PRUEBAS GENERALES PARA CARBOHIDRATOS.

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Programa de , Facultad de , Universidad del Cauca
Fecha de la prctica: / /2014, Fecha de entrega: / /2014

1. RESUMEN
En la prctica de laboratorio se realiz diferentes pruebas cualitativas para la identificacin de
Carbohidratos; Los Carbohidratos son biomoleculas compuestas por Carbono, Hidrogeno y Oxigeno,
cuyas principales funciones en los seres vivos son aportar energa inmediata y estructural, [1] para su
identificacin existen varias pruebas con las cuales se caracteriza azucares especficos, dependiendo
de sus propiedades fisicoqumicas, entre las que estn, las realizadas en la prctica, como lo son:
Molish, Seliwanoff, Bial o de Orcinol, Benedict, Barfoed y de Yodo para polisacridos. La mayora de
las pruebas cualitativas, se basan en la formacin de sustancias coloreadas o precipitados mediante
tratamiento con reactivos, los cuales proporcionan informacin sobre la estructura de la molcula.

2. RESULTADOS
CARBOHIDRATOS.
Tabla 1. Resultados experimentales, para la identificacin de Carbohidratos, donde, - genero
un resultado negativo y + un resultado positivo.
Prueba
Carbohidratos
Molish
Seliwanoff
Bial
Benedict
Yodo
Barfoed
Almidn
- Amarillo
- Azul
+ Violeta
-Azul
No
Claro
reacciono
Sacarosa
Rosado(Violeta) + Amarillo
- Verde
- Amarillo
-Azul
+
Amarillo
Claro
Glucosa
+ Verde
+ Rojo
- Amarillo
+Rojo
+ Rojo
Galactosa
Rosado(Violeta)
+ Verde
+ Rojo
- Amarillo
+
Ribosa
+ Verde
+ Rojo
-Azul
- Amarillo
Claro
Fructosa
Rosado(Violeta) +Amarillo - Amarillo
+ Rojo
+ Rojo
- Amarillo
+
Muestra
- Amarillo
+Amarillo
- Amarillo
+
+ Violeta
-Verde
Problema
Amarillo
.

3.

ANALISIS DE RESULTADOS

La mayora de las pruebas cualitativas para la caracterizacin qumica de los carbohidratos se basa en
la formacin de sustancias coloreadas o precipitados mediante tratamiento con reactivos, los cuales
proporcionan informacin sobre la estructura de la molcula. [2]

Prueba de Molish.
1/4

La reaccin de Molish es una reaccin que tie cualquier carbohidrato presente en una disolucin, en
esta se utiliza como reactivo una disolucin de -naftol al 5% en etanol de 96. En un tubo de ensayo a
temperatura ambiente, se deposita la solucin problema y un poco del reactivo de molish, a
continuacin se le aade cido sulfrico, un color violeta en la interfase entre el cido y la solucin
acuosa indica una prueba positiva para carbohidratos. Se basa en la deshidratacin de los carbohidratos
por la presencia del cido sulfrico o clorhdrico para producir un aldehdo, que se condensa con 2
molculas de -naftol dando como resultado una coloracin rosa/violeta caracterstica. Todos los
carbohidratos deberan dar una reaccin positiva. [3]

Figura 1. Reaccin de Molish.

Como se puede observar en la Tabla 1. Esta prueba dio como resultado positivo solo para la Sacarosa,
Galactosa y Fructosa, pero debi dar positivo para todos ya que esta no es especfica para un
determinado tipo de carbohidratos sino que por el contrario no es selectiva, esto se pudo deber a un
error manual en el momento de realizar las pruebas. Para el caso del almidn y de los disacridos,
primero se da la hidrolisis de los enlaces glicosidicos del polisacrido y/o disacrido respectivamente,
producindose as los respectivos monmeros, que posteriormente por medio de una deshidratacin se
formara el furfural que reaccionara con el -naftol para generar el complejo coloreado que dar la
prueba positiva, con una coloracin Rosa/Violeta o purpura. [4]
Prueba de Seliwanoff.
Esta es una prueba para distinguir entre aldosas y cetosas. Estas son distinguidas a travs de su funcin
como cetona (cetosas) o como aldehdo (aldosas). Esta prueba se basa en que al calentarlas, las cetosas
son deshidratadas ms rpidamente que las aldosas, dando derivados de furfural que se condensan con
resorcinol para formar un complejo de color rojo, El hidroximetilfurfural se forma rpidamente a partir
de cetohexosas, y ms lentamente a partir de aldohexosas. El tratamiento prolongado ms de 15
minutos en calentamiento provoca isomerizacin de la glucosa (aldohexosa) en fructosa (cetohexosa),
por lo que tambin la glucosa pude dar la prueba positiva. La sacarosa da una reaccin positiva debido
a la hidrlisis cida de su enlace glicosidico cuyos productos son la D- glucosa y la D. fructosa: las
reacciones involucradas en la reaccin son: [5]

2/4

Figura 2. Reaccin de Seliwanoff.

En la Tabla 1. Se puede observar que esta prueba dio como resultado positivo para la Sacarosa,
Fructosa y muestra problema, lo cual es congruente con lo reportado en la literatura, en la cual dice que
esta reaccin da positiva con cetosas y negativa con aldosas, tal y como se observa en la Tabla 1,
glucosa, galactosa y ribosa dio negativo para esta prueba. [6]
Prueba de Bial u Orcinol.
La prueba de Bial se usa para diferenciar pentosas de hexosas. Tanto las pentosas como las hexosas se
deshidratan en el medio acido concentrado dando furfural (a partir de pentosa) o 5-hidroximetilfurfural
(a partir de hexosas); ambas sustancias reaccionan con orcinol y FeCl 3, dando productos de
condensacin, que se diferencian por la coloracin. A partir de pentosas se obtienen colores de
tonalidad azul-verde, mientras que las hexosas originan una coloracin verde, caf o caf-rojiza.
A continuacin se presenta la reaccin general de la Prueba de Bial:
O
O
HC

OH
C
H

OH
C
H

OH
C
H

OH
CH

OH
CH2

HCl
3H2O

HOH2C

CH
O

5 -Hidroximetil Furfural
Hexosa.

3/4

O
O

OH

OH

OH

OH

HCl
HC

C
H

C
H

C
H

CH2

CH

3H2O

Furfural

Pentosa.
CH3

OH
O

H3C

+
CH
O

Furfural

H2O

OH

HO

OH

CH
O

Orcinol

OH
H3C
OH

bis (3,5-dioxi-metil-fenil furfuril-metano)

Figura 3. Reaccin de Bial.
En la Tabla 1 se puede observar que esta prueba dio positiva para: Glucosa, Galactosa y Ribosa, el
almidn dio como resultado negativo, ya que al ser un polisacrido presenta ms de 5 o 6 tomos de
carbono; [7]
Prueba para azucares reductores. Prueba de Benedict.
Algunos azucares tienen la propiedad de oxidarse en presencia de agentes suaves como el ion Fe3+ o
Cu2+. Esta caracterstica radica en la presencia de un grupo carbonilo libre, el cual es oxidado y genera
un grupo carboxilo. Por lo tanto aquellos azucares con un grupo carbonilo libre son llamados azucares
reductores y aquellos en los que el grupo carbonilo se encuentra combinado en unin glicosidica se
conocen como azucares no reductores. Esta prueba es especfica para azucares reductores.
Todos los monosacridos poseen un grupo reductor libre. Los disacridos maltosa y lactosa tienen
grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee, ya que se pierden los grupos reductores de sus
componentes cuando est formada.
Los azucares que presentan algn OH anomerico libre son reductores y por tanto, capaces de reducir
los iones cpricos (Cu2+) a iones cuprosos (Cu+). Estos ltimos, en solucin alcalina, producen
hidrxido cuproso, de color amarillo, que se convierte, por calentamiento, en oxido cuproso, de color
rojo.
Esta prueba, se basa en la capacidad que tiene el carbohidrato de reducir el Cu 2+ en un medio alcalino.
Este Cu2+ se oxida y precipita en forma de xido de cobre Cu2O, lo que proporciona la coloracin
positiva de la reaccin. La coloracin depender de la concentracin de xido de cobre y esta a su vez
de la reduccin del cobre; va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo, dependiendo de la coloracin
[8]
.

4/4

El reactivo de Benedict est constituido por una disolucin de Sulfato de Cobre (II), citrato de sodio y
carbonato de sodio. Al tratar el azcar con estos reactivos, experimentan una reaccin de oxidacin. El
cobre (II) en disolucin acuosa, de color azul, se reduce a cobre (I), el cual precipita como oxido de
cobre (I), de color rojo. El esquema de la reaccin es el siguiente [9]:
H
C

CH2OH
O

(CHOH)n

(CHOH)n

CH2OH

CH2OH

Cu2+

Cu2O rojo

Cetosa

Aldosa

Figura 4. Esquema de reaccin para una prueba positiva con el reactivo de Benedict.
En la prctica realizada en el laboratorio la prueba de Benedict tal como lo observamos en la Tabla 1,
dio positivo para todas las muestras a excepcin de Sacarosa y Almidn.
Al poseer todos los monosacridos un grupo reductor libre la prueba deba darnos positivo para la
Glucosa, la Galactosa, la Ribosa, la Fructosa y efectivamente los resultados obtenidos para estas
muestras fue positivo.
La mayora de disacridos son azucares reductores porque uno de sus carbonos anomericos (grupo
aldehdo o cetona reductor) de sus estructuras no est formando enlaces glucosidico. Una excepcin es
la sacarosa (azcar no reductor) que tal como se ve en la Figura 5, tiene los dos carbonos anomericos
formando parte del enlace que une los dos monosacridos. Por esta razn para este disacrido la
prueba dio como resultado negativa.
CH2OH
O

CH2OH

H
OH

OH

1
H

H
O

OH

OH

OH

CH2OH

Figura 5. Sacarosa.
Tambin podemos observar que la Fructosa un disacrido dio como resultado positivo, esto ocurre por
las condiciones en las que se realiza la prueba, en medio alcalino caliente esta cetohexosa se
tautomeriza a glucosa, y por ende se reduce al ion cprico.
Prueba de Yodo para polisacridos.
La prueba del yodo es una reaccin qumica usada para determinar la presencia de almidn y
otros polisacridos. Una solucin de yodo, disuelto en una solucin acuosa de yoduro de potasio reacciona con almidn produciendo un color prpura profundo.

5/4

Esta reaccin es el resultado de la formacin de cadenas de poliyoduro a partir de la reaccin del

almidn con el yodo. La amilosa, el componente del almidn de cadena lineal, forma hlices donde se
juntan las molculas de yodo, formando un color azul oscuro a negro. La amilopectina, el componente
del almidn de cadena ramificada, forma hlices mucho ms cortas, y las molculas de yodo son
incapaces de juntarse, conduciendo a un color entre naranja y amarillo. Al romperse o hidrolizarse el
almidn en unidades ms pequeas de carbohidrato, el color azul-negro desaparece. En consecuencia,
esta prueba puede determinar el final de una hidrlisis, cuando ya no hay cambio de color.
La prueba se basa en una reaccin fsica y no qumica, en la cual el almidn reacciona con el yodo para
formar un complejo de color azul intenso. La estructura helicoidal de la amilosa tambin sirve como
base de una reaccin til. El interior de la hlice tiene el tamao y polaridad adecuados para aceptar
una molcula de yodo. Cuando el yodo se aloja en el interior de la hlice, se forma un complejo.
El almidn forma con el yodo un color azul oscuro. Este color debido a la absorcin de yodo dentro de
los espacios abiertos de las hlices de la amilosa que constituyen el 20% del almidn. Las
amilopectinas, tambin presentes en el almidn, forman un color rojo a purpura con el yodo. [10]

En nuestro caso el almidn dio positivo para la prueba al igual que la muestra problema.
Para las muestras de monosacridos y disacridos da resultado negativo en la reaccin, debido a que la
prueba de yodo determina solo la presencia de almidn [11]
Prueba de Barfoed.
Este ensayo se emplea para diferenciar a los mono de los disacridos. Estos ltimos reaccionan ms
lentamente con el acetato cprico, debido probablemente al tamao molecular, aunque tambin pueden
estar implicados otros factores tales como una interaccin ms compleja con los dos anillos
monosacridos. Cabe recalcar que los disacridos dan positiva a la reaccin (los reductores), pero con
ms tiempo de calentamiento, ya que as se hidroliza el disacrido. El fundamento radica en la
reduccin del acetato a oxido cuproso. [12]
Como se puede observar en la Tabla 1, los resultados fueron positivos para Glucosa, Galactosa y
Fructosa, para el almidn y sacarosa dio negativo, ya que esta ltima es un disacrido y esta prueba da
ms lentamente para estos, con lo cual requerira ms tiempo, para darse.

4. CONCLUSIONES.
-

La mayora de las pruebas cualitativas para la caracterizacin qumica de carbohidratos se

basa en la formacin de sustancias coloreadas o precipitados mediante tratamiento con
reactivo, los cuales proporcionan informacin sobre la estructura de la molcula.

Los disacridos son azucares formados por la unin de dos monosacridos mediante el
enlaces glucosidicos, si este enlace se efecta entre dos carbonos anomericos, el disacrido
no tendr el potencial aldehdo o cetona libre, por lo tanto no dan positivas aquellas
pruebas que involucren la participacin de estos grupos, recibiendo el nombre de azcar
reductor. Por el contrario los que lo posean, darn positivas estas reacciones, llamndose
azucares reductores. (Benedict)

6/4

Todos los glcidos por accin del cido sulfrico concentrado se deshidratan formando
compuestos furfricos (las pentosas dan furfural y las hexosas dan hidroximetilfurfural).
Estos compuestos furfricos reaccionan positivamente con el reactivo de Molish (solucin
alcohlica de alfa-naftol).

5. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS.
5.1. Escribir todas las reacciones qumicas que se presenten durante la prctica.
Las reacciones se encuentran plasmadas en cada uno de los anlisis de las diferentes pruebas.
5.2. Porque la fructosa da una prueba positiva con el reactivo de Benedict el cual es especfico
para azucares reductores?
Es posible observar que la fructosa (una cetohexosa) es capaz de dar positivo a esta prueba, lo cual
ocurre por las condiciones en que se realiza la prueba, en un medio alcalino caliente esta cetohexosa se
tautomeriza (pasando por un intermediario enolico) a glucosa (que es capaz de reducir al ion cprico)
[13]

5.3. Porque se dice que la maltosa y la lactosa tienen un grupo aldehdo potencial?
En las estructuras de la lactosa y la maltosa, se puede observar de sus frmulas que la estructura cclica
de la derecha de cada molcula tiene su tomo de carbono anomerico (grupo C=O) intacto. En otras
palabras, estos azucares pueden existir en las formas y y presentar el fenmeno de mutorrotacin.
Reaccionan con fenilhidrazina y reducen la disolucin de fehling, propiedades de los azucares que
pueden resultar de la ruptura de la estructura cclica dando una cadena con funcin aldehdo. A estos
azucares se les llama generalmente azucares reductores. Se dice que es un grupo potencial porque est
libre para reaccionar con otros compuestos segn sea el caso. [14]

Figura 6. Molcula de Lactosa.

Figura 7. Molcula de Maltosa.

7/4

5.4. Porque el glucgeno y el almidn dan resultados negativos como azucares reductores?
Dan negativo como azucares reductores debido a que son polisacridos unidos por un numero inmenso
de enlaces glicosidicos, los cuales para su ruptura necesitan de mucho ms tiempo, en romperse a sus
respectivos monmeros.
5.5. Explique porque en la prueba de Barfoed los disacridos reaccionan ms lentamente que
los monosacridos.
Los disacridos reaccionan ms lentamente porque primero debe haber una ruptura del enlace
glicosidico para posteriormente reducir al cobre (II) a Cobre (I), mientras que los monosacridos lo
hacen de forma directa.
5.6. Que se deduce de la solubilidad del cido glucosacarido.
El cido glucosacarido se forma a partir de que el aldehdo de la glucosa se oxida a carboxilo dando
origen a un cido aldonico, en este caso el cido glucosacarico, en el cual la oxidacin del C1 y C6 de la
aldosa forma un cido dicarboxilico. Este presenta una baja solubilidad.

6. REFERENCIAS
[1] http://es.wikipedia.org/wiki/Gl%C3%BAcido Consultado 22/11/2014 Hora 5:46 p.m
[2] Guarnizo, A. Martinez, P. Experimentos de Quimica Organica. Ediciones Elizcom. Pag 136. Libro
Virtual.
[3]http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_de_Molisch Consultado 22/11/2014 Hora 3:46 p.m
[4]http://www.institutoanglomexicano.edu.mx/secundaria/Reacciones%20de%20los%20Carbohidratos
.pdf Consultado 22/11/2014 Hora 7:35 p.m
[5] http://es.wikipedia.org/wiki/Prueba_de_Seliwanoff Consultado 22/11/2014 Hora 11:54 p.m
[6]http://docencia.izt.uam.mx/japg/RedVirtualJAP/CursoDRosado/2_EstructuradeCompuestosBioquim
icos/9-1_ReaccionesIdentificacion.pdf Consultado 22/11/2014 Hora 11:46 a.m
[7] Guarnizo, A. Martinez, P. Experimentos de Quimica Organica. Ediciones Elizcom. Pag 138. Libro
Virtual.
[8]
http://www.scribd.com/doc/23351531/Reacciones-de-Identificacion-Para-Los-Carbohidratos
Consultado 23/11/2014 Hora 8:46 a.m
[9]Herrera, C; Bolaos, N; Lutz, G. Quimica de alimentos, Manual de laboratorio. Editorial de la
Universidad de Costa Rica. Primera edicin. 2003. Pag 12.
[10] Guarnizo, A. Martinez, P. Experimentos de Quimica Organica. Ediciones Elizcom. Pag 142.
Libro Virtual.
[11]http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales%20PDF/EXPERIMENTO%204%20ID
ENT%20CARB%2006-05.pdf Consultado 23/11/2014 Hora 12:30 p.m

8/4

[12]http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales%20PDF/EXPERIMENTO%204%20ID
ENT%20CARB%2006-05.pdf Consultado 23/11/2014 Hora 9:46 a.m

[13] http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_de_Benedict Consultado 23/11/2014 Hora 9:46

p.m
[14] Rudolph Macy. Quimica Organica Simplificada. Editorial Revert. Barcelona Espaa. 1992 pag
424-425. Libro Virtual.

9/4

10/4