U
300 U
10 g
30 g
30 g
DIMETRO DE LA ZONA DE INHIBICIN
(en mm)
CON S. aureus
CON E. coli
ATCC 25923
ATCC 25922
24-35
15-20
17-22
--25-37
18-23
19-26
21-27
11-15
22-30
8-14
19-27
19-26
19-26
17-25
17-22
18-26
17-23
22-31
19-28
26-37
7-13
12-16
14-22
12-20
19-28
18-25
15-19
-
RESULTADOS
Antibiograma
Germen ___________________________________
Antibitico
Concentracin
Dimetro de la zona
de inhibicin
3.8
Interpretacin
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA ANTIBIOGRAMA
_________________________________________________________________________________________________
OBSERVACIONES
Compare los resultados obtenidos por Ud. con los de algunos de sus compaeros. Anote sus conclusiones.
BIBLIOGRAFA
Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiologa. Manual de Mtodos
Generales. Segunda edicin. Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela.
Palavecino Rosales E. 1997. Boletn Escuela de Medicina. Pontificia Universidad Catlica de Chile.1997;26:156-160.
URL: [Link]
Prof. Magaly Pedrique de Aulacio
Febrero 2002
3.9
