PEREZ QUILANTAN, Luis Manuel.
Fermentacin en estado slido del mijo
perla (pennisetum americanum (l) leeke) por rhizopus oligosporus para la
obtencin de un producto rico en protena. Universidad Autnoma de
Nuevo Len, Facultad de Ciencias Biolgicas divisin de estudio de
posgrado. J unio de 1996.
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Parmetros de la fermentacin slida:
Los parmetros de importancia son: microorganismo, humedad, concentracin de
inculo, temperatura, pH, agitacin, aireacin, forma y tamao de partculas.
Microorganismos.- Basado en el tipo de microorganismos presentes en la
fermentacin en estado slido se dividen los microorganismos en dos grupos
principales: Natural (silvestres o nativos), cuyos ejemplos son el ensilaje y la
composta que utilizan microflora natural. Puro (individual o mezclado) son
generalmente usados a nivel industrial que requiere de un control y la utilizacin
de un sustrato seleccionado (Pandey 1992).
En las fermentaciones slidas, la seleccin de un microorganismo adecuado, es
importante para su desarrollo. Diversos grupos de microorganismos pueden crecer
en sustrato slido, sin embargo el bajo contenido de agua en este tipo de
fermentaciones, favorecen para el desarrollo de los hongos.
Los hongos crecen en el medio slido produciendo protena a partir del consumo
del sustrato, adicionado con fuentes inorgnicas de nitrgeno y otros minerales. La
ventaja de utilizar los hongos para produccin de biomasa para el consumo animal
y humano, es el bajo contenido que poseen en cidos nucleicos al compararlos
con las bacterias y con las levaduras (Cuadro 3). Dentro de este grupo, los
gneros Aspergillus y Rhizopus se han usado extensamente por su capacidad de
sntesis de amilasas y proteasas. Existen pocas especies de estos gneros que en
condiciones especficas producen micotoxinas (Hesseltine 1981, Mohyuddin y
Trilok 1977, Peflaloza 1981, Sugama y Okazaki 1979).
Cuadro 3.- Anlisis Qumico de diferentes tipos de microorganismos (base seca).
Componentes
%
Hongos Bacterias Levaduras Algas
Proteinas 10 50 40 7 40 45 10 60
Grasas 2 7 10 13 2 6 74 80
c. nucleicos 1 3 13 34 4 10 1 5
FUENTE: Aiba y col. Citados por Gonzales 1989.
Humedad.- El nivel de agua se ajusta segn los requerimientos de los
microorganismos (Cannel y Moo-Young 1980, Peftaloza 1981). Cuando el
contenido de agua es muy alto los espacios vacos entre las partculas se llenan
de agua desalojando al aire y provocando disminucin del oxgeno en la masa, y
adems podra estimular la contaminacin bacteriana (Alvarez 1990,Cabrero
1987, Pealoza 1981). Por otro lado, si el contenido de agua es bajo el
crecimiento de los hongos se inhibe.
En la elaboracin de alimentos fermentados, existen diferentes rangos de
humedad para su adecuada obtencin (Beauchat 1984, Pealoza 1981). Cantidad
de inculo.- Usualmente para asegurar un rpido crecimiento, se requiere una alta
concentraccin de esporas en la inoculacin, as como para competir con otros
microorganismos por el sustrato. La cantidad ptima de inoculacin vara de 10s
a 107 esporas/g de material seco (Pealoza 1981).
Temperatura.- Los hongos pueden crecer en un amplio rango de temperatura
entre los 20 y 45C, cuya influencia tiene efectos complejos. Altas temperaturas
inhiben la germinacin de esporas pero no afectan significativamente el desarrollo
del micelio. Para la produccin de enzimas y micotoxinas la temperatura ideal
vara entre 28 y 35C . 0 micelio de A. niger se desarrolla en los 35 y 45"C, pero
se consigue un mayor rendimiento en los 35 y 40C (Cabrero 1987, Finger y col.
1976, Pealoza 1981).
pH.- Los hongos crecen a pH cidos entre 3.0 y 4.5; el efecto del pH inicial en las
fermentaciones slidas no est bien establecido. Durante la fermentacin el pH
tiende a disminuir dependiendo de la cantidad de urea y sales de amonio que
intervengan en la fermentacin (Pealoza 1981).
Aireacin y agitacin.- Son parmetros claves en la transferencia de masa
dentro de las partculas. La transferencia de oxgeno entre las partculas depende
de los espacios Ubres, de la aireacin y la agitacin o mezclado (Cannel y Moo-
Young 1980, Gonzlez y col. 1989, Hesseltine 1972, Pealoza 1981). El flujo de
aireacin sobre la produccin de biomasa tiene un comportamiento tal que es
ptimo a flujos volumtricos de aire bajos, suficientes para favorecer la remocin
del bixido de carbono producido por la respiracin y la transferencia de masa
intrapartcula, al hacer ms accesible el oxgeno disuelto en agua procurando
condiciones cercanas a la isotermicidad alrededor de este punto, la eficiencia
disminuye. Al reducirse el flujo de aire por debajo de este punto, se restringe el
suministro de aire y el hongo tiende a la esporulacin, a flujos mayores del ptimo
la produccin de biomasa disminuye por dificultarse la fijacin de la espora al
sustrato al existir perturbaciones o pequeas turbulencias en el fermentador
(Gonzlez y col. 1989, Gonzlez y col. 1990). En las fermentaciones estticas la
aireacin desempea las funciones de agitacin, el aumento en el flujo del aire
mejora el desarrollo del micelio y el consumo del sustrato (Barrios y Anaya 1987,
Silman 1980).
Forma y tamao de las partculas.- En las reacciones bioqumicas de las
fermentaciones slidas el oxgeno es esencial, y para ello el oxgeno debe de
difundirse en la capa acuosa que rodea a la partcula slida o penetrar en los
poros del sustrato. En consecuencia, el tamao y la forma de las partculas
determinan el grado de porosidad (Finger y col. 1976). El tamao de partcula
ptimo vara dependiendo del sustrato, del microorganismo a utilizar y de la
cantidad de oxgeno presente en el medio. Las partculas pequeas tienen la
ventaja de poseer una mayor relacin de superficie a volumen. Esta relacin tiene
una gran influencia sobre la transferencia de masa inter e intrapartcula (Gonzlez
y col. 1989, Moctezuma y col. 1986).
Informacin tecnolgica 2003
Barrios- Gonzlez et al. (1988) usaron este sistema para producir metabolitos
secundarios como la penicilina. Estos autores reportaron mayor rendimiento y
productividad en FES con respecto a la Fermentacin lquida (FL). Barrios-
Gonzlez et al. (1993, 1993b) demostraron que el uso de un soporte con tamao
de partcula grande (14 mm) incremento en 33% la produccin de penicilina, sin
embargo este efecto se debi a una alta concentracin de azcar en la fabricacin
de bagazo empelada.
KRAJ MALNIK BROWN, Rosa. Modificacin del mtodo de
cilindro de agar para alsiar mutantes estables de penicillium
cbrysogenum sobre productoras de penicilina en fermentacin
slida. Universidad Autnoma Metropolitana, Divisin de
Ciencias Biolgicas y de la Salud. 10 de julio de 1995 - 16 de
agosto de 1996
[Link]
Barrios y colaboradores (1993), desarrollaron un mtodo de seleccin racional,
basandozse en el principio de que las cepas resistentes a altas concentraciones
de cido fenil actico( AFA), tienen a ser sobreproductoras. Esto se debe a que el
precursor es toxico para el microorganismo y esto provoca que como mecanismo
de desentoxificacin ste incorpora ms rpidamente al AFA a la va de
biosntesis de penicilina.
MNDEZ VZQUEZ Susana. Optimizacin de algunas
condiciones de operacin en la produccin de penicilina con P.
chrysogenum por fermentacin slida. Universidad Autnoma
Metropolitana, Unidad Iztapalapa. Divisin de Ciencias Biolgicas
y de la Salud. J ulio de 1993
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El soporte o sustrato slido puede o no ser biodegradable y debe tener una
elevada rea superficial por unidad de volumen (103 - 102 mZ/ml) (Viniegra,l989).
Algunos de los sustratos que se manejan son el bagacillo de caa, salvado de
trigo, residuos de caf, etc. (Mudgett,l986).
La baja humedad reduce los problemas de contaminacin.
La agitacin del cultivo inhibe la esporulacin del hongo reduciendo el riesgo de
contaminacin en el laboratorio.
La aireacin es facilitada por los espacios de partculas del sustrato y .Las
partculas de la mezcla.
Las ventajas mencionadas han convertido a la FS en un mtodo que ha
despertado mucho intres para la produccin de compuestos de gran importancia
social y econmica como enzimas, protenas (Aidoo et a1,1982), cido gibrelico
(Hesseltine,l972), aflatoxinas (Barrios-Gonzlez,l988). Procesos de
enriquecimiento proteico de productos naturales como la yuca (Raimbault y
~01,1985) y produccin de antibiticos (Barrios-Gonzlez,l988).
Recientemente se ha desarrollado un mtodo para la produccin de penicilina por
FS sobre un soporte inerte impregnado con medio de cultivo lquido obteniendo
resultados muy favorables, ya que hay una mayor produccin de penicilina (17
veces ms que en FL) en un tiempo ms corto en comparacin con la FL.
Tambin se observ un rendimiento 7 veces mayor y una produccin volumtrica
de 8.5 veces superior (Barrios-Gonzlez,l988).
Gonzlez (1993), realiz estudios bsicos sobre los efectos de ciertos factores
ambientales como tamao de partcula, densidad de empaque y efecto del
mezclado en la produccin de penicilina por FS, y encontr que estos factores
alteran el desarrollo del hongo y la produccin de penicilina.
OBJETIVO GENERAL
Determinar el efecto del tipo de inculo sobre la produccin de penicilina por
Penicillium chrysogenum (P2-4) en fermentacin slida.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
1.- Establecer las condiciones de trabajo (como medio de cultivo, tamao de
partcula y densidad de empaque) con las que se obtiene una mayor produccin
de penicilina.
2.- Determinar el efecto del tipo de inculo sobre la produccin de penicilina.
Anlisis de la muestra
a) pH. La determinacin del pH se realiz, pesando 1.0 gr de bagazo fermentado +
10 ml cie agua destilada. Se agit durante 10 minutos y se midi el pH con un
potencimetro.
b) X de humedad. Se determin por gravimetra en 4 gr de bagacillo fermentado
humedo (bfh)
c) Biomasa. Este parmetro se cuantifico utilizando la tecnica de peso seco, con 4
gr de bfh.
d) Cuantificacin de penicilina. Se midi la cantidad de penicilina producida por e1
m.0. , midiendo la actividad de ste por medio de la tecnica del bioensayo usando
como microorganismo sensible a el antibiotic0 Bacillus subtillis.
