MICROPROPAGACIN
CULTIVO IN VITRO DE MERISTEMAS DE AJO
El ajo (Allium sativum, famlia Amaryllidaceae) es
una monocotilednea, originaria de Asia. El bulbo, o
cabeza de ajo, est formado por bulbillos o dientes
de ajo (Figura 1).
Debido a las propiedades aromticas conferidas por
la alicina, dichos bulbillos resultan un condimento
indispensable en la cocina de varios pueblos.
Con algunas propiedades antimicrobianas, el ajo
tambin es utilizado en la medicina popular para el
control de la presin sangunea, del colesterol, de
las enfermedades coronarias y de la ateroesclerosis.
La propagacin es asexuada, a partir de los
bulbillos. En el ajo-semilla, se consigue eliminar los
virus por cultivo in vitro de los meristemas prximos
al disco caulinar basal. Existen diversas estrategias
de mejoramiento gentico, basadas en la
informacin
existente
en
los
Bancos
de
Germoplasma.
Figura 1. El ajo (Allium sativum). Arriba: cabeza de
ajo; en el medio: corte de la cabeza de ajo; abajo:
corte longitudinal de un diente de ajo, mostrando el
disco caulinar basal.
Brote
Disco caulinar basal
BIBLIOGRAFA
MALAJOVICH M.A. e MANN V.S. Micropropagacin. Gua 80: El laboratorio de enseanza; Gua 85:
La desinfeccin de los instrumentos; Gua 90: La desinfeccin de los explantes y Gua 96: Los medios
de cultivo. [Link]
PEAT G. AND JONES M. A protocol for rapid, measurable plant tissue culture using stem disc meristem
micropropagation of garlic (Allium sativum L.). SSR 93(345), 2012.
Gua 105
Mara Antonia Malajovich / Guas de actividades
Biotecnologa: enseanza y divulgacin
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ACTIVIDAD PRCTICA
OBJETIVO
Cultivar, in vitro, explantes de disco caulinar basal de ajo.
MATERIAIS
Un diente de ajo, bistur o cuchillo afilado, azulejo, frasco desinfectante con agua sanitaria diluida al
medio, 3 frascos con agua destilada estril, pinzas, papel toalla, una placa de Petri con papel toalla
estril, 4 frascos con medio nutritivo estril *, palitos estriles, alcohol 70, mechero Bunsen
(opcional).
* El medio nutritivo es una solucin de sales minerales a las que se adiciona sacarosa (1 a 5%), agar
(0,7%) y agua de coco, como se indica en las Guas 111: Micropropagacin: medios clsicos y 112:
Micropropagacin: medios alternativos.
PROCEDIMIENTO
La limpieza del lugar de trabajo es fundamental, as como la higiene de las manos. El
lugar de trabajo ser desinfectado con alcohol 70. Cuidado! El alcohol es inflamable.
Los participantes se lavarn muy bien las manos y los antebrazos con agua y jabn,
antes de pasarse alcohol 70.
Esterilizar el material contaminado antes de descartarlo.
1. Separacin de los explantes
Pelar el bulbillo (diente de ajo) y cortar justo en la parte seca de la base, como se observa en la
figura de abajo.
2. Desinfeccin de la superficie de los explantes
Esterilizar el bulbillo por inmersin, durante 20 minutos, en agua sanitaria diluida a La mitad y con
una gota de detergente.
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3. Lavados en agua destilada estril
Hacer 3 lavados de 1, 3 y 5 minutos, agitando suavemente.
4. Establecimiento del cultivo
o En condiciones aspticas, poner los dientes de ajo en una placa de Petri que contiene papel toalla
estril.
o Con un bistur afilado, separar una lmina de 2 mm del disco basal y corarlo al medio.
o Transferir los dos explantes al frasco con medio de cultivo estril, manteniendo la polaridad de
uno de los fragmentos e invirtiendo la del otro.
5. Seguimiento
Observar semanalmente el crecimiento de los explantes.
En relacin con la bibliografa citada, respetamos la indicacin de colocar los dientes de ajo en la
heladera durante al menos una semana antes de iniciar la actividad prctica. No agregamos el
antifngico Nipagin (metilparabeno) en los lavados, como recomiendan los autores, pero realizamos
los tests del procedimiento.
La ventaja de comenzar con la esterilizacin del diente de ajo reside en conseguir eliminar los
contaminantes. A pesar de que el proceso daa los tejidos externos, esto no parece afectar la lmina
caulinar basal que est dentro del bulbillo.
Esta actividad exige tiempo de preparacin, porque demanda bastante material estril, pero el
resultado es excelente. Luego de algunas semanas, observamos el crecimiento de los explantes de
ajo, a partir de la regin meristemtica del disco basal del bulbillo (Figura 2).
CMO MONTAR UN PROYECTO?
Probar el procedimiento con puerro o cebolla.
Modificar la composicin del medio nutritivo.
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Figura 2. Explantes de disco caulinar basal de bulbillos de ajo cultivados in vitro.
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