INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS
DEPARTAMENTO DE INGENIERA BIOQUMICA
CURSO PRCTICO DE BIOINGENIERA I
OBTENCIN DE LAS CONSTANTES DE
MODELOS CINTICOS DE CRECIMIENTO Y
CONSUMOS DE SUSTRATO
INTEGRANTES:
Becerra Ros Mariana
Chvez Baca Mara Antonia
Huitrn Rojas Jos Eduardo
Lara Saldaa Adriana Raquel
Reyes Nez Paula Isamar
Toledo Aranda Daniel
GRUPO:
7IV1
PROFESORES:
M en C Carlos Alberto Sandoval Carrasco
M en C Mara Elena Mondragn Parada
M en C Alejandro Hernndez Estvez
FECHA DE ELABORACIN.
Jueves, 29 de agosto de 2013
FECHA DE ENTREGA.
Viernes, 06 de septiembre de 2013
Obtencin de las constantes de modelos cinticos de
crecimiento y consumos de sustrato
INTRODUCCIN
Modelos cinticos
El modelado matemtico es una herramienta de gran utilidad en tecnologa, ya que permite
analizar en forma cuantitativa el comportamiento microbiano en un determinado ambiente o
sistema particular, es decir, permite realizar estimaciones cuantitativas, considerando la accin
simultnea de diversos factores limitantes extrnsecos e intrnsecos; lo cual implica una gran
ventaja, en tiempo y costo, comparado a los mtodos utilizados tradicionalmente en
microbiologa.
El modelado matemtico es realizado, generalmente, asumiendo condiciones constantes para
determinar los valores de los parmetros cinticos de crecimiento. El modelado de bioprocesos
es una tarea compleja debido a que las reacciones biolgicas son influenciadas por el ambiente
qumico (tales como los niveles de concentracin de nutrientes y productos) y por las
condiciones fsicas del proceso. El metabolismo y los mecanismos de regulacin de muchos de
estos sistemas biolgicos an no son totalmente comprendidos, por lo cual las descripciones
matemticas de los mismos deben ser simplificadas sin prdida de informacin que permita el
desarrollo de modelos adecuados para la simulacin, diseo y optimizacin de bioprocesos.
Biorreactores
Un biorreactor se puede definir como un sistema que proporciona un medio ambiente controlado
permitiendo el crecimiento eficaz de las clulas y la formacin de un producto, el cual debe tener
niveles ptimos de temperatura, pH, substrato, sales y oxgeno, para as convertir la materia
prima en productos especficos de inters.
Cuando se va a llevar a cabo un determinado proceso que implica una reaccin qumica (o
bioqumica) adems de conocerse la cintica debe determinarse el tipo y tamao del reactor y
las condiciones de operacin ms adecuadas para el fin propuesto.
Los equipos en los que se efectan reacciones homogneas pueden ser de tres tipos generales:
Discontinuos (batch), las clulas se cultivan en un recipiente con una concentracin inicial
sin que esta sea alterada por nutrientes adicionales, por lo que el volumen siempre
permanece constante y solo las condiciones ambientales del medio son controladas por el
operador.
Continuos de flujo estacionario, consiste en alimentar nutrientes y retirar productos
continuamente de un biorreactor. Bajo ciertas condiciones el cultivo puede alcanzar un
estado estacionario donde no existe variacin con el tiempo del volumen del biorreactor.
Semicontinuos de flujo no estacionario, los nutrientes son alimentados al biorreactor de
forma continua o semicontinua mientras que no hay efluente en el sistema. Segn sea el
objetivo de la operacin, la adicin intermitente del sustrato mejora la productividad de la
fermentacin manteniendo baja la concentracin del sustrato.
Cintica de crecimiento
Debido a la naturaleza autocataltica del crecimiento microbiano, la concentracin de
microorganismos, X, influye en la velocidad con que aumenta la poblacin, r x As:
r x =X
En esta ecuacin, es la velocidad especfica de crecimiento, la cual para un tipo de
microorganismo dado depende principalmente de la composicin y concentracin del medio de
cultivo, presencia de inhibidores, temperatura y pH.
Existen diversas expresiones para : la ms difundida es la ecuacin de Monod, que relaciona el
valor de con la concentracin de un componente del medio de cultivo que est en defecto
respecto de los requerimientos del microorganismo: el sustrato limitante.
S
Ks+ S
= m
Donde S es la concentracin de sustrato limitante, m es la velocidad de crecimiento especfica
mxima, y Ks se conoce como constante de saturacin. El valor de Ks est inversamente
relacionado con la afinidad del microorganismo por el sustrato.
Cuando S Ks, toma el valor de m y rx slo depende de X.
En general Ks tiene valore muy bajos, del orden de los mgl -1, por tanto
concentraciones relativamente bajas de S son suficientes para hacer que =m. En promedio las
bacterias poseen valores de m cercanos a 0.9 h-1, las levaduras 0.45 h-1 y los hongos
filamentosos 0.25 h-1; de todos modos m debe ser determinado experimentalmente para cada
caso en particular.
Consumo de sustrato
dS
1 dX
=
dt
Y x /s dt
O bien:
rs =
1
Y x/ s
rx
Adems:
rs =
X
Y x/ s
Tambin puede expresarse la velocidad de consumo de sustrato como:
r s =q s X
Donde qs es la velocidad especfica
ecuaciones anteriores surge que:
q s=
de
consumo
de
sustrato.
Comparando
las
Y x/s
Si =m se tendr qs=qsm es decir que ambos parmetros estn directamente relacionados.
Por lo expuesto hasta aqu es evidente que el crecimiento puede ser caracterizado mediante tres
parmetros: KS, m e Yx/s. Estos dependen tanto del microorganismo como del medio de cultivo
empleado, por lo que su evaluacin debe realizarse para cada caso en particular.
OBJETIVOS.
Obtener las constantes cinticas de los modelos de crecimiento y consumo de sustrato de la
levadura Candida utilis Y-900.
Determinar la concentracin celular, concentracin de glucosa, velocidad especfica de
consumo de glucosa, as como el rendimiento y la productividad celular.
Determinar el valor de la velocidad de dilucin a la cual se obtiene la mxima
productividad celular en cultivo continuo.
Determinar ek valor de la energa de mantenimiento, el valor de Y g, mx y Ks.
RESULTADOS
Microorganismo: Candida utilis Y-900
Sr= 2 g glucosa/L
Vop= 1 L
Concentracin celular
Tabla 1. Datos de concentracin celular obtenidos experimentalmente.
D
(1/h)
Filtro
N
Peso (f )
(mg)
Muestra
Vol (mL)
Peso (f)+
(x) (mg)
0.108
1
2
3
4
5
6
35.5
35.3
35.6
35.4
35.9
35.4
-------
5
5
5
5
5
5
42 41.5
41.7 41.2
41.8 41.3
41.9 41.5
41.5
40.1
-------
0.156
0.21
0.25
La concentracin celular se calcul de la siguiente manera:
Promed
io peso
(f) + (x)
(mg)
41.75
41.45
41.55
41.7
41.5
40.1
*x (g
cel/ L)
1.2
1.18
1.14
1.22
1.12
0.94
1.01
Concentraci n celular =
( Promedio peso de filtro +biomasa )( Peso de papel filtro )
Volumen de muestra
Concentraci n celular =
( 41.75 mg )( 35.5 mg )
g cel
=1.2
5 mL
L
Se realiz de igual manera para los dems datos.
Concentracin de sustrato (Glucosa)
Tabla 2. Datos de concentracin de sustrato obtenidos experimentalmente.
D (1/h)
0.108
0.156
0.21
0.25
Volumen de
alcuota
(ml)
0.2
0.2
0.2
------
Control
As540 nm
Muestra
As540 nm
S (g/L)
0.34
0.30
0.29
------
0.018
0.03
0.009
-------
0.0116
0.0216
0.0068
0.12
La concentracin de Sustrato residual, para cada muestra tomada, se calcula de la siguiente
manera, considerando tringulos semejantes:
|del| problema
Concentraci n del problema=
x concentraci n del control
|del|control
As para el primer caso se tiene:
Concentracin del control como 0.22g/L
Concentraci n del problema=
0.018
g
x 0.22
0.34
L = 0.0116 g/L;
Se realiz de la misma manera para los dems datos.
INFORME
1. Parmetros de estado obtenidos durante la operacin del quimiostato.
Tabla 3. Parmetros de operacin del quimiostato.
D(1/h)
Concentraci Concentraci
n celular x
n de glucosa
(gcel/L
s (gglc/L)
Velocidad
especfica de
consumo de
glucosa qs
(gglc/gcel h)
Rendimiento
Yxs
(gcel/gglc)
Productividad
celular (Rc)
0,108
1,20
0,1059
0,1705
0,6335
0,1296
0,108
1,18
0,1059
0,1734
0,6230
0,12744
0,156
1,14
0,1935
0,2472
0,6311
0,17784
0,156
1,22
0,1935
0,2310
0,6754
0,19032
0,21
1,12
0,0068
0,3737
0,5619
0,2352
0,21
0,94
0,0068
0,4453
0,4716
0,1974
0,25
1,01
0,1200
0,4653
0,5372
0,2525
Fue necesario llevar a cabo algunos clculos para la obtencin de qs, Y
x/s
y Rc.
Velocidad especifica de consumo de glucosa (qs)
De acuerdo a un anlisis en base al balance de sustrato, tenemos que:
qs=
D(Sr S )
;
X
De donde:
qs=Velocidad especfica de consumo de Glucosa
D=Velocidad de dilucin
Sr=Sustrato limitante= 2 g/L
S=Sustrato residual
As para el primer caso se tiene que:
1
0.108 h
qs=
(2 gL 0.0116 gL ) =0.1705
1.2
g
L
g de glucosa
hg de c lula
Para los dems casos, se aplic la misma frmula.
Rendimiento (Y
x/s
Para este caso partimos de:
dx
1
dt
x
x
Y x / s=
=
=
s ds
qs
1
dt
x
As, considerando que en condiciones de equilibrio, =D, para el primer caso se tiene:
Y x / s=
0.108 h1
g de c lulas
=0.6335
g de glucosa
g de glucosa
0.1705
hg de c lula
Se aplic lo mismo para todos los casos.
Productividad celular
Productividad=( D ) ( x)
De acuerdo a la frmula:
Para el caso 1, se tiene:
Productividad=( 0.108 h1 ) 1.2
gc l
gc l
=0.1296
L
hL
Se aplic lo mismo para los dems datos.
Figura 1. Grfica de x en funcin de la velocidad de dilucin
Concentracin celular
1.25
1.20
1.15
1.10
f(x) = - 1.45x + 1.37
R = 0.89
Concentracin celular
1.05
D (1/h) 1.00
Linear (Concentracin
celular)
0.95
0.90
0.85
0.80
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
X (gcel/L)
Figura 2. Grfica de s en funcin de la velocidad de dilucin
Concentracin Glc
0.4
0.35
0.3
0.25
D (1/h)
0.2
Concentracin Glc
Linear (Concentracin Glc)
0.15
0.1
f(x) = 0.61x - 0.07
R = 0.5
0.05
0
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
s (gcel/L)
Valor de la energa de mantenimiento y Yg
Energa de mantenimiento
f(x) = 2.2x - 0.08
R = 0.97
Yg
qs(gglc/gcelh)
Linear (Yg)
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
miu (1/h)
Con la ecuacin de la recta obtenemos los valores de (m) y (Yg). La energa de mantenimiento
ser la pendiente de la ecuacin y el rendimiento celular mximo ser la ordenada al origen.
Energa de mantenimiento (m) = 2.203 (g glc/g cel h)
Rendimiento celular mximo (Yg) = 0.0773 (g cel/g glc)
Figura 3. Grfica para determinar max y Ks
max y Ks
10
8
6
miu (1/h)
f(x) = 0.01x + 5.63
R = 0.03
miumax y Ks
Linear (miumax y Ks)
2
0
50
100
150
200
s(gglsc/l)
max= 1/5.6252= 1.1778
Ks= (0.0067*5.6252) = 0.0377 (g/l)
DISCUSION
El cultivo continuo permite que la poblacin microbiana se mantenga en un estado continuo de
crecimiento balanceado, al eliminar de manera continua algo del cultivo y reemplazarlo con
medio nuevo a la misma rapidez [1], en el desarrollo de esta prctica se utiliz la levadura
Candida utilis Y-900 donde la glucosa funge como fuente de carbono y energa, adems de ser
tambin el sustrato limitante. De esta manera se obtuvieron las constantes cinticas de los
modelos de crecimiento y de consumo de sustrato, por lo que fue necesario conocer la relacin
que guarda la concentracin celular con la velocidad de dilucin, as como la de sta ltima con
la concentracin del sustrato.
En la grfica de la concentracin celular Vs velocidad de dilucin, se observa el comportamiento
de la biomasa en un estado de equilibrio. Bibliogrficamente durante el crecimiento en rgimen
permanente o estado estacionario dx/dt=0.
En la grfica de concentracin de sustrato Vs velocidad de dilucin se puede ver la variacin de
concentracin de sustrato residual en estado estacionario dnde el valor de S es bajo ( 0.0116
g/L) pues el sustrato que entra en el birreactor se consume casi en su totalidad. Al final de la
curva se observa un incremento debido a que la dilucin utilizada era cercana a la velocidad de
dilucin crtica en la cual se lavan las clulas, se puede explicar porque en el medio la biomasa
disminuye y el sustrato no est consumindose.
Sin embargo al realizar el clculo de la productividad celular en cultivo continuo (Rc mx), con un
valor de 0.2525 y una velocidad de dilucin de 0.25h -1podemos decir que es posible trabajar
con Dilucio un poco ms alta, para que asi se pueda estimar mejor la productividad celular del
sistema.
En cuanto a la determinacin de energa de mantenimiento y el valor de Yg para Candida utilis
Y-900, este realiz a partir de la curva qs= f(D), de la cual, mediante la ecuacin de la recta los
valores correspondientes a m (energa de mantenimiento)fueron de 2.203 (g glc/g cel h) y
Yg=0.0773 (g cel/g glc) respectivamente,los cuales resultaron bastante razonables teniendo un
valor mas grande para la m (lo que significa que es la energa necesaria para los procesos
relacionados con mantenimiento, como el potencial de membrana, el transporte de solutos y la
renovacin de protenas. [2] ), y el Rendimiento de (Yg) fue mucho mayor a el rendimiento de Y x/s
debido a que a ste se le considera la biomasa generada del sustrato.
Finalmente otras constantes obtenidas fueron la mx y Ks a partir de la relacin de =f(s),
donde los resultados arrojados fueron los siguientes max= 1/5.6252= 1.1778,Ks=
(0.0067*5.6252) = 0.0377 (g/l) respectivamente, tomando en cuenta que la ecuacin de Monod
indica que
la tasa de crecimiento () depende de la mxima que puede alcanzar el
microorganismo (max), de la concentracin de substrato (S) y de un valor constante, Ks, que
representa la concentracin de substrato a la que se alcanza una tasa de crecimiento igual a la
mitad de la mxima. Por lo anterior esta tendr mucha importancia al tratarse de cultivos
continuos. Para que se cumpla esta ecuacin el rendimiento debe ser independiente de la
concentracin de substrato.
En la prctica, el valor de Ks resulto muy bajo, lo que indica que los microorganismos crecen con
tasas () muy prximas a las mximas (max) a concentraciones de substrato bajas y slo
cuando estas son extremadamente bajas, la velocidad de crecimiento se reduce. Esto es debido
a que los sistemas de transporte de nutrientes suelen tener valores de Km considerablemente
reducidos (La Km indica la concentracin de substrato a la que la velocidad de transporte es la
mitad de la mxima).
Por ltimo en un cultivo continuo se mantienen los microorganismos en crecimiento constante
porque se aade de forma constante medio de cultivo fresco (que aporta nuevos nutrientes) y se
elimina cultivo (medio usado con sus microorganismos correspondientes) a la misma velocidad
con objeto de mantener el volumen total del cultivo constante.
Los cultivos continuos son importantes para trabajar con microorganismos que estn creciendo
constantemente de manera que sean capaces de producir constantemente productos de inters
(biomasa, metabolitos secundarios, etc).
En un cultivo continuo se pretende mantener un ambiente constante durante todo el tiempo de
cultivo.
CONCLUSIONES
Para Candida utilis Y-900, a una temperatura de 27C y con un pH de entre 4.5 y 5.5 se
obtuvo la mayor productividad, con un valor de 0,2525, a una velocidad de dilucin (D)
igual a 0.25 h-1.
La energa de mantenimiento (m) es de 2.203 g glucosa/g clulas h y posee un
rendimiento celular mximo (Yg) de 0.0773 g clulas/g glucosa.
Los valores de max= 1.1778 y Ks= 0.0377 (g/l)
BIBLIOGRAFA
[1] Scragg A., (1996). Biotecnologa para ingenieros: sistemas biolgicos en procesos
tecnolgicos.
LIMUSA
NORIEGA
EDITORES.
1
edicin.
Mxico.
pp.205
[2]http://www.ms.gba.gov.ar/sitios/laboratorio/files/2012/08/CULTIVO-CONTINUO.pdf
Modelaje y simulacin de un biorreactor enzimtico no isotrmico para una reaccin serieparalelo. Yamilet Snchez Montero, Alexis Bouza, Jenny MontBrun-Di Filippo. Universidad
Simn Bolvar, Departamento Procesos y Sistemas. Caracas, Venezuela. Universidad Simn
Bolvar, Departamento Termodinmica y Fenmenos de Transferencia. Revista de la
Facultad de Ingeniera Universidad Central de Venezuela. Versin impresa ISSN 0798-4065.
Rev. Fac. Ing. UCV v.26 n.1 Caracas mar. 2011
Introduccin al diseo de reactores. Dr.ing. I. Lpez. Dr.ing. L. Borzacconi. 2009. Facultad
de ingeniera
http://tesis.uson.mx/digital/tesis/docs/1608/Capitulo2.pdf
http://www.biologia.edu.ar/microind/crecimiento%20bacteriano.htm#Cintica
de
crecimiento
Validacin y comparacin de modelos de crecimiento microbiano. Cayr, Mara E. Vignolo,
Graciela Garro, Oscar A. Facultad de Agroindustrias - UNNE. Cdte. Fernndez 755 (H3700LGO) Pcia. R. Senz Pea - Chaco - Argentina. CERELA CONICET
