USO

Medio selectivo que permite el crecimiento de Neisserias patge-

nas.
Est recomendado universalmente para recuperar Neisseria gono-
rrhoeae y Neisseria meningitidis.
FUNDAMENTO
El diagnstico cultural de Neisseria gonorrhoeae y Neisseria me-
ningitidis ofrece serias dicultades al bacterilogo debido a las
exigencias nutricionales de estos grmenes. En los materiales de
origen genital (especialmente femenino) la dicultad se incremen-
ta por la abundante ora de contaminacin presente en estos es-
pecmenes; ello explica las numerosas fallas en la recuperacin de
gonococo al quedar enmascarado por el desarrollo invasor de la
ora saprta.
El medio de cultivo es altamente nutritivo ya que contiene agar ba-
se GC, hemoglobina y el suplemento de enriquecimiento Britalex.
El agregado de la mezcla antimicrobiana V.C.N.T. (vancomicina, co-
listina, nistatina y trimetoprima) le otorga selectividad ya que inhibe
el desarrollo de microorganismos Gram positivos y Gram negativos
(an el swarming de Proteus spp.) y Candida spp. mientras que no
tiene efecto inhibitorio en el desarrollo de Neisseria gonorrhoeae
y Neisseria meningitidis, las cuales son aisladas en plazos de 18 a
24 horas con una ausencia casi total de contaminantes.
Debido a que los requerimientos nutricionales de Neisseria menin-
gitidis son similares a los de Neisseria gonorrhoeae, este medio
puede ser utilizado para aislar el microorganismo principalmente
cuando existe otra ora microbiana u organismo de contamina-
cin.

CONTENIDO Y COMPOSICIN
Cdigo B0820745: equipo que contiene:
- GC Agar Base (doble concentracin): 3 frascos x 50 ml.
- Solucin de Hemoglobina al 2%: 3 frascos x 50 ml.
- Suplemento Britalex: 3 viales.
- Suplemento V.C.N.T.: 3 viales.
- Solvente estril: 3 viales.
GC Agar Base: este medio de cultivo se emplea como medio basal
para la preparacin del medio Thayer Martin (original o modicado)
y Agar Chocolate con o sin enriquecimiento para la recuperacin
de Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis.
MEDIO TM
Medio de Thayer Martin Modicado
B0820745
HOJA 1 DE 4
FRMULA (en gramos por litro)
PLURIPEPTONA ................................................................................................................. 15, 0
ALMIDN ...................................................................................................................................... 1,0
FOSFATO DIPOTSICO ..................................................................................................... 4,0
FOSFATO MONOPOTSICO ......................................................................................... 1,0
CLORURO DE SODIO ......................................................................................................... 5,0
AGAR ...............................................................................................................................................15,0
pH FINAL: 7.2 0.2
Nota: la frmula detallada corresponde al GC Agar Base simple
concentracin. En el Medio TM se encuentra en doble concentra-
cin.
Solucin de Hemoglobina al 2%: solucin estril, lista para usar.
Est preparada a partir de una materia prima deshidratada de ori-
gen bovino y es un enriquecimiento adecuado para el cultivo de
Neisserias, Haemophilus inuenzae y estreptococos.
Las soluciones de hemoglobina tienen la ventaja que se pueden
esterilizar por autoclave pero no son tiles como un indicador de la
hemlisis bacteriana.
Suplemento BRITALEX: suplemento estril liolizado que se usa
para el aislamiento de bacterias nutricionalmente exigentes. Es
particularmente recomendado para la preparacin de Agar Cho-
colate Enriquecido a partir de Agar Base GC y hemoglobina para
la deteccin y aislamiento de Neisseria gonorrhoeae y Neisseria
meningitidis.
Tambin se utiliza como enriquecimiento para el cultivo de Haemo-
philus inuenzae.
FRMULA (en gramos por litro)
VITAMINA B12 .....................................................................................................................0.01
L-GLUTAMINA......................................................................................................................10.0
ClH GUANINA .................................................................................................................. 0.030
ADENINA..................................................................................................................................... 1.0
ACIDO P-AMINOBENZOICO ............................................................................. 0.013
L-CISTINA ................................................................................................................................... 1.1
NAD (COENZIMA I) .................................................................................................... 0.250
COCARBOXILASA ....................................................................................................... 0.100
NITRATO FRRICO ..................................................................................................... 0.020
HCl TIAMINA ..................................................................................................................... 0.003
HCl CISTENA .......................................................................................................................25.9
GLUCOSA ............................................................................................................................ 100.0
MEDIO TM, Medio de Thayer Martin Modicado
HOJA 2 DE 4
Instrucciones: reconstituir aspticamente el contenido de un vial
con 2,1 ml del solvente del equipo.
Suplemento V.C.N.T.: los antimicrobianos que constituyen este
suplemento son utilizados en el medio Thayer Martin Modicado
como inhibidores de los organismos contaminantes de la muestra.
FRMULA (para 1 litro de medio)
VANCOMICINA .................................................................................................................3.0 mg
COLISTINA ............................................................................................................................7.5 mg
NISTATINA ....................................................................................................................... 12500 U
TRIMETOPRIMA ..............................................................................................................5.0 mg
De este modo, por cada mililitro de la solucin de V.C.N.T. agregado
a 100 ml del medio de cultivo preparado da una concentracin nal
de:
VANCOMICINA .............................................................................................................. 3 g/ml
COLISTINA .................................................................................................................... 7.5 g/ml
NISTATINA .................................................................................................................... 12.5 U/ml
TRIMETOPRIMA ........................................................................................................... 5 g/ml
Instrucciones: reconstituir aspticamente el contenido de un vial
con 2,1 ml del solvente del equipo.
INSTRUCCIONES: PREPARACIN DEL MEDIO THAYER
MARTIN MODIFICADO
Colocar los frascos de GC Agar Base (dobre concentracin) ce-
rrados en bao mara y llevar a ebullicin para fundir el medio de
cultivo slido contenido en los mismos.
Una vez que se ha fundido el medio de cultivo, retirar cuidado-
samente los frascos del bao mara y dejar enfriar (temperatura
aproximada 50 C).
Cuando alcanzan esta temperatura, agregar por cada 50 ml de
GC Agar Base (doble concentracin): 50 ml de solucin de hemo-
globina al 2%, 1 ml de Britalex y 1 ml de la mezcla antimicrobiana
V.C.N.T. reconstituidas tal como se indic en los pasos anteriores de
estas instrucciones.
Mezclar para homogeneizar. Distribuir en placas de Petri estriles
y dejar solidicar.
Importante: los suplementos Britalex y V.C.N.T se agregan en con-
centracin nal al 1 % del medio de cultivo.
CARACTERSTICAS DEL PRODUCTO
Todos los constituyentes de este producto son estriles.
- GC Agar Base (doble concentracin): color mbar.
- Solucin de Hemoglobina al 2%: color marrn.
- Suplemento Britalex: color blanco, aspecto homogneo.
Al reconstituirse con el solvente estril se obtiene una solucin
incolora-rosada.
- Suplemento V.C.N.T.: color blanco, aspecto homogneo. Al recons-
tituirse con el solvente estril se obtiene una suspensin.
- Solvente estril: incoloro.
Medio de cultivo preparado: Thayer Martin Modicado: color ma-
rrn.
ALMACENAMIENTO
- GC Agar Base (doble concentracin) y Solucin de Hemoglobina
al 2%: a 10-35 C.
- Suplemento Britalex, Suplemento V.C.N.T. y Solvente estril: a 2-8
C.
Nota: en caso de haber reconstituido los suplementos Britalex y
V.C.N.T., pueden ser conservados a -20 C hasta 3 semanas.
PROCEDIMIENTO
Siembra
En supercie, estriar directamente el material en estudio.
En general podemos detallar:
1) Exudados nasales, farngeos y conjuntivales: las muestras se to-
man con hisopos pretratados* y se procede a su siembra directa.
2) Orinas: se toman los primeros 5 a 10 ml de la orina matinal y se
siembra con ansa una gota del sedimento centrifugado.
3) Muestras de genitales masculinos: si se efecta la siembra di-
recta, la muestra se recoge con ansa. Cuando la siembra no se
realiza de inmediato, el material debe tomarse con hisopos pretra-
tados* (ver aclaracin a continuacin), y transportarse en el Medio
de Stuart o Amies.
4) Muestras de genitales femeninos: las muestras se toman con
hisopos pretratados* utilizando espculos sin lubricantes. Si el ma-
terial no se procesa directamente, proceder como en 3.
5) Muestras de Rectales: proceder como en 3 y 4.
*Hisopos pretratados: Stuart y colaboradores han empleado hiso-
pos tratados con solucin buffer de fosfatos y carbn bacteriolgi-
co para el transporte de las muestras conteniendo Neisseria gono-
rrhoeae. El carbn neutraliza las sustancias inhibitorias contenidas
en el agar del medio de transporte. Cooper sugiere que los hisopos
tratados de esta manera son capaces de absorber los factores txi-
cos presentes en algunos lotes de agar, adems pueden absorber
los metabolitos txicos producidos por los microorganismos.
Preparacin de los hisopos: se realizarn sobre varilla de plstico
o madera. No usar alambre comn porque el xido frrico que se
forma diculta o inhibe ciertos microorganismos y a su vez puede
contener esporas de anaerobios. Deber ser de algodn y previa-
mente hervidos durante 5 minutos en solucin buffer de fosfato
Srensen M/15.
FOSFATO DISDICO .................................................................................................... 0.81 g
FOSFATO MONOSDICO ........................................................................................ 0.18 g
AGUA DESTILADA C.S.P. ........................................................................................ 100 ml
pH FINAL: 7.4
El exceso de lquido se elimina y luego los hisopos se sumergen
en una suspensin al 1% de carbn activado en polvo no en el
mismo buffer. Los hisopos tratados se secan a 100 C y luego se
esterilizan durante 1 hora a 150 C con aire caliente.
Como alternativa a los hisopos pretratados pueden utilizarse
los hisopos COPAN, con medio Stuart o Amies.
Siembra y mtodo de aislamiento
La siembra inicial con hisopo o ansa, se practica sobre un tercio de
la supercie de la placa, completando el aislamiento con ansa como
indica la gura.
Incubacin
En atmsfera con 3-7 % de CO
2
, a 35-36 C durante 18-48 ho-
ras.
En la mayora de los casos se obtiene un cultivo precoz, y abundan-
te entre las 18 y 24 horas de incubacin.
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS
Observar las caractersticas de las colonias. Las colonias de go-
nococos y meningococos obtenidas en este medio selectivo son
usualmente opacas, grisceas, convexas, de 1-4 mm de dimetro.
Luego de 48 horas de incubacin pueden transformarse en colo-
nias mucoides.
MEDIO TM, Medio de Thayer Martin Modicado
HOJA 3 DE 4
Informacin complementaria para la identicacin de espe-
cies de neisseria:
Para completar el diagnstico presuntivo realizar:
a) un extendido del cultivo obtenido, coloreado por el mtodo de
Gram: diplococos Gram negativos.
b) prueba de oxidasa: positiva.
El diagnstico conrmatorio se realiza mediante pruebas de fer-
mentacin de hidratos de carbono y/o tcnicas de coaglutinacin
o ltex.
Pruebas diferenciales
MICROORGANISMOS
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226
Staphylococcus epidermidis ATCC 14990
Escherichia coli ATCC 25922
Candida albicans ATCC 10231
Proteus mirabilis ATCC 43071
CRECIMIENTO
Satisfactorio
Inhibicin parcial o total
Inhibicin parcial o total
Inhibicin parcial o total
Inhibicin parcial o total
CONTROL DE ESTERILIDAD RESULTADO
Medio sin inocular Sin cambios
Medio Selectivo T.M. (C0
2
) + + - - - -
Agar Chocolate (C0
2
) + + + + + +
Agar o caldo comn - - + + V +
Desarrollo a 22C - - + + V +
Reaccin de oxidasa + + - + + +
Fermentacin de glucosa + + -* V - -
Fermentacin de maltosa - + - V - -
N
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* Acinetobacter baumannii puede utilizar glucosa por va oxidativa
LIMITACIONES
- La mezcla antimicrobiana VCNT diere de las mezclas empleadas
en otros medios selectivos, en la inhibicin casi total del desarro-
llo de contaminantes comunes: Proteus, Candida spp., Neisserias
saprtas, Moraxella (Branhamella) catarrhalis, Staphylococcus
spp., etc. De todas maneras deben extremarse las precauciones de
asepsia durante la toma de la muestra para evitar una contamina-
cin masiva.
- Si no se cuenta con equipos especiales, (cmara hmeda y at-
msfera de CO
2
) puede subsanarse el inconveniente, colocando las
placas en un recipiente hermtico (desecadores, envases de hoja-
lata, etc.), con un algodn humedecido y una vela encendida, que al
consumir el oxgeno del ambiente brinda una atmsfera adecuada
de CO
2
(3-7 %).
- La temperatura de la estufa de cultivo debe ser de 35-36C para
el mejor desarrollo de las Neisserias patgenas. A esta temperatura
desarrollan perfectamente en los otros medios, todos los dems
grmenes que habitualmente se cultivan a 37C.
- No se recomienda el empleo del medio selectivo TM para la siem-
bra de LCR, ya que de estar presentes Neisseria meningitidis o
CONTROL DE CALIDAD
Siembra Inicial
con hisopo o ansa
2do aislamiento
con ansa
1er aislamiento
con ansa
MEDIO TM, Medio de Thayer Martin Modicado
Neisseria gonorrhoeae ser en cultivo monomicrobiano. En tales
casos se recomienda el agar chocolate suplementado de Britalex
( ).
MATERIALES NECESARIOS NO PROVISTOS
Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de
calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales segn requeri-
miento.
PRECAUCIONES
- Solamente para uso diagnstico in vitro. Uso profesional exclu-
sivo.
- No utilizar el producto si al recibirlo su envase est abierto o da-
ado.
- No utilizar el producto si existen signos de contaminacin o dete-
rioro, as como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.
- Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el produc-
to.
- Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y ma-
nipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad
establecidas por el laboratorio.
- Las caractersticas del producto pueden alterarse si no se conser-
va apropiadamente.
- Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del
mismo segn reglamentaciones vigentes.
REFERENCIAS
- Stuart, R. D., Toshach, S. R., Patsula, T. M.: Canad, J. Pub. Hlth
(1954) 45, 73.
- Thayer, J. D., Martin, J. E.: Pub. Hlth. Rep. (1964) 979, 49-57.
- Seminar on Venereal Diseases Washington D.C. USA (1965),
WHO PAHO.
- Thayer, J. D., Martin, J. E.: Pub. Hlth. Rep. (1966) 81, 559.
- U.S. Department of Health Education and Wellfare CDC Atlanta
Georgla 30333.
- Procedures for use by the laboratory in the isolation and identi-
cation of Neisseria gonorrhoeae.
- Seth, A.: Brit. J. Vener. Dis (1970) 46,201-202.
- Douglas S. Kellogg, JR; King K. Holmes, Gilbert A. Hill. 1976. La-
boratory Diagnosis of Gonorrhea, Cumitech 4, American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
- Alan T. Evangelista, Henry R. Beilstein. 1993. Laboratory Diagno-
sis of Gonorrhea, Cumitech 4A, American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
- Isenberg, H.D., ed. Clinical Microbiology Procedures Handbook,
Vol. I & II. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
- Forbes, B.A., et al. 1998. Bailey and Scotts Diagnostic Microbiolo-
gy, 10th ed. C.V. Mosby Company, St. Louis, MO.
- Murray P.R., Baron, Pfaller, Tenover and Yolken. 1999. Manual of
clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
INDICACIONES AL CONSUMIDOR
Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento.
Conservar el producto segn las indicaciones del rtulo.
LABORATORIOS BRITANIA S.A.
LOS PATOS 2175 (C1283ABI)
CABA - ARGENTINA
TEL/FAX 54 11 4306 0041
SMBOLOS UTILIZADOS
DIAGNSTICO
IN VITRO
CDIGO N ELABORADOR ESTRIL N DE
DETERMINACINES
LOTE N FECHA DE
VENCIMIENTO
LMITE DE
TEMPERATURA
INSTRUCCIONES
DE USO
0
1
/
2
0
1
1

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R
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3

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HOJA 4 DE 4