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Prctica
AISLAMIENTO DE NARINGINA
Fecha:
8 de abril de 2013
Pginas
11
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Contenido
I. INTRODUCCIN
II. CONOCIMIENTOS PREVIOS
III. OBJETIVO
Pgina
2
2-6
6
III. 1. Objetivo General
III. 2. Objetivos Particulares
IV. METODOLOGA
6-8
IV. 1 Reactivos
IV. 2 Requerimientos de seguridad
IV. 3 Procedimiento
Pginas de la
6-8
V. RESULTADOS
8-10
VI. DISCUSIN DE RESULTADOS
10-11
VII. CONCLUSIN
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VIII. BIBLIOGRAFA
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I.
INTRODUCCIN
Los flavonoides son sustancias cristalinas ampliamente distribuidas en las plantas. Estn
hechos a base de hidrogeno, carbono y oxgeno y poseen tres anillos en su estructura
bsica; el anillo A proviene de la ruta de la malonil coenzima A y el anillo B y la cadena C3
provienen de la ruta del cido shikmico.
La naringina es un flavonoide del tipo flavanona por el carbono carbonilo presente; esta
especie est contenida en grandes cantidades en la toronja, siendo el causante de su
sabor amargo caracterstico. Qumicamente la naringina se encuentra como naringenina7-neohesperidosido, con formula qumica C27H32O14, compuesto que al hidrolizarse
genera naringenina libre. Tiene una estructura polar, siendo soluble en solventes polares
como el agua y posee un punto de fusin de 166C.
Figura 11.1 Estructura de la naringina
La importancia de saber aislar flavonoides reside en las mltiples aplicaciones que estos
pueden tener, ya que al ser una familia de compuestos muy amplia, hay gran cantidad de
funciones que pueden llevar a cabo en distintas reas, como la investigacin gentica
para mejorar la calidad de los alimentos y las plantas, adems de al inducir una mayor
produccin de flavonoides; en la farmacologa por ejemplo se utilizan en la elaboracin de
cremas bloqueadoras de luz ultravioleta, en diversos medicamentos, como lo son los
destinados al tratamiento contra cncer, a disminuir niveles de colesterol y triglicridos,
como antioxidantes naturales, como antibiticos, expectorantes, entre otros.
II.
CONOCIMIENTOS PREVIOS
1.- Qu es un flavonoide?
Los flavonoides son compuestos polifenlicos ampliamente distribuidos en la
naturaleza en vegetales, semillas, frutas y bebidas. Estos compuestos fueron
descubiertos por el premio Nobel Szent-Gyrgy, quien en 1930 aisl de la cscara
del limn una sustancia, la citrina, que regulaba la permeabilidad de los capilares;
desde entonces, se han identificado ms de 5000 flavonoides diferentes. Los
flavonoides se encuentran principalmente localizados en los rganos jvenes de
las plantas superiores. El papel que se les atribuye en las plantas abarca
funciones muy diversas. As por ejemplo, podran tener un papel importante en los
mecanismos de obtencin de energa o formar parte de las defensas antiinfecciosas de las plantas en las que se encuentran.
Algunos flavonoides presentan importantes propiedades farmacolgicas (actividad
antihipertensora, antibitica, diurtica, expetorante, antineoplsica, etc.) Adems,
son importantes sus aplicaciones industriales derivadas de su capacidad de
absorcin de las radiaciones visible y ultravioletas, entre las que cabe destacar su
uso como fotoprotectores en cremas solares, estabilizantes frente al
envejecimiento por la luz y el calor en plsticos, en preparaciones para fotografa
en color, como blanqueadores pticos, etc.
Los flavonoides contienen en su estructura qumica un nmero variable de grupos
hidroxilo fenlicos y excelentes propiedades de quelacin con hierro y otros
metales de transicin, lo que les confiere una gran accin beneficiosa para la
salud humana, por su accin antioxidantes y eliminadora de radicales libres. Entre
los flavonoides ms comunes podemos citar, las chalconas, dihidrochalconas,
flavonas y flavanonas.
(Climent, M. 2005)
2.- Origen biosinttico de los flavonoides
Los flavonoides son metabolitos secundarios vegetales de origen biosinttico
mixto: el anillo A proviene de la ruta de la malonilcoenzima A y el anillo B y la
cadena C3 provienen de la ruta del cido shikmico. Un trictido se cicla y se
condensa con una molcula de cido p-cumrico. La enolizacin del ciclo
proveniente de la ruta de la malonil CoA da origen al anillo aromtico A en las
chalconas y flavanonas. Estas a su vez son los precursores de las dems clases
de flavonoides. Es importante recalcar que este proceso de biosntesis sustenta el
hecho de que en la mayora de flavonoides el anillo A sea meta-oxigenado, es
decir como es caracterstico de los anillos aromticos originados por la va de la
malonil CoA; y por otro lado, el anillo B proveniente de la ruta del cido shikmico,
generalmente es orto-oxigenado.
Figura 11.2 Ruta biosinttica de los flavonoides
(Martnez A, 2005)
3.- Diferentes tipos de flavonoides de acuerdo a su estructura
Estructura bsica y numeracin
de los carbonos de un
flavonoide.
Hay cinco tipos fundamentales
de flavonoides y se diferencian
entre ellos por la estructura del
anillo
C,
teniendo
ms
sustituyentes o con la aparicin
de dobles enlaces.
Principales tipos de flavonoides, segn su estructura.
Antocianidinas. Flavonoide que poseen
unido el grupo OH en posicin 3, pero
adems poseen un doble enlace entre los
carbonos 3 y 4 del anillo C.
Flavanos. Flavonoide con un grupo OH
en la posicin 3 del aillo C. Ejemplo:
Catequina
Flavanoles. Flavonoide con grupo
carbonilo en la posicin 4 del anillo C, un
doble enlace entre los carbonos 2 y 3 del
anillo C y posee un grupo hidroxilo en la
posicin C3. Ejemplo: Quercitina
Flavonas. Flavonoide que poseen
un grupo carbonilo en la posicin 4 del
anillo C, un doble enlace entre los
carbonos 2 y 3 del anillo C y carece del
grupo hidroxilo en la posicin C3.
Ejemplo: Diosmetina
Flavanona. Flavonoide con grupo
carbonilo en la posicin cuatro del anillo
C. Ejemplo, Naringina.
Tabla 11.1 Tipos de flavonoides, segn su estructura.
(Martnez, S. 2002)
4.- Propiedades fsicas y qumicas de los flavonoides
De manera general son molculas que tienen dos anillos bencnicos ( aromticos, para
los qumicos orgnicos) unidos a travs de una cadena de tres tomos de carbono,
puesto que cada anillo bencnico tiene 6 tomos de carbono, los autores los denominan
simplemente como compuestos C6C3C6. (Martnez A, 2005)
Las propiedades fsicas dependen de la clase de flavonoide considerado y su forma (libre,
glicsido sulfato). Por ejemplo las flavonas, flavonoles y auronas, debido al sistema
conjugado son compuestos slidos con colores que comprenden desde el amarillo muy
tenue hasta el rojo. Las antocianidinas son de colores rojo intenso, morado, violeta y azul.
Las flavanonas y flavanonoles debido al carbono quiral C-2 presentan el fenmeno de la
rotacin ptica. Los glicsidos son en general slidos amorfos, mientras que las agliconas
y los altamente metoxilados son cristalinos. La solubilidad depende de la forma en que se
encuentren y el nmero y clase de sustituyentes presentes. Los glicsidos, las
antocianidinas y los sulfatos son solubles en agua y alcohol. Las agliconas flavonoides
altamente hidroxiladas son solubles en alcohol (etanol, metanol y n-butanol), mientras que
las poco hidroxiladas lo son en solventes como ter etlico, acetato de etilo y acetona. Las
agliconas flavonoides altamente metoxiladas son solubles en solventes menos polares
como el ter de petrleo y el cloroformo. Los flavonoides con hidroxilos fenlicos son
solubles en soluciones alcalinas, pero algunos altamente hidroxilados se descomponen
por accin de las bases fuertes, un hecho que permite reconocerlos y diferenciarlos de
otros, y que hace aos se utiliz para su elucidacin estructural.
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Los glicsidos flavonoides son slidos amorfos que se funden con descomposicin,
mientras que las correspondientes agliconas son slidos cristalinos.
(Martnez A, 2005)
III.
OBJETIVOS
III. 1. Objetivo General
Aislar un glicsido flavonoide a partir de cscara de toronja seca e identificarlo mediante
reacciones qumicas especficas y su punto de fusin.
III. 2. Objetivos Particulares
A) Obtener la naringina cruda mediante extraccin de la cscara de toronja por infusin
con agua.
B) Purificar la naringina por recristalizacin e identificarla mediante reacciones qumicas.
C) Comprobar su pureza utilizando como criterios su punto de fusin y su factor de
retencin en cromatografa en capa fina (CCF).
IV.
METODOLOGA
IV.1 Reactivos y soluciones
3 ml de HCl concentrado
NaOH
7.5 ml de cido sulfrico concentrado
Magnesio metlico
4 g de sulfato crico amoniacal
150 ml de hexano o ter de petrleo
IV. 2 Requerimientos de seguridad
El alumno debe de presentarse en cada sesin de laboratorio en bata decente, con lentes
protectores y guantes. Los disolventes orgnicos deben de manejarse en la campana de
extraccin. Cualquier calentamiento debe hacerse con parrilla. Debe de evitarse manchar
cualquier mesa de trabajo. Al final de cada sesin, los equipos de alumnos deben dejar
limpia y ordenada su mesa, as como los aparatos utilizados (balanza, rotaevaporador,
recirculador, etc.).
IV.3 Disposicin de residuos
Los residuos orgnicos deben de verterse en los garrafones especficos dispuestos para
ese propsito en el laboratorio.
Los residuos vegetales deben de secarse en la campana, colocarse en una bolsa de
plstico y desecharse en los botes de basura comunes.
V.
PROCEDIMIENTO
V.I Extraccin Naringina
Colocar en matraz
bola de 250 ml
30 g cscara de
toronja seca y
molida
Agregar 150 ml aprox.
de agua caliente a
90C
Mantener
temperatura por
Filtrar y evaporar in
vacuo, hasta 1/9 de
su vol. Inicial aprox.
Enfriar el concentrado
en el refrigerador, para
precipitacin de
naringina.
Desengrasar con 150
ml hexano en Soxhlet
por 45 minutos
Colocar la cscara en
vaso de pp. De 500 ml
Filtrar con bchner y
presionar bagazo.
Combinar extractos
acuosos, se hierven
con 1% de celite por
5 min.
Extracto hexnico se
descarta, disolvente
remanente se
Agregar al bagazo
100 ml de agua,
mantener a 80C por
5 min.
Filtrar en caliente
Medir punto de
fusin
V.2Ensayos qumicos de identificacin de flavonoides
Adicionar 1-2 gotas de
HCl a una pequea
porcin de muestra
Adicionar tambin
trozo de Mg metlico
V.3 Placa cromatogrfica
Adicionar 2-3 gotas de
NaOH al 10% a una
porcin de muestra
Flavonas: amarillo-rojo
Flavonoles: caf naranja
Chalconas: Prpura
Coloracin
Naranja: Flavonas
Roja-intensa: Flavanoles
Carmes o magenta:
Flavanonas
No hay cambio:
Chalconas
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Diluir una pequea
muestra en etanol
Colocar en placa
cromatogrfica
Eluir con etanol puro.
Revelar placa con
sulfato srico amoniacal
V. RESULTADOS
Peso de la cscara de toronja: 24.1589 gr
Peso del polvo obtenido: 1.004 gr.
Segn la literatura, el porcentaje de naringina presente en la cscara de toronja es del 5%
(Geronazzo, 2001) por lo que el porcentaje de rendimiento es de:
Punto de fusin de naringina terico: 166 C (Geronazzo, 2001)
Punto de fusin del producto: 168 C - 180C
Ensayos qumicos de identificacin de flavonoides:
Producto + HCl
Producto + NaOH
a)
b)
Figura 11.3 Pruebas de identificacin de flavonoides comparando con un testigo
a) Coloracin roja indica presencia de flavonas, roja intensa flavanoles, el
carmes flavanonas y si no hay cambio son chalcona.
b) Coloracin amarilla indica presencia de flavonas, los flavonoles un color
caf naranja y las chalconas un color prpura
Muestra del equipo
Rf: 4.7 cm
Figura 11.4 CFF de naringina vista en cmara de luz ultravioleta
Muestra del equipo
Figura 11.5 CCF de naringina con solucin reveladora
VI. DISCUSIN
La naringina es un flavonoide (flavanona glicosilada) que se extrae de la cscara de
algunos ctricos.
Se logr aislar a partir de la cascara de toronja la naringina obteniendo un rendimiento
final de 83% este como rendimiento experimental, el rendimiento terico consultado es de
5% en cscara de toronja seca (Valderrama. 2001), se puede concluir que el alto
rendimiento se pudo dar debido a otros compuestos presentes en el producto, ya que la
pureza del compuesto no fue del 100%.
En la bibliografa consultada especifica que el punto de fusin es de 83C , pero sta se
encuentra como naringina octahidratada, esto es entonces en presencia de agua, en otras
bibliografas nos indica que en punto de fusin se encuentra alrededor de 166 C, en la
parte experimental sali un punto de fusin de 168C sto se lo debemos posiblemente a
la prdida de agua, ya que el compuesto se dej secar por un tiempo largo, por lo que, en
ese tiempo, pudo perder la cantidad de agua para llegar a ese punto de fusin, por lo que
concluimos que se obtuvo naringina en su forma concentrada, tambin el punto de fusin
obtenido, a dems de no poseer las suficientes molculas de agua, se pudo determinar
que el compuesto no est completamente puro.
En el caso de las pruebas de identificacin, estas salieron positivas; la primera prueba
realizada fue con HCl y trozos de magnesio, se hicieron dos pruebas de este, con el
testigo y con la muestra obtenida en la sesin, en el caso del testigo que contena
naringina pura, tomo un tono carmes, mientras que la experimental tomo un color rojo,
esto debido a la alta concentracin y las impurezas contenidas en el producto.
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En la otra prueba de identificacin con NaOH al 10% el testigo tomo un color amarillo
claro y el experimental un amarillo ms fuerte, esto se debi de igual forma a la alta
concentracin del producto, as como de sus impurezas.
Finalmente se realiz la cromatografa en capa fina, en donde se coloc la naringina pura
y la realizada en la sesin, y se pudo observar, que efectivamente, se obtuvo como
producto final la naringina.
VII. CONCLUSIONES
Se logr aislar la naringina de la cscara de la toronja.
Al desengrasar la cscara con hexano se permiti un acceso ms sencillo a la flavanona
glicosilada, que tiene caractersticas polares, por lo que puedo ser extrada
adecuadamente con agua.
Se realiz la purificacin de la naringina por medio de la cristalizacin, posteriormente se
llevaron a cabo pruebas de identificacin mediante reacciones qumicas.
Para comprobar la pureza del producto obtenido se llev a cabo punto de fusin y su
factor de retencin en cromatografa de capa fina.
VIII. BIBLIOGRAFIA:
Geronazzo, H. 2001. Obtencin de Hesperidina apartir de Naranjas. Informacin
Tecnolgica: Vol. 12: Pg 3-8
Martnez-Flrez, S; Gonzlez-Gallego, J; Culebras, J. 2002. Los flavonoides:
propiedades y acciones antioxidantes. Departamento de Fisiologa, Universidad de Len y
Hospital de Len. Espaa. Nutr. Hosp. XVII (6) 271-278
Climent, M; Garca, H. Morera, I. 2005. Experimentacin en qumica: qumica
orgnica, ingeniera qumica. Ed. Univ. Politc. Valencia. Pg. 153-155
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