Introduccin
Una de las herramientas ms importantes que usan los bilogos para estudiar
estructuras celulares es el microscopio. Las clulas fueron descritas por
primera vez en 15 por el cientfico ingls Robert Hooke en su libro
Micrographia. Utilizando un microscopio que l mismo fabrico, Hooke examin
un trozo de corcho y dibujo y describi lo que vio.
Eligi el trmino clula porque el tejido le recordaba las pequeas habitaciones
en las que viven los monjes. Curiosamente lo que Hooke vio no eran realmente
celular vivas, sino las paredes de las celular del corcho muertas. Mucho ms
tarde los cientficos reconocieron que el interior que encierran las paredes es la
parte ms importante de las clulas vivas.
Pocos aos despus inspirado por el trabajo de Hooke, el holands Anton Van
Leeuwenhoek examino clulas vivas con unos pequeos lentes que haba
fabricado, era un experto en un pulido de lentes y fue capaz de ampliar
imgenes ms de 22 veces. Entre sus descubrimientos importantes estn las
bacterias, los protistas, las clulas de la sangre y los espermatozoides.
La capacidad del ojo humano es limitada a la hora de estudiar lo pequeo, hay
una inmensa cantidad de clulas y microorganismos que influyen
significativamente en la vida del hombre y que por ello exigen ser estudiadas
en favor de un mayor conocimiento y mejora en la calidad de vida.
Gracias a los avances y progresos en el campo de la microscopia el hombre ha
sido capaz de ver organismos y estructuras que a simple vista serian invisibles
y con ellos efectuar descubrimientos decisivos en el campo de la microbiologa,
relacionados con las transformaciones de la materia orgnica, las causas de
las enfermedades o los agentes implicados en los cambios geoqumicos
Objetivos:
Reconocer las partes del microscopio y sus diferentes preparados
El microscopio
1. Definicin: El microscopio es un instrumento ptico que amplifica la
imagen de un objeto pequeo. Es el instrumento que ms se usa en los
laboratorios que estudian los microorganismos. Mediante un sistema de lentes
y fuentes de iluminacin se puede hacer visible un objeto microscpico. Los
microscopios pueden aumentar de 100 a cientos de miles de veces el tamao
original.
Actualmente existen dos tipos de microscopios: el ptico y el electrnico. En el
microscopio ptico el aumento del objeto se consigue usando un sistema de
lentes que manipula el paso de los rayos de luz entre el objeto y los ojos. El
microscopio electrnico utiliza un rayo de electrones controlado por un campo
magntico.
2. Tipos de microscopio:
a) Microscopio ptico: Los microscopios de este tipo generalmente
producen un aumento de 1000 veces el tamao original. El lmite lo tienen en
unas 2000 veces. Los lentes de un microscopio ptico son el condensador, el
objetivo y el ocular. La luz que entra en el sistema debe enfocarse sobre la
preparacin y para esto se utiliza el condensador. Elevando o bajando el
condensador puede alterarse el plano del foco de luz y elegirse una posicin
que consiga el foco preciso. El objetivo es la lente situada cerca del objeto que
se observa. El aumento primario del objeto es producido por la lente objetivo y
la imagen se transmite al ocular, donde se realiza el aumento final.
Los microscopios que se usan normalmente en microbiologa estn equipados
con tres objetivos: bajo poder, alto poder y objetivo de inmersin. Estos
objetivos estn montados sobre una pieza que se llama revolver que puede
rotarse para alinear el objetivo deseado con el condensador. La imagen
formada por el objetivo es finalmente aumentada por el ocular. El aumento total
de un microscopio compuesto es el producto del aumento de su objetivo y de
su ocular. El microscopio compuesto es capaz de conseguir aumentos
considerablemente mayores que el microscopio construido con una sola lente.
Este ltimo, llamado microscopio simple, se usa principalmente como lupas y
cristales de aumento.
b) Microscopio electrnico: Los microscopios electrnicos utilizan rayos
de electrones en lugar de la luz, lo que les permite tener un poder de resolucin
muy elevado. La longitud de onda de los rayos de electrones es de 0,005 0,0003 nm, muy corta comparada con la de la luz visible (426 - 750 nm; violeta
- rojo). Es posible con el microscopio electrnico resolver objetos separados
por una distancia de 0,003 m, comparado con los 0,25 m de uno ptico. Los
aumentos pueden llegar a ser de un milln de veces. A causa de la naturaleza
de este instrumento slo pueden examinarse objetos muy delgados; incluso
una sola bacteria es demasiado gruesa para ser observada directamente. Por
lo que, para preparar muestras para el microscopio electrnico se necesitan
tcnicas especiales de cortes ultrafinos. Para seccionar las clulas primero
deben ser fijadas y deshidratadas (etanol o acetona). Despus de la
deshidratacin, la muestra se incluye en una resina y es aqu donde se realizan
cortes finos con un ultramicrtomo, por lo general equipado con una cuchilla de
diamante. Una sola clula bacteriana puede cortarse en cinco o seis secciones
muy finas. Si slo tiene que observarse el contorno de un organismo, no son
necesarias secciones finas por lo que se montan clulas enteras que se
recubren de una capa fina de un metal pesado (oro). El rayo de electrones es
dirigido sobre la preparacin y los electrones dispersados por el metal pesado
activan una pantalla de observacin produciendo una imagen. A la primera
tcnica se la denomina Microscopa Electrnica de Transmisin (MET) y a la
segunda Microscopa Electrnica de Barrido (MEB).
3. Partes del microscopio:
3.1 Componentes pticos del microscopio:
a)Los objetivos: constan de un sistema de lentes podemos de hablar de
objetivos secos que son aquellos en los que entre el objetivo y la preparacin
solo hay aire y tambin podemos hablar de objetivos de inmersin, cuando es
necesario colocar entre el lente y la preparacin un elemento lquido, que
permite una mayor luminosidad. Esta y otras caractersticas como: aumento del
objetivo, apertura numrica, longitud del tubo y espesor del cubreobjetos,
vienen indicadas mediante unas marcas en el objetivo
b) Los oculares: estn formados por dos lentes que se encuentran separadas
por un diafragma. Para hacer ms cmoda la observacin, existen
microscopios que tienen dos oculares en lugar de uno, ello permite observar
con los dos ojos a la vez. Actualmente existen cabezales mltiples que
permiten que varias personas puedan observar una misma muestra a la vez
c) La fuente de luz: es muy importante ya que una correcta iluminacin dela
preparacin que deseamos observar es una condicin necesaria para poder
realizar una buena observacin. Podemos obtener la fuente de luz a travs de
un espejo situado debajo de la platina, que recoge tanto la luz natural como la
luz elctrica o a travs de lmparas incorporadas
d) El condensador: Se trata de una pieza con un conjunto de lentes, situada
debajo de la platina, cuya misin es concentrar la luz sobre el espcimen, a fin
de conseguir una adecuada iluminacin del mismo. El condensador se puede
desplazar en sentido vertical mediante un mando. As mismo posee un
diafragma que mediante una palanca, controla la cantidad de luz sobre el
espcimen
e) El diafragma: est situado debajo de la platina y del condensador, siendo el
encargado de regular la entrada de luz al condensador. En algunas modelos se
acciona por medio de una palanca y en otros mediando una rueda con orificios
de distintos dimetros
3.2 Componentes mecnicos del microscopio:
a) El estativo: Es la pieza que da soporte a todos los elementos del
microscopio. Bsicamente consta de una base o pie sobre la que descansa
todo el aparato. En algunos microscopios tiene forma de herradura aunque
en los microscopios actuales se presenta como una placa compacta en
cuyo interior se encuentra el sistema de iluminacin. El resto del estativo est
formado por el brazo que en los microscopios pequeos sirve de asa para su
transporte ,el cabezal del que pende el revlver y del que arranca el tubo .En
algunos microscopios, antiguos, el brazo se halla unido al estativo mediante
una articulacin o charnela que permite inclinar el tubo.
b) La platina: es la pieza sobre la que se colocan las diferentes
preparaciones que deseamos observar. La forma de la platina es variada y
puede ser tanto fija como mvil. Prcticamente todos los microscopios
profesionales actuales poseen un carro mvil graduado que hace posible el
movimiento y la localizacin precisa de reas de inters en la preparacin
c) Los mandos de enfoque: Son mandos que desplazan la platina en sentido
vertical (en algunos microscopios la platina es fija y lo que se desplaza en
sentido vertical es el revlver y los objetivos). El denominado tornillo
macromtrico permite un primer enfoque de aproximacin mientras que el
tornillo micromtrico realiza un enfoque fino y preciso
d) El tubo: lleva en la parte inferior el revolver con los objetivos y en la
superior los oculares cambiables
e) El revlver: es una pieza que lleva varios objetivos intercambiables y
permite adaptar estos al tubo del microscopio
Colorantes
1.Definicin: Los colorantes son sustancias de origen qumico o biolgico,
generalmente tintes, pigmentos, reactivos u otros compuestos, empleados en la
coloracin de tejidos microorganismos para exmenes microscpicos,
debiendo tener al menos, un grupo cromforo que le proporcione la propiedad
de teir.
2. Tipos de colorantes:
-Segn su origen:
a) Colorantes naturales: Los colorantes naturales son considerados en
general como inocuos y consecuentemente las limitaciones especficas en su
utilizacin son menores que las que afectan a los colorantes artificiales. Los
colorantes naturales son bsicamente histolgicos, encontrndose entre los
empleados con mayor frecuencia, los siguientes:
ndigo: Se obtiene de diversas especie de plantas del genero indigfera
que contiene indican, el cual se fermenta para producir el colorante.
Carmn: Se produce, mediante el tratamiento con alumbre y otras sales
metlicas a hembras del insecto cochinilla "Coccus castis".
Orcena y Tornasol: Se obtiene mediante el procesamiento industrial de
lquenes de los gneros: Le canora tinctoria y Rosella tinctoria.
Hematoxilina: Este colorante se extrae con ter de la madera de un rbol
oriundo de Mxico y de algunos pases suramericanos denominados
Hematoxilium campechianum.
b) Colorantes artificiales: Son derivados de la destilacin de la hulla (tipo de
carbn mineral), qumicamente todos son sales. Se obtiene de la anilina, o es
ms exactamente del alquitrn de hulla siendo todos derivados del benceno
-SEGUN SUS PROPIEDADES QUMICAS: La mayora de los colorantes
empleados en histologa actan como cidos o bases y tienden a formar
uniones salinas con radicales ionizables presentes en los tejidos.
a) Colorantes cidos: como por ejemplo la eosina, colorante cargado en
forma negativa, se une a componentes celulares cargados positivamente.
Estos componentes cargados positivamente se denominan acidfilos, porque
tienen afinidad por los colorantes cidos. Por ejemplo, estos colorantes se unen
a grupos aminos de las protenas. Estas protenas pueden pertenecer al
citoesqueleto de la clula o hallarse en la matriz extracelular. Debido al elevado
contenido de protenas del citoplasma la eosina es un excelente colorante
citoplasmtico. La eosina se une tambin a las membranas plasmticas, sin
embargo, se desconoce la naturaleza qumica de esta unin. Las clulas que
presentan un gran desarrollo de membranas (muchas mitocondrias, mucho
retculo endoplasmtico liso, etc.) son sumamente acidfilas, o sea, se tien
intensamente con la eosina.
b) Colorantes bsicos: como por ejemplo el azul de metileno, colorante
cargado positivamente, se une a componentes celulares cargados
negativamente. Estos componentes cargados negativamente se denominan
basfilos, porque tienen afinidad por los colorantes bsicos. Por ejemplo, estos
colorantes se unen al ncleo y ciertas regiones del citoplasma.
Como caso particular, la hematoxilina no tiene carga, para teir un tejido se la
une a un mordiente que junto a la hematoxilina forman una laca. La laca es
bsica y por lo tanto se une a cargas negativas de la clula o matriz
extracelular.
c) Colorantes neutros: son colorantes en los que la porcin cida y la bsica
colorean. Tien las partes bsicas de una clula de un color y las partes cidas
de otro. Tien el ncleo de un color y el citoplasma de otro. Ej. El eosinato de
azul de metileno.
d) Colorantes indiferentes: tien aquellas estructuras o sustancias que los
disuelven ms fcilmente que el lquido en que estn preparados. Un ejemplo
es el colorante sudan, un colorante de lpidos.
Bibliografa:
Solomon Berg Martin- Biologa VIII edicin
Lincografa:
http://perso.wanadoo.es/sergioram1/microscopios.htm
http://melissapuentes.weebly.com/uploads/1/1/0/9/11098901/colorantes_
y_coloracion_i.pdf
http://pagina.jccm.es/museociencias/otras%20actividades
%20web/material%20cnr%20web/manual%20de%20microscopia.pdf
http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/13097/1/Microscopio.pdf
