27/03/2015
AGM Estructura Bacteriana 14-2
AGM Estructura Bacteriana 14-2
Plasmid
AGM Estructura Bacteriana 14-2
27/03/2015
Objetivos
o
Revisar las diferencias estructurales y qumicas
de la pared celular de bacterias y
arqueobacterias.
Comparar la pared de procariontes y
eucariontes
Mencionar la importancia de la pared.
Indicar que microorganismos carecen de
pared.
Aplicar los conocimientos adquiridos.
27/03/2015
Mg-03-AMG
Pared bacteriana
Gram positiva
Gram negativa
Micobacteria
Todas las bacterias tienen
pared celular?
Cul es su funcin?
Cmo est
compuesta?
Qu tan rgida es?
Para qu la
necesitan?
Es igual a la de los
dems
microorganismos?
Es igual en todas las
bacterias?
27/09/2013
AGM Sem. 14-I MG-03
27/03/2015
Pared celular de bacterias
(Reaccin al Gram)
Pared celular bacteriana
1. Es una estructura compleja, semirgida, responsable
de la forma de la bacteria.
2. Se encuentra entre la membrana citoplsmica y la
cpsula**. La pared celular rodea la frgil
membrana citoplasmtica protegiendo el interior
celular de los cambios en el medio ambiente.
3. La mayora de los procariontes poseen pared celular
Pared celular bacteriana
4. Tiene varias funciones:
Prevenir la ruptura de las clulas cuando su presin
interna es mayor que la de su exterior, esto ocurre
cuando la bacteria se encuentra en medios
hipotnicos
Punto de anclaje de flagelos.
Lugar de accin de algunos antibiticos.
27/03/2015
Pared celular bacteriana
3. La composicin qumica es variable.
4. Tincin diferencial: Gram y Ziehl Neelsen.
Tincin de Gram
Carcteristicas
Gram-positivas
Tincin de Gram
Capa de pptido glucano
Contenido en lipopolisacridos (LPS)
Contenido en lpidos y lipoprotena
Acidos teicoicos
Espacio periplsmico
Membrana externa
Estructura de los flagelos
Produccin de toxinas
Resistencia a la rotura fsica
Sensibilidad de la pared celular a la
lisozima
Gruesa (varias capas)
Virtualmente ninguna
Bajo (las bacterias cidoalcohol resistentes tienen
lpidos unidos al pptido
glucano)
Presentes en muchas de ellas
Ausente
Ausente
2 anillos en el cuerpo basal
Principalmente exotoxinas
Alta
Alt
Marcada
Sensibilidad a penicilina y
Sulfamidas
Sensibilidad a estreptomicina,
cloranfenicol y tetraciclinas
Gran-negativas
Retienen el cristal violeta y
se
tien de morado
Mucho menos marcada
Inhibicin por colorantes bsicos Marcada
Sensibilidad a detergentes
Marcada
aninicos
Resistencia a la azida sdica
Marcada
Se decoloran y toman el
colorante de contraste
(safranina), tindose de
rosa.
Delgada (una capa).
Alta
Alto (debido a la presencia
de membrana externa).
Ausentes.
Presente.
Presente.
4 anillos en el cuerpo basal.
Principalmente endotoxinas.
Baja.
Baja (requiere un
tratamiento previo para
desestabilizar la membrana
externa).
Mucho menos marcada.
Marcada.
Mucho menos marcada.
Mucho menos marcada.
Mucho menos marcada
27/03/2015
Tincin de Gram
Dans, Christian Gram, 1844.
La tincin de Gram es uno de los
mtodos de ms importantes en el
laboratorio de bacteriolga.
TINCIN DIFERENCIAL
Gram
Tcnica:
a. Frotis
b. Colorante primario
c. Enjuagar
d. M ordente
e. Enuagar
f. Decolorante
g. Enjuagar
h. Colorante contraste
i. Secar
j. Observar
TINCIN DIFERENCIAL
(Gram)
Fundamento:
Estructura fsica y composicin
qumica de PC
Usos
SOLO PARA BACTERIAS
Morfologa y agrupacin y
pureza
27/03/2015
TINCIN DIFERENCIAL
(Gram)
Las bacterias se dividen en: Gram positivas y Gram negativas
En este caso, los trminos positivo y negativo no tiene nada que ver
con carga elctrica ni con su actividad benfica o nociva, sino
simplemente designan dos grupos distintos de bacterias.
Gram ( + )
Gram ( - )
Pared celular bacteriana
Esquema de la pared celular de una bacteria
Gram Negativa
Contiene una capa mucho
ms delgada de
peptidoglicano y est
rodeada por una membrana
exterior compuesta de
fosfolpidos, lipopolisacridos,
y lipoprotenas
Esquema de la pared celular de una bacteria
Gram Positiva
El material de la pared celular
bacteriana que confiere rigidez es el
peptidoglicano (80 -90 %). La pared de
estas clulas, es gruesa y consiste en
varias capas interconectadas de
peptidoglicano as como algo de
cido teicoico
Composicin qumica
El pptidoglicano o murena esta compuesto por
el disacrido: N-acetilglucosamina (NAG) y el
cido N-acetilmurmico (NAM).
27/03/2015
Composicin qumica
Estos 2 carbohidratos se enlazan por uniones
glucosdicas b (1>4) formando una cadena de 10 a
65 azcares, que constituyen la porcin glucosdica
de la pared celular.
Composicin qumica
Formada por un complejo macromolecular llamado
pptidoglucano (murena), que se encuentra solo en
combinacin con otras sustancias.
El pptidoglicano consiste en de unidades repetidas de un
disacrido unido a polipptidos formando una red que rodea
y protege a la clula.
Composicin qumica
En general: la parte peptdica esta constituda por cinco
aminocidos unidos al cido acetilmurmico.
Los aminocidos generalmente encontrados en este pptido
son: D-Alanina, L-Alanina , cido D- Glutmico y/o bien D-Lisina
o bien Ac. Diaminopimlico.
Este hecho es nico, pues los aminocidos que se encuentran
generalmente en otras protenas son todos de la forma L.
27/03/2015
Composicin qumica
Monmero del pptidoglicano
Estos aminocidos se unen para
formar una estructura repetida
llamada el tetrapptido del
glicano
Gram positivas
En bacterias Gram positivas se encuentran embebidos en su
pared polisacridos cidos llamados cidos teicicos que
contienen subunidades de glicerolfosfato ribitol fosfato.
Gram positivas
Algunos de estos cidos que contienen glicerol se asocian a
los lpidos de la membrana, tomando el nombre de cidos
lipoteicicos.
27/03/2015
Muchos patgenos Gram + presentan tipos especiales de
glicopolmeros (CGW) en su pared celular adems de los cidos
teicicos,
La funcin de estos glicopolmeros es hacer ms fuerte la pared
celular.
Bacterias Gram positivas
Debido a que la pared celular de las bacterias Gram (+)
estan constituidas por una capa gruesa de pptidoglicano
son ms sensibles a la accin de la lisozima y la penicilina y
sus derivados, ya que estos antibiticos inhiben la formacin
de los enlaces peptdicos intracatenarios del
pptidoglicano y glucosdicos entre NAM y NAG.
Pared celular
(Gram negativa)
27/03/2015
Pared celular
(Gram negativa)
En bacterias Gram negativas la pared celular tiene una estructura
ms compleja. Esta formada de dos reas separadas y una
membrana extracelular adicional. Entre ambas se encuentra el
espacio periplsmico y una delgada capa de pptidoglicano.
Espacio periplsmico
Porinas
Las porinas le permiten a las bacterias Gram (-) tener mayor
permeabilidad debido a que estas actan como canales de entrada y
salida de sustancias hidroflicas de bajo peso molecular, como vitamina
B12, hierro o maltosa.
Membrana externa de bacterias
Gram negativas
La membrana externa de la pared de Gram (-) esta compuesta
por el LIPOPOLISACRIDO (LPS) esta capa no consta solamente
de fosfolpidos sino que contiene adems polisacridos y
protenas, estas se unen para formar estructuras lipopolisacridas
especficas.
Composicin qumica:
Lipoprotenas
Lipopolisacridos
Fosfolpidos
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27/03/2015
Membrana externa de bacterias
Gram negativas
Funciones:
Evitan fagocitosis
Barrera contra antibiticos, detergentes, metales
pesados, sales biliares, enzimas digestivas y algunos
colorantes
Los polisacridos O son antgenos y diferencian especies
de bacterias Gram negativas
El lpido A acta como endotoxina
Espacio periplsmico - Espacio que se ubica entre la membrana
interna y la externa de las clulas Gram negativas. Contiene
protenas; incluye protenas de unin para los sustratos
especficos, enzimas proteolticas y quimiorreceptores. En
ausencia de este espacio, las bacterias Gram positivas secretan
exoenzimas.
Protenas del espacio periplsmico
Tipo de
enzima
Ejemplos
Funcin
Enzimas
hidrolticas
Fosfatasas
Degradantes, compuestos que
contienen fosfato .
Proteasas
Degradantes protenas y pptidos.
Endonucleasas
Degradantes cidos nucleicos.
Azcares,
aminocidos, iones,
vitaminas
Protenas de acoplamiento para el
transporte a travs de la membrana.
Protenas de
quimiotxis
Percepcin del medio ambiente y el
cambio de comportamiento de la
clula en respuesta a un estmulo.
-lactamasas
Degradantes, la penicilina y
compuestos relacionados antes de
que tengan contacto con la clula.
Protenas
de unin
a:
Quimioreceptor
es
Enzimas
destoxificant
es
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27/03/2015
Las bacterias G(+) y G( - )muestran diferencias
estructurales muy importantes.en su pared celular:
Membran
a externa
Espacio
Peptidoglicano
periplsmic
o
Membrana
citoplasmti
ca
Gram Positivas
Carcteristicas
Tincin de Gram
Capa de pptido glucano
Contenido en lipopolisacridos
(LPS)
Contenido en lpidos y lipoprotena
Acidos teicoicos
Espacio periplsmico
Membrana externa
Estructura de los flagelos
Produccin de toxinas
Resistencia a la rotura fsica
Sensibilidad de la pared celular a la
lisozima
Sensibilidad a penicilina y
Sulfamidas
Sensibilidad a estreptomicina,
cloranfenicol y tetraciclinas
Inhibicin por colorantes
bsicos
Sensibilidad a detergentes
aninicos
Resistencia a la azida sdica
Gram Negativas
Gram ( + )
Gran ( - )
Retienen el cristal
violeta y se
tien de morado
Gruesa (varias capas)
Se decoloran y toman el colorante de contraste
(saf ranina), tindose de rosa.
Delgada (una capa).
Virtualmente ninguna
Alta
Bajo (las bacterias
cido-alcohol
resistentes tienen
lpidos unidos al
pptido glucano)
Presentes en muchas
de ellas
Ausente
Alto (debido a la presencia de membrana externa).
Ausentes.
Presente.
Ausente
Presente.
2 anillos en el cuerpo
basal
Principalmente
exotoxinas
Alta
4 anillos en el cuerpo basal.
Alt
Baja (requiere un tratamiento previo para
desestabilizar la membrana externa).
Marcada
Principalmente endotoxinas.
Baja.
Mucho menos marcada.
Mucho menos marcada
Marcada.
Marcada
Mucho menos marcada.
Marcada
Mucho menos marcada.
Marcada
Mucho menos marcada
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27/03/2015
Pared celular en archeas
Estos microorganismos
presentan una gran
variedad de tipos de
paredes celulares.
Algunas de ellas,
presentan una estructura
parecida al
pptidoglucano llamana
PSEUDOPPTIDOGLUCAN
O formado por
subunidades de N-acetil
glucosamina y Nacetiltalosaminurnico,
con enlaces Beta 1-3.
NAT: N-acetiltalosaminurnico
Pared celular en archeas
Algunas especies de Archeas carecen tanto de pptidoglicano como de
pseudopptidoglicano y estan formadas por polisacridos, glicoprotenas
protenas.
Sin embargo en general la forma ms comn de las Archeas es la capa S
paracristalina, que esta compuestas de protenas lipoprotenas
dispuestas en simetra hexagonal. Esta estructura se encuentra en Archeas
como los halfilos extremos,metangenos y los hipertermfilos.
Sus funciones son idnticas a las bacterias pero son resistentes a penicilina
y lisozima.
Capa S de
Aquaspirillum serpens
de simetra hexagonal
Capa cristalina S
Se encuentra principalmente en arqueobacterias.
Hipertermfilas
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27/03/2015
Diferentes arreglos de la capa S de
Archaea
Nature Rev. Microbiol. 9 414-426 (2011)
Pared Celular
Bacterias
Micobacteria
Arqueas
Pptidoglucano
(N-acetilglucosamina y N-acetilmurmico)
cidos Teicoicos y Lipoteicoiocos en Gram positivas
Pptidoglucano
(N-acetilglucosamina y N-acetilmurmico)
Acidos Miclicos
Pseudopeptidoglucano
(N- acetilglucosamina y cido N-acetiltalosaminuronico)
Polisacridos, glicoprotenas o protenas (Glucosa, cido
glucornico, galactosamina, acetato, SO4-)
Capa cristalina S
Protena o glicoprotena
Bacterias sin pared celular
Existen bacterias que no poseen pared celular como
los micoplasmas o los Thermoplasmales que son
Archeas.
Micoplasma: Estos microorganismos son patgenos
intracelulares obligados (slo pueden vivir dentro de
las clulas del hospedero). Requieren de esteroles
para la estabilidad de su membrana citoplsmica
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27/03/2015
Bacterias sin pared celular
Debido a la falta de pared celular, los
Mycoplasmas se adhieren a la membrana
citoplsmica de la clula husped, hidrolizando sus
fosfolpidos y causando la lisis celular para obtener
nutrientes.
Lesiones en la pared celular
Agente: lisozima
Protoplasto: clula que ha perdido totalmente la
pared celular.
Esferoplasto: clula con pared celular
parcialmente destruida.
Formas L
Formas
L naturales:
Carentes
totalmente (o casi) de PC que algunas bacterias
generan espontneamente en medios a base de suero
(que son hipertnicos)
Colonias en forma de huevo frito
Formas
L inducidas:
Tratamiento con
penicilina en medio hipertnico
inestables: tratamiento breve; revierten PC
L estables: tratamiento prolongado; no revierten PC
L
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27/03/2015
Estructura bacteriana y Antibiticos
Antibiticos que inhiben la sntesis de
pared celular
Cicloserina: Se comporta como anlogo estructural de la D-
alanina por lo que inhibe la actuacin de la racemasa que
conviertela L-ala en D-ala, as como la reaccin de unin de dos Dala.
Vancomicina Inhiben la segunda trasnglucosidacin es decir la
unin de diversas unidades disacardicas.
Bacitracina: Se une al undadecaprenol pirofosfato bloqueando su
desfosforilacin e impidiendo la regeneracin del bactoprenol.
Penicilinas y cefalosporinas: estos derivados beta-lactmicos
inhiben la reaccin de entrecruzamiento por transpeptidacin.
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27/03/2015
Bacterial
Cell Wall
&
Differenti
al Staining
Tincin diferencial
(Ziehl-Neelsen o cido-alcohol resistente)
Tcnica:
a. Frotis
b. Colorante primario con una fuente de calor
c. Enjuagar
d. Decolor con ALCOHOL CIDO
e. Enjuagar
f. Colorante contraste
g. Secar
h. Observar
Tincin diferencial
(Ziehl-Neelsen o cido-alcohol resistente)
Fundamento:
Composicin qumica de PC
Usos
Esta tincin se aplica especialmente para la
diferenciacin de bacterias de los gneros
Mycobacterium y Nocardia, que son
resistentes a la decoloracin con alcohol
cido de otras bacterias que no lo son.
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27/03/2015
Interpretacin
La pared de los BAAR tiene un contenido de lpidos superior al
60% representado por las ceras A, B, C y D,
Polisacridos como glucanas, mananas, arabinogalactanas y
arabinomananas;
Glicolpidos,
cidos miclicos, micsidos-C y protenas.
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Glicopolmeros sin carga
Nature Rev. Microbiol, 6, 276-287 (2008)
Son bifurcados contienen manosa, arabinosa y/o
galactosa.
Glicopolmeros sin carga
Las arabinogalactanas unidas al
peptidoglicano se unen covalentemente a los
cidos miclicos.
cell wall of Mycobacterium contains a large
amount of glycolipids, especially mycolic acids
Glicopolmeros sin carga
Las
lipoarabinomananas
estn unidas a la
membrana por
glicolpidos que
contienen inositolfosfato.
cell wall of Mycobacterium contains a large
amount of glycolipids, especially mycolic acids
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BIBLIOGRAFA
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Mg-03-AMG
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