PRACTICA No 2
MORFOLOGA GENERAL DE LAS LEVADURAS.
OBJETIVO
Al concluir la prctica, el alumno conocer la morfologa general de levaduras.
FUNDAMENTO
LEVADURAS Y MOHOS
An cuando los trminos moho y levadura no tienen significacin taxonmica es suelen
denominarse de esta manera a una de las formas de hongos que no pueden definirse
netamente. Se define a las levaduras como hongos cuya forma corriente y dominante de
crecimiento es unicelular. Son de Formas esfricas, elpticas y cilndricas, cuyas
dimensiones oscilan de 2 a 8 m de dimetro por 3 a 15m de longitud para la levadura
Saccharomyces cerevisiae. Aunque algunas otras especies llegan incluso a 100 m. Debido
a su tamao, hay cierta facilidad para observarlas al microscopio ptico y poder conocer
algunas estructuras generales con ayuda de colorantes. Ver fig 1
Los mohos suelen describirse como hongos filamentosos multicelulares en que los
filamentos llamados hifas,. se ramifican; y veces se unen para formar una masa
enmaraada, cualquier parte grande de la misma se conoce como micelio. Las clulas del
moho suelen ser cilndricas y su tamao es variable. El dimetro de las clulas de algunos
mohos va de 2 a 5 m, y pueden ser 2 a 4 veces ms largos que anchos. La morfologa
general de los mohos, no requiere tincin alguna, basta con montarlas en un portaobjeto
y observarlas directamente al microscopio; aun cuando existe el riesgo de desbaratar o
desorganizar algunas de sus delicadas estructuras.
La importancia que tiene el estudio de las levaduras y los momos es numerosa, no solo
desde el punto de vista morfolgico sino por todas las actividades en las que ellos
intervienen, ya sea como agentes de contaminacin y descomposicin en los diferentes
procesos naturales, o aprovechando sus diferentes productos de utilidad al hombre.
MORFOLOGIA DE LAS LEVADURAS
Levadura en gemacin
activa que produce
clulas hijas maduras
en unos 30 minutos.
Estas
fueron
fotografas
tomadas a
intervalos de 10 minutos.
Saccharomyces cerevisiae en el que
se ven yemas y cicatrices de las
yemas formadas (flechas)
Ver fig. 1
ACTIVIDADES
MATERIAL:
MATERIAL BIOLGICO
a. mechero
b. Portaobjetos
c. Cubreobjetos
d. Asa bacteriolgica
Cultivo de Saccharomyces cerevisiae
EQUIPO
-
Microscopio ptico
REACTIVOS
a. Etanol al 40%
b. Hidrxido de potasio
c. Azul de metileno de Loeffler
d. Etanol al 10%
e. Solucin de yodo (lugol)
TCNICA
A. Montaje seco (frotis)
1. Haga un frotis de regular densidad con el cultivo de la levadura.
2. Deje secar al aire.
3. Bae el portaobjetos con solucin de etanol al 40% o por 1 minuto
aproximadamente.
4. Lave con agua corriente, escurra .
5. Bae con solucin de KOH y djelo reaccionar 1 hrs aprox. Si se empieza a
deshidratar, agregue ms KOH.
6. Lave con agua corriente y escurra.
7. Cubra con el colorante azul de metileno por espacio de 2 min.
8. Lave con etanol al10% sacuda el exceso de alcohol y seque al aire.
9. Observe los frotis con el objetivo de inmersin, dibuje sealando estructuras
internas.
INTERPRETACIN DE RESULTADOS
Los ncleos se tien de azul oscuro o rosa mucho ms claro.
ASA DE TUSTENO Y LEVADURA (SACCHAROMYCES
CEREVISIAE).
MUESTRA DE LEVADURA (SACCHAROMYCES
CEREVISIAE).
MUESTRA DESPUES DE 1 HORA DE REPOSO.
SE BUSCO EL AZUL DE METILENO CON EL OBJETIVO
DE 10X.
SE PUDIERON OBSERVAR LOS NUCLEOS OSCUROS
QUE PRESENTAN CADA UNO DE LAS LEVADURAS.
ESTA SE HIZO CON EL OBJETIVO DE INMERSION
100X.
B. Montaje Hmedo
1. Coloque una pequea gota del cultivo de levaduras sobre el portaobjetos agregue
sobre la muestra una gota pequea de solucin de yodo de Gram y mezcle con el
asa.
2. Observar con objetivo seco fuerte y despus con objetivo de inmersin (Cubriendo
previamente la muestra con el cubreobjetos).
3. Trate de detectar estructuras internas como grandes vacuolas. Dibjelas y seale
estructuras apoyado bibliogrficamente.
SE TOMA LA MUESTRA
(SACCHAROMYCES CEREVISIAE).
DE
MUESTRA
LISTA EN CUBRE
(SACCHAROMYCES CEREVISIAE).
LEVADURA
OBJETOS
AQUI PODEMOS OBSERVAR LO QUE SON LAS CIAMIDOSPORAS ESTA IMAGEN
FUE TOMADA DESDE 40X EN EL MICROSCOPIO.
AQU PODEMOS VER LA MUESTRA DE LEVADURA HMEDA VISTA DESDE 10X,
TAMBIN PODEMOS OBSERVAR QUE TENEMOS ALGUNOS CONJUNTOS DE
LEVADURAS.
EN ESTA IMAGEN PODEMOS OBSERVAR CLARAMENTE UN TIPO DE LEVADURA
LLAMADA ASPERGILIUS. OBJETIVO 40X.
MORFOLOGIA DE LOS MOHOS
Cabezas conidiales de varios gneros de hongos. Ntese el arreglo diferente de las
conidias que sirve para la identificacin.
MATERIAL
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.
MATERIAL BIOLGICO
a.
Mechero
Portaobjetos
Portaobjetos para cultivo de mohos
b.
Cubreobjetos
Asa bacteriolgica
EQUIPO
Cajas de petri estriles
Pincetas
a.
Cultivo de mohos del aire o
cultivo de mohos del pan, tortillas,
ctricos, etc.
Agar Maltosa Sabouraud
Microscopio ptico
TCNICA
1er. Caso
Observacin de mohos del aire
1. Exponga la placa de agar al aire por unos 30 min., despus gurdela en la caja petri
estril.
2. Incube a 30 C por ms de 24 hrs.
3. Observe al microscopio cuando haya suficiente crecimiento, con objetivo seco
dbil y seco fuerte.
4. Trate de identificar con ayuda de material bibliogrfico las siguientes estructuras
bsicas: esporas (diversos tipos), esterigma, conidiforo, tipos de hifas, micelios.
5. Dibuje y seale estructuras.
PODEMOS OBSERVAR EL
CRECIMIENTO DE MOHO
DENTRO DE LA CAJA PETRI
(MUESTRA JITOMATE).
SE TOMA CON CUIDADO UNA
PEQUEA
PORCIN
DE
MICELIOS DE LAS COLONIAS
DE MOHO PRESENTES.
EN ESTA IMAGEN PODEMOS OBSERVAR LOS MOHOS EN UN OBJETIVO DE
10X.
EN ESTA IMAGEN SE OBSERVAN EL CRECIMIENTO DE MOHOS CON UN OBJETIVO
DE 40X .
2. Caso
Mohos desarrollados en un sustrato especfico
1. Con picetas, con sumo cuidado, desprenda pequeas porciones de los micelios de
las colonias representativas.
2. Haga un montaje hmedo con cada una de las colonias, colocando a cada una de
ellas una pequea gota de la llave. Sin mezclar ni destruir la colonia.
3. Coloque el cubreobjetos.
4. Haga dibujos de sus observaciones con objetivos seco dbil y seco fuerte,
indicando los nombres de las estructuras bsicas. (Use colores cuando sea
necesario).
REPORTE DE LA PRCTICA:
Reporte las observaciones que se le piden, detalle, auxliese de manera bibliogrfica.
De sus comentarios.
Anexe su cuestionario.
CUESTIONARIO
1. Describir las caractersticas morfolgicas de los hongos filamentosos. Definir hifa,
micelio, tabicados, no tabicados, cenoctico, micelio vegetativo y areo.
Hifas:
La pared celular de estos es semirrgida.
Estn ampliamente esparcidos en la naturaleza.
Se ven comnmente en el pan que ya no es reciente.
Cada filamento se desarrolla principalmente en la punta por extensin de
clula terminal.
El micelio es la reunin de hifas que constituye el cuerpo vegetativo de un
hongo.
Micelio vegetativo: Es la parte del micelio que penetra en el sustrato
(superficie del suelo, plantas, alimento, etc.)Para absorber sustancias
nutricionales.
Micelio areo: Es la parte del micelio que se proyecta por encima del
sustrato y que se encarga de funcin reproductora y de dispersin de la
especie mediante esporas.
Tabicados: se denominan septos y forman el micelio tabicado, tienen
poros que permiten el paso del citoplasma y el ncleo, de ah que las hifas
no consten de clulas sinode.
No tabicados: son Los hongos inferiores que tienen un micelio continuo o
cenoctico, carecen de tabiques o muestran muy pocos y solo se presentan
para aislar las partes viejas o las reproductoras
2. Nombrar y describir 5 tipos de esporas asexuales de hongos.
Clamidiosporas: pueden generarse de forma interna, redondendose la clula del
interior de la hifa y quedando rodeada por una gruesa pared para luego
desprenderse
Esporangiosporas: pueden formarse en el interior de una estructura denominada
esporangio que al madurar se rompe liberando las esporas.
Conidiosporas: pueden generarse de forma externa, como una produccin de la
hifa en vez de como una transformacin y suelen formarse en estructuras
diferenciadas de la hifa (conidiforos).
Blastosporas: Conidios formados por gemacin o blastognesis de la clula
conidigena, que permanece fija; stos se observan aislados, en racimos o
cadenas, como en las levaduras.
3. Describir los hongos clasificados como phycomycetes y Basidyomicetes
Clase phycomycetes
Una caracterstica comn a todos ellos es la ausencia de tabiques en los hifas; esta
caracterstica lo distingue de otras clases. Los phycomycetes poseen un talo
micelial bien desarrollado. Hifas frtiles producen esporangios en el extremo de los
esporangiforos. En el talo de Rhizopus, adems de las hifas negativas y de los
esporangios hay unas hifas en forma de raz con mltiples ramificaciones y cortos
denominados rizoides.
La reproduccin sexual en algunos gneros tiene lugar por simple fusin de los
extremos de hifas plurinucleadas. Este modelo de reproduccin sexual es comn
en los gneros de importancia mdica: Mucor, Ausidia y Rhizopus. Estos tres
pueden causar fulminantes infecciones en los tejidos e invadir el sistema nervioso
central.
Clase basidiomycete
Estos estn caracterizados por la produccin de basidiosporas que nacen
externamente en el pice o parte lateral de un basidio. Entre esta clase se incluyen
las setas comestibles, las consolas de los rboles y las royas y tizones que
destruyen los cereales.
De las aproximadamente 12,000 especies de Basidiomycetes, ninguna, se ha visto
implicada en enfermedades humanas. El estado sexual o perfecto de Criptococus
neoformans se encontr en 1975 y ahora se denomina Filobasidiella neofarmans.
Es el ms importante patgeno humano basidiomiceto y causa la Criptocacosis.
Una infeccin que implica al torrente circulatorio as como a los pulmones, sistema
nervioso central y otros rganos.
4. Cual es la caracterstica que presentan todos los miembros del orden
Ascomycetes?
Los miembros de esta clase estn caracterizados por la formacin de ascas dentro
de las cuales se producen ascosporas. Algunos Ascomycetes forman cuerpos
fructferas a ascocarpos que rodean a las ascas y a sus ascosporas. La mayora de
las 15,000 especies de Ascomycetes son saprofitas.
Muchas levaduras son Ascomycetes, ya que producen ascosporas. Un modelo
sencillo de formacin de ascosporas puede verse en el ciclo biolgico de la
levadura Schizosaccharomyces.
La reproduccin asexual en los Ascomycetes filamentosas tiene lugar mediante la
produccin de grandes cantidades de conidios.
5. Nombrar un gnero de levaduras patgenas. En que difieren de las levaduras
inocuas comunes?
La Nematospora coryli esta puede causar enfermedades en las plantas y en los
animales, las levaduras patgenas se alimenten tomando nutriente del husped en
el que se encuentren ya sea una planta o animal provocndole ciertos daos, las
levaduras inocuas estas son inofencivas y susu actividades son aprovechadas por el
ser humano, incluso se encuentran en los alimentos.
6. Describir las caractersticas principales de las levaduras qu es lo que las
distingue de los mohos comunes, de los Fung imperfecti, y de los
microorganismos tipo de levadura del gnero Cndida
Las levaduras se han definido como hongos microscpicos, unicelulares, la mayora
se multiplican por gemacin y algunas por escisin, son esfricas, ovales o
cilndricas no forman filamentos ni micelio.
Los Fung imperfecti se reproducen de manera asexual por medio de conilios. Cada
conilio forma una hifa y el conjunto de hifas luego forman los micelios constitudos
por hifas talicadas, mientras que las levaduras se multiplican por gemacin.
Genero Candida: forma hifas verdaderas o falsas con abundantes clulas en
gemacin o blastosporas y pueden formar clamidosporas, la levadura no presentan
hifas.
CONCLUCION.
En esta prctica se pudo observar la estructura y morfologa de los hongos, en teora se
conoci las partes que lo componen, funciones, clasificacin. Es de suma importancia
conocer e identificar a la hora de trabajar con ellas ya que existen una gran variedad y
clasificacin de estos, es muy difcil tomar muestras de las levaduras, y a la hora de
observarlos tambin, se pudo comprobar lo terico ya que si se observaron formas
ovaloides, esfricas y cilndricas, as como tambin las hifas y micelios, y esas
ramificaciones formadas, una vez ms se utilizaron las tinciones para poder observar de
mejor manera algunas muestras.
Bibliografa:
[Link]/medlineplus/spanish/ency/esp.../[Link]
