MICROSCOPA

Joseph Nstor David Sequeda Ramn - 94090920680

Juan Manuel Tarazona Rivera - 1090449401
Yolevanny Mora Ortega - 1090474339
Ana Karina Medina Medina - 1093766000









Docente:
ESP. Claudia Maritza Leyva Durn












UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
GRUPO BR
SAN JOS DE CCUTA
2014
PROCEDIMIENTO


Para observar las muestras de la mejor manera posible y as obtener unos resultados
ptimos debemos antes que nada tener un manejo optimo del microscopio y una
excelente preparacin de lo que vamos a observar para obtener un buen balance entre
contraste y resolucin.

Teniendo unas muestras propuestas a observar tomamos la primera que es el hilo,
colocamos la muestra en la platina luego colocamos la luz a nuestro gusto para una
cmoda prctica, estando todo bien, nosotros observamos el hilo en el detalle menor
posible en el microscopio (4X) obteniendo un buen enfoque. Ahora pudiendo haber
observado en los otros dos objetivos posibles (10X) Y (40X) vamos a sacar unas
conclusiones:

- Encontramos una relacin, donde todos los objetivos tienen un fin comn, mostrar
un aumento real con un detalle proporcionado en cada uno de manera diferente.

- Las diferencias con respecto a sus tamaos al utilizar los objetivos 10x y 40x se
deben al poder de aumento correspondiente a ellos, por tanto para el objetivo de 4X
estamos observando a 40 veces su tamao, para el de 10X estamos observando a
100 veces su tamao y para el de 40X el poder obtenido ser de 400 veces.

Ahora tomamos una letra y podemos observar en el microscopio que la posicin que
toma esta es invertida con respecto a la posicin en el portaobjeto, esto debido a que el
lente objetivo es convexo.

La proporcin aproximada que se puede observar es 10 veces menor, pero en ms
detalle ya que su dimetro de campo siempre es menor al aumentar el objetivo, en 4X
el dimetro de campo es de 4,5 cm y en 40X es de 0,45 cm.

Ahora he tomado de nuevo al muestra de la letra para un perfecto anlisis y cuando
desplazo el carro hacia la derecha sin dejar de mirar los oculares observo que la
direccin con que se mueve la imagen es hacia la izquierda, si lo muevo hacia la
izquierda este de desplaza hacia la derecha, si tomo la otra perilla de carro para
moverlo hacia adelante este al mirar los oculares se desplaza hacia atrs y si lo hago
hacia atrs se desplaza hacia adelante. Todo esto ocurre dado que las lentes del
microscopio invierten la imagen.

Los valores numricos de los poderes de resolucin obtenidos van disminuyendo a
medida que vamos aumentando en los objetivos, es decir, a mayor aumento mayor
abertura numrica por tanto menor poder de resolucin, pero podemos observar que el
lmite de resolucin aumenta y as tenemos en mayor detalle con el aumento del
objetivo lo que estamos observando.



FUNDAMENTACIN


El tipo de microscopio ms utilizado es el microscopio ptico, que se sirve de la luz
visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio ptico ms simple
es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar
un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan microscopios compuestos, que
disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos
microscopios pticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces.

El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular,
montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo est compuesto de
varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes
de los microscopios estn dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el punto
focal del ocular. Cuando se mira a travs del ocular se ve una imagen virtual
aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende de las
longitudes focales de los dos sistemas de lentes.

El equipamiento adicional de un microscopio consta de un armazn con un soporte que
sostiene el material examinado y de un mecanismo que permite acercar y alejar el tubo
para enfocar la muestra. Los especmenes o muestras que se examinan con un
microscopio son transparentes y se observan con una luz que los atraviesa, y se suelen
colocar sobre un rectngulo fino de vidrio. El soporte tiene un orificio por el que pasa la
luz. Bajo el soporte se encuentra un espejo que refleja la luz para que atraviese el
espcimen. El microscopio puede contar con una fuente de luz elctrica que dirige la luz
a travs de la muestra.

Los MO actuales tiene un poder resolutivo de 0,2 m, unas mil veces la del ojo
humano.

VARIANTES DE OBSERVACIN:


Microscopa ptica normal (de campo brillante coloreado): El material a observar se
colorea con colorantes especficos que aumentan el contraste y revelan detalles que no
aprecian de otra manera




Clula de Pisum,
coloracin: safranina-fast-green
Traqueidas del leo de Pinus
Coloracin: safranina


Microscopa de campo brillante: el material se observa sin coloracin. La luz pasa
directamente y se aprecian detalles que estn naturalmente coloreados.

El microscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de un cono
hueco concentrado sobre el espcimen. El campo de visin del objetivo se encuentra
en la zona hueca del cono de luz y slo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello
las porciones claras del espcimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos
minsculos que se estn analizando aparecen como una luz brillante sobre el fondo.
Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y
sin manchas, invisibles con iluminacin normal.

Microscopa en contraste de fase: se usa principalmente para aumentar el contraste
entre las partes claras y oscuras de las clulas sin colorear. Es ideal para especmenes
delgados, o clulas aisladas. El microscopio de fase ilumina el espcimen con un cono
hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el microscopio
de fase el cono de luz es ms estrecho y entra en el campo de visin del objetivo, que
contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz y provoca
un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de iluminacin provoca
variaciones minsculas en el ndice de refraccin de un espcimen transparente,
hacindolo visible. Este tipo de microscopio es muy til a la hora de examinar tejidos
vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biologa y medicina.





Imagen de contraste de fase de clulas epiteliales cultivadas utilizando un objetivo de
20X.



Nomarski, microscopa diferencial de contraste de interferencia (DIC). Utiliza dos
rayos de luz polarizada y las imgenes combinadas aparecen como si la clula
estuviera proyectando sombras hacia un lado. Fue diseado para observar relieves de
especmenes muy difciles de manejar, es muy utilizado en los tratamientos de
fertilizacin in-vitro actuales. DIC se usa cuando el espcimen es muy grueso para usar
contraste de fases
Clulas epiteliales 200X

www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/microscopy/images/20x_dic.tif


Microscopa de fluorescencia: una sustancia natural en las clulas o un colorante
fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la
energa absorbida como rayas luminosas: esto se conoce como fluorescencia. La luz
fluorescente de mayor longitud de onda se observa como si viniera directamente del
colorante.




TIPOS DE MICROSCOPA


Microscopa ptica (longitud de onda: 400-700nm) Espectro de luz visible
Imagen 2D

1- Microscopio de fondo claro

Se ve todo claro menos la preparacin.

Usa como fuente de luz directa una bombilla o la luz solar.

La muestra a observar debe ser fina para que pueda ser atravesada por la luz.

Los microorganismos se suelen teir (por contraste).

2- Microscopio de fondo oscuro

Se ve todo oscuro menos el objeto observar que se ve claro.

Se usa para ver microorganismos vivos sin teir como espiroquetas (Efecto Tindall).
Tiene la lente objetivo y un dispositivo que hace que el condensador y el foco de rayo
luminoso No entre un cono de luz, sino que tiene un dispositivo que slo deja pasar los
rayos ms divergentes.

Este rayo de luz pasa por la muestra, y si hay objeto, entonces lo difracta, vindose el
objeto blanco ya que desva estos rayos.





Clulas epiteliales, triple coloracin: ncleo (azul), microtubulos (verdes), actina
(rejo). 200X (izq.) y 1000X (der.).


www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/microscopy/images/100x_fluor.tif
3- Microscopio de contraste de fases o de fondo claro con dispositivo de
Zernicke

Transforma las variaciones del ndice de refraccin luminosa en distintas intensidades
luminosas.

Se pueden observar microorganismos vivos. Es un microscopio ptico modificado que
permite contrastar sustancias de diferente grosor o densidad.

El resultado es una imagen con distintos grados de brillo y oscuridad.

Con ste mtodo, el material denso aparece brillante, mientras que las partes de la
clula que tienen una densidad parecida a la del agua (casi nula) aparecen oscuras.

Se utiliza para visualizar microorganismos y estructuras celulares sin necesidad de usar
colorantes o matarlos.

+ Imagen 3D

4- Microscopio de contraste diferencial inteferencial o de Nomarsky

Utiliza luz polarizada.

La luz pasa por un prisma dividindolo en 2 rayos que pasan por la muestra.

5- Microscopio de fuerza atmica

Tiene un sensor que coge fuerzas atmicas repulsivas, basndose en dispositivos
electromagnticos.

Se construye un modelo digitalizado de la imagen.

6- Microscopio Confocal

Se basa en mejorar la relacin entre la seal y el ruido de la imagen.

Acopla una fuente de luz lser a un microscopio ptico.

Un rayo lser se refleja en un espejo que lo dirige a un punto de la muestra muy
preciso. Mediante la iluminacin concreta de un solo plano de la muestra, la intensidad
de iluminacin disminuye rpidamente por encima y por debajo de ese plano, y como
consecuencia la luz perdida en los otros planos es mnima.

Las imgenes obtenidas de las diferentes capas se pueden almacenar y luego
superponer digitalmente para reconstruir la imagen tridimensional de la muestra
completa, a esto se le llama microscopa de barrido confocal.

Microscopa ultravioleta

1- Microscopio de Luz ultravioleta

Mayor claridad y nitidez que el microscopio ptico.

Usa lentes de cuarzo, no de vidrio.

La emisin de luz es a longitud de onda ms corta (200-300nm).

Necesitamos mecanismos accesorios de visin para ver la imagen.

2- Microscopio de Fluorescencia

La emisin de luz es a 300-400 nm.

A la luz se le da un colorante fluorescente (Rodamina o aureoamina).

Usa lentes de cristal (vidrio).

Emite luz ultravioleta, pero lo que llega arriba es luz visible.

Microscopa electrnica

Usa chorros de electrones.

Disminuye el poder de resolucin, por lo que aumenta la calidad o nitidez de la
muestra a observar.

La longitud de onda se rebaja a 0.04nm.

El microscopio electrnico es como un microscopio de fondo claro invertido. Se trata de
un filamento de tungsteno que suelta electrones, que pasan a travs de un solenoide de
campo magntico (imn) que abre el chorro de luz, y as puede amplificar el chorro de
electrones, esto equivale a la lente objetivo, ya que el chorro de electrones se
recoge en una pantalla fotorreceptora o fotoconvertidora.

1- Microscopio de transmisin (MET)

Las lentes son electromagnticas, operndose en todo momento a alto vaco, en este
estado la muestra se deshidrata muy rpido, lo cual nos deforma las estructuras, por lo
que no nos permite el anlisis de muestras vivas.

Adems los electrones NO tienen gran poder de penetracin, por eso requiere de cortes
muy finos.


2- Microscopio de Barrido (MEB)

Usa campos electromagnticos.

El ctodo o foco emisor tambin se encuentra arriba, pero existe otra lente magntica
que nos dirige un chorro especfico de electrones.

La muestra se cubre de sales de metales pesados (como oro o platino)

Los electrones pasan por el generador de barrido, es una zona que continuamente
cambia de polaridad, y ste chorro de electrones es como una cortina que se abre y
cierra continuamente.

Este choque de electrones genera una imagen de la superficie de la muestra, y esto se
recoge en una pantalla fotoconvertidora.
































BIBLIOGRAFA


- PRINCIPIOS FSICOS DE MICROSCOPIA DE LUZ
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- TIPOS DE MICROSCOPA
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