Practicas de Biologa Celular
PRACTICA 5
AISLAMIENTO DEL ADN
INTRODUCCIN
El aislamiento del ADN es el principio de muchos mtodos usados en la
ingeniera gentica, como la transformacin, secuenciacin, mapeo fsico, mutagnesis
sitio dirigidas, etc. El aislamiento de los cidos nucleicos implica la destruccin de la
clula por choque osmtico; homogeneizacin, digestin enzimtica o tratamiento
mecnico suave.
OBJETIVO
El alumno aislar y observara al ADN extrado de forma rudimentaria.
Materiales de laboratorio por equipo
1 Mortero y pistilo
4 Tubo de ensayo
1 Pipeta de 10 ml
1 pipeta Pasteur
Tubos para centrifuga
Material del alumno por equipo
Muestra vegetal (ajo, cebolla, planta,
jitomate)
Sal de mesa
Bicarbonato de sodio
Detergente lquido o champ
palillos
Materiales de laboratorio por grupo
Alcohol isoamlico a 0C
Centrfuga
Agua destilada
1 bandeja de metal
hielo
ACTIVIDAD DE LA PRACTICA
1. Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera
o en un bao de hielo triturado:
120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del
grifo.
1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.
5 g de bicarbonato sdico.
5 ml de detergente lquido o champ.
2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que
pueda haber en la cocina (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en
cuadraditos.
3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las
cuchillas a impulsos de 10 segundos. As se rompern muchas clulas y
otras quedarn expuestas a la accin del detergente.
4. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del
tampn fro y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar
despus los restos vegetales ms grandes del caldo molecular hacindolo
pasar por un colador lo ms fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja
velocidad 5 minutos y despus pipetear el sobrenadante.
5. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con pipeta 10
ml de alcohol isoamlico enfriado a 0C. Se debe dejar escurrir lentamente el
Nota: cuida la presentacin del trabajo, la ortografa y la redaccin, recuerda que es
un entrenamiento para tu carrera profesional y/o cientfica.
MMGJ
Practicas de Biologa Celular
alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol
quedar flotando sobre el tampn.
6. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la
separacin entre el alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y
hacia atrs y poco a poco se irn enrollando los fragmentos de mayor
tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de
alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo con el aspecto de
un copo de algodn mojado.
Reportar Resultados
CUESTIONARIO
Qu dificultades se presentaron para la realizacin de la prctica?
Qu observaste en las fibras?
Cul es la funcin del detergente y agentes quelantes en la purificacin del ADN?
Porqu se dice que las protenas contaminan al ADN purificado?
Porqu es til el estudiar y analizar al ADN de una clula?
Si todos los organismos vivos tienen ADN en sus clulas, que es lo que hace a los
organismos diferentes de otros?
Nota: cuida la presentacin del trabajo, la ortografa y la redaccin, recuerda que es
un entrenamiento para tu carrera profesional y/o cientfica.
MMGJ
Practicas de Biologa Celular
Nota: cuida la presentacin del trabajo, la ortografa y la redaccin, recuerda que es
un entrenamiento para tu carrera profesional y/o cientfica.
MMGJ
